氮硝基左旋精氨酸对烟雾吸入性损伤大鼠肺保护作用的研究

目的探讨氮硝基左旋精氨酸对烟雾吸入性损伤大鼠肺组织的保护作用。方法雄性Sprague-Dawle大鼠60只采用随机数字表法分为4组,空白组6只,余下分为生理盐水组、低剂量组和高剂量组,每组设6h、24h、48h三个时相点,各时相点6只。空白组不予任何处理,其余3组大鼠制作烟雾吸入性损伤模型,生理盐水组、低剂量组和高剂量组于伤后分别腹腔注射等容量的生理盐水、浓度为10mg/kg的氮硝基左旋精氨酸和浓度为20mg/kg的氮硝基左旋精氨酸。注射30min后将每只大鼠股动脉取血5mL,离心后检测血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,活杀后取部分左肺匀浆后检测丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,取部分右肺经4%甲醛溶液固定后做病理苏木精-伊红染色切片光镜观察。结果低剂量组48h与同时相点生理盐水组相比,TNF-α[(179.51±8.67)ng/L vs (231.39±9.98)ng/L],IL-6[(289.01±31.84)pg/mL vs(398.67±32.93)pg/mL],MDA[(4.37±0.62)nmol/mg vs (4.41±0.35)nmol/mg],MPO[(41.39±1.49)U/g vs (50.18±1.72)U/g]降低,差异有高度统计学意义(P<0.01),SOD[(93.82±5.69)U/mg vs (88.46±5.48)U/mg]和IL-10[(110.33±4.21)ng/L vs (108.85±5.47)ng/L]升高,差异有高度统计学意义(P<0.01)。高剂量组比低剂量组差异更显著。病理切片显示致伤后6h低剂量组和高剂量组大鼠相较生理盐水组肺组织炎细胞浸润减少,肺泡萎陷程度减轻,其中高剂量组比低剂量组改善更明显。结论氮硝基左旋精氨酸可减轻大鼠吸入性损伤后肺组织中炎性反应及过氧化反应,从而减轻肺损伤的程度。     

气道应用T-bet重组腺病毒抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症

目的探讨气道应用T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对哮喘小鼠气道炎症反应的影响及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为4组,实验组(A组)、对照病毒组(B组)、PBS对照组(C组)和正常对照组(D组),A、B、C组采用卵蛋白(OVA)、明矾建立哮喘模型,分别于第19天激发前气道内单次应用50μLAdT-bet(108pfu)、AdLacZ、PBS。26d取肺泡灌洗液(BALF)测定细胞成分、IL-4、IL-5、IFNγ浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3表达。结果1)A组BALF中的嗜酸粒细胞(EOS)为(0.5±0.2)%明显低于B组(21.2±6.9)%和C组(20.9±6.8)%(P<0.01);2)A组BALF中的IL-4(6.7±3.8)pg/mL和IL-5(12.4±4.9)pg/mL的水平明显低于B组[IL-4(91.4±22.5)pg/mL和IL-5(55.6±10.6)pg/mL]和C组[IL-4(89.8±23.6)pg/mL和IL-5(56.7±11.5)pg/mL](P<0.01),而IFNγ的水平(710±45)pg/mL则明显高于B组(13.1±3.5...     

Th17/Treg相关因子在哮喘小鼠中的表达变化及其意义

目的检测哮喘模型小鼠辅助性T17细胞(Th17)和调节性T细胞(Treg)相关细胞因子及受体的表达变化,探讨Th17/Treg在哮喘发病机制中的作用。方法 20只清洁级BALB/C雌鼠,鼠龄6周,体质量18~20 g。随机分为对照组和哮喘组,每组10只。哮喘组小鼠腹腔注射卵白蛋白(OVA)与氢氧化铝的氯化钠混悬液3次后,给予雾化的OVA激发,建立哮喘小鼠模型。对照组给予等量的0.9%氯化钠溶液。末次激发后24 h处死小鼠,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类计数;酶联免疫吸附分析(ELISA)、实时定量聚合酶链反应(Q-PCR)和Western blot法测定小鼠外周血和肺组织中的Th17/Treg细胞相关因子及受体的表达水平。结果哮喘组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性细胞比例、中性粒细胞比例、淋巴细胞比例显著高于对照组。哮喘组外周血和肺组织中白细胞介素(IL)-17和IL-18高于对照组[IL-17(124.36±2.14)pg/mL、(21.70±1.02)pg/mL vs(25.98±5.23)pg/mL、(19.95±3.21)pg/mL;IL-18(227.06±24.14)pg/mL、(413.97±32.01)pg/mL vs(120.38±10.32)pg/mL、(238.21±15.33)pg/mL],IL-10和转化生长因子β(TGF-β)低于对照组[IL-10(60.42±24.12)pg/mL、(65.14±15.11)pg/mL vs(61.07±14.36)pg/mL、(104.36±28.16)pg/mL;TGF-β(38.72±12.12)pg/mL、(58.65±24.21)pg/mL vs(30.19±10.16)pg/mL、(121.06±39.12)pg/mL];哮喘组维甲酸相关孤儿素受体γt(RORγt)水平高于对照组[(8.77±2.35)、(4.46±1.05)vs(3.03±1.02)、(3.45±1.25)],肺叉头蛋白3(FoxP3)水平低于对照组[(5.15±1.84)vs(12.35±3.21)];并且外周血和肺组织中相关细胞因子及受体的表达差异具有显著统计学意义(P0.01)。结论 Th17/Treg及其主要相关因子在哮喘的发病中具有重要作用。     

