脐血造血干祖细胞增殖过程中人类巨细胞病毒感染对hoxa9、hoxa10基因表达影响的研究

目的在基因水平探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染导致脐血CFU-G损伤的机制,探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中hoxa9、hoxa10基因表达的情况。方法从2006年5月至2007年10月收集12例正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血干细胞体外培养技术及荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,以HCMV-AD169和(或)全反式维甲酸(ATRA)持续干扰HSC,观察正常对照组、ATRA组、HCMV-AD169组、ATRA+HCMV组的造血干祖细胞经人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导后,在增殖分化过程中第3、7和12天检测CFU-Ghoxa9、hoxa10基因表达情况。结果各组hoxa9、hoxa10基因均在CFU-G增殖分化的第7天表达量最高(P0.01),第12天表达量明显减弱(P0.01),与正常对照组比较,CFU-Ghoxa9、hoxa10基因表达受ATRA(6×10-8mol/L)上调,而受HCMV下调(P0.01),与HCMV组比较,ATRA可上调HCMV感染的CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达。结论 CFU-G的增殖分化与hoxa9、hoxa10基因的表达相关。HCMV可能通过调控hoxa9、hoxa10基因表达异常引起造血功能异常,ATRA不仅能显著上调正常CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达,而且能上调HCMV感染的CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达。     

全反式维甲酸对脐血粒-单系祖细胞HOXB6基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒-单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法1.采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM集落生成情况。2.采用实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。3.结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果1.人类造血干祖细胞向粒单系增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达;2.随时间延长,CFU-GM-HOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;3.与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论1.在脐血CFU-GM祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系正常增殖分化过程中的调控基因之一;2.ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。     

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1....     

经人类巨细胞病毒感染的人脐血造血干细胞向淋巴系造血祖细胞增殖分化过程中同源盒b4、b6基因的表达

目的 探讨经人类巨细胞病毒(HCMV)感染的人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系造血祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中同源盒(hox)b4、b6基因的表达.方法 取健康母亲健康足月顺产儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血祖细胞体外培养技术,分组以HCMV-AD169病毒液和(或)全反式维A酸(ATRA)持续干预,观察其不同时间点各组细胞集落生成情况,并在鉴定为CFU-TL集落细胞后不同时间点分别提取各组细胞核精核酸(RNA)并检测其完整性;将提取到的总RNA反转录为互补脱氧核糖核酸,在不同时间点采用实时荧光定量反转录PCR(FQ-RT-PCR)技术检测各组hoxb4、hoxb6基因的表达.结果 1.培养的集落细胞经瑞-姬染色法染色,鉴定为CFU-TL.2.各组所提取的RNA结构基本完整.3.人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外),各组hoxb4、hoxb6基因均有表达.且随培养时间推移,hoxb4基因表达的相对水平逐渐降低;而hoxb6基因表达的相对水平在培养第7天最高,第12天降低.4.与空白对照组比较,ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平显著增高,而HCMV组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较低.5.与HCMV组比较,HCMV加ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较高.结论 1.hoxb4、hoxb6基因在人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外)均有表达,提示其均与淋巴系统造血密切相关.2.HCMV能下调CFU-TL hoxb4、hoxb6基因的表达(体外),提爪HCMV可能通过调控hoxb4、hoxb6基因表达异常导致造血功能异常.3.ATRA能显著上调正常CFU-TLhoxb4、hoxb6基因的表达.实用儿科临床杂志,2009,24(10):757-759     

