脂多糖对人牙周膜细胞COX-2蛋白表达的影响

目的：观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响,探讨牙周病发生发展过程中脂多糖（LPS）与COX-2的关系。方法：使用不同浓度LPS刺激体外培养人牙周膜成纤维细胞,免疫组织化学法检测细胞COX-2蛋白表达,灰度分析并进行统计学处理。结果：LPS组COX-2蛋白表达明显高于对照组,并且LPS浓度越高,COX-2表达越强。结论：LPS能够诱导人牙周膜成纤维细胞COX-2表达上调,随着LPS刺激浓度增高,COX-2表达逐渐增强,这一机制很可能在牙周炎发生发展过程中扮演重要角色。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞细胞周期的影响

临床常见咬合创伤引起牙齿松动、牙周膜腔增宽、牙槽骨吸收。牙周膜受损与牙周膜组织及人牙周膜成纤维细胞(hum an periodontal ligam ent fibrob last,HPLF)的生命活动异常有密切关系[1]。本组应用可控压力细胞加载装置,对HPLF加载不同大小的间断性压力[2],用流式细胞仪观察不同间断性模拟咬合压力对HPLF细胞周期的影响,推测50、100 kPa间断性压力对细胞分裂有抑制作用。1材料和方法1.1牙周膜成纤维细胞原代培养和细胞加载方法取青少年因正畸需要而拔除的前磨牙,组织块法[3]原代培养,反复贴壁纯化。置37℃,50 mL/L CO2,100%湿度CO2…     

纤维粘连蛋白与流体剪切力对体外培养的牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：在体外利用流体剪切力模拟咬合创伤,对牙周膜成纤维细胞（HPDLF）给予不同浓度的纤维粘连蛋白（FN）处理．在不同时段测量HPDLF的COX-2mRNA的表达量．以期模拟HPDLF在口腔存在咬合创伤的情况下FN对其生物学行为的影响。方法：收集因正畸矫治需要拔除的健康年轻恒牙,以第3代细胞作为研究对象。样本分为A、B2组,A组为利用水平摇床施加剪切力培养,转速为35r／min;B组为静态培养。A、B2组中分别分为加入FN0μg／ml（对照）、20μg／ml、40μg／ml、60μg／ml等4组,每组4孔。无血清培养6h、12h。采用SPSS13．0软件包对结果进行配对t检验。结果：HPDLF原代培养,24h后80％组织块贴壁。7～10d有细胞从组织块周围游出。14d左右长满培养瓶。免疫组化染色显示抗波丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性。RT-PCR结果显示,A组6h后COX-2表达即有体现：12h后,相同FN用量的样本的COX-2表达量较加力6h时高。且表达量随着FN用量的增加而减少。B组中,各样本电泳结果为阴性。光密度扫描分析,配对t检验结果t=13．45,P〈0．01。结论：流体剪切力可以引起HPDLF的炎性反应。人血浆FN可以减少HPDLF的COX-2mRNA表达,呈时间、剂量依赖性。     

静态牵张应变对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的:探讨牵张应变对体外培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响。方法:牵张应变量设为0%、8%、13%、18%、23%共5组,每组分别加载1 h8、h、16 h、24 h后收集细胞,免疫组化检测细胞中COX-2的表达,灰度分析并进行统计学处理。结果:8%~18%牵张应变范围,细胞内COX-2表达随着加载时间和应变量的增高而增强,23%应变量作用下COX-2表达降低,且与加载时间无关联。结论:在细胞的生理应变范围(8%、13%、18%)内,静态牵张应变促进人牙周膜成纤维细胞COX-2的表达,当牵张应变量超过生理应变范围(23%),则COX-2的表达量降低。     

机械力诱导牙周膜成纤维细胞p38 MAPK磷酸化反应的实验研究

目的：研究p38蛋白激酶(p38 MAPF)是否参与机械压力在牙周膜成纤维细胞的信号转导过程，初步探讨咬合创伤对牙周组织的损伤机制。方法：本实验通过免疫印迹法观察机械压力刺激后，牙周膜细胞内磷酸化p38 MAPK不同时段强度的变化。结果：当压力值为200kPa时，细胞内p38 MAPK磷酸化程度明显增强，约60min后磷酸化水平降至刺激前水平。结论：初步证明机械力信号可通过跨膜转导激活p38 MAPK，引起牙周膜细胞功能改变，导致牙周组织改建。     

