大黄素对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的 探讨大黄素诱导细胞凋亡对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的治疗作用.方法 45只SD大鼠分为对照组、胰腺炎组、治疗组,每组15只.观察胰腺组织内腺泡细胞凋亡指数、NF-κB mRNA、Bax mRNA、外周血中中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophii,PMN)凋亡指数及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3、caspase-8)的变化情况.结果 与胰腺炎组比较,治疗组腺泡细胞和PMN凋亡指数及胰腺组织内NF-κB mRNA、Bax mRNA、PMN caspase-3与caspase-8表达均明显增加(F=853.199,327.126,143.586,48.857,231.750,96.552,P＜0.05).治疗组中,胰腺组织病理学评分与胰腺腺泡细胞凋亡指数、PMN凋亡指数均呈负相关(r=-0.96,-0.94,P＜0.05);胰腺腺泡细胞凋亡指数与胰腺组织内NF-κB mRNA、Bax mRNA表达呈正相关(r=0.73,0.76,P＜0.05);胰腺组织内NF-κB mRNA与Bax mRNA表达呈正相关(r=0.94,P＜0.05);PMN凋亡指数与PMN caspase-3、caspase-8表达均呈正相关(r=0.99,0.99,P＜0.05).结论 大黄素能有效治疗AP,其机制是通过Bax途径诱导胰腺腺泡细胞凋亡,并通过caspase途径来诱导外周血中PMN凋亡,从而明显减轻AP病情程度.     

全身炎性反应综合征中性粒细胞凋亡信号转导机制异常的研究进展

全身炎性反应综合征(SIRS)是多种疾病发展至多器官功能不全综合征(MODS)的前期表现,它的发生与中性粒细胞(PMN)凋亡延迟或障碍有关。PMN凋亡后被完整地吞噬而不释放细胞内容物,从而可以减少PMN介导的机体炎症损害,PMN的凋亡过程影响着SIRS的发展和转归。深入探讨PMN凋亡机制及SIRS时PMN凋亡的延迟机制,适度地调控PMN胞内凋亡信号或改变某些细胞信号的转导途径,对适当控制炎症反应,避免炎症的加重和迁延具有重要意义。     

187 从免疫学判断败血症多器官衰竭病人的防御障碍:补体激活与中性粒细胞之间的关系

败血症导致多器官衰竭(MOF)的发病机制与多形粒细胞(PMN)功能失学以及补体激活异常有关.作者选择11例败血症病人确诊MOF者为Ⅰ组;3例败血症病人无MOF者为Ⅱ组;3例手术病人无明显感染者为Ⅲ组;再以3例健康人为对照组.此20例均采静脉血标本分离出PMN作研究.(一)PMN—内皮细胞粘附测定:按Gimbrone等介绍的方法备制健康人体新鲜脐带静脉的内皮细胞(HUVEC)用相衬显微镜(phase-contrast micro-scope)观察PMN粘附到内皮细胞的数目,以此来估计PMN表面淋巴细胞功能相关抗原—1(LFA—1)即     

集落刺激因子与中性粒细胞的凋亡

中性粒细胞(PMN)是炎症反应中的重要效应细胞。PMN可吞噬和杀死异物,也能诱发、放大炎症反应,所以维持一定数量的PMN十分重要。凋亡是维持PMN数目稳定的主要机制。集落刺激因子能抑制PMN的凋亡,在全身炎症反应的发生和发展中起着重要作用。     

体外循环和细胞凋亡:病理生理及防治研究进展

CPB心肺转流体外循环诱发全身炎症反应综合征(SIRS),并引起心、肺、脑、肾等多脏器功能损害。近年来,关于细胞凋亡在CPB-SIR及脏器功能损害中的作用受到了广泛的关注。中性粒细胞(PMN)凋亡延迟在其中起着关键性作用,而心肌细胞(CM)凋亡则是体外循环后心肌缺血-再灌注损伤的主要     