人类巨细胞病毒对粒单系祖细胞分化过程中HOXB6、A5基因的影响

目的探讨人类造血干细胞(HSPC)向粒单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6、A5基因的表达情况,及人类巨细胞病毒(HCMV)对其的影响。方法采用real-timePCR技术测定正常对照组与HCMV组HSPC向CFU-GM增殖过程中HOXB6、A5基因的表达水平。结果①HOXA5基因表达多为阴性,HOXB6基因在增殖过程的第3天开始表达,第7天增高,第12天显著降低(P<0.05)。②相对于正常组,HCMV感染组HOXB6基因表达下调(P<0.05)。结论HOXA5可能不是人类HSPC向CFU-GM增殖分化过程的主控基因;HOXB6是人类HSPC向CFU-GM定向分化的主控基因之一,其表达呈现时间规律性;HCMV干扰的细胞组HOXB6表达下调的同时,其细胞集落生成较正常组差。提示HCMV可能通过调控HOXB6基因表达异常,引起造血干细胞增殖分化异常。     

脐血粒系祖细胞发育过程同源盒基因B7的表达及干预

目的 探讨人类脐血造血干细胞向粒系祖细胞发育过程中同源盒(HOX)B7 mRNA和蛋白的表达及全反式维A酸(ATRA)和(或)三氧化二砷(As2O3)对脐血粒系祖细胞发育过程中HOXB7表达的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western-blot技术测定空白对照组、ATRA组、As2O3组、ATRA+As2O3组造血干细胞向粒系祖细胞增殖过程中HOXB7 mRNA及蛋白表达水平.结果 1.琼脂糖凝胶电泳显示RNA电泳图的5 S,18 S,28 S 3条带型整齐,无明显拖尾及弥散,说明RNA结构完整,无明显降解.2.反转录PCR扩增各组均有目的 基因HOXB7和内参照ACTB基因的cDNA产物,与DNA分子Marker相比扩增产物大小分别如下:HOXB7为129 bp,ACTB基因为111 bp,与预定理论值大小符合.3.人类造血干细胞向粒系祖细胞增殖分化过程中,空白对照组、ATRA组、As2O3组及ATRA+As2O3组的HOXB7 mRNA第3天少量表达,第7天表达较强烈,第12天表达减弱;空白对照组、ATRA组的HOXB7蛋白在增殖分化的第3天少量表达,第7天表达较高,第12天表达减弱,As2O3组及ATRA+As2O3组的HOXB7蛋白的表达在各时间点无明显差异.4.与空白对照组比较,ATRA组HOXB7 mRNA及蛋白的表达上调(P<0.05),而As2O3组HOXB7的表达无明显差异(P>0.05).结论 HOXB7基因可能是人类造血干祖细胞向粒系祖细胞增殖分化过程的调控基因之一,HOXB7基因与粒系造血有相关性.ATRA治疗白血病的作用可能与调节HOX基因的表达有关.As2O3对HOXB7 mRNA及蛋白的表达无明显调节作用.     

造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因表达的研究

目的探讨人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因表达的情况及全反式维甲酸(ATRA)对HOXC6基因表达的影响。方法采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续诱导人脐血造血干细胞,观察人脐血HSC经植物血凝素(PHA-M)诱导后,在培养过程第3、7和12天的淋巴系祖细胞集落生成情况;采用实时荧光定量PCR技术检测人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因的表达水平。结果人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中,HOXC6基因表达呈现时间规律性。结论HOXC6基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显降低,提示HOXC6基因与人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程密切相关,可能是其调控基因之一。ATRA能显著上调HOXC6基因的表达。     

人巨细胞病毒对人脐血红系祖细胞生长的影响及作用机制研究

人巨细胞病毒 (humancytomegalov irus ,HCMV)感染在我国发生率达 80 %～ 90 % [1 ] ,大多数是潜伏感染。造血系统是其感染的主要受累部位之一 ,引起各系血细胞减少 ,其机制尚未明了 ,本文旨在探讨HCMV对人脐血红系祖细胞生长的抑制和其作用机制。　　脐血标本 :2 0例脐血标本由本院产房提供 ,取自正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血。其母亲健康 ,HBsAg阴性 ,每份标本常规ELISA检测抗CMV IgG ,PCR检测HCMVDNA均为阴性 (共筛查 2 5例标本获得 )。病毒 :HCMV毒株为HCM VAD169,购自同济医科大学同济医院 ,感染滴度为 10 …     

