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1.
目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础。方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成。9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学。①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析。剩余3只大鼠作为正常对照。②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrixmetalloproteinase2,MMP-2)和明胶酶9(matrixmetalloproteinase2,MMP-9)的活性变化。结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析。①MMP-2和MMP-9mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2mRNA低表达,检测不到MMP-9mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高。②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMP-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显。随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深。③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro-MMP2(Mr72000)与Pro-MMP9(Mr92000)及其活化形式activeMMP-2(Mr66000)与activeMMP-9(Mr83000)的表达,MMP-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达。MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达。④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮。对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑。结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关。 相似文献
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目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础。方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成。9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学。①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析。剩余3只大鼠作为正常对照。②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和明胶酶9(matrix metalloproteinase 2,MMP-9)的活性变化。结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析。①MMP-2和MMP-9mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2mRNA低表达,检测不到MMP-9mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高。②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMP-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显。随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深。③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro—MMP2(Mr72000)与Pro—MMP9(Mr92000)及其活化形式activeMMP-2(Mr 66000)与activeMMP-9(Mr83000)的表达,MMP-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达。MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达。④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮。对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑。结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关。 相似文献
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不同种属来源明胶及其他因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
金属蛋白酶12(MMP-2,明胶酶A)与金属蛋白酶-9(MMP-9,明胶酶B)在多种生理过程中起作用,病理状态下如肿瘤、心血管疾病和呼吸系统疾病,则这些酶的表达和活性增加。明胶酶谱法多用于检测血浆、细胞培养上清及组织中的金属蛋白酶-2和9的活性,我们先前的实验发现不同来源的明胶直接影响明胶酶谱法结果,不同方式处理样本对酶的活性检测有影响,本研究就明胶的来源(自猪、牛皮肤提取)是否影响金属蛋白酶活性的检测,以及不同样本量、样本储存温度、反复冻融等因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶活性的影响进行探讨。 相似文献
4.