琥珀酸对人外周血中性粒细胞凋亡的影响

目的 了解琥珀酸对人外周血中性粒细胞(PMN)凋亡的影响,探讨其致病机制.方法 体外孵育PMN,将PMN浓度调至5×106个/ml.在细胞中加入琥珀酸刺激,根据所加琥珀酸浓度分为5、10、20、30 mmol/L琥珀酸组;对照组加入常规培养液.取各组细胞培养上清液,检测其活性氧含量.5、20 mmol/L琥珀酸组细胞于处理前及处理后2、4、6、8、10 h分别取细胞悬液1 ml,行半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性及细胞凋亡率检测.结果 5、10、20、30 mmol/L琥珀酸组活性氧含量(0.437±0.056、0.432±0.024、0.395±0.049、0.386±0.010)均低于对照组(0.505±0.028,P＜0.05).随着孵育时间延长,各组细胞caspase-3活性均逐渐增加,但与对照组比较,5 mmol/L琥珀酸组caspase-3活性降低,20 mmol/L琥珀酸组则升高(P＜0.05).对照组细胞处理前凋亡率为(6.1±1.1)%,处理后2 h为(13.2±2.0)%,10 h达(27.7±3.7)%;5 mmol/L琥珀酸组细胞凋亡率除处理后4 h外其余时相点均低于对照组(P＜0.05);20 mmol/L琥珀酸组细胞处理后4～10 h凋亡率均高于对照组(P＜0.05).结论 低浓度琥珀酸抑制PMN凋亡,而高浓度琥珀酸可促进PMN凋亡.细菌感染时,通过代谢产物琥珀酸抑制PMN免疫功能.     

中性粒细胞凋亡调控在炎症治疗中的潜在作用

中性粒细胞即多形核白细胞(PMN)是体内重要的炎症细胞,PMN凋亡是其介导的炎症反应终止的最主要步骤。在炎症控制与治疗中,明确PMN凋亡在全身性炎症反应中的作用及其相关影响因素十分必要,有利于为调节机体炎症反应开辟一条新途径。     

白介素-6延缓中性粒细胞凋亡

中性粒细胞(PMN)是炎性器官损害中的重要介质,从炎症处清除PMN是炎症消散的先决条件,PMN凋亡是非炎性处置PMN的一种机制。细胞凋亡不同于细胞坏死,仅有典型的形态学改变(核固缩以及染色质聚集)和生化标志(DNA裂解),吖啶橙溴化乙啶染色可显示细胞膜完整以及典型的核形态学变化。还可应用DNA胶电泳法作凋亡定量测定。至于PMN的功能性容量可经其生成O_2~-的能量来评估。大戟二萜醇-12-豆蔻酸盐-13乙酸盐(PMA)不经过细胞膜受体而直接激活细胞内     

细胞凋亡与胎儿神经管发育缺陷

目的探讨胎儿神经管畸形(NTDs)发育过程中胎盘和神经组织细胞凋亡的发生规律。方法采用原位末端标记技术检测孕16～39 w神经管畸形儿胎盘绒毛组织和中枢神经组织的细胞凋亡。结果脊柱裂暴露处脊髓组织细胞凋亡指数大于非暴露处脊髓组织的凋亡指数(P0.05)。无脑儿胸段脊髓细胞凋亡指数与非无脑儿胸段脊髓细胞凋亡指数无统计学差异(P0.05)。NTD儿胎盘绒毛组织细胞凋亡指数明显大于正常胎盘绒毛组织的细胞凋亡指数(P0.01)。结论NTD儿未闭合处的脊髓组织和胎盘绒毛组织的细胞过度凋亡,与胎儿神经管畸形的发生有关。     

烧伤病人早期血清和创面水肿液对中性粒细胞凋亡的影响

目的 探讨烧伤病人早期血清、水泡液和痂下组织液对中性粒细胞(PMN)凋亡的影响。方法 采用伤后3d内重度以上烧伤患血清、24h内水泡液以及1周内Ⅲ度创面痂下组织液体外培养正常PMN,以正常血清作对照,应用流式细胞分析等方法观察PMN凋亡。结果 烧伤病人早期血清、水泡液和痂下液能抑制PMN凋亡,使PMN凋亡百分率下降、DNA断裂百分率降低,DAN凝胶电泳不出现细胞凋亡特有的“梯形带”;且痂下液与烧伤病人早期血清对PMN凋亡的抑制程度几乎相同,而水泡液的抑制作用稍弱于前两。结论 烧伤病人早期血清、水泡液和痂下组织液能抑制PMN凋亡。     