川芎嗪调控NF-κB信号通路对银屑病HaCaT细胞模型趋化因子和炎症因子表达影响北大核心CSCD

目的:探讨川芎嗪调控NF-κB信号通路对银屑病HaCaT细胞模型趋化因子和炎症因子表达的影响。方法:HaCaT细胞分为Control、Model(10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-L(0.1 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-M(0.2 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-H(0.4 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-M+PMA组(1μmol/L的NF-κB信号激活剂PMA、0.2 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)。qRT-PCR检测Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达,ELISA法检测IL-6、IL-4、IL-13含量,Western blot检测p65、IκBα蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达水平升高(1.00±0.09 vs 3.69±0.25,1.00±0.10 vs4.51±0.28,1.00±0.11 vs 2.96±0.21,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13增多[(96.32±8.87)pg/ml vs(275.14±26.31)pg/ml,(23.61±1.47)pg/ml vs(108.62±11.96)pg/ml,(5.58±0.42)pg/ml vs(26.35±2.47)pg/ml,P<0.05],p65蛋白表达水平升高(0.23±0.02 vs 0.86±0.08,P<0.05),IκBα蛋白表达水平降低(0.96±0.09 vs 0.25±0.04,P<0.05)。与Model组相比,TMP-L、TMP-M、TMP-H组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达水平依次降低(3.69±0.25 vs 2.75±0.14、2.23±0.16、1.40±0.11,4.51±0.28 vs 3.27±0.36、2.23±0.17、1.80±0.12,2.96±0.21 vs 2.03±0.14、1.62±0.12、1.14±0.11,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13减少[(275.14±26.31) pg/ml vs (204.15±13.62) pg/ml、(162.01±14.81) pg/ml、(117.62±10.30) pg/ml,(108.62±11.96) pg/ml vs(80.43±7.79)pg/ml、(53.24±4.11)pg/ml、(31.20±2.26)pg/ml,(26.35±2.47)pg/ml vs(14.20±1.22)pg/ml、(10.66±1.04)pg/ml、(6.42±0.50)pg/ml,P<0.05],细胞中p65蛋白表达水平降低(0.86±0.08 vs 0.56±0.05、0.45±0.04、0.30±0.03,P<0.05),IκBα蛋白表达水平升高(0.25±0.04 vs 0.52±0.06、0.63±0.06、0.79±0.07,P<0.05)。与TMP-M组相比,TMP-M+PMA组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA水平升高(1.00±0.08 vs 1.86±0.12,1.00±0.10 vs 2.64±0.23,1.00±0.09 vs 1.56±0.13,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13增多[(163.50±12.84)pg/ml vs(200.61±13.60)pg/ml,(52.87±5.39)pg/ml vs(86.48±6.92)pg/ml,(9.76±0.75)pg/ml vs(16.42±1.37)pg/ml,P<0.05],p65蛋白表达水平升高(0.45±0.06 vs 0.98±0.12,P<0.05),IκBα蛋白表达水平降低(0.60±0.07 vs 0.26±0.03,P<0.05)。结论:川芎嗪通过抑制NF-κB信号通路降低银屑病HaCaT细胞模型趋化因子表达和炎症因子分泌水平。     

Fractalkine在大鼠肝硬化中全肝血流阻断致肺损伤中表达

目的探讨趋化因子Fractalkine(Fkn,CX3CL1)在大鼠肝硬化模型中全肝血流阻断致肺损伤中表达及意义。方法选择80只雄性成年SD大鼠,鼠龄2.0～2.5个月,体质量160～200 g。随机分为4组(n=20),即对照组(A组),阻断肝门、肝上下腔静脉及肝下下腔静脉15 min(B组)、30min(C组)、45 min(D组);制作肝硬化大鼠全肝血流阻断模型。取右肺下叶肺组织常规苏木精-伊红(HE)染色病理检查,留取肺及肝组织检测Fkn的表达,并切取肺组织及血浆检测核因子-κB(NF-κB)及白细胞介素21(IL-21)水平变化。结果各组成功建模后,D组肺损伤病理评分[(12.25±1.52)分]明显高于A组[(2.05±1.00)分]、B组[(7.90±1.62)分]及C组[(8.25±1.55)分](P0.001),A组无明显病理改变。在各组肝、肺组织中Fkn的表达测定中,D组Fkn表达明显高于B组、C组及A组(P0.05)。血清中NF-κB、IL-21表达在A组[(11.67±2.11) ng/L,(633.30±42.03) ng/L]最低(P0.05),D组[(18.13±1.83) ng/L,(801.96±54.38) ng/L]明显高于B组[(14.72±2.56) ng/L,(712.67±53.63) ng/L]及C组[(15.23±2.26) ng/L,(713.59±61.60) ng/L](P0.05)。肺组织中NF-κB、IL-21表达A组[(14.48±2.07) ng/L,(590.89±55.38) ng/L]最低(P0.05),D组[(19.66±1.53) ng/L,(910.85±87.63) ng/L]明显高于B组[(16.65±1.75) ng/L,(696.23±51.91) ng/L]及C组[(17.02±1.47) ng/L,(697.22±41.24)ng/L](P0.05)。结论 Fkn在肝硬化大鼠全肝血流阻断致肺组织损伤时表达增加,且阻断时间超过30 min后更加明显。     