人牙周膜细胞在弹性牵张力作用下核心结合因子mRNA的表达

目的 探讨人牙周膜细胞在应力作用下的成骨特性及核心结合因子(corebinding factor a 1，cbfal)在正畸成骨和正畸牙齿移动中的作用机制。方法 体外原代培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞，进行大鼠cbfal cDNA片段的克隆和序列测定，制备大鼠cbfal cDNA探针。人牙周膜细胞在弹性膜上体外培养，采用体外培养细胞加载系统加载弹性牵张力。用原位杂交方法检测cbfal mRNA的表达。结果 正常对照组不加力的人牙周膜细胞未检测到cbfal mRNA阳性表达，实验组加载弹性牵张力的人牙周膜细胞出现cbfal mRNA阳性表达。结论 弹性牵张力可以诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞分化；cbfal作为转录因子是正畸成骨的调控途径之一。     

咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其凋亡相关基因表达的影响

目的观察咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其相关基因表达的影响。方法拔除健康雄性SD大鼠右上颌第一、二、三磨牙建立右下颌磨牙咬合力改变动物模型,分别于拔牙后6、12h及1、2、3、5、7、14、28d处死大鼠(n=6),取右下颌磨牙区牙槽骨组织,进行H-E染色和透射电镜观察;免疫组化染色检测牙周膜成纤维细胞Bcl-2和Bax表达。另设正常咬合力大鼠作为对照组(n=6)。免疫组化染色结果采用二级计分法,根据染色强度及阳性细胞的数目进行计分取平均值。结果成功建立咬合力改变SD大鼠模型。H-E染色结果显示实验组牙周膜结构疏松,纤维排列无序,牙槽骨骨壁凹凸不平;透射电镜结果显示实验组牙周膜成纤维细胞出现核固缩、核染色质浓缩、边集。免疫组化染色表明拔牙后12h牙周膜成纤维细胞Bax表达最高(216.83±6.34),而Bcl-2的表达在3d时达峰值(219.33±10.25),此后二者均开始下降,至28d基本恢复正常(7.00±2.37,5.67±2.16,P<0.01)。结论细胞凋亡及其相关基因Bcl-2和Bax参与了牙周膜的改建过程。     

IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达研究

目的：研究IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达水平的变化，为细胞因子网络调控牙周膜成纤维细胞功能的研究提供新资料。方法：采用原代培养的人牙周膜成纤维细胞，取5-8代细胞以IL-1β梯度浓度干预，采用RT-PCR法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果：在正常的人牙周膜成纤维细胞中未见TRAF6基因表达，IL-1β干预后，TRAF6呈阳性表达，并且随着IL-1β干预的浓度增高，其表达水平上调。结论：IL-1β干预后TRAF6在HPLFs中的表达水平的变化提示TRAF6可能是参与牙周膜成纤维细胞功能调控的重要信号分子。     

周期性牵张力加载下人牙周膜细胞中血管内皮生长因子表达变化的研究

目的：观察周期性牵张力作用下，体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPLFs)中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的变化，以探讨机械力介导下牙周组织改建的机制。方法：通过体外细胞培养加载系统，采用周期性牵张力(每分钟6个循环，12％形变量)加载l、3、5、7d，用免疫组化和原位杂交技术，观察VEGF在HPLFs中的表达。结果：HPLFs在体外表达VEGF，其蛋白水平及mRNA水平的表达从加力ld开始升高，5d达到高峰，在加力7d开始下降。结论：在一定条件下，周期性牵张力可显著影响HPLFs VEGF的蛋白和mRNA水平的表达，进一步证实机械力作用下，VEGF参与了牙周组织改建，在正畸牙齿移动的机制中具有重要意义。     

咬合力增强对大鼠磨牙牙周膜Ⅰ型胶原mRNA时空表达的影响

目的：研究咬合力增强后大鼠牙周膜Ⅰ型胶原在转录水平的改建模式。方法：用大鼠建立咬合力增强动物模型，运用原位杂位法检测牙周膜Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果：咬合力增强后，Ⅰ型胶原的mRNA表达在前2d内急降，第3d出现较大回升，到第1周时达到较高水平，第3周时又明显增强，但稍弱于对照组，第4周同第3周接近；随着整体信号的减弱，第1天时，PDL内外侧信号基本均匀，以后随着整体信号的回升，牙侧信号又强于骨侧。结论：牙周膜能在一定范围内耐受高于生理状态的咬合力。     