急性胰腺炎外周血中性粒细胞凋亡及XIAP表达的意义

目的 探讨急性胰腺炎(AP)外周血中性粒细胞(PMN)的凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XI-AP)的表达意义.方法 采用流式细胞仪分别测定重急性胰腺炎(SAP)组,轻症急性胰腺炎(MAP)组和正常对照(NC)组外周血PMN的凋亡情况,采用RT-PCR和Western Blotting技术测定各外周血PMN中XIAP mRNA及蛋白的表达,分析PMN凋亡及XIAP表达与疾病严重程度的关系.结果 PMN凋亡SAP组为(2.15±0.40)%,MAP组(4.16±0.14)%,NC组为(4.31±0.12)%,SAP组和MAP组PMN凋亡较NC组明显减少(P<0.05),而SAP组PMN凋亡显著少于MAP组P<0.01).SAP及MAP组XIAP mRNA的表达较NC组增加(P<0.05),而SAP组显著高于MAP组(P<0.01).各组PMN XIAP蛋白水平与其mRNA水平一致.结论 IAP可能参与介导SAP外周血PMN的凋亡延迟,且与疾病的严重程度有关.     

核因子-κB的活化在急性胰腺炎大鼠的中性粒细胞凋亡延迟中的作用

重症急性胰腺炎(SAP)是一个死亡率极高的疾病,O'Neills等[1]研究结果表明,SAP时外周血中性粒细胞(PMN)凋亡受到抑制.核因子-κB(NF-κB)作为一个重要的核转录因子,在细胞凋亡中发挥着重要的作用.本研究旨在观察NF-κB的活化在SAP大鼠外周血PMN凋亡中的调控作用.     

严重烧伤早期大鼠中性粒细胞、巨噬细胞凋亡实验研究

目的探讨严重烧伤后中性粒细胞(PMN)凋亡及烧伤血清刺激后PMN、巨噬细胞(Mφ)凋亡,以及巨噬细胞吞噬凋亡PMN的变化.方法选用Ⅲ度30%TBSA烧伤大鼠模型,收集伤后0、6、12、24hPMN,分离伤后24h烧伤血清,应用流式细胞技术检测PMN凋亡百分率;同时收集大鼠腹腔巨噬细胞,检测烧伤血清对Mφ凋亡变化的影响及烧伤后24h大鼠腹腔Mφ对凋亡PMN吞噬能力.结果伤后大鼠PMN凋亡百分率明显降低,伤后6、12、24h各时相点无显著差异.烧伤大鼠血清刺激24h后,PMN凋亡百分率为(15.4±1.2)%,较正常大鼠血清刺激后(50.6±3.9)%显著降低;而Mφ凋亡百分率为(23.2±2.1)%,较正常大鼠血清刺激后(¨.5±1.6)%增多;严重烧伤后大鼠腹腔Mφ对凋亡PMN吞噬能力由(35.0±2.6)%降至(21.8±2.1)%.结论严重烧伤后及在烧伤血清刺激下大鼠PMN凋亡延迟,Mφ吞噬凋亡PMN能力降低,可能凋亡的PMN被Mφ吞噬不完全,最终坏死,释放毒性内容物,是引发SIRS的重要因素之一.     

高迁移率族蛋白1参与脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征时中性粒细胞的凋亡

目的 探究脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)时高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)参与中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)凋亡延迟的相关机制及正丁酸钠(sodium butyrate,SB)的干预效果. 方法 采用随机数字表法将90只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组(NS组,6只)、内毒素(lipopolysaccharide,LPS)致伤组(LPS组,42只)、HMGB1抑制剂SB干预组(SB组,42只),LPS组、SB组又分为7个时相点(LPS致伤后0.5、1、2、6、12、24、48 h),每个时相点6只动物.LPS组,腹腔注射LPS 5 mg/kg;SB组,腹腔注射LPS 5 mg/kg后0.5 h静脉注射SB,每次剂量500 mg/kg;NS组,腹腔注射生理盐水1 ml.LPS组、SB组于LPS注射后各时点,颈静脉取血检查PMN,取血后左肺灌洗收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),取右肺中叶行HMGB1 mRNA检测;于LPS注射12h时点(NS组大鼠留取颈静脉血、收集BALF、取右肺中叶行HMGB1 mRNA检测),3组大鼠收集左肺BALF后,取右肺下叶检测肺组织湿/干重比(wet/dry weight ratio,W/D),取右肺上叶进行病理组织学检查;于24、48 h时点,LPS组、SB组取右肺下叶检测肺组织W/D、取右肺上叶进行病理组织学检查. 结果 与NS组比较,LPS组肺组织中HMGB1 mRNA表达量明显增高,24 h达最大值,差异有统计学意义(P＜0.05);SB组的HMGB1 mRNA表达量减少,差异有统计学意义(P＜0.05).LPS组BALF中凋亡早期PMN表达量与NS组类似,但凋亡晚期PMN变化则不同,LPS组外周血中凋亡晚期PMN细胞高于NS组(P＜0.05),LPS组BALF中凋亡晚期PMN细胞均低于NS组(P＜0.05).LPS 12 h组BALF的PMN百分比明显高于NS组[(49.1±6.8)、(2.7±0.5)],差异有统计学意义(P＜0.01).LPS组肺组织光镜下可见肺泡腔水肿,支气管壁中发现PMN浸润,肺泡壁毛细血管扩充血.LPS24 h组肺组织的W/D明显高于NS组[(6.71±0.12)、(4.18±0.26)],差异有统计学意义(P＜0.05).SB干预组的HMGB1 mRNA表达量减少,早期凋亡率类似,SB组的BALF晚期凋亡率高于同时点LPS组的BALF,SB外周血组晚期凋亡低于同时点LPS外周血组,差异有统计学意义(P＜0.05).SB组BALF的PMN百分比、肺组织病理损伤程度、W/D均低于LPS组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 在大鼠ARDS中,HMGB1 mRNA表达较晚,但持续时间长,SB对HMGB1有潜在的治疗作用,HMGB1可能参与PMN凋亡机制的调节.     