肺结核患者外周血Th17/Treg的表达及其病理意义

为探讨肺结核患者外周血Th17与Treg的表达及其病理意义,收集2017年1月至2018年6月青海省第四人民医院收治的80例肺结核患者作为结核组,同期收集80例健康成人作为对照组。观察两组外周血Th17与Treg及其细胞因子的表达情况,同时分析Th17与Treg及其细胞因子与肺结核患者病情严重程度的相关性。结果显示,与对照组比较,结核组Th17降低[(2.69±0.93)%vs(1.94±0.91)%,P=0.000],Treg升高[(7.88±2.65)%vs(9.60±2.59)%,P=0.000],IL-17降低[(32.89±8.92) pg/mL vs(25.72±9.62) pg/mL,P=0.000],IL-10升高[(22.80±6.81) pg/mL vs(26.61±7.62) pg/mL,P=0.001]。肺结核患者病灶数目、直径总和与Th17、IL-17呈显著负相关(P0.05),与Treg、IL-10呈显著正相关(P0.05)。与无空洞形成的患者比较,空洞形成的患者Th17降低[(2.06±0.62)%vs(1.76±0.68)%,P=0.045],Treg升高[(8.79±2.12)%vs(10.81±2.41)%,P=0.000],IL-17和IL-10差异无统计学意义(P0.05)。提示外周血中Th17与Treg在肺结核患者中表达异常,与结核病情严重度相关。     

经皮椎弓根螺钉治疗胸腰段脊柱骨折对椎体功能和炎症水平的影响

目的观察经皮椎弓根螺钉和开放椎弓根螺钉治疗胸腰段脊柱骨折的疗效及其对椎体功能和炎症水平的影响。方法选择2016年1月至2017年12月在上海市第八人民医院收治的胸腰段脊柱骨折患者92例,其中男性60例,女性32例;年龄19～59岁,平均年龄35.01岁;坠落伤54例,砸伤29例,交通伤9例;根据骨折部位,T109例,T1119例,T1223例,L123例,L218例;根据AO分型,A1型42例,A2型33例,A3型17例。根据手术方式不同分为观察组和对照组,每组各46例。观察组予以经皮椎弓根螺钉治疗,对照组予以传统开放椎弓根螺钉治疗。比较两组术后疗效、手术时间、术中出血量、切口长度、术后镇痛时间、下床活动时间和住院时间,以及两组治疗前后椎体前缘高度、后凸Cobb角、Oswesry功能障碍指数(ODI)、美国脊髓损伤协会(ASIA)评分、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)。结果观察组总有效率97.83%,对照组93.48%;两组总有效率差异无统计学意义(χ~2=0.261,P 0.05)。观察组手术时间、术中出血量、切口长度、术后镇痛时间、下床活动时间和住院时间明显减少或者短于对照组(P 0.01)。观察组和对照组治疗前椎体前缘高度、后凸Cobb角、ODI、ASIA评分、hs-CRP、TNF-α、IL-1β和HMGB-1水平差异无统计学意义[(61.38±10.67)%vs (60.75±11.59)%,(16.34±2.67)°vs (16.73±3.19)°,(15.34±6.38)%vs (15.68±7.16)%,(35.64±5.38)分vs (36.19±6.18)分,(6.38±0.96) mg/L vs (6.27±0.84) mg/L,(36.18±5.68) pg/mL vs (35.64±6.27) pg/mL,(17.38±2.37) pg/mL vs (17.15±3.58) pg/mL,(18.37±3.68) pg/mL vs (17.93±4.15) pg/mL;P 0.05];治疗后观察组和对照组ODI和ASIA评分较治疗前明显降低或升高[ODI:(4.85±2.34)%vs (10.68±3.69)%;ASIA:(48.19±3.18)分vs (43.68±4.29)分;P 0.01],而观察组和对照组的hs-CRP、TNF-α、IL-1β和HMGB-1较治疗前明显降低[hs-CRP:(8.94±2.49) mg/L vs (10.86±3.17) mg/L;TNF-α:(43.68±8.64) pg/mL vs (58.67±6.47) pg/mL;IL-1β:(24.35±3.43) pg/mL vs (31.46±4.41) pg/mL;HMGB-1:(31.32±3.71) pg/mL vs (43.18±5.18) pg/mL;P 0.01];观察组ODI、ASIA评分降低或升高水平较对照组更加明显(P 0.01),而对照组hs-CRP、TNF-α、IL-1β和HMGB-1升高水平较观察组更加明显(P 0.01)。结论经皮椎弓根螺钉治疗胸腰段脊柱骨折疗效确切,具有微创、术后炎症反应轻和恢复快,有助于术后脊柱功能的恢复。     

