自体许旺细胞桥移植治疗帕金森病模型猴的研究

目的 研究猴自体许旺细胞(SC)从内侧前脑束区(MFB)到尾状核的桥移植对偏侧帕金森病模型猴产生的功能效应及结构效应。方法 将3只偏侧帕金森病模型猴(恒河猴)自体SC悬液在立体定向下进行从MFB到尾状核的桥移植,另3只模型猴注射生理盐水作为对照。术后进行行为学评估,应用单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)检测多巴胺代谢的变化,4个月后进行细胞学检查。结果 自体SC桥移植后,猴行为学表现明显好转。在SPECT检查中,猴脑内移植侧的基底节区多巴胺代谢明显增加,放射性计数从术前的61％增加到术后的79％。SC可在猴脑内存活并迁移,并使其周围的多巴胺能神经纤维明显增加,每只猴针道周围酪氨酸羟化酶(TH)阳性的星形胶质细胞数量超过5000个。移植组猴针道周围TH表达也明显增高,为对照组的243％。结论 自体SC桥移植对帕金森病猴有明确的治疗作用。     

胚鼠黑质细胞悬液移植于帕金森病模型鼠侧脑室的实验研究

将胚鼠中脑腹侧组织制成细胞悬液移植于帕金森病(PD)模型鼠侧脑室,动态观察受体鼠在移植前后的行为变化。移植后16周应用诱发荧光及免疫细胞化学等方法,对移植物在受体鼠脑内的存活及生长情况进行了研究。结果,受体鼠旋转行为明显改善,侧脑室内可见黄绿色荧光细胞及酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应阳性细胞,有的发出突起伸向室管膜及迁于尾核区.提示:移植的胚鼠黑质细胞生长良好,似作为触液神经元发挥其作用。     

帕金森病猴模型人胚脑细胞移植的实验研究

帕金森病猴模型人胚脑细胞移植的实验研究刘振国，等。中华神经精神科杂志１９９４；２７（３）：１４６应用四基－苯基－四氢吡啶（ＭＰＴＰ）诱发猴偏侧帕金森病（ＰＤ）模型。取人胚胎（胎龄１１～１２周）黑质及尾核，制成黑质及黑质＋尾核细胞悬液，采用立体定向技术...     

脑内神经细胞移植治疗震颤麻痹三例报告

本文报告对震颤麻痹患者,应用自体肾上腺髓质细胞移植在尾状核头内2例,用胎脑黑质细胞移植在尾状核头内一例,术后近期收到明显效果。提示细胞移植数量多,约1×10~6个细胞,其中含有很多的嗜铬细胞,植入后与宿主接触面积大易存活。提供新的嗜铬细胞源,激动纹状体神经元的多巴胺受体,提高脑内多巴胺的含量,达到病因治疗的目的,起到机能移植的效果。     

人胚黑质细胞移植治疗帕金森病模型猴的行为观察

观察人胚黑质细胞移植治疗帕金森病（ＰＤ）模型猴的病理行为及改善程度。方法应用甲基－苯甲基－四氢吡啶（ＭＰＴＰ）制备偏侧ＰＤ猴模型，将早期人胚黑质细胞立体定向植入ＰＤ猴脑内，连续半年观察动物行为的改善程度，并结合免疫电镜证实移植神经元存活。结果移植治疗后模型猴运动减少、动作缓慢，肌张力增高较移植前明显改善，肢体震颤几乎消失，向右侧自发性旋转行为减轻，阿朴吗啡（ＡＰＯ）诱发的旋转次数明显少于移植前，且可持续一年，免疫电镜可观察到移植酪氨酸羟化酶阳性神经元与宿主脑细胞建立突触联系。结论植入ＰＤ猴脑内的黑质神经元可与宿主神经细胞建立突触联系，且病理症状改善持续时间较长。     

颈上交感神经节和单涎酸神经节苷脂联合移植抗帕金森病的实验研究

目的：观察颈上交感神经节（SCG）和单涎酸神经节苷酯（GM1）联合植入帕金森病（PD）大鼠脑内的抗PD效果及移植物的存活情况。方法：将用酶消化法制成的同种大鼠SCG细胞悬液和GM1立体定向植入PD大鼠损毁侧尾壳核内,比较单纯细胞移植组,联合移植组,上清液组和非移植组间及移植前,后诱发旋转行为的变化,移植6个月后移植区行组织学检查（HE,TH染色）。结果：两个实验组中的PD大鼠移植后的旋转行为较移植前和对照组明显改善,其中尤以联合移植组的旋转行为减少最为明显,而两个对照组的改善不明显,脑切片组织学观察可见实验组移植区内有存活良好的TH阳性细胞,联合移植组中的阳性细胞数目明显多于单纯细胞移植组。结论：1．GM1可提高SCG细胞在受体脑内的存活率,2．同种成年大鼠SCG细胞植入PD大鼠脑内可以存活,并可纠正PD大鼠的异常旋转行为。     

