离子捕获法测定糖化血红蛋白及临床应用

了解糖尿病人糖化血红蛋白 (GHb)与空腹血糖的关系。方法 :用全自动免疫分析仪 ,采用离子捕获法 (ICIA)检测糖化血红蛋白 ,在全自动生化分析仪上用 GOD法测定空腹血糖。结果 :用 ICIA法检测 72例糖尿病 (DM)患者糖化血红蛋白 (GHb)及空腹血糖。空腹血糖值高于正常参考值 (>6.2mmol/L)的 55例 ,其中糖化血红蛋白高于正常值的 43例 ,占 78.2 %。空腹血糖值正常 (3.9～ 6.2 mmol/L )的 1 7例 ,其中糖化血红蛋白高于正常值的 4例 ,占 2 3.5%。另外还分析了 GHb和血糖与病情的相关情况。临床上 GHb可做为糖尿病控制的指标。     

酶法尿素检测试剂的改进及性能评价

目的建立一种改良酶法尿素测定试剂,并评估其性能。方法采用酶法测定尿素反应前后吸光度(A)值的变化率并对试剂进行改良,评估其性能。同时与现有酶法试剂及进口和光试剂进行比较。结果现有试剂空白A值为1.8,空白A值变化率为-0.001 8;改良试剂空白A值为1.8,空白A值变化率为-0.001 9;和光试剂空白A值为1.6,空白A值变化率为-0.000 4。现有试剂检测限为0.035 mmol/L、改良试剂为0.014 mmol/L、和光试剂为0.075 mmol/L。分析敏感性现有试剂为-0.04,改良试剂为-0.13,和光试剂为-0.05。改良试剂对高、低值血清的批内精密度分别为0.45%和0.85%,批间精密度分别为0.38%和0.71%,线性浓度范围为0~38 mmol/L;改良试剂与和光试剂方法学比对的回归方程为Y=0.93X+0.41(r=0.999),估计偏倚低于允许误差;342μmol/L结合胆红素、342μmol/L非结合胆红素、0.03 g/L维生素C、5 g/L血红蛋白、1 450 FTU乳糜对改良试剂高、低值样本检测结果均无干扰。结论改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性,并且自身性能良好,符合相关临床应用要求。     

免疫分离法测定血浆脂蛋白残粒胆固醇的临床评价

目的　对免疫分离法测定血浆脂蛋白残粒胆固醇 (RLP C)进行方法学评价 ,并探讨其临床应用价值。方法　分析免疫分离法测定血浆RLP C的精密度、准确度、干扰因素 ,并将该法与超速离心法 (UC)进行比较 ,同时用该法测定 80例正常人、70例冠心病患者、72例 2型糖尿病患者和2 5例Ⅲ型高脂蛋白血症患者空腹血浆RLP C水平。结果　免疫分离法测定血浆RLP C的批内CV为 2 .78%～ 4 .98% ,批间CV为 3.99%～ 7.5 7% ,RLP C浓度 2 .4 4mmol/L以下时线性良好 ,r =0 .992。分析灵敏度为 0 .0 5mmol/L ,回收率为 92 .1%～ 98.3% ,免疫分离法 (X)与超速离心法 (Y)具有良好的相关性 ,Y =1.0 2 2X +0 .0 2 1,r =0 .989。甘油三酯 (TG) <15 .3mmol/L ,血红蛋白 (Hb) <5g/L ,低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C) <7.0mmol/L ,高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C) <3.0mmol/L ,胆红素 <342 μmol/L ,抗坏血酸 <15 0mmol/L时对方法无显著干扰。冠心病患者、2型糖尿病患者和Ⅲ型高脂蛋白血症组空腹血浆RLP C分别为 (0 .4 4 5± 0 .2 5 1)mmol/L、(0 .336± 0 .172 )mmol/L和(0 .878± 0 .6 72 )mmol/L ,均显著高于正常人 [(0 .190± 0 .0 70 )mmol/L],P <0 .0 0 1。结论　免疫分离法测定RLP C操作简单 ,结果准确可靠 ,精密度好 ,符合临床常规使用     

脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素

目的　建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法。方法　对pH、2 酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果　用双试剂连续监测法 ,试剂Ⅰ :10 0mmol/LN ,N 二乙醇胺基乙酸缓冲液 (pH 8.80 ) ,含 2 酮基异乙烯酸钠 3.0mmol/L、NADH 0 .3mmol/L、亮氨酸脱氢酶 2 .0kU/L。试剂Ⅱ :试剂Ⅰ中加入脲酶 70kU/L。本法线性范围血清 0 .5～ 15 0mmol/L ,尿液 8.0～ 6 5 0mmol/L。血清和尿液的平均回收率分别为 10 2 .1%和 10 1.5 %。血清批内和批间平均CV分别为 1.0 2 %和 1.70 % ;尿液批内平均CV为 1.98%。本法 (Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法 (X)对比相关良好 (血清Y =0 .992X +0 .0 4 0 ,r=0 .993;尿液Y =0 .990X +0 .6 1,r=0 .991)。胆红素 <32 5 μmol/L、血红蛋白 <5g/L、抗坏血酸 <80 0 μmol/L、三酰甘油 (TG) <7.5mmol/L和NH+ 4 <0 .5mmol/L对测定无明显干扰。结论　本法简便、准确、线性范围广 ,可用于常规自动分析。     

As2O3/TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征原始细胞系MDS-L的生物学变化

目的　观察骨髓增生异常综合征 (MDS)髓系原始细胞系MDS L经不同剂量和不同时间的三氧化二砷 (As2 O3 )和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)处理后的生物学变化。方法　体外培养的MDS L细胞经 9种不同浓度的药物及药物组合 (As2 O3 :1,2 ,5mmol/L ;TRAIL :10 0 ,30 0 ,5 0 0 μg/L ,As2 O3 1mmol/L TRAIL 10 0 μg/L ;As2 O3 2mmol/L TRAIL 30 0 μg/L ;As2 O3 5mmol/L TRAIL 5 0 0 μg/L)处理 ,在 2 4 ,4 8和 72h后收获细胞。对未经药物处理的细胞和药物处理后收获的细胞均进行流式细胞仪检测细胞凋亡 ;药物处理 2 4h后的细胞再经体外培养 18d后作形态学观察 ,同时以流式细胞仪检测CD34 细胞变化 ,检测药物的促分化作用 ;RT PCR检测P15 ink4b mRNA表达 ;甲基化特异性PCR(MethylationspecificPCR ,Msp)检测P15 ink4bDNA甲基化状态 ;DAB免疫酶标检测P15 ink4b蛋白水平表达。结果　不同的药物组合均可诱导细胞发生凋亡 ,药物处理 4 8h凋亡达高峰 (约 2 5 % ) ,72h时仍有约9%的细胞凋亡。药物处理 (尤其是As2 O3 TRAIL)导致细胞明显的形态学分化 ,而TRAIL能显著降低CD34 细胞比率。未经处理的MDS L细胞基本不表达P15 ink4b,并伴有明显的DNA甲基化。药物处理后P15 ink4b表达增强 ,并伴有DNA去甲基     

酶法测定血清钠离子的评价

目的评价酶法测定钠离子的性能。方法评价血清钠离子酶法试剂的准确性、精密度、开盖稳定性、线性、与电极法的相关性、回收率及抗干扰性。结果酶法测定钠离子的变异系数(CV)<2%,定标周期能够维持5 d,准确度满足朗道质控品要求,线性范围达到100～160 mmol/L,与电极法具有很好的相关性[相关系数(r)=0.989 9],回收率为100.9%,在胆红素≤600μmol/L、甘油三酯≤20 mmol/L、维生素C≤0.5 g/L、血红蛋白≤10 g/L、铵离子≤25 mmol/L、钾离子≤10 mmol/L、镁离子≤5 mmol/L、钙离子≤5 mmol/L、锌离子≤50 mmol/L、铜离子≤50 mmol/L对钠离子测定无明显干扰。结论钠离子酶法试剂有较好的重复性、准确性和稳定性,线性良好,抗干扰能力强,能满足临床使用要求。     

血红蛋白增多症合并糖尿病患者糖化血红蛋白测定一例分析

糖化血红蛋白作为糖代谢长期监测指标日益受到临床的重视 ,目前实验室最常用的测定方法有离子交换树脂微柱法、免疫法、电泳法以及亲和色谱微柱法。我们对 1例合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症 (HPFH)的糖尿病患者进行糖化血红蛋白检测时 ,发现一些问题 ,讨论如下。患者男 ,5 2岁 ,患 2型糖尿病半年余。 2 0 0 3年 6月抽血查血糖和糖化血红蛋白 (HbA1c) ,采用葡萄糖氧化酶法测得空腹血糖 :9 8mmol/L ;餐后 2h血糖 :16 9mmol/L ,美国Bio rad公司DIASTAT自动糖化血红蛋白仪测得HbA1c为 4 9 7%(参考值 :4 0 %～ 6 3% )。此结果难…     