目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶含量的分析,比较各方法检测结果的差异。结果免疫组化方法能定位、半定量检测出基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;Western blot能定量说明基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;明胶酶谱法能检测出MMP-2、MMP-9酶原和活性酶在良恶性肿瘤间的差异。结论免疫组化、Western blot、明胶酶谱三种方法结合,既发挥免疫组化细胞定位的优势,又克服了免疫组化法非精确定量的弱点,并打破其不能辨别酶原与活性酶的局限性,更加客观准确反映各型肿瘤组织中MMP-2、MMP-9的实际表达。 相似文献
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摘要:目的研究封闭负压引流技术对人慢性创面中活性形式明胶酶(活性MMP-2、活性MMP-9)的影响。方法对5例慢性创面患者给予创面封闭负压引流(-120mmHg压力)150d,分别于吸引前和吸引后24h、3、5、10、15d收集创面渗出液。另以10例乳腺癌切除术后第3天的创面引流液为急性创面对照。用Zymography法测明胶酶活性,并用薄层分析仪分析试验结果。结果封闭负压引流治疗前,1例的活性MMP-2和另1例的活性MMP-9较对照组高,两例的活性形式明胶酶总活性(两种酶活性之和)较对照组活性高。封闭负压引流治疗后,慢性创面渗出液中活性MMP-2、活性MMP-9及活性形式明胶酶总活性与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论人慢性创面中活性形式明胶酶的活性过低或活性过高均可能是慢性创面长期不愈的原因,封闭负压引流能调节慢性创面中活性形式明胶酶的活性。 相似文献
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目的:探讨RECK基因与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)相关性在早孕滋养细胞浸润调控中的作用。方法:分别采用免疫组化、Western blot法、明胶酶谱法检测52例正常妊娠(早孕组27例、足月妊娠组25例)胎盘组织中RECK表达定位、蛋白含量及MMP-2的活化比例。结果:免疫组化提示早孕、足月妊娠均有RECK蛋白表达,其主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞的胞膜和胞质。RECK表达随孕周增加而增强.早孕组RECK表达明显低于足月妊娠组(P〈0.05),且在具有侵袭力的早孕锚定绒毛的细胞柱上RECK表达呈弱阳性;Western blot检测亦显示早期妊娠RECK蛋白质含量显著低于足月妊娠(P〈0.05));明胶酶谱示MMP.2的活化比例则相反,早孕组MMP-2活化比例明显高于足月妊娠组(P〈0.05)。结论:MMP-2活性的表达变化与滋养细胞浸润活性呈正相关,而肿瘤抑制基因RECK的表达变化与之呈负相关.MMP-2与RECK基因相互作用在滋养细胞浸润活性调控中可能起重要作用。 相似文献
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趋化因子FKN对单个核细胞TNF-α和MMP-2表达的影响及ERK在其中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨趋化因子Fmetalkine(FKN)对单个核细胞肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)和基质金属蛋白酶-2(matrix metal proteinase-2, MMP-2)表达的影响及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)在其中的作用。方法抗凝血用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞;将提取的单个核细胞分为:空白对照组、FKN组及PD98059(ERK阻断剂)组;分别应用ELISA和明胶酶谱法检测各组单个核细胞中TNF-α和MMP-2表达情况。结果FKN诱导组TNF-α表达较空白组明显增多(P〈0.05),FKN诱导组MMP-2表达较空白组明显减少(P〈0.05);PD98059组TNF-α和MMP-2表达均较FKN组明显减少(P〈0.05)。结论趋化因子FKN可以诱导单个核细胞TNF-α的表达而促进动脉粥样硬化的形成和进展,这一作用可能是通过ERK途径实现的;FKN可以抑制单个核细胞MMP-2的表达,而这一作用可能与ERK无关。 相似文献
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目的:基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质和基底膜,在肿瘤的浸润和转移过程中起重要作用。研究基质金属蛋白酶-2(matrixmetallopro-teinase2,MMP-2)及其mRNA在乳腺癌组织和细胞中的表达,探讨其与血管生成及肿瘤生物学行为的关系。方法:实验于2002-01/2004-01在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成。应用免疫组织化学、免疫细胞化学、原位杂交、侵袭实验、明胶酶谱分析及形态定量分析方法,对76例乳腺癌组织和体外培养的MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA、微血管密度(MVD)进行检测。结果:乳腺癌组织中MMP-2及其mRNA的表达均高于癌旁正常组织;MMP-2及其mRNA主要表达于肿瘤细胞胞浆中,其阳性率分别为77.63%和71.05%;MMP-2及其mRNA的表达均与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MVD与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MMP-2或其mRNA表达阳性组MVD值明显高于阴性组。MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA均为阳性;MMP-2抗体可使MCF-7细胞侵袭细胞数由(56.21±3.68)个/400倍下降为(20.32±3.24)个/400倍;直接培养于培养瓶的MCF-7细胞可以分泌MMP-2酶原,培养于I型胶原包被培养瓶的MCF-7细胞MMP-2酶原表达增强并且出现活化形式。结论:乳腺癌组织和细胞具有较强的分泌MMP-2的能力,MMP-2促进肿瘤的侵袭和转移, 相似文献