嗅鞘细胞移植治疗帕金森病动物模型的相关研究

目的 利用大鼠同种异体嗅鞘细胞移植的方式对帕金森病模型大鼠进行治疗,初步探究在PD模型大鼠脑内移植嗅鞘细胞能否成为治疗帕金森病的一种有效手段。方法 提取和培养原代OECs,利用6-OHDA两点注射法建立帕金森病动物模型,通过APO诱导方式验证模型及检测治疗效果,通过HE染色进行大鼠黑质细胞形态学观察,利用抗TH荧光染色细胞计数对比治疗前后TH阳性神经元表达情况差异。结果 从嗅鞘细胞移植后的第4周开始,PD模型的行为学诱导旋转圈数明显减少。HE染色结果示:PD模型大鼠毁损侧的黑质致密部的神经元变性明显,且TH阳性神经元数量降低,经OECs治疗后的帕金森大鼠的患侧黑质部位神经元变性改善,且TH阳性神经元含量明显增高。结论 嗅鞘细胞能够改善帕金森模型大鼠的行为学变化。嗅鞘细胞能够提高帕金森模型大鼠患侧黑质部位多巴胺神经元含量。     

自体许旺细胞桥移植治疗帕金森病模型猴的研究（摘要）

目的研究猴自体许旺细胞(SC)从内侧前脑束区(啪)到尾状核的桥移植对偏侧帕金森病模型猴产生的功能效应及结构效应。方法将3只偏侧帕金森病模型猴(恒河猴)自体SC悬液在立体定向下进行从MFB到尾状核的桥移植，另3只模型猴注射生理盐水作为对照。术后进行行为学评估，应用单光子发射计算机体层摄影术(SPCET)检测多巴胺代谢的变化，4个月后进行细胞学检查。     

胚胎中脑细胞植入帕金森病模型大鼠脑内的实验研究

目的：观察胚胎中脑细胞脑内移植治疗帕金森病(PD)模型大鼠的长期疗效。方法：将取自11．5天胚胎(E11．5)大鼠的中脑细胞植入PD模型大鼠的绞状体，观察大鼠旋转行为的改变，并于移植手术1年后用免疫组织化学的方法检测移植细胞的存活及其分化为多巴胺能神经元的状况。结果：E11．5大鼠中脑细胞在植入脑内后能够明显改善PD大鼠的旋转行为，但只有不到0．1％的移植细胞能够分化成为多巴胺能神经元，这些分化良好的多巴胺能神经元可以在脑内长期存活。结论：E11．5大鼠的中脑细胞植入PD模型大鼠的绞状体后，虽然有一定的疗效，但其最终分化成为多巴胺能神经元的比例却较低，提示E11．5大鼠胚胎中脑细胞不如E13—E15大鼠胚胎中脑细胞脑内移植治疗PD的效果好。     

脑细胞悬液移植治疗黑质损伤 Ⅱ 悬液制备、移植物成活、生长和形态

从12～15天的胚胎中脑腹侧部取材用以制备含DA细胞的悬液(供体和受体动物均用Wistar大鼠)。选经6-OHDA损毁已存活6个月的动物,向其伤侧尾状核内单点或多点注射细胞悬液(3—4万个细胞/μl)5～40μl(5μl/点)。14个受体动物中有10个动物的脑内移植物成活。多数移植物内含有大量成活的DA细胞体,在注射部位聚集成若干细胞团簇。尾状核接受多点移植的动物中,移植物的体积较小,DA细胞的含量也较少。移植物附近的受体脑组织中可见大量DA末梢。本文结果显示,胚胎黑质组织的细胞悬液移植可以改善因6-OHDA损毁DA通路造成的行为异常。多点悬液移植物比单个移植物对行为的恢复更为有效。     

Action of Schwann cells implanted in cerebral hemorrhage lesion

Objective To investigate whether there is neogenesis of myelin sheath and neuron after transplantation of Schwann cells into cerebral hemorrhage lesion. Methods Schwann cells were expanded, labeled with BrdU in vitro and transplanted into rat cerebral hemorrhage with blood extracted from femoral artery and then injected into the basal nuclei. Double immunohistochemistry staining and electron microscopy were used to detect the expression of BrdU/MBP and BrdU/GAP-43 and remyelination. Results BrdU/MBP double positive cells could be seen at 1 week up to 16 weeks after transplantation of Schwann cells. Thin remyelination was observed under electron microscope. GAP-43 positive cells appeared after 12 weeks and were found more in Hippocamp. Conclusions Grafted Schwann cells participate in remyelination and promoter nerve restore in rat cerebral hemorrhage.     