改良酶法肌酐测定试剂的研制

目的探讨建立一种改良酶法肌酐(Cr)测定试剂,并考察其与进口Cr测定试剂(日本东洋纺公司酶法Cr试剂)对血清测定的可比性及偏倚。方法采用酶法测定Cr反应前后吸光度的变化,探讨试剂各成分和浓度对检测性能的影响,并在同一台全自动生化分析仪上同时测定两种试剂的空白吸光度(A值)、分析灵敏度,对自主研发试剂的精密度、线性范围及方法学指标进行评价。结果自主研发试剂的空白A值为0.009,分析灵敏度的A值变化率为0.13,优于进口试剂。自主研发试剂高、低值血清测定变异系数分别为1.5%和1.1%;线性范围为0~2 850μmol/L;方法学比对回归方程为Y=0.98 X+1.15,r=0.999;估计偏倚低于允许误差。以相对偏差不小于10%作为有明显干扰的评判指标,结果显示35mmol/L肌酸、3.42mmol/L胆红素、0.03g/L维生素C、5g/L血红蛋白、1 450浊度乳糜对高、低值浓度标本检测结果均无干扰。结论自主研发的Cr测定试剂性能良好,与进口试剂之间具有良好的相关性,符合临床应用基本要求。     

免疫比浊法检测糖化血红蛋白A1c的性能评价

目的评价Roche公司第3代免疫比浊法检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的性能。方法分析免疫比浊法检测HbA1c的精密度、线性,评价Hb、胎儿Hb(HbF)、三酰甘油(TG)、总胆红素(T-Bil)和不稳定HbA1c对HbA1c检测的影响、抗干扰能力及其与HPLC法测HbA1c结果的相关性;比较免疫比浊法检测HbA1c与高效液相色谱(HPLC)法的一致性。结果免疫比浊法检测HbA1c的变异系数(CV)均<2.5%。在4.7%～15.4%范围内,理论值与实测均值呈线性相关,r2值达0.999。Hb、HbF、T-Bil、TG水平分别在57～177 g/L、1.7%～11.7%、27～265μmol/L、3.2～9.85 mmol/L范围时,差异百分比均<5%;当HbF>13.5%时,差异百分比>5%。不稳定GHb(样本葡萄糖糖含量0～55.56 mmol/L)对HbA1c检测无影响。免疫比浊法(X)与高效液相色谱法(Y)相关性良好,Y=1.0188X-0.2271,r2=0.971 3。结论免疫比浊法检测HbA1c性能良好,适合临床应用。     

传染性非典型肺炎早期与普通肺炎早期的实验室回顾分析

目的　回顾性分析我院传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征 (SARS)早期与普通肺炎早期的多项实验室检测项目 ,探讨两者的试验结果差别。方法　 2 0 0 3年 4～ 5月收治的 35例传染性非典型肺炎患者及 2 0 0 1～ 2 0 0 3年的 35例普通肺炎患者实验室检测项目进行回顾性分析。结果　两种肺炎早期检测结果与正常对照组相比除有很多相同点外 ,也有不同点 ,两种肺炎早期检测值差异有显著意义的项目及其测定均值分别为 :补体C3 (C3 ) :0 98g/L ,1 36 g/L ;补体C4(C4) :0 2 9g/L ,0 34g/L ;C反应蛋白 (CRP) :2 5 6 5mg/L ,4 4 73mg/L ;红细胞沉降率 (ESR) :2 2 93mm/h ,4 3 6 3mm/h ;凝血酶原时间百分活动度 (PT % ) :95 79,88 85 ;纤维蛋白原 (Fbg) :2 78g/L ,3 91g/L ;天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) :30 6 0IU/L ,2 3 83IU/L ;直接胆红素 (DBIL) :2 34μmol/L ,3 34μmol/L ;碱性磷酸酶 (AKP) :4 5 2 6IU/L ,6 3 97IU/L ;γ 谷氨酰转肽酶 (GGT) :17 94IU/L ,2 7 91IU/L ;血糖 (GLU ) :6 77mmol/L ,5 11mmol/L ;钙 (Ca) :2 2 2mmol/L ,2 33mmol/L ;磷 (IP) :0 97mmol/L ,1 0 9mmol/L ;钠 (Na) :135 2 4mmol/L ,139 4 6mmol/L ;氯 (Cl) :97 2 6mmol/L ,10 0 91mmol/L ;总胆固醇 (TC) :3 35m     