大黄素对全身炎性反应综合征病人外周血中性粒细胞Fas/FasL、Caspase-3表达的影响

目的 探讨全身炎性反应综合征(SIRS)病人外周血中性粒细胞(PMN)凋亡信号Fas/FasL、Caspase-3表达的动态变化及大黄素对SIRS时PMN凋亡的影响及其作用机制.方法 采集6例健康志愿者及8例SIRS病人(均为急性胰腺炎病人)外周血液并从中分离PMN进行体外培养.分为3个实验组:正常组,SIRS组,大黄素干预组.观察各组PMN的凋亡情况;检测各组PMN Fas/FasL和Caspasc-3表达水平的变化.结果 SIRS组PMN凋亡百分率明显低于正常组(P＜0.05),大黄素干预后SIRS病人PMN凋亡百分率明显增加(P＜0.05);SIRS组PMN Fas和Caspase-3的表达水平明显低于正常组(P＜0.05),大黄素能诱导SIRS病人PMN Fas和Caspase-3的表达(P＜0.05).各组PMN在体外培养24 h后,经Western Blotting没有检测到FasL的表达.结论 SIRS病人外周血PMN凋亡存在异常,且与Fas和Caspase-3的表达降低有关;大黄素能通过诱导Fas和Caspase-3的表达,对SIRS时PMN凋亡延迟具有抑制作用.     

肝I/R损伤中髓系细胞与内皮细胞TLR4对PMN迁移的体外比较

目的探讨髓系细胞及肝窦内皮细胞Toll样受体4(TLR4)在小鼠肝缺血再灌注(I/R)损伤中对外周血多形核细胞(PMN)迁移的影响。方法以TLR4野生型小鼠(C3H/HeN)与TLR4变异型小鼠(C3H/HeJ)为对象,将供体小鼠骨髓细胞转入经射线照射的受体小鼠体内,制作4组嵌合体:A组为髓系细胞TLR4+/+和内皮细胞TLR4+/+;B组为髓系细胞TLR4+/+和内皮细胞TLR4-/-;C组为髓系细胞TLR4-/-和内皮细胞TLR4+/+;D组为髓系细胞TLR4-/-和内皮细胞TLR4-/-,然后建立4组嵌合体小鼠肝I/R损伤模型。将提取的肝组织炎性蛋白及外周血分离的PMN分置于Transwell小室上下2个空间内检测PMN迁移情况。以C3α为阳性对照,缓冲液为阴性对照。结果与C组(67.10±6.89)比较,A组PMN迁移数目(148.95±11.04)明显增多,差异有统计学意义(P0.05);与D组(63.15±8.86)比较,B组PMN迁移数目(142.65±8.67)明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。而A组与B组PMN迁移数目差异无统计学意义(P0.05),C组与D组PMN迁移数目差异亦无统计学意义(P0.05)。结论在肝I/R损伤中的PMN迁移中髓系细胞TLR4而非内皮细胞TLR4起主导作用。     