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《临床与病理杂志》2015,(11)
组蛋白脱乙酰基酶7(histone deacetylase7,HDAC7)属于Ⅱa类组蛋白脱乙酰基酶,是肿瘤血管生成的关键因子,研究表明HDAC7能影响血管内皮细胞的生长和增殖、改变血管内皮细胞的迁移能力,HDAC7与转录因子-肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor2,MEF2)-2相互作用调节其下游靶基因基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinase-10,MMP-10)-10,进而参与维持血管的完整性和稳定性,在实体瘤生长和转移中具有十分重要的作用,本文综述HDAC7与肿瘤血管新生的机制,以及该靶点在肿瘤血管靶点治疗中的研究进展。 相似文献
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目的:探讨MMP-2和MMP-9在早孕胎盘滋养细胞中的表达及意义。方法:通过免疫组织化学技术及West-ern blot技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果:MMP-2和MMP-9蛋白主要定位在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有少量阳性染色,且早孕早期绒毛滋养细胞中MMP-2表达量高于早孕晚期(P0.05),而MMP-9表达量在早孕晚期高于早期(P0.05)。结论:MMP-2和MMP-9在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,且在早孕不同时期,二者表达不同,为深入探讨MMPs在滋养细胞浸润机制中的作用提供理论基础。 相似文献
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肿瘤细胞及其基质细胞分泌的明胶酶B(matrix metalloproteinase-9。MMP-9)和明胶酶A(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在促血管生成、肿瘤细胞侵袭和转移灶形成中的作用已日益引起人们的关注。有资料显示,在非小细胞肺癌患者的体液(如尿液、血清)中可检测到MMP-9(相对分子量92 000)和MMP-2(相对分子量72 000)蛋白,且与侵袭转移密切相关。然而,在淋巴瘤患者血清中MMP-9、MMP-2蛋白检测及其意义的文献报道极少, 相似文献
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目的:基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质和基底膜,在肿瘤的浸润和转移过程中起重要作用。研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及其mRNA在乳腺癌组织和细胞中的表达,探讨其与血管生成及肿瘤生物学行为的关系。方法:实验于2002—01/2004—01在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成。应用免疫组织化学、免疫细胞化学、原位杂交、侵袭实验、明胶酶谱分析及形态定量分析方法,对76例乳腺癌组织和体外培养的:MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA、微血管密度(MVD)进行检测。结果:乳腺癌组织中:MMP-2及其mRNA的表达均高于癌旁正常组织;MMP-2及其mRNA主要表达于肿瘤细胞胞浆中,其阳性率分别为77.63%和71.05%;MMP-2及其mRNA的表达均与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MVD与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MMP-2或其mRNA表达阳性组MVD值明显高于阴性组。MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA均为阳性;MMP-2抗体可使MCF-7细胞侵袭细胞数由(56.21&;#177;3.68)个/400倍下降为(20.32&;#177;3.24)个/400倍;直接培养于培养瓶的MCF-7细胞可以分泌MMP-2酶原,培养于Ⅰ型胶原包被培养瓶的MCF-7细胞MMP-2酶原表达增强并且出现活化形式。结论:乳腺癌组织和细胞具有较强的分泌MMP-2的能力,MMP-2促进肿瘤的侵袭和转移,促进乳腺癌血管生成,可作为判定乳腺癌生物学行为、临床治疗和预后的重要指标。 相似文献
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目的探讨MMP-2和MMP-9在早孕胎盘滋养细胞中的表达及意义。方法本研究通过免疫组织化学技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果MMP-2和MMP-9蛋白主要定位在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有少量阳性染色,且旱孕早期绒毛滋养细胞中MMP-2表达量高于早孕晚期(P〈0.05),而MMP-9表达量在早孕晚期高于早期(P〈0.05)。结论MMP-2和MMP-9在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,且在早孕不同时期,二者表达不同,为深入探讨MMPs在滋养细胞浸润机制中的作用提供理论基础。 相似文献