聚凝胺对免疫球蛋白比浊测定的增强效应

目的　研究低离子聚合物Polybrene对透射免疫比浊测定的增强效应。方法　应用聚乙二醇和Polybrene建立了一种新的检测体系 ,双试剂、双波长、两点终点法检测免疫球蛋白含量。结果　Ig最低检测浓度为 1mg/L ,脂血 (Trig <4.0mmol/L)、黄疸 (TBil<70 μmol/L)、和溶血 (Hb <10g/L)对测定无影响。批内CV分别为 3 2 5 %和 2 6 7% ,批间CV分别为 3 5 %和3 13% ,与进口试剂相比较 ,结果无显著性差异 ,P >0 .0 5。结论　Polybrene可明显增加检测吸光度 ,提高检测灵敏度。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的　建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法　用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果　所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论　建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。     

尿素酰基裂解酶酶偶联法测定血清总钙

目的 介绍尿素酰基裂解酶酶偶联测定血清总钙的方法。方法 双试剂两点法；缓冲液为三乙醇胺（TEA，pH8.0,200mmol/L）；试剂I：含NaHCO326.0mmol/L,NADPH 0.4mmol/L,α－酮戊二酸8.0mmol/L，尿素酰基裂解酶115U／L，GLDH43．0kU/L；试剂Ⅱ：含NaCO3 26.0mmol/L,ATP6.2mmol/L。结果 方法线性范围为0．5－5．0mmol/L，批内和批间平均变异系数分别为2．13％和2．69％。平均回收率为102．7％ 。本法（Y）与邻甲酚酞络合酮法（OCPC法，X1）比较：r＝0．981，Y1＝1．02X1－0．021，与偶氮胂Ⅲ法（X2）比较：r＝0．978，Y＝0．99X2＋0．03。血清胆红素高达300μmol/L，血红蛋白4g/L，镁2.5mmol/L，NH4^ 2.0mmol/L,Trig 8.0mmol/L对本法无明显干扰。结论 本法具有简便、准确、快速，适用于自动分析等特点。     

高效毛细管电泳法测定尿中肌红蛋白

肌红蛋白 (Mb)尿常见于急性心肌梗死、烧伤及其他原因引起的肌肉组织损伤性疾病[1] 。本实验参照Shihabi等[2 ] 的报道 ,建立了高效毛细管区带电泳法来定量检测尿中Mb ,可用于常规检测。1　材料与方法1.1　试剂　 (1)马Mb标准品为BioChemika公司产品 ,批号为 4 1833/ 114 6 0 1。 (2 ) 0 .15mol/L硼砂缓冲液 :含Na2 B4O7·10H2 O 5 7.2 0g/L ,调节pH 8.2。 (3)含 10g/LPEG 6 0 0 0的 0 .15mol/L硼砂缓冲液 ,调节pH 8.2。 (4)PEG 6 0 0 0为Bio Rad公司产品 ,其余试剂均为国产分析纯级。 (5 )所用缓冲液和冲洗液均通过 0 .2 μm滤膜…     

肌酐试剂稳定性的改进

为克服贝克曼Synchron CX3 DELTA所用的肌酐试剂在冬天常发生沉淀,阻塞管道的情况,改进试剂配方,使硼酸为15.72 mmol/L、SDS 6 mmol/L、Na_3PO_4 3 mmol/L。经二年应用,质控满意,CV3.1％～10.7％(2 mo),与酶法比较检测24份标本,结果分别是150.56±168.7μmol/L与148.9±162.7μmol/L(t=1.71,P>0.05)。     

CELL-DYN 3700全自动五分类血液分析仪试剂研制及临床应用

随着血液分析仪的推广和普及 ,解决血液分析仪试剂的国产化是目前我国检验界的重要课题[1 2 ] 。CELL DYN 370 0全自动血液分析仪 (以下称CELL DYN 370 0 )是高档五分类仪器 ,试剂配方难度大 ,技术含量高 ,一般需用进口产品。我们自行研制了CELL DYN 370 0全套稀释液、清洗剂、溶血剂和鞘液 ,经多方验证完全达到进口试剂要求。报道如下。1　材料与方法1.1　自研试剂主要成分及含量1.1.1　稀释液　NaCl4 .9g/L、Na2 SO410 .0g/L、EDTA K2 0 .3g/L、甲基脲 (稳定剂 ) 1g/L ,噻唑啉酮 (防腐剂 ) 0 .5 8g/L ,哌嗪烷基磺酸 (缓冲…     

糖基化指甲蛋白,血浆蛋白及血红蛋白测定法

糖基化血红蛋白(GHb)和糖基化血浆蛋白(GPP)是糖尿病患者血糖控制较准确的指标.我们在测定GHb 和GPP 的基础上,进一步测定了糖基化指甲蛋白(glycosylated nail protein,GNP)的水平.一、试剂0.5mol/L 草酸溶液、0.05mol/L α-硫代巴比妥酸(TBA)溶液、400g/L三氯醋酸溶液(TCA)均用双蒸馏水配制,4℃冰箱保存;100μmol/L 5-羟甲基糖醛(5-HMF)贮存液:     