炎症反应中性粒细胞凋亡延迟机制研究进展

凋亡的PMN被巨噬细胞吞噬可限制PMN介导的机体损害，PMN凋亡的进程影响着炎症的发展和转归。近来，PMN受体超家族，促／抗凋亡蛋白以及分裂原激活的蛋白激酶家族(MAPKs)在炎症反应PMN凋亡延迟中的作用引起人们的广泛关注。本文阐述了PMN在炎症反应中凋亡延迟机制新进展，希望通过干扰PMN凋亡进程找到一种新的炎症治疗方法。     

高渗盐复苏消除肠系膜淋巴液对中性粒细胞的预激

失血性休克后,中性粒细胞(PMN)被预激是继发多器官功能衰竭(MOF)的前兆。近年来的研究发现,失血性休克动物用林格液(LR)复苏后其肠系膜淋巴液对PMN仍有预激潜能并可导致肺损伤,而用高渗盐水(HTS)复苏者其肺脏受到保护,因此进一步     

胸段硬膜外阻滞对油酸诱发猪急性肺损伤时炎性反应的影响

目的 观察胸段硬膜外阻滞对油酸诱发猪急性肺损伤(ALI)时炎性反应的影响.方法 家猪14只,体重30～35kg,随机分为2组(n=7):对照组(C组)及硬膜外阻滞组(TEB组).于T3,4硬膜外置管后,采用静脉输注油酸的方法 制备ALI模型.ALI模型制备成功后,TEB组硬膜外注射0.25%罗哌卡因5ml,随后以2ml/h速率持续输注4 h,C组给予等容量生理盐水.分别于输注油酸前即刻、ALI模型制备成功后即刻、硬膜外给药1、2、3和4 h时测定PaO2.于硬膜外给药4 h时处死动物,行右侧支气管肺泡灌洗,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数,计算中性粒细胞(PMN)百分比及PMN凋亡率;取左肺组织,测定总肺水量(TLW)及血管外肺水量(EVLW),并观察肺组织病理学结果 .结果 与C组比较,TEB组BALF中细胞总数、PMN百分比、TLW及EVLW均降低,PaO2和PMN凋亡率升高(P＜0.05或0.01).TEB组肺组织病理学损伤程度较C组减轻.结论 胸段硬膜外阻滞可减轻猪ALI时肺组织的炎性反应.     

诱导中性粒细胞凋亡减轻体外循环后肺损伤的体内外实验研究

目的观察诱导中性粒细胞(PMN)凋亡对体外循环(CPB)后肺脏损伤的保护作用。方法在体外实验中,Percoll细胞分离液梯度密度离心得PMN,培养48 h,实验组加入不同浓度的克拉霉素 (5、10、20μg/ml)。台盼蓝染色,镜下观察细胞存活率。流式细胞仪检测细胞凋亡率。免疫组化法观察 PMN凋亡相关基因蛋白Fas和bcl-2的表达情况。在体内实验中,将12只绵羊随机分为低分子右旋糖酐肺动脉灌注组(对照组)和低分子右旋糖酐+克拉霉素肺动脉灌注组(实验组)。建立CPB后经肺动脉灌注肺保护液,CPB 90min后撤离CPB。观察呼吸功能,检测细胞因子浓度,并观察肺组织形态学改变及肺内PMN凋亡情况。结果克拉霉素明显缩短PMN的生存期。流式细胞仪检测显示,实验组24 h凋亡率 1、5、10和20μg/ml浓度组分别为(33．7±4．9)％、(48．0±4．9)％、(52．0±5．4)％和(53．0±7．1)％,明显高于对照组的(31．5±3．5)％(P<0．01);免疫组化染色显示实验组Fas的表达较对照组高,而bcl-2的表达低于对照组(P<0．01);体内实验结果显示,实验组肺血管阻力[(10．22±1．44)kPa·s·L-1]低于对照组 [(20．26±4．71)kPa·s·L-1,P<0．01],而动脉血氧指数[(188±48)mm Hg]较对照组[(123±62)mm Hg, P<0．05]高。实验组支气管肺泡灌洗液内细胞因子白细胞介素-8和肿瘤细胞因子均低于对照组(P< 0．05)。形态学观察表明实验组肺损伤较对照组轻。对照组肺内中性白细胞凋亡率为29％,实验组凋亡率达73％(P<0．01)。结论克拉霉素能诱导PMN凋亡,减轻CPB所造成的肺脏损伤。