硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

 目的　探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BOR）对慢性粒细胞白血病（CML）伊马替尼耐药细胞株K562／G01的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法　采用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞周期与凋亡。结果　K562／G01细胞对伊马替尼不敏感,伊马替尼对K562／G01和K562细胞的IC50分别是（20.09±1.38）、（0.54±0.13）μmol／L;BOR对K562／G01细胞具有增殖抑制作用,并于48 h时作用效果达高峰,IC50（23.10±2.71）nmol／L,随着BOR浓度和作用时间的增加,FCM检测可见G2／M 期细胞周期阻滞及明显的凋亡峰。结论　BOR对CML伊马替尼耐药细胞株具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G2／M 期的阻滞有关。     

洛铂对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡作用的实验研究

目的 探讨洛铂（LBP）对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期HepG2细胞,分别采用不同浓度LBP（0、2.5、5、10、20 μmol／L）处理48 h。普通光镜观察细胞形态学改变;MTS法检测细胞增殖,并计算半数抑制浓度（IC50）;Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法及Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测Bax、Bak、Bcl-2、Bid、Bcl-XL、Survivin及PARP-1蛋白表达。结果 随着LBP浓度的升高HepG2细胞密度减少,离巢死亡细胞数目增多;光镜下可见典型核固缩、碎裂的凋亡细胞。LBP能显著抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05）;2.5、5、10、20 μmol／L的LBP作用HepG2细胞48 h后的增殖率分别为（92.11±1.79）％、（65.87±1.78）％、（51.57±0.81）％及（33.11±1.47）％; LBP作用HepG2细胞48 h的IC50为13.28 μmol／L。2.5、5、10、20 μmol／L LBP作用48 h HepG2细胞的凋亡率分别为（11.64±0.85）％、（20.99±2.21）％、（33.02±2.30）％和（40.77±1.58）％,与LBP 0 μmol／L 的（3.29±0.43）％比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.5、5、10、20 μmol／L LBP能够下调HepG2细胞中的Bcl-2、Mcl-1蛋白表达,上调Bax、Bid、PARP-1蛋白表达, 对Bcl-XL、Bak及Survivin蛋白表达无影响。结论 LBP能够诱导HepG2细胞凋亡、抑制细胞增殖,其可能机制与上调Bax、Bid和PARP-1蛋白以及下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达有关。     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的作用

 目的　探讨狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的细胞毒作用及其机制。方法　U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用CCK-8试剂检测细胞毒作用,用流式细胞术（FCM）对细胞周期及凋亡进行检测。结果　狗舌草提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制质量浓度约为3.2 μg／ml;狗舌草总提取物影响U266细胞周期,当药物质量浓度为1.25、2.5、5、10 mg／L时G0／G1期细胞减少[（34.12±0.49）%、（38.06±0.63）%、（27.46±0.61）%、（15.91±0.32）%],S期[（4.98±0.50）%、（4.01±0.22）%、（4.16±0.15）%、（5.04±0.12）%]、G2／M期[（50.05±1.12）%、（51.27±0.71）%、（51.84±0.73）%、（55.11±0.25）%]细胞增加;凋亡细胞增加;用Annexin V／PI染色FCM检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系。结论　狗舌草提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。     

褪黑素联合顺铂通过诱导细胞凋亡抑制人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖

目的：研究褪黑素（melatonin,MT）和顺铂（cisplatin,DDP）单独或联合应用对人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖及凋亡的影响。方法：采用不同质量浓度MT和DDP单独或联合处理U251和SHG-44细胞,并设对照组（不加任何药物）及乙醇组（加入乙醇）;以CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期,采用两药相互作用指数（coefficient of drug interaction,CDI）评估MT是否影响U251和SHG-44细胞对DDP的敏感性。结果：CCK-8结果显示,单用MT或DDP可浓度依赖性抑制U251和SHG-44细胞的增殖,MT还可协同增强DDP对U251和SHG-44细胞的增殖抑制作用（CDI<1）。流式细胞术检测结果显示,MT可促进U251和SHG-44细胞的凋亡,MT可增强DDP对U251和SHG-44细胞的凋亡诱导作用,0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP组U251和SHG-44的细胞凋亡率显著高于20 μg/ml DDP组\[（66.3±1.0）% vs （45.9±1.7）%,（35.5±0.8）% vs （15.5±0.8%）;均P<0.01\];而且0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP 组U251和SHG-44细胞的G1期比例显著高于20 μg/ml DDP组\[（52.4±2.1）% vs （27.9±1.5）%,（39.7±1.5）% vs （27.7±1.3）%;均P<001\]。结论：MT能显著增强DDP对人胶质瘤细胞U251和SHG-44的凋亡诱导作用,从而协同增强DDP对细胞增殖的抑制作用,有望成为人胶质瘤化疗的辅助药物。     