静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达

目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4 h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8%、12%和16%3个亚组,并取加力时间0h、形变率0%作为对照组。用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin 和Wnt3a蛋白表达显著减少(P<0.05)。在加力时间相同的组内(2 h、4 h、6 h),β-catenin 和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P<0.05)。结论:β-catenin和 Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用。     

The roles of angiotensin II in stretched periodontal ligament cells

The loading caused by occlusion and mastication plays an important role in maintaining periodontal ligament (PDL) tissues. We hypothesized that a loading magnitude would be involved in the production of biological factors that function in the maintenance of PDL tissues. Here, we identified up-regulated gene expressions of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), alkaline phosphatase (ALP), and angiotensinogen in human PDL fibroblastic cells (HPLFs) that were exposed to 8% stretch loading. Immunolocalization of angiotensin I/II (Ang I/II), which was converted from angiotensinogen, was detected in rat PDL tissues. HPLFs that were stimulated by Ang II also increased their gene expressions of TGF-β1 and ALP. Furthermore, the antagonist for Ang II type 2 receptor, rather than for type 1, significantly inhibited gene expressions induced by the stretch loading. Analysis of these data suggests that Ang II mediates the loading signal in stretched HPLFs to induce expressions of TGF-β1 and ALP.     

人牙周膜成纤维细胞增殖与压力关系的初步观察

目的：在体外培养环境下观察压力对人牙周膜成纤维细胞（HPLF）增殖的影响。方法：取第4－6代培养的HPLF,应用可控压力细胞加载装置分别间断性施加30、60、90kPa的压力,分别在培养3、5、7d后用MTT法测定各组的A值。结果：HPLF在30、60、90kPa的压力培养环境下MTT反应的A值显著小于对照组,压力值越大,A值越小。结论：30、60、90kPa间断性压力显著抑制PLF细胞增殖,该抑制作用随压力值增大而增强。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响

目的:探讨不同力值和不同时间的压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响。方法:采用细胞加载装置,对细胞分别施加0、0.25、0.5、1.0 MPa的压力30 min;施加1.0 MPa的压力,分别持续10、30、50 min,通过四唑盐比色实验(MTT法)检测细胞受力后6、12、18、24、30、36 h的OD值。结果:0.25、0.5 MPa组的OD值与对照组无显著性差异(P>0.05);1.0 MPa压力下,加载30 min和加载50 min组有显著性差异(P<0.05),表现为受力后6 h细胞OD值即明显降低,12 h进一步降低,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),24 h后细胞OD值与对照组无差异。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖活力和压力值以及压力作用时间存在一定的关系;细胞的增殖活力随着压力值的增加、压力作用时间的延长而有所降低,但这种影响是可逆的。     

bFGF与米贝拉地尔对人牙周膜成纤维细胞增殖的调节

目的:研究成纤维细胞生长因子(bFGF,以下用B代表)与米贝拉地尔(Mibefradil,以下用M代表)这两种药物对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)增殖的调节作用。方法:B分10.0、20.0、30.0 μg/L 3种浓度(分别为B1、B2、B3),M分2.5、5.0、10.0 μmol/L 3种浓度(分别为M1、M2、M3),再按加药时间分为1 d组、2 d组和3 d组,用WST法检测两种药物单独使用和按先后不同顺序联合使用后HPLFs的增殖率。结果:两种药物单独使用可分别起到促进和阻滞细胞增殖的效果,但是B作用时间过长细胞表现为增殖受阻滞。其中,B3作用1 d组细胞增殖率最高(P<0.05),M2作用1 d组细胞增殖率最低(P<0.05)。M仅对加用B3的细胞有明显阻滞作用,与单独使用B3的细胞增殖率有显著性差异(P<0.05)。另外,只有B1不能改变细胞加用M后增殖受阻滞的现象。所有联合用药后的细胞增殖率均与正常细胞增殖率无统计学差异。结论:bFGF与Mibefradil单独使用有各自的最佳作用浓度和作用时间。除过度增殖状态外,HPLFs增殖状态很难受到阻滞,并且处于增殖受阻滞状态的细胞很容易恢复增殖状态,以维持HPLFs不断处于增殖平衡状态。     