小鼠吸入性损伤模型的建立与吸入性损伤对小鼠肺TNF-α、内脏器官NF-κB及生存率影响的实验研究

目的建立小鼠烟雾吸入性损伤模型,观察烟雾吸入对小鼠肺肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内脏器官核转录因子-kappa B(NF-κB)及生存率的影响。 方法将190只BALB/c小鼠,随机选取10只,设为对照组;其余180只小鼠随机分为6组,每组30只,采用自制致伤装置,以松木屑和煤油作为发烟材料,对6组小鼠分别进行6、8、10、12、14、16 min烟雾吸入致伤,对照组小鼠不经烟雾吸入,其他处理同各烟雾吸入组。观察吸入性损伤后小鼠行为状态及72 h生存变化情况;各组小鼠死亡后立即取肺、心、肝、肾组织,观察其病理改变及检测组织细胞NF-κB活化状态积分值,并测定小鼠肺组织内TNF-α含量。数据间比较采用单因素方差分析及t检验。 结果(1)对照组,致伤6、8、10 min组小鼠在吸入致伤过程中均存活,而致伤12、14、16 min组小鼠在致伤过程中分别出现部分或全部死亡;除对照组外,各致伤组存活小鼠伤后出现呼吸急促、活动减少、随后自行恢复至正常状态;对照组,致伤6、8、10、12、14、16 min组伤后72 h生存率分别为100%、100%、97%、73%、52%、43%和0;(2)伤后死亡小鼠各器官组织有不同程度的炎症细胞浸润、充血、水肿等病理表现;(3)致伤14 min组伤后死亡的小鼠肺、心、肝、肾组织内可见大量位于细胞核中的NF-κB p65阳性染色,该阳性染色信号在伤后24～72 h时间段死亡小鼠上述器官组织的NF-κB p65蛋白积分光密度(IOD)值分别为3 245.37±296.40、2 022.92±356.52、2 148.70±310.99、2 054.61±260.56,均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05);(4)致伤14 min组伤后24～72 h死亡小鼠的肺组织TNF-α的含量(54.86±5.24)pg/mL明显高于对照组(27.84±4.08)pg/mL、致伤时死亡(31.24±4.46)pg/mL及伤后0～24 h内死亡(45.09±4.69)pg/mL,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。 结论持续8～14 min烟雾吸入导致后续72 h内相应小鼠生存率下降、肺组织TNF-α表达显著上调以及多器官内的急性炎症反应和NF-κB信号通路的显著激活。烟雾吸入时间大于16 min时致小鼠即刻死亡。     

玻璃酸钠对膝骨关节炎的治疗作用及其与相关细胞因子表达的关系

目的 观察玻璃酸钠治疗膝骨关节炎的临床疗效及对关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响.方法 30例健康人群为对照组,30例轻、中度膝骨关节炎患者观察组;观察组患者给予膝关节腔内注射玻璃酸钠2 mL,每周一次,5周为一个疗程.评估观察组一个疗程后临床症状的改善及治疗前后两组关节滑液中细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α水平变化.结果 一个疗程后,观察组患者膝关节在疼痛及关节功能方面改善,与治疗前相比P＜0.01;临床总有效率为90％;观察组治疗前关节滑液中细胞因子水平为IL-1β[(85.63 ±18.94) ng/L]、IL-6[(234.06 ±46.11) pg/mL]、TNF-α[(209.87±48.72) ng/mL]与对照组IL-1β[(21.13±7.54)ng/L]、IL-6[(45.78±17.09) pg/mL]、TNF-α[(59.87±16.01)ng/mL]相比浓度明显升高(P＜0.01);一个疗程后与治疗前相比三种细胞因子浓度均明显降低[分别为(44.69±15.68) ng/L,(92.18±34.76) pg/mL,(118.63±40.97) ng/mL,P＜0.01].结论 玻璃酸钠治疗膝骨关节炎短期临床疗效确切,其抑制了细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α的表达,降低了膝关节软骨的损害.     

木材锯末与谷壳烟雾致豚鼠肺部炎性反应和氧化-抗氧化失衡

目的 探讨木材锯末和谷壳烟雾致豚鼠肺部的异常炎性反应及氧化损伤作用.方法 20只白化豚鼠随机分为两组,每组10只.实验组每天暴露于木材锯末和谷壳燃烧所产生的烟雾中两次,每次30 min,共21 d;对照组暴露于新鲜空气.3周后进行肺组织病理检测,并检测肺组织匀浆中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力及肺泡灌洗液(BALF)中的MDA、SOD、总抗氧化能力、白细胞介素8(IL-8)、IL-6、细胞问黏附分子1(ICAM-1)的活力或含量.结果 与对照组豚鼠比较,实验组肺实质、小动脉及支气管炎性细胞浸润明显增多;肺泡面积比例及平均肺泡面积明显增大;单位而积肺泡数明显减少[(134.11±18.22)个/视野比(178.76±21.72)个/视野,P<0.01];肺小动脉及支气管平滑肌层显著增厚.肺组织匀浆中SOD、GSH-PX、GSH、CAT、总抗氧化能力的活力或含量降低[(225.55±12.52)U/mg比(296.57±13.46)U/mg,(23.60±1.85)mg/g比(34.38±1.85)mg/g,(119.67±9.61)mg/g比(134.73±8.07)mg/g,(7.10±0.21)U/mg比(9.20±0.24)U/mg,(0.89±0.10)U/mg比(1.27±0.15)U/mg,P均<0.01];MDA的含苗显著升高[(3.05±0.38)U/mg比(2.09±0.17)U/mg,P<0.01].BALF中,SOD、总抗氧化能力的活力显著降低;MDA的含量显著升高;BALF中IL-6、IL-8、ICAM-1浓度增高.结论 木材锯末与谷壳烟雾可导敛豚鼠肺组织及气道氧化-抗氧化失衡,引起氧化损伤.     