葛根总黄酮对骨髓瘤细胞株U266及RPMI8226增殖作用的研究

 【摘要】　目的　初步探讨葛根总黄酮（PRF）对骨髓瘤细胞株U266及RPMI 8226增殖影响及其机制。方法　采用0、10、30、50、100 μg／ml PRF分别处理U266、RPMI 8226细胞 48 h及72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,瑞特染色观察细胞形态学改变,FITC-Annexin V／PI双染法检测细胞早期凋亡率改变,DNA片段化分析观察PRF处理U266细胞DNA断裂片段。结果　PRF可以抑制2种骨髓瘤细胞增殖,对U266细胞抑制作用大于对RPMI 8226细胞的作用,呈浓度依赖性;随PRF浓度增加2种细胞凋亡比例增加。瑞特染色未观察到2种细胞凋亡形态学特征。0、10、30、50、100 μg／ml PRF 处理U266细胞48 h早期凋亡率分别为（3.20±0.36）%、（5.20±0.92）%、（7.30±1.22）%、（8.10±0.53）%、（10.80±0.90）%,呈剂量依赖性增高,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。DNA片段化分析U266细胞未出现凋亡细胞特有的DNA梯带。结论　一定浓度PRF对骨髓瘤U266及RPMI 8226细胞具有较明显的增殖抑制作用;PRF对U266细胞增殖抑制作用机制虽可能与凋亡相关,但并非U266细胞增殖受抑的主要途径,其确切机制有待进一步探讨。     

NVP-BEZ235对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的探讨PI3K／Akt／mTOR双靶点抑制剂NVP-BEZ235在体外对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。方法 采用0、0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235 处理HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度NVP-BEZ235处理24、48、72和96h的增殖抑制率,流式细胞仪、Transwell侵袭实验、荧光定量PCR及免疫印迹检测不同浓度NVP-BEZ235处理48h后的细胞周期分布、穿膜细胞数及基质金属蛋白酶（MMP）-2的mRNA和蛋白水平。结果NVP-BEZ235可呈剂量和时间依赖的方式升高增殖抑制率（P＜0.05）;除0.01μmol／L处理24h的晚期凋亡率外,0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235处理24、48h的早、晚期凋亡率均高于0μmol／L（P＜0.05）;0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235处理48h的G0／G1期细胞比例高于0μmol／L,穿膜细胞数、MMP-2 mRNA和蛋白水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）,且各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论NVP-BEZ235可抑制肝癌HepG2细胞增殖及侵袭转移,促进其凋亡和阻滞细胞在G0／G1期并降低MMP-2表达。     

DON 对胃癌细胞HGC-27 细胞周期和凋亡的影响

 目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响。方法 体外培养的胃癌细胞HGC-27经50、100、1000、2000μg／L DON处理12h、24h、48h，应用流式细胞术（FCM）进行细胞周期分析，检测凋亡情况及其量效关系，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达情况。结果 FCM检测结果表明，较高浓度（1000和2000μg／L）DON处理对细胞周期分布的影响随处理时间不同有明显差异。DON处理12h，可明显降低G0／G1细胞百分率、增加S期细胞百分率。处理时间延长至24h和48h，则表现为G0／G1细胞百分率增加，S期细胞百分率降低（P〈0．05）。DON处理24h和48h，各DON实验组HGC-27细胞凋亡率均高于对照组，在50～2000ug／L浓度范围内，凋亡率随着DON处理浓度的升高而升高。Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示，DoN处理12、24和48h，Bax和Caspase-3蛋白表达均明显升高，而Bcl-2蛋白表达降低。结论 DON处理可影响体外培养的胃癌细胞象HGC-27细胞的细胞周期分布，其作用依DON浓度和作用时间的不同而有差异。同时DON可诱导HGC-27细胞凋亡，上调Bax和Caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