骨髓干细胞移植后mdx鼠抗肌萎缩蛋白的表达

目的研究骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)后抗肌萎缩蛋白表达的动态变化。方法取6~8周龄C57BL/6鼠骨髓干细胞,以2×107个/只干细胞尾静脉移植到经7Gyγ射线预处理后的7~9周龄mdx鼠体内,分别于移植后5、8、12、16周应用免疫荧光、逆转录-聚合酶链反应、Western blot检测腓肠肌抗肌萎缩蛋白的表达情况。结果经γ射线放疗预处理的mdx鼠,在尾静脉移植骨髓干细胞5周后可见抗肌萎缩蛋白少量表达,随移植时间延长表达逐渐增多,16周时肌纤维抗肌萎缩蛋白的表达为12%,并可见肌细胞核中移现象较同龄mdx鼠对照组减少,边居增多。结论同种异体骨髓干细胞移植治疗mdx鼠后,骨髓干细胞通过血液循环趋向病变肌组织,并分化为肌细胞表达抗肌萎缩蛋白。随移植时间延长表达增多,提示骨髓干细胞移植可长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生。     

具骨髓间充质干细胞表型的成体干细胞移植造血

目的为了探索骨髓成体干细胞是否能重建超致死剂量射线照射后小鼠的造血功能.方法采用液体培养分离,培养,扩增雄性小鼠骨髓成体干细胞,作为供体细胞,将受体雌性小鼠预先经Cs137全身照射850rad后在4 h内从尾静脉输入细胞.受体小鼠分为5组,每组10只a正常小鼠不经任何处理;b输入6×106cell/只(0.3ml)新鲜全骨髓;c输入6×106 cell/只(0.3 m1)去基质细胞的造血细胞;d输入6×106cell/只(0 3 m1)经培养后的成体干细胞,输注细胞后第1天上、下午肌肉注射各一次Granulocyte colony stimulating factor(G-CSF)等细胞因子;e注射D-Hanks液0.3ml/只.观察各组小鼠的存活情况,小鼠在输注前查尾静脉血,计细胞总数、涂片、分类,输细胞后每周各组分别取小鼠肝、脾、股骨,固定作病理切片,另外一侧股骨冲出骨髓,计数一条股骨有核细胞数、涂片、测定colonyforming unit-granulocyte/macrophage(GM-CFU)值.结果输全骨髓组外周血有核细胞和骨髓有核细胞数及GM-CFU值在输注后的第1,2周都高于单输成体干细胞组,但单输基质细胞组有核细胞逐渐恢复,小鼠存活好,至输注后第3周,无论外周血或骨髓中的有核细胞都较第2周明显恢复,GM-CFU也明显升高,而单输造血细胞和D-hnks液组小鼠存活7～8 d死亡.结论小鼠超致死剂量照射后,输入经培养后的同种小鼠骨髓成体干细胞配合G-CSF等细胞因子注射可重建小鼠造血功能.     

人脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内重建体液免疫的实验研究

目的探讨人脐血CD34+造血干细胞(HSC)在NOD/SCID小鼠模型体内体液免疫功能重建的作用。方法从新鲜脐血中分离出单个核细胞(MNC),利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内,移植后4、6、8、10周分批处死存活的小鼠,取其脾脏和外周血,分别进行细胞表型分析、体液免疫分析,监测小鼠体液免疫功能重建情况。结果照射2周后,阴性对照组小鼠全部死亡,6周后移植组小鼠存活率为37.5%,空白对照组小鼠存活率为100%。移植4、6、8、10周移植组外周血人CD45+细胞表达(%)分别为4.87±1.23、9.22±2.07、12.34±2.38、8.14±2.36,CD19+B淋巴细胞表达(%)分别为1.07±0.50、2.17±0.95、3.34±0.90、1.67±0.90。移植后10周,在移植组小鼠脾脏可见CD19+B淋巴细胞分布。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合免疫模型。缺少相应细胞因子刺激,CD34+细胞分化能力随时间减弱。     