糖皮质激素对类风湿关节炎炎性因子改变及效果的观察

目的：分析糖皮质激素对类风湿关节炎炎性因子改变及效果。方法：选取我院2014年8月至2015年8月门诊及住院就诊的80例类风湿关节炎患者,依据抽签法分成对照组与观察组,每组40例,对照组采取常规治疗,观察组基于对照组联合糖皮质激素治疗,对比分析两组治疗后炎性因子、RF、ESR、晨僵、关节肿胀数及关节压痛数、DAS评分及VAS评分变化、治疗有效率与不良反应。结果：治疗后,观察组炎性因子TNF-α低于对照组[(31.23±8.74) vs.(36.46±9.12) pg/mL],IL-6低于对照组[(2.62±0.31) vs.(3.67±0.36) pg/L],CRP低于对照组[(15.26±1.03) vs.(17.38±1.10) mg/L],比较有显著差异(P<0.05);观察组RF低于对照组[(15.34±1.21) vs.(20.25±1.24) U/mL],ESR低于对照组[(24.36±1.57) vs.(28.95±1.60) mm/h],晨僵少于对照组[(16.73±1.28) vs.(18.97±1.34)],关节肿胀数低于对照组[(47.28±0.40) vs.(6.73±0.45)],关节压痛数低于对照组[(6.18±0.52) vs.(9.36±1.05) min],比较差异显著(P<0.05);观察组DAS28低于对照组[(1.93±0.20) vs.(2.18±0.26)分],VAS低于对照组[(2.23±0.25) vs.(3.07±0.12)分],比较差异明显(P<0.05);治疗有效率95.00%高于对照组80.00%(P<0.05),观察组总不良反应率25.00%高于对照组20.00%,但无统计学意义(P>0.05)。结论：类风湿关节炎运用糖皮质激素治疗安全性高,可有效降低炎性因子水平,改善患者临床症状,促进身心恢复。     

白细胞介素-37在类风湿性关节炎患者血清表达水平的研究

目的 通过检测类风湿性关节炎(RA)患者血清中细胞因子白细胞介素(IL)-37、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-18、炎性指标红细胞沉降率以及C-反应蛋白(C-reactionprotein,CRP)水平,观察RA患者临床数据包括压痛关节数,肿胀关节数以及DAS28评分等,探讨RA患者血清IL-37水平升高的意义以其在RA发病机制中可能的作用.方法 80例RA患者、80例健康对照患者,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中细胞因子水平.结果 RA患者血清中IL-37[(40.33±11.25)pg/mL]、TNF-α[(110.41 ±35.37) pg/mL]、IL-18[(121.73±29.22) pg/mL]水平以及红细胞沉降率(ESR)[(42.31±15.02) mm./h]、CRP[(38.31±17.22) mg/L]水平明显高于对照组IL-37[(18.21±5.72) pg/mL]、TNF-α[(30.19±6.82) pg/mL]、IL-18[(55.47±7.29) pg/mL]水平,组间差异有统计学意义(P＜0.05).IL-37的表达与TNF-α、IL-18水平呈正相关(相关系数r=0.981,P=0.001).结论 IL-37在RA患者体内高表达并与其它几种炎性因子的表达具有相关性,IL-37可能作为炎性抑制因子参与了RA的发生、发展.     

小鼠心肌缺血再灌注损伤后NF-κB磷酸化状态及炎症因子的表达水平

目的探讨小鼠心肌缺血再灌注损伤后核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)磷酸化状态及炎症因子的表达水平.方法15只小鼠采用冠脉结扎再灌注法建立小鼠心肌缺血再灌注模型(观察组),另选15只小鼠作为对照组.再灌注损伤4h后,处死小鼠,HE染色分析心肌组织病理变化.取心肌组织采用Western blot分析NF-κB信号通路变化,采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immu-nosorbent assay,ELISA)分析两组小鼠外周血和心肌组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的表达水平.结果观察组小鼠心肌缺血再灌注后,可见心肌组织中炎症细胞大量浸润.与对照组比较,观察组小鼠心肌细胞细胞核中NF-κB水平显著增加,细胞质中p-IκBα水平显著增加,差异具有统计学意义(F值分别为30.497和17.501,P值均<0.05).观察组小鼠外周血中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平较对照组显著上调[(373.12±25.19)pg/mL比(178.53±16.01)pg/mL,(919.43±29.88)pg/mL比(119.15±18.09)pg/mL,(519.44±20.14)pg/mL比(136.65±12.41)pg/mL,t值分别为25.250、88.735和62.670,P值均<0.05],心肌组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平较对照组显著上调[(100.52±10.23)pg/mL比(19.32±4.87)pg/mL,(159.44±12.43)pg/mL比(34.65±8.33)pg/mL,(159.39±14.29)pg/mL比(20.48±8.32)pg/mL,t值分别为27.757、32.300和32.536,P值均<0.05],差异均具有统计学意义.结论心肌缺血再灌注后NF-κB处于激活状态,导致下游炎症因子大量释放,增加了心肌细胞负担.     