实验性脑缺血大鼠牙周组织中COX-2、MMP-9的表达研究

目的    探讨实验性急性脑缺血发生后牙周组织中炎症因子环氧化酶-2（COX-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达及意义。方法    选取体重300 g左右的纯种6月龄雄性Wistar大鼠30只,随机分为3组,每组10只,采用四血管闭塞法建立实验性大鼠脑缺血动物模型。3组大鼠分别于建模成功后即刻、3 d、7 d处死,并制作上颌第一磨牙沿牙体长轴近远中向5 μm厚的牙体牙周组织联合切片。HE染色进行牙周组织学观察;免疫组化染色（SP法）,光镜观察COX-2、MMP-9在牙周组织中的表达。用专业图像分析软件分别对各组标本切片的免疫组化染色结果进行图像分析。结果    成功建立大鼠急性脑缺血动物模型后,3 d处死组较即刻处死组牙周组织中COX-2、MMP-9的表达升高,7 d处死组较3 d处死组牙周组织中COX-2、MMP-9的表达升高,组间两两比较差异均有统计学意义（均P < 0.05）。结论    急性脑缺血发生后,牙周组织中的炎症细胞因子COX-2、MMP-9不断升高,牙周破坏已经开始。     

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下，细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况，探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法：采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上，通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况，并进行统计分析。结果：在8％、12％、16％力值组，细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增，肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗，排列更有规律；而在20％力值组，其结果则反之。结论：静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架。     

ʵ������ȱѪ����������֯��COX-2��MMP-9�ı���о�

??Objective    To discuss the expression of inflammation factors COX-2 and MMP-9 in periodontal tissue and its significance in the experimental acute cerebral ischemia.  Methods    The study was conducted in the laboratory of Stomatological hospital of Hebei Medical University in June 2012. Totally 30 male Wistar rats of 300 g or so were randomly divided into 3 groups?? 10 rats in each group. Four vessel occlusion was used to establish the model of cerebral ischemia in rats. The 3 groups of rats were respectively killed immediately and 3 d and 7 d after modeling?? and the periodontal tissue of 5 μm thick was produced in the maxillary first molar. HE staining was performed to observe the periodontal tissues?? and the expression of MMP-9 and COX-2 in periodontal tissues was observed by immunohistochemical staining ??SP method??. Image analysis of immunohistochemical staining of the specimens of each group were performed by professional image analysis software. Results    The expression of COX-2 and MMP-9 in the 3-day group after the acute cerebral ischemia model rats was significantly higher than those in the immediate death group ??P < 0.05??. The expression of COX-2 and MMP-9 in the 7-day group was significantly higher than those in the 3-day group??P < 0.05??. Conclusion    After onset of acute cerebral ischemia?? the inflammatory cytokines COX-2 and MMP-9 in periodontal tissues are increased?? and periodontal destruction has begun.     

根管消毒药物体外细胞毒性和细胞回复能力的研究

目的:探讨5种常用根管消毒药物的细胞毒性以及毒性的可逆性,寻找一种较理想的根管消毒药物。方法:用体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs),通过MTT法、ALP活性测定法以及透射电镜等方法,系统评价甲醛甲酚(FC)、樟脑酚(CP)、甲硝唑、氢氧化钙和中药制剂的细胞毒性及其毒性的可逆性。采用SPSS11.5软件包,所有数据均经正态分布检验、方差齐性检验、t检验和方差分析。结果:FC和CP对HPLFs的增殖、ALP活性均有显著抑制作用(P<0.01、P<0.05)。FC的细胞毒性为3～4级,细胞回复度<30%。CP的细胞毒性为1～3级,细胞回复度<30%。甲硝唑对HPLFs的增殖、ALP活性有轻微抑制作用,细胞毒性为1级,细胞回复度为32%～85%。氢氧化钙和中药制剂对HPLFs的增殖和ALP活性均无显著抑制作用(P>0.05),细胞毒性为0～1级,细胞回复度>90%。通过透射电镜观察,HPLFs的超微结构显示,FC、CP有重度毒性,甲硝唑有轻度毒性,而氢氧化钙和中药制剂基本无毒性。结论:FC、CP细胞毒性大,且毒性不可逆;甲硝唑有轻微细胞毒性,但毒性可逆;氢氧化钙和中药制剂无细胞毒性。临床上可用氢氧化钙或中药制剂作为较理想的根管消毒药替代有毒性的FC、CP。