转基因神经干细胞移植治疗暂时性脑缺血的实验研究

目的探讨转染血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的神经干细胞在宿主缺血区的基因表达情况,以及对神经功能的保护作用.方法用脂质体介导法将VEGF121基因转染到大鼠神经干细胞中.经RT-PCR及免疫荧光染色检测转基因神经干细胞及其分化细胞的基因表达情况.建立大鼠大脑中动脉梗塞模型(tMCAO),并将其随机分成(1)对照组,(2)细胞悬液PBS移植组,(3)神经干细胞移植组,(4)转基因神经干细胞移植组,前3组每组10只大鼠,第4组20只大鼠.立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区.移植后2～12周进行神经损害严重程度评分(NSS)并与其他3组比较.用免疫荧光染色方法观察移植后1周转基因神经干细胞在脑内的基因表达情况和移植后12周转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况.结果转基因神经干细胞及其分化的子代细胞均有VEGF121的表达并持续2周左右.移植后2、4、6、8、10、12周(4)组大鼠的NSS评分分别为5.8±1.5、5.0±1.0、4.6±1.0、4.0±0.7、4.0±1.0、3.8±0.4,均低于其他3组.其中第8周显著低于(1)、(2)组(均P=0.008),第12周显著低于(1)、(2)、(3)组(均P=0.000).转基因神经干细胞移植后1周在宿主脑内迁徙并表达VEGF基因产物,移植后12周在宿主脑内存活、迁徙,部分分化成神经元.结论转染VEGF基因的神经干细胞移植后在缺血早期表达基因产物,并对宿主局部血管和神经结构具有保护作用.转基因神经干细胞移植是治疗脑缺血性疾病的可行途径.     

星形胶质细胞在脑内移植中的作用

目的 探讨星形胶质细胞在脑内移植中的作用。方法 应用人胚胎皮南的星形胶质细胞移植于恒河猴脑皮质内,通过免疫组化方法动态观察星形胶质细胞的形态变化。结果 星形胶质细胞在突主组织中可继续发生、分化,其胶质纤维突破起长形成,并与宿主组织呈渐进融合。同时,星形胶质细胞与移植组织中毛细胞血管的形成关系密切,并可能直接参与毛细血管的形成过程。结论 星形胶质细胞移植对于改善缩主脑组织的环境条件,促进其结构功能修     

小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用

目的 在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells, NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响.方法 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能.结果 EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起.AD小鼠的记忆功能明显改善.结论 胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍.     

Experimental Study of Cell Migration and Functional Differentiation of Transplanted Neural Stem Cells Co-labeled with Superparamagnetic Iron Oxide and Brdu in an Ischemic Rat Model

Objective To explore the migration of transplanted neural stem cells co-labeled with superparamagnetic iron oxide （SPIO） and bromodeoxyuridine （Brdu） using the 4.7T MR system and to study the cell differentiation with immuno-histochemical method in ischemic rats. Methods Rat neural stem cells （NSCs） co-labelled with SPIO mediated by poly-L-lysine and bromodeoxyuridine （BrdU） were transplanted into the unaffected side of rat brain with middle cerebral artery occlusion （MCAO）. At weeks 1, 2, 3, 4, 5, and 6 after MCAO, migration of the labelled cells was monitored by MRI. At week 6 the rats were killed and their brain tissue was cut according to the migration site of transplanted ceils indicated by MRI and subjected to Prussian blue staining and immunohistochemical staining to observe the migration and differentiation of the transplanted NSCs. Results Three weeks after transplantation, the linear hypointensity area derived from the migration of labelled NSCs was observed by MRI in the corpus callosum adjacent to the injection site. Six weeks after the transplantation, the linear hypointensity area was moved toward the midline along the corpus callosum. MRI findings were confirmed by Prussian blue staining and immunohistochemical staining of the specimen at week 6 after the transplantation. Flourescence co-labelled immunohistochemical methods demonstrated that the transplanted NSCs could differentiate into astrocytes and neurons. Conclusion MRI can monitor the migration of SPIO-labelled NSCs after transplantation in a dynamical and non-invasive manner. NSCs transplanted into ischemic rats can differentiate into astrocytes and neurons during the process of migration.     

细胞周期依赖性蛋白激酶-5在C型尼曼-皮克病神经元变性中的作用

目的 确定细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cyclin dependent kinases-5,cdk5)在C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)神经元变性过程中的作用.为NPC的临床治疗提供可能的药物作用靶点.方法 将针对cdk5基因的siRNA序列克隆入rAAV-2载体,对4周龄npc-/-小鼠进行小脑rAAV-cdk5-siRNA-GFP注射(n=8),以空载体病毒(rAAV-GFP)注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=8).在干预后4周连续观察小鼠脑内cdk5水平及小鼠神经生化和病理的改变.结果 注射后1周可见针道附近、小脑深部核团及浦肯野细胞出现绿色荧光蛋白表达.与空载体病毒组相比,注射4周后小鼠脑内cdk5的表达水平降低34.17%(P<0.05,n=6);轴突球状体数量减少30.76%(P<0.05,n=6),存活浦肯野细胞数增加300%(P<0.05,n=8);细胞骨架蛋白磷酸化程度降低16.32%(P<0.05,n=6).结论 rAAV2-cdk5-siRNA小脑注射,能显著减轻npc小鼠神经生化和病理改变.cdk5的激活在NPC神经元变性过程中起到了关键性的作用,有可能成为NPC治疗的新靶标.