Th17及Tc17细胞在博来霉素致系统性硬化病小鼠模型外周血、皮肤和肺组织中的表达

目的 研究T辅助细胞17(Th17)及T细胞毒细胞17(Tc17)在博来霉素致系统性硬化病(SSc)小鼠模型外周血、皮肤和肺组织的表达及意义.方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组(A组),博莱霉素注射4周无或轻度肺纤维化(PF)组(B组),明显PF组(C组).观察小鼠皮肤、肺部炎症和纤维化(Ashcroft评分)病变,流式细胞计数检测外周血、皮肤和肺部CD4+、CD8+、CD4+IL-17+Th17、CD8+IL-17+Tc17细胞的比例,荧光定量PCR(RT-PCR)检测小鼠皮肤和肺部维甲酸相关孤独受体(RORγt)、白细胞介素(IL) -17A mRNA的表达,ELISA检测外周血IL-17的含量,并分析这些指标的相关性.结果 皮肤羟脯氨酸含量和PF评分C组[(3.07±1.26) μg,/mg和4.0±1.41]、B组[(2.43±0.61) μg/mg和1.50±0.76]较A组[(1.45±0.40) μg/mg和0.60±0.70]明显增加,C组肺羟脯氨酸的含量较A组和B组明显增多(P均＜0.05).与A组比较,B组和C组外周血、皮肤和肺组织CD4+细胞数明显增多,CD8+细胞数明显减少,Th17细胞比例明显增加,C组外周血、肺组织、B和C组皮肤Tc17细胞明显增加(P均＜0.05);B组和C组外周血、肺组织和皮肤Th17/CD4+CD8+[ (1.41±0.36)％、(1.79±0.77)％],[(2.58±1.07)％、(5.23±2.34)％]和[(3.50±1.20)％、(4.02±1.32)％]较A组(0.71±0.25)％、(1.15±0.59)％、(0.99±0.46)％明显增加,Tc17/CD4+CD8+肺组织C组(1.62±0.53)％较A组(1.00±0.47)％,皮肤B组(1.70±0.70)％和C组(1.63±0.63)％较A组(1.11±0.34)％明显增高(P均＜0.05).与A组比较,B组和C组皮肤、C组肺组织IL-17A、RORγt mRNA的表达量、外周血IL-17含量明显增高(P均＜0.05).外周血Th17细胞、[L-17含量与肺部炎症、PF评分、肺和皮肤羟脯氨酸含量、皮肤炎症密切正相关(P＜0.01);皮肤和肺部Th17和Tc17细胞分别与皮肤和肺部炎症和纤维化评分、皮肤和肺部羟脯氨酸的含量密切正相关(P均＜0.01).结论Th17和Tc17细胞在SSc小鼠模型外周血、皮肤、肺组织的比例增高,且以Th17细胞为主,其表达与皮肤、肺部炎症和纤维化病变密切相关,并可通过分泌IL-17参与SSc的发病.     

香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠CD4+IL-17+辅助性T细胞的影响

目的 探讨香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠肺实质、外周血中CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)的影响。方法 将40只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为4组：对照12周组(C12)、对照24周组(C24)、烟雾暴露12周组(S12)、烟雾暴露24周组(S24),每组10只。香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型。HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔(Lm)和肺泡破坏指数(DI);酶联免疫吸附法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-17、干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺实质中IFN-γ和TNF-α水平;流式细胞术检测小鼠肺实质、外周血中CD4+ IL-17+T(Th17)细胞占CD4+T细胞的百分比;免疫荧光PCR法检测小鼠肺实质、外周血中RORγt和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系。结果 (1)S12组和S24组Lm为(39.19±3.51) μm和(46.87±7.16) μm,DI为39.13±1.57和45.16±3.13,均明显高于C12组和C24组(32.60±3.21) μm和(32.38±3.73) μm及28.23±1.62和28.86±2.07,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(均P＜0.05)。(2) S12组和S24组BALF中IL-17、IFN-γ及TNF-α水平[(119.72±10.72) ng/L和(296.40±14.00) ng/L、(129.7±22.2) ng/L和(251.1±62.4) ng/L,(17.35±1.60) ng/L和(36.35±1.43) ng/L]较C12组和C24组[(52.06±4.70) ng/L和(51.89±6.82) ng/L、(85.8±26.8) ng/L和(88.9±11.5) ng/L,(6.41±0.90) ng/L和(5.85±0.92) ng/L]明显增高;在肺实质中,S12组和S24组IFN-γ及TNF-α水平[(1124.3±174.4) ng/L和(1342.7±206.1) ng/L,(77.2±13.7) ng/L和(101.7±19.0) ng/L]亦较C12组和C24组[(946.2±81.9) ng/L和(1027.2±188.3) ng/L,(62.1±16.1) ng/L 和(64.4±15.1) ng/L]明显增高;且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(3)S12组和S24组肺实质中Th17细胞比例[(3.27±1.12)％和(7.19±2.24)％]明显高于C12组和C24组[(1.80±0.75)％和(1.99±0.59)％];S12组和S24组外周血中Th17细胞比例[(1.96±0.61)％和(3.82±1.26)％]亦明显高于C12组和C24组[(0.90±0.37)％和(0.97±0.32)％];且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(4) S12组和S24组肺实质中RORγt和IL-17 mRNA表达量（1.73±0.35和4.52±1.15,4.00±0.87和83.43±21.01）较C12组和C24组（0.83±0.21和0.90±0.36,0.80±0.22和0.64±0.31）明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中,S12组和S24组RORγt和IL-17 mRNA表达量(1.48±0.32和2.75±0.79,201.25±5.49和416.22±99.64)亦较C12组和C24组(0.59±0.25和0.75±0.36,24.90±5.49和22.28±4.24)明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(5)烟雾暴露组中,外周血和肺实质的Th17细胞比例均与Lm、DI值显著正相关(r值分别为0.767、0.772;0.722、0.706,均P＜0.05)。结论 Th17细胞在香烟暴露肺部炎症、肺气肿小鼠外周血及肺内表达增高,并伴活性的增强,且随烟雾暴露时间延长而增强,提示香烟暴露肺气肿小鼠Th17细胞上调可能是导致小鼠肺内及全身炎症反应放大的原因之一。     