香加皮杠柳苷对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用

目的：分析中药香加皮醇提物杠柳苷（periplocin from cortex periplocae，CPP）对食管癌细胞株TE-13的生长抑制作用，探讨其诱导细胞周期阻滞的机制。方法：应用MTr法检测CPP对TE-13细胞的抑制作用；Gimsa染色法分析TE-13细胞的形态学变化；FCM法检测细胞周期分布和凋亡率；Western印迹法检测TE-13细胞经药物处理前后细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、CDK2蛋白表达的变化。结果：CPP对TE-13细胞增殖具有明显的抑制作用（P〈0．01），并呈时间和浓度依赖性，药物浓度越大，作用时间越长，抑制效应越强，CPP作用48h时，对TE-13细胞的半数抑制浓度（IC50）为0．61μg／mL。经2μg／mL的CPP作用48h后，TE-13细胞发生明显的凋亡形态学变化；G0／G1期细胞明显增多（P〈0．01），S期细胞明显减少（P〈0．01），G2／M期细胞没有明显变化（P〉0．05）。不同浓度CPP作用48h后能降低TE-13细胞中CDK4蛋白的表达（P〈0．01），对CDK2蛋白的表达则没有明显影响（P〉0．05）。结论：CPP能显著抑制，TE-13细胞的增殖，其作用机制可能与CPP诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

Stellettin B对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨Stellettin B 对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（01、1、10、100μmol／L）Stellettin B处理A549细胞和NCI-H1299细胞24、48、72和92h的增殖抑制率;采用Hoechst染色检测处理A549细胞24、48h后的凋亡指数;流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法和PI染色法分别检测处理A549细胞48h后的凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blotting检测处理48h后A549细胞周期相关蛋白（Cyclin A、CDK2及p21CIP1）的表达水平。结果 不同浓度Stellettin B可显著增强对A549细胞的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。不同浓度Stellettin B处理24、48h后,A549细胞的凋亡指数、凋亡率均升高且呈剂量依赖性（P＜0.05）。随着Stellettin B浓度的增加,G0／G1期细胞比例及p21CIP1蛋白的表达水平逐渐升高,S和G2／M期细胞比例及Cyclin A和CDK2蛋白的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Stellettin B 可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,可能与其对细胞周期相关蛋白表达的调控有关。     

苦参素改变端粒酶活性对人肝癌细胞株HepG2、QGY体外增殖影响的研究

[目的]观察苦参素对人肝癌细胞株HepG2、QGY体外增殖和端粒酶活性的影响.[方法]应用MTT法检测HepG2与QGY增殖抑制的程度;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡;PCR-ELISA法检测端粒酶活性的变化.[结果]苦参素对HepG2和QGY细胞增殖的抑制随着时间的延长而增加,具有时间依赖性,各浓度时间之间均有显著性差异(P＜0.001);从细胞周期分析,苦参素能阻滞HepG2和QGY细胞周期进程,同时诱导细胞凋亡,各细胞之间均有显著性差异(P＜0.001);苦参素对细胞端粒酶均有时间和剂量依赖性,各组间均有显著性差异(P＜0.001).[结论]对端粒酶活性的抑制可能是苦参素发挥抗肿瘤作用的机制之一.     

Caspase-3在苦参碱诱导鼻咽癌CNE2细胞凋亡中的作用

目的：探讨苦参碱对鼻咽癌CNE2细胞生长和凋亡的影响以及Caspase-3在其中的作用。方法：将不同浓度（0、0.25、1.00、4.00g/L）的苦参碱分别作用于体外培养的CNE2细胞48h;采用MTT法检测细胞的存活与增殖,采用Annexin-Ⅴ和PI双染法测定细胞凋亡,采用Westernblot法检测细胞中Caspase-3蛋白的含量。结果：在苦参碱1.00和4.00g/L浓度作用下,CNE2细胞存活和增殖受到影响,其存活率分别为对照组的65.1%和50%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）;且CNE2细胞的凋亡频率明显增加,分别达到15.78%和28.44%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。苦参碱1.00和4.00g/L浓度组细胞的Caspase-3蛋白水平分别为1.22±0.34和1.69±0.46,均比对照组0.87±0.26明显增高（P均〈0.05）。结论：苦参碱能够引起鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制和凋亡增加,并对Caspase途径有激活作用。     

苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时对 G1细胞周期调节因子的调控

目的：观察苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时,G1细胞周期调节因子的变化,探讨苦参碱对肿瘤细胞增殖的调控。方法：0、0．3、0．8、1．5g/L苦参碱作用HepG2细胞3天,免疫组化检测p53,Rb,p21,p27,p16,cyclinD1蛋白表达：原位杂交检测p53,cyclin D1mRNA的表达。真彩色图像分析对基因表达强弱进行定量。结果用Microsoft-Excel软件统计处理。结果：用药后细胞周期负调控因子p53,Rb,p21,p27,p16表达增强;正调控因子cyclinD1表达减弱。结论：苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2分化、凋亡的机制可能与苦参碱上调了G1细胞周期负调节因子的表达,下调了G1期正调节因子cyclinD1表达有关。     

重组人源白细胞介素-24联合重组人源核心蛋白聚糖对人类肝细胞癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导协同效应的研究

目的 观察外源基因重组人源白细胞介素（IL）-24（rhIL-24）联合重组人源核心蛋白聚糖（rhDCN）对人类肝细胞癌HepG2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 采用脂质体瞬时转染法将pcDNA3.1（＋）-IL-24和pcDNA3.1（＋）-DCN质粒转染至HepG2细胞,48 h后倒置显微镜下观察细胞生长状况、形态学改变.分别在转染后24h、48 h和72 h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察IL-24和DCN单独及联合转染对HepG2细胞的增殖抑制效应.转染后48 h流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,并进行细胞周期阻滞分析.结果 与对照组相比,转染目的基因48 h后显微镜下可见细胞生长不同程度地被抑制,并可见典型的凋亡细胞形态改变,以联合转染组改变更为明显.MTT结果显示转染后48 h和72 h,双基因联合转染组的抑制率分别是（31.88±6.57）％和（36.83±3.76）％,与对照组和单独转染组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）.流式细胞术结果显示,单独转染IL-24和DCN基因可诱导HepG2细胞出现不同程度凋亡,而双基因联合转染组细胞凋亡率可达（32.56±0.90）％,与空质粒转染组的（2.98±0.72）％、空白细胞对照组的（3.50±0.92）％、IL-24组的（20.01±1.08）％和DCN组的（22.20±0.91）％比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）.细胞周期分析结果表明,与对照组相比,IL-24基因转染组的G2/M期和DCN基因转染组的G0/G1期细胞比例明显增高分别为（11.24±0.35）％、（77.93±0.67）％,而双基因联合转染组G0/G1期和G2/M期细胞比例同时增高,分别是（71.36±0.60）％和（10.39±0.67）％,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 联合转染IL-24和DCN基因可以协同发挥较单独应用更强的抑制HepG2细胞增殖和诱导HepG2细胞凋亡的作用.IL-24可使HepG2细胞发生G2/M期阻滞,DCN可使HepG2细胞发生G0/G1期阻滞,双基因联合使HepG2细胞同时发生G2/M期和G0/G1期阻滞,是IL-24和DCN对HepG2细     

siRNA靶向抑制CDCA5基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）基因表达对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的影响。方法 优化siRNA转染条件,将3条靶向抑制CDCA5基因的siRNA载体片段（序列1、2和3）分别高效转染人肝癌HepG2细胞（A、B和C组）,并设阴性对照组（NC组）及空白组。免疫印迹法检测转染72h各组CDCA5蛋白的表达水平。CCK-8法检测转染24、48、72、96、120h各组细胞的增殖能力,Annexin V-FITC／PI 双标记流式细胞术检测各组转染48h的凋亡情况。结果 A、B和C组的CDCA5蛋白水平均低于NC组和空白组（P＜0.05）,其中B组的表达率最低,抑制率最高,达89.3％,故选择序列2进行后续实验。自转染48h起,B组的相对增殖率均低于NC组和空白组（P＜0.05）;B组转染72h的相对增殖率为（66.58±2.58）％,均低于其他观察时间点（P＜0.05）。B组转染48h的早期和晚期凋亡率分别为（17.43±2.31）％和（22.37±2.21）％,均高于NC组和空白组（P＜0.05）。 结论 通过siRNA能够降低HepG2细胞的CDCA5表达水平,有效抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。     