四种物质对两种D-二聚体试剂检测结果的影响分析

目的：探讨三酰甘油（TG）、血红蛋白（HGB）、总胆红素（TBIL）和类风湿因子（RF）等4种物质对 ACL TOP全自动血凝仪两种D-二聚体试剂检测结果的影响。方法分别用脂肪乳、血红蛋白液、胆红素标准品和类风湿因子标准品与对照血浆按不同比例混合,配制TG含量分别为2,4,6,8和10 mmol/L,HGB含量分别为1,2,3,4和5 g/L,TBIL含量分别为20,40,60,80和100μmol/L,以及10个 RF含量在0～150 IU/L之间的系列样本,并用D-dimer和D-dimer HS两种试剂进行检测,每份标本测定两次,结果取均值。结果 TG≤2 mmol/L时不会对 D-dimer试剂产生干扰,≥4 mmol/L时D-dimer试剂因“数据基线 SD超出范围”无法进行检测,≤10 mmol/L时不会对 D-dimer HS试剂产生干扰;HGB≥1 g/L时D-dimer试剂因“数据基线 SD超出范围”无法进行检测,≤4 g/L时不会对D-dimer HS试剂产生干扰,等于5 g/L时D-dimer HS试剂检测结果假性增高约30.4％;随TBIL浓度升高,D-dimer和D-dimer HS试剂检测结果均假性增高,增高幅度与TBIL含量呈乘幂关系,且两种试剂增高一致;D-dimer试剂检测结果假性升高与 RF含量呈线性相关,Y＝59.31X＋50.43,R2＝0.998,RF≤150 IU/L时不会对D-dimer HS试剂产生干扰。结论 TG,HGB,TBIL和 RF会干扰 D-dimer试剂检测过程;TBIL和 HGB会干扰D-dimer HS试剂检测过程;D-dimer HS试剂抗干扰能力优于 D-dimer试剂;D-二聚体测定结果与临床医生判断不符时应考虑干扰物质的影响。     

液体试剂与干粉试剂酶法测定血清总二氧化碳的实验对比

目的　评价液体试剂与干粉试剂酶法测定血清总二氧化碳 (TCO2 )的可靠性。方法　依据美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCLS)有关文件对 2种试剂测定血清TCO2 进行相关性比较并对其线性、精密度进行评价。结果　液体试剂与干粉试剂相关良好 (r =0 .976 0 ) ,预期相对偏差在 15mmol/L时为 0 .0 7% ,在 2 5mmol/L时为 0 .16 % ,在 5 0mmol/L时为 0 .2 2 %。 2种试剂的线性范围均较宽 ,线性回归方程分别为Y =0 .995 9X - 1.4 2 92和Y =0 .9787X - 0 .5 74 8,r分别为 0 .9998和 0 .9997。 2种试剂的精密度均很好 ,其批内不精密度及总不精密度 (CV)均 <6 .1%。结论　液体试剂与干粉试剂测定血清中的TCO2 的相关性、线性、精密度均很好 ,具有可比性 ,而液体试剂使用更为方便。     

酶偶联法测定肌酐与苦味酸法的比较

目的：评价肌酐酶－氧化酶偶联法测定肌酐（以下简称酶法）。方法：同时用ROCHE公司和LABO公司的两种酶法试剂盒测定肌酐并与苦味酸法进行比较。结果：LABO酶法测定肌酐的线性范围为25μmol/L-2210μmol/L，ROCHE为49μmol/L－4420μmol/L，苦味酸法为92μmol/L－520μmol/L。LABO试剂的批内CV＜0．54％，批间CV＜2．06％，回收率为95％；ROCHE试剂的批内CV＜0．88％，批间CV＜2．30％，回收率为99％；苦味酸法批内CV＜1．13％，批间CV＜3．23％，回收率为93％。溶血、黄疸对两种酶法测定肌酐的干扰率＜4％；抗坏血酸对苦味酸法产生正干扰，当其＞0．625g/L时，干扰率≥11．2％，抗坏血酸≥1．25g/L时，对ROCHE试剂测定结果的干扰率≥5．58％；药物头孢曲松钠≥1．00g/L时，对苦味酸法产生正干扰，干扰率≥7．11％，对其它两种试剂无干扰。结论：酶法测定肌酐优于苦味酸法，可作为临床常规测定方法。同时，临床实验室需根据自己的实际情况选择合适的酶法试剂盒。