冠心病人群血清NO、ET、hs-CRP、TNF-α和脂联素水平的相互关系

为探讨冠心病人群中血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂联素和胆固醇(TC)水平并分析其相互之间的关系,本文选定对照组(A组)20名、单纯冠心病组(B组)32例和冠心病伴高胆固醇血症组(C组)36例,对上述指标进行检测。结果表明:ET:B组(66.5±48.3pg/mL)、C组(73.2±53.8pg/mL)与A组(50.1±20.7pg/mL)比,分别P<0.01和P<0.001;hs-CRP:B组(2.18±2.02mg/dL)、C组(3.08±2.73mg/dL)与A组(1.46±1.26mg/dL)比,P均小于0.001;TNF-:αB组(19.0±7.0pg/mL)、C组(25.0±9.0pg/mL)与A组(15.0±5.0pg/mL)比,P均小于0.001;NO:B组(43.5±22.7μmol/L)、C组(40.1±20.3μmol/L)与A组(75.4±40.6μmol/L)比,P均小于0.001;脂联素:B组(8.58±2.72mg/L)、C组(7.08±2.03mg/L)与A组(12.46±3.26mg/L)比,P均小于0.001。血清脂联素水平和冠状动脉狭窄程度呈负相关(P<0.01)。在以TC为应变量的多元回归分析中,hs-CRP、脂联素进入方程(P<0.001)。冠心病人群的血清ET、hs-CRP、TNF-α水平显著高于非冠心病人群,血清NO、脂联素水平则与之相反。脂联素和TC、hs-CRP同样是一个很好的评价冠心病冠状动脉粥样硬化严重程度的指标。     

急性白血病患者浆细胞样树突状细胞TLR9的表达及功能分析

目的 检测Toll样受体9(TLR9) mRNA在急性白血病(AL)患者外周血浆细胞样树突状细胞(pDCs)内的表达水平及pDCs的功能.方法 免疫磁珠分选13例初诊未治急性髓细胞白血病(AML)、11例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者和15例健康对照外周血pDCs,real time-PCR检测pDCs内TLR9mRNA表达水平;用CpG ODN2216与pDCs共培养24h,ELISA检测上清液中IFN-α、IL-6、TNF-α水平.结果 AML-pDC和ALL-pDCs产生的IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别为[(378.24±89.96)pg/mL,(57.98±29.68)pg/mL,(60.24±26.75) pg/mL]、[(352.56±67.34) pg/mL,(68.78±31.45) pg/mL,(53.67±25.98) pg/mL]明显低于正常对照组[(685.86±102.16) pg/mL,(91.25±32.12) pg/mL,(86.65±28.69)pg/mL] (P＜0.05);AML-pDC、ALL-pDC中TLR9 mRNA的表达水平分别为0.34±0.25、0.41±0.23,均明显低于正常对照组(P＜0.05).结论 急性白血病患者pDCs内TLR9mRNA水平明显降低,可能与患者pDCs功能缺陷有关.     