鸦胆子油对人肝癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的:探讨鸦胆子油对人肝癌HepG2和Huh7细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用MTT法分析不同浓度鸦胆子油的增殖抑制作用,并用流式细胞仪进行细胞周期和细胞凋亡分析。结果:鸦胆子油能够使HepG2细胞和Huh7细胞的存活率降低,HepG2细胞24h和48h的IC50值分别为59.41μl/L和45.35μl/L,Huh7细胞24h和48h的IC50值为273.43μl/L和103.52μl/L。细胞周期实验中细胞G0/G1期比例升高。细胞凋亡实验中HepG2和Huh7细胞早期凋亡和晚期凋亡的比例均有增加,但晚期凋亡的细胞比例增加更大,分别为(61.47±7.74)%和(69.34±6.42)%。 结论:鸦胆子油能够抑制HepG2细胞和Huh7细胞的增殖,且通过阻滞细胞周期于G0/G1期诱导细胞凋亡。     

钼酸氨对人肝癌和结肠癌细胞增殖和周期的影响

目的 观察钼酸氨对体外培养人肝癌和结肠癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 采用不同浓度钼酸氨（0.101、0.202、0.404 mmol·L-1）分别对人肝癌细胞株HepG2和结肠癌细胞株HCT-116作用 24、48、72 h后,利用显微镜观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 随着钼酸氨浓度的增加和作用时间的延长,其对HepG2细胞和HCT-116细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用愈加明显,存在着显著的量-效和时-效关系,且低浓度（0.101 mmol·L-1）HepG2细胞受抑制显著于HCT-116细胞,高浓度（0.404 mmol·L-1）则相反,差异有统计学意义(P<0.05);钼酸氨不仅阻止HCT-116细胞由G1/G0期向S期移行,而且阻止HCT-116细胞由G2/M期向G1/G0期移行,将细胞阻滞在G1/G0期和G2/M期,而对HepG2细胞仅将细胞特异性地阻滞在G1/G0期。钼酸氨可促进HepG2细胞和HCT-116细胞凋亡,并且细胞调亡和坏死率随钼酸氨浓度增加和作用时间延长而逐渐升高。结论 钼酸氨对结肠癌和肝癌细胞均有增殖抑制、诱导凋亡和改变细胞周期作用,且高浓度钼酸氨对结肠癌细胞作用强于肝癌细胞,钼酸盐具有抗癌活性。     

miR-125a表达对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响分析

目的 探讨microRNA-125a（miR-125a）对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）法检测人肝癌HepG2细胞及人正常肝细胞7702中的miR-125a水平,同时采用真核表达载体pGenesil-1质粒制备过表达miR-125a的重组质粒pGenesil-miR-125a及表达随机序列的阴性对照pGenesil-NC,根据实验设计将HepG2细胞分为3组：空白对照组、阴性对照组和过表达组,其中空白对照组未进行转染,阴性对照组和过表达组分别成功转染pGenesil-NC和pGenesil-miR-125a,待3组转染24、48、72及96 h后采用qPCR法检测各组的miR-125a水平,噻唑盐比色法检测各组转染24、48、72及96 h的细胞增殖率,分别采用Hoechst染色和流式细胞术检测转染24、48 h后的凋亡指数和caspase-3活化率来评价凋亡情况,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞周期,同时采用免疫印迹法检测转染48 h后对凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）表达的影响。结果 HepG2细胞中miR-125a水平为（0.24±0.06）,低于正常肝细胞7702细胞（P<0.05）;与阴性表达组相比,过表达组转染24、48、72及96 h的miR-125a水平升高,增殖率降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与其余两组相比,过表达组转染后的凋亡指数、caspase-3活化率、G0/G1期细胞比例及Bax和Cleaved caspase-3水平均升高,S和G2/M期细胞比例及Bcl-2水平均降低,以上差异有统计学意义（P<0.05）。     

苦参碱对白血病细胞癌基因和细胞周期调控蛋白表达的影响

目的：探讨在苦参碱诱导下,白血病细胞株K562增殖和分化时相关癌基因及细胞周期调控蛋白表达表达的改变及意义。方法：应用分子生物学Norhern Blot和DotBlot杂交技术检测人红白细胞病细胞株K562在苦参碱作用后的c-myc,N-ras及p53mRN表达;同时用Western BLotting-ECL分析苦参碱作用前、后24、48、72小时K562细胞Cyclin D1,CyclinE,Ddk2,Cdk5的不同表达水平。结果：在增殖的K562细胞（培养48小时）中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在苦参碱作用24小时分化启动的细胞中,随着DNA合成减少,N-ras,p53mRNA表达增强;c-myc mRNA表达明显受抑;同时CyclinD,Cdk5表达增强,结论：若参碱抑制K562细胞增殖并诱导分化可能与相关癌基因表达和CyclinD1/Cdk5,CyclinE/Cdk2不同表达有关。