人巨细胞病毒抑制粒-单及红系祖细胞的体外增殖及干预研究

探讨人巨细胞病毒 (HCMV)抑制脐血粒 -单系祖细胞的 (CFU GM)、红系爆式祖细胞 (BFU E)及红系祖细胞 (CFU E)的体外增殖和黄芪注射液与更昔洛韦(GCV)对此的干预作用 ,采用造血祖细胞体外培养、聚合酶链反应 (PCR)技术 ,培养、观察、计数CFU GM、BFU E及CFU E集落产率、抑制率、提高率 ,集落峰值时间和集落维持时间 ,并用PCR检测集落细胞内HCMV DNA。结果显示 :①HCMVAD169对CFU GM、BFU E及CFU E均有抑制作用 ,其抑制作用与HCMV浓度有关 ,高浓度 ( 1∶1 0 ,1 1 0 0 )感染组与对照组比较集落产率明显下降 (P <0 0 1 ) ,集落维持的时间明显缩短 (P <0 0 1 ) ,集落峰值时间无明显差异 (P >0 0 5) ,而低浓度组 ( 1∶1 0 0 0 )无此作用 ;②PCR检测发现在HCMV感染的造血祖细胞内存在HCMV DNA ;③在 1∶1 0感染组中 ,加入黄芪注射液与更昔洛韦后 ,HCMVAD169感染的CFU GM、BFU E及CFU E集落产率明显增加 (P <0 0 1 )。结论 :①造血祖细胞是HCMVAD169的宿主细胞之一 ,HCMVAD169能直接感染造血祖细胞 ;②在体外HCMVAD169对CFU GM、BFU E、CFU E的生长 ,集落形成有明显的抑制作用 ;③黄芪与更昔洛韦有抗HCMV作用 ,能促进受HCMV感染的造血祖细胞集落增殖     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关     

��Ѫ��Ѫ����ϸ����ֳ�����������ϸ��������Ⱦ��hoxa9��hoxa10������Ӱ����о�

??Abstract??Objective??To observe the expression of hoxa9 gene and hoxa10 gene in the process of the differentiation and proliferation of hematopoietic stem cell to Colony Forming Unit-Granulocyte??CFU-G??in vitro??and to explore the possible mechanism of HCMV-induced maldevelopment to human cord blood Granulocyte Progenitor in genic level. Methods??Twelve cases of cord blood were collected from fetal placenta umbilical vein. By the colony culture in vitro?? the impact of HCMV-AD169 and ATRA on the CFU-G colony formation was observed?? then detect the expression of hoxa9 and hoxa10 genes in the differentiation progress of Hematopoietic Stem Cell ??HSC?? to CFU-G affected by HCMV and/or ATRA on the third?? seventh?? and twelfth day. Results??Homeobox genes did have a regulatory function in the differentiation process of hematopoiesis. Compared with the expression of hoxa9 and hoxa10 genes on day 3?? the quantity of hoxa9 and hoxa10 genes was obviously higher on day 7 and lower on day 12 respectively in each group. Compared with the expression of hoxa9 and hoxa10 genes of normal group?? the expression of hoxa9 and hoxa10 of the group ATRA was up-regulated remarkably??while the expression of hoxa9 and hoxa10 of the group HCMV was down-regulated. ATRA was against the down-regulated effect caused by HCMV. Conclusion??The hoxa9 and hoxa10 gene are correlated to the manipulation of the proliferation and differentiation of granulocyte progenitor cell. The abnormal expression of hoxa9 and hoxa10 gene induced by HCMV may play an important role in HCMV-induced abnormal hematogenic damage. ATRA?? 6×10-8 mol/L??can up-regulate the expression of hoxa9 and hoxa10 genes??which confirms the theory that the normal hematopoietic lineage determination and maturation rely on the stable and consistently expression of Homeobox genes.     