let-7在小鼠哮喘模型气道炎性反应中的作用及机制

目的 观察let-7家族微RNA抑制剂(anti-let-7)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎性反应的影响,并探讨let-7参与哮喘形成的机制.方法 32只小鼠按随机数字法分为4组(n=8),即正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、干预对照组(C组)和干预组(D组).其中B、C和D组用鸡卵蛋白(OVA)免疫,建立哮喘模型,A组以生理盐水替代OVA处理.D组小鼠激发前注射anti-let-7以抑制内源性let-7表达,C组小鼠注射乱序siRNA对照.比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞计数,肺组织中let-7e以及BALF中白细胞介素-10(IL-10)含量；体外用anti-let-7转染肺癌细胞A549,并检测细胞中let-7e表达和细胞培养上清中IL-10的含量；荧光素酶报告法检测let-7e是否直接靶向IL-10.结果 与A组相比,B组和C组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增加[(20.32±5.33)×109/L和(24.74±6.69)×109/L比(7.12± 1.88)×109/L,(6.45±2.5)×109/L和(7.12±2.66)×109/L比(0.04±0.01)×109/L,均P＜0.01]；肺组织中let-7e水平明显升高(分别为3.83倍和3.27倍,均P＜0.01).与C组比较,D组BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少[(13.85±3.74)× 109/L比(24.74±6.69)×109/L,(2.15±1.13)×109/L比(7.12±2.66)×109/L,均P＜0.05]；肺组织中let-7e显著降低[(0.45±0.22)比(3.28±0.45),P＜0.01],同时BALF中IL-10水平明显升高[(4.68±0.85)比(1.70±0.29),P＜0.01].此外,在肺癌细胞A549 中转染anti-let-7,let-7e表达显著下降[(0.22±0.03)比(1.00±0.11),P＜0.01],同时培养上清中IL-10明显上升[(2.58±0.35)比(1.00±0.15),P＜0.01].体外let-7e过表达显著降低IL-10报告载体的荧光素酶活性[(0.59±0.06)比(1.00±0.03),P＜0.01],而对突变的IL-10报告载体没有抑制作用.结论 anti-let-7对哮喘小鼠气道炎性反应具有明显的抑制作用,其作用机制可能与let-7直接靶向并抑制IL-10有关.     

胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺的保护作用

目的 探讨胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺的保护作用.方法 雄性Wistar大鼠54只,随机分为正常组、盐水组、胰岛素组,每组18只.胰岛素组烟雾吸入性致伤后,皮下注射胰岛素(5 U/Kg),盐水组致伤后注射与胰岛素组等体积的生理盐水,正常组不做致伤处理.三组大鼠分别于12 h、24 h、48 h尾静脉取血检测血糖水平后腹主动脉取血2 ml,离心取血清检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量,并取各组各时段大鼠肺组织行病理切片光镜观察.结果 光镜下正常兰且肺泡结构清晰完整:盐水组肺组织肺泡间隔增宽、炎细胞浸润;胰岛素组肺组织炎细胞较盐水组减少.与正常组比饺,盐水组12 h血糖水平升高(P<0.0 1),与盐水纰比较,胰岛素组各时相点血糖水平降低(P<0.01).胰岛素组不同时相点TNF α和IL-6含量高于正常组(P<0.01)但低于盐水组(P<0.05或P<0.0 1).盐水组IL-10含量与正常组相比无统计学差异(P>0.0 5、),胰岛素组IL-10含量与正常组相比升高(P<0.0 1).结论 胰岛素可减轻烟雾吸入性损伤大鼠体内炎性反应,对肺组织有一定的保护作用.     

CX3CL1、CXCL10及CXCL5在慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者中的表达及其预后评估价值北大核心CSCD

目的:探讨CX3趋化因子配体1(CX3CL1)、CX趋化因子配体10(CXCL10)及CXCL5在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者中的表达及其预后评估价值。方法:选取2018年1月至2021年6月儋州市人民医院收治的226例慢性阻塞性肺疾病患者(COPD组)和60例健康志愿者(对照组),根据COPD患者病情严重程度分为稳定期COPD组(124例)和AECOPD组(102例),并根据AECOPD患者发病入院后28 d的死亡情况,将其分为存活组(64例)和死亡组(38例)。比较各组血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5表达水平。应用多因素Logistic回归分析影响AECOPD预后的危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CX3CL1、CXCL10及CXCL5对AECOPD患者预后评估的价值。Pearson相关分析探究AECOPD患者血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5间的相关性。结果:AECOPD组血清CX3CL1[(370.52±102.16)pg/ml vs(274.18±84.35)pg/ml、(108.52±27.36)pg/ml]、CXCL10[(115.73±34.60)pg/ml vs(73.26±25.17)pg/ml、(21.45±8.10)pg/ml]及CXCL5[(226.48±75.20)pg/ml vs(153.62±58.74)pg/ml、(87.20±31.15)pg/ml]水平均明显高于COPD组和对照组(P<0.001)。死亡组血清CX3CL1[(426.73±126.35)pg/ml vs(327.18±96.70)pg/ml]、CXCL10[(139.42±41.15)pg/ml vs(95.84±30.16)pg/ml]及CXCL5[(270.83±81.46)pg/ml vs(191.25±67.30)pg/ml]水平均明显高于存活组(P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示病程[OR(95%CI)=2.103(1.361~4.217)]、CX3CL1[OR(95%CI)=3.195(2.116~9.215)]、CXCL10[OR(95%CI)=2.328(1.480~5.942)]及CXCL5[OR(95%CI)=2.719(1.895~8.416)]是影响AECOPD预后的危险因素。ROC曲线显示CX3CL1、CXCL10及CXCL5三项联合评估AECOPD患者预后的曲线下面积为0.937(95%CI:0.874~0.986),敏感度为96.8%,特异度为84.5%。相关分析显示,AECOPD患者血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均呈正相关(P<0.001)。结论:血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平在AECOPD患者中明显升高,三项联合检测对AECOPD患者预后评估具有较好的价值。