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人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1在裸鼠体内的高致瘤性及其机制的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究确定人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1在裸鼠体内的高致瘤性,并对其成瘤机制进行初步探讨。将SHI-1细胞接种至裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;取肿瘤组织行病理检测、R显带核型分析;RT-PCR检测MLL-AF6融合基因和VEGF基因的转录;明胶酶谱法检测培养上清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和MMP-2的表达;体外穿膜实验观察迁移能力。结果表明:注射SHI-1细胞的16只裸小鼠均于皮下出现肿块;瘤体由白血病细胞组成;注射的裸鼠中有MLL/AF6融合基因和VEGF基因的转录;在无血清培养上清中MMP-9和MMP-2的表达明显高于对照细胞;SHI-1细胞有较强的迁移能力,MMP-2的阻断抗体可显著抑制其体外迁移能力。结论:SHI-1在裸鼠体内有极高的成瘤率,其机制可能与p53基因的异常、高水平VEGF基因的转录、金属蛋白酶的高表达和较强的体内浸润能力有关。 相似文献
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基质金属蛋白酶2、9在乳腺癌病人尿中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)在乳腺癌病人尿中表达的临床意义。方法 采用明胶酶电泳法、Western Blot法,观察了乳腺癌(127人)、乳腺良性疾病(41人)、正常人(60人)尿中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表达状况。结果 乳腺癌病人尿中MMP-2、MMP-9表达分别为64.56%、76.37%;乳腺良性疾病为43.93%、39.02%;正常人为38.33%、15%。乳腺癌的MMP-2、MMP-9表达均高于乳腺良性疾病和正常人,差异有非常显著性意义(P〈0.01);乳腺良性疾病的MMP-9表达水平高于正常人(P〈0.01)。乳腺癌病人尿中MMP-9表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结状况有关(P〈0.01),而与年龄、绝经前后、ER表达无关(P〉0.05)。而MMP-2只与淋巴结状况有关(P〈0.05)。结论 尿中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达对乳腺癌的诊断、早期治疗具有重要意义。尤其对乳腺癌的普查及早期预防可能具有重要意义。 相似文献
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目的探讨不同浓度的灯盏花素对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及活性的影响。方法体外培养HUVECs,待细胞生长到融合状态时加不同浓度的灯盏花素(17.5、35.0、70.0μg/mL),1 h后加入凝血酶(4 kU/L),作用24 h后采用明胶酶谱法检测MMP-2的活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定MMP-2 mRNA的表达。结果凝血酶可诱导HUVECs MMP-2的表达;不同浓度的灯盏花素可抑制凝血酶诱导的MMP-2的表达(P〈0.01)。结论灯盏花素可抑制凝血酶诱导的HUVECs MMP-2的表达;可能对抗动脉粥样硬化,稳定硬化斑块、防治斑块破裂和预防急性冠状动脉综合征的发生产生有益的作用。 相似文献
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c-Met及MMP-2在子宫内膜异位症在位子宫内膜的表达及意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与子宫内膜异位症发病机制的关系及临床意义。方法采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法检测45例盆腔子宫内膜异位症患者(内异症组)及30例非子宫内膜异位症妇女(对照组)的在位子宫内膜的c-Met与MMP-2的免疫表达水平。结果①盆腔子宫内膜异位症妇女的在位子宫内膜c-Met、MMP-2表达水平分别高于对照组(P均〈0.01);②c-Met与MMP-2在两组中均呈正相关(对照组r=0.937,内异症组r=0.885)。结论类似肿瘤的转移和侵袭机制,c-Met、MMP-2在内异症的发病中发挥了重要作用。 相似文献
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背景:明胶酶B基因在脑血管病变中表达已有报道,但在脑损伤脑水肿形成中是否起重要作用?目的:了解大鼠脑损伤后脑组织明胶酶B基因表达情况,探讨其与脑水肿发生的关系。设计:随机对照的实验研究。地点和材料:实验地点:解放军第二五二医院动物室及中心实验室,40只Wistar大鼠,雌雄各半,体质量(410±50)g。干预:40只大鼠,于伤后不同时间取水肿区脑组织及正常脑组织:提取组织总RNA:用共扩增反转录定量PCR方法测定MMP-9基因表达水平。主要观察指标:观察MMP-9大鼠脑损伤后12,24,48h表达水平,并与正常脑组织表达水平比较。结果:脑损伤水肿区脑组织MMP-9基因表达水平明显高于正常脑组织(0.66±0.14):伤后12h表达最强(2.63±0.14),24,48h表达逐渐下降犤(1.71±0.30)和(1.30±0.26)犦,但仍高于正常对照组,差异有显著性意义(t=3.43,3.90,P<0.01)。结论:明胶酶B在脑损伤脑水肿形成中可能起重要作用。 相似文献
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费新雄 《临床和实验医学杂志》2013,12(10):778-779
目的探讨Survivin和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在老年宫颈癌的表达及与肿瘤侵袭转移的关系。方法选择72例老年宫颈上皮内瘤病变(CIN)患者及58例老年宫颈癌患者为研究对象,采用免疫组织化学方法检测患者病变组织Survivin和MMP-2的表达。比较CIN患者与宫颈癌患者Survivin和MMP-2表达阳性率的差别,并探讨Survivin和MMP-2与老年宫颈癌肿瘤侵袭转移的关系。结果 CINⅠ~Ⅱ级、CINⅢ级及宫颈癌患者Survivin和MMP-2阳性率依次升高(P<0.05);Survivin和MMP-2阳性率与FIGO分期、淋巴转移、间质浸润有关(P<0.05)。结论不同级别宫颈病变Survivin和MMP-2阳性率不同,Survivin和MMP-2在老年宫颈癌患者肿瘤侵袭转移等生物学行为中起重要作用。 相似文献