人巨细胞病毒感染对HEL细胞周期及Cdt1表达的影响

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）感染对人胚肺成纤维（HEL）细胞周期及复制允许因子Cdt1表达的影响,探讨HCMV感染可能的发病机制。方法：用血清饥饿法同步化HEL细胞于G0/G1期, 用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组（n=106）,同时设模拟感染组为对照组（n=106）。于感染后12,24,48,72,96 h收获细胞。流式细胞术测细胞周期; RT-PCR法检测Cdt1 mRNA的表达水平。结果：①模拟感染组在感染后12 h,24 h 时处于G1期细胞比感染组明显增多,两组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。②两组Cdt1 mRNA表达水平在12 h,24 h和48 h时差异均有显著性（P﹤0.05）。模拟感染组Cdt1 mRNA表达水平的高峰出现在感染后12 h,而感染组的高峰则出现在感染后48 h。结论： ①HCMV感染影响了HEL细胞周期,使大部分细胞停滞在G1期。②HCMV感染使HEL细胞复制允许因子Cdt1 mRNA的表达水平迟滞。③HCMV感染可能通过影响复制允许因子Cdt1的生成而干扰宿主细胞周期,影响宿主细胞DNA合成,导致器官功能障碍。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：580-582］     

人巨细胞病毒对造血系统的影响

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)对造血系统的影响及其机制。方法 采用造血祖细胞体外半固体培养技术,研究HCMV AD169株对粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU—E)、多向造血祖细胞(CFU—Mix)及巨核系祖细胞(CFU-MK)集落生长的影响;分别用原位聚合酶链反应(IS-PCR)和聚合酶链反应(PCR)检测CFU-GM、CFU-Mix、CFU-MK及CFU-E集落细胞中的HCMV DNA;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFU-E集落细胞中的晚期抗原(late antigen,LA)mRNA及CFU-MK集落细胞中的前早期抗原(immediate early antigen,IEA))mRNA;用免疫组化方法检测CFU—Mix集落细胞中HCMV早期蛋白P52。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU—GM、CFU—E,CFU—Mix及CFU—MK的生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;经IS-PCR或PCR检测发现病毒感染组CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK细胞中有HCMV DNA存在;RT—PCR检测发现病毒感染组CFU-MK细胞中有IEA mRNA的表达,而CFU-E细胞中的LA mRNA为阴性;免疫组化(IHC)检测发现病毒感染组CFU-Mix集落细胞中有HCMV P52的表达。结论 HCMV AD169可抑制CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK的分化和增殖;HCMV AD169对造血系统有直接损害作用。此作用可能是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少及贫血的原因之一。     

人类巨细胞病毒感染对脐血造血祖细胞增殖的影响(英文)

目的：探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk)体外增殖的抑制作用及其机制。方法：20例脐血标本收集于正常足月顺产新生儿。实验共分5组:(1)3个HCMV感染组,每个感染组分别加入0.1 mL的103、104及105空斑形成单位(PFU)HCMV-AD169病毒液于培养体系中;(2)灭活对照组,加入同体积灭活HCMV病毒液;(3)空白对照组,不加HCMV病毒液,代之以同体积的IMDM。采用造血祖细胞体外半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169株对脐血CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落数、抑制率和集落维持时间;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-DNA。结果：(1)在造血祖细胞培养体系中加入不同滴度的HCMV-AD169后,104和105PFU滴度感染对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落形成均有显著的抑制作用,103PFU滴度感染对CFU-Mix及CFU-Mk集落形成有显著的抑制作用,与空白对照组和灭活对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。病毒滴度越高,抑制程度越明显(P<0.05)。(2)104和105PFU滴度感染组CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01),103PFU滴度感染组CFU-Mix和CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01)。(3)PCR显示3个感染组的CFU-GM、CFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落细胞内均有HCMV-AD169DNA存在。结论：HCMV-AD169能直接感染CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk造血祖细胞,并抑制造血祖细胞的增殖,这可能与HCMV感染患儿出现粒细胞减少、血小板减少和贫血等造血功能紊乱有关。