自体骨髓干细胞移植治疗严重慢性下肢缺血性疾病15例★

严重慢性下肢缺血患者其下肢远端没有良好的流出道，故无法接受手术搭桥。植入自体骨髓干细胞移植后缺血下肢可形成新生血管，建立侧支循环，改善肢体血供，以达到细胞性血管搭桥目的。选择2006-06/2007-02沈阳市第七人民医院内分泌科住院确诊的严重慢性下肢缺血性疾病患者15例，患肢均有不同程度的静息痛、缺血性溃疡或趾端坏疽，踝臂指数0~0.5，CTA及彩超证明为周围动脉闭塞性病变，病变远端流出道差，患者对本实验知情同意且自愿接受自体骨髓干细胞移植术，排除并发严重的心、肺、脑等脏器功能不全不能耐受手术者，实验经医院医学伦理委员会批准。于双髂后上棘穿刺采集自体骨髓血，每例采集骨髓血100~300 mL，羟乙基淀粉及Ficoll液分离，配置成干细胞混悬液50 mL，单个核细胞计数为（2.05~9.36）×108。椎管内麻醉，沿下肢动脉走行给予缺血下肢肌肉及足部局部注射移植自体骨髓干细胞混悬液，术后给予常规药物治疗。移植后12周患者肢体疼痛、患肢冷感明显减轻，皮肤温度升高，间歇跛行距离延长（t=-5.328~6.373，P < 0.01）；踝臂指数略微升高（P > 0.05）；肾功能不全者血肌酐略微降低（P > 0.05）。9例缺血性足溃疡患者的足部创面于术后3~12周基本愈合；2例趾端坏疽患者在干细胞移植术中进行坏疽部位截趾，术后4周完全愈合。术后均未出现异常症状或体征，随访6个月无不良反应发生。提示自体骨髓干细胞移植术能够增加严重慢性缺血患肢的血流灌注，明显改善肢体疼痛、冷感、间歇跛行等指标，且不会加重并发肾功能不全患者的肾功能损伤，安全有效。     

彩色多普勒超声评价自体外周血干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症：与血管造影结果吻合吗？*

背景：糖尿病下肢动脉闭塞的传统治疗方法如药物、介入等效果不佳,干细胞移植是近几年治疗该病变的新方法,临床取得了较好的效果。评价干细胞移植的治疗效果造影检查损伤大,费用高,所以采用彩色多普勒超声进行下肢动脉无创性检查具有重要的临床价值。 目的：应用彩色多普勒超声评价自体外周血干细胞移植后下肢动脉病变的改善情况,并与血管造影结果相比较。 方法：纳入确诊糖尿病下肢动脉闭塞症患者41例,经重组人粒细胞集落刺激因子150 µg皮下注射,1次/d进行外周血干细胞动员,第5天用血细胞分离机采集分离干细胞,配成干细胞悬液,将干细胞悬液肌肉注射进行双下肢移植(3×109细胞/肢)。干细胞移植后观察3个月至1年,同时进行各项指标的综合评估。 结果与结论：干细胞移植后,患肢疼痛、冷感、间歇性跛行、溃疡明显好转,踝臂指数明显升高(P < 0.01),彩色多普勒超声测量足背动脉血流速度明显增加(P < 0.01)。移植后下肢动脉管腔血流有不同程度改善,闭塞动脉周围、肌肉内的侧支血管增多;螺旋CT血管造影显示新生侧支血管明显增多。41例患者均未发生并发症和不良反应。提示彩色多普勒超声可准确、快速地检测和评价干细胞移植后下肢血运改善情况,和血管造影结果相吻合,在评价干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症的疗效方面能为临床提供可靠的诊断依据。     

人脐带间充质干细胞移植改善糖尿病兔下肢缺血

背景：将骨髓和自体外周血干细胞移植到糖尿病下肢缺血患者的下肢肌肉内后,可促进血管再生,改善和恢复糖尿病下肢缺血患者的患肢血流,但采集风险较大,对患者年龄、身体条件、心理接受程度要求较高。与骨髓和自体外周血干细胞相比,脐带资源丰富,细胞采集简单,免疫原性弱。 目的：探讨人脐带间充质干细胞移植改善糖尿病兔下肢缺血的可行性。 方法：建立糖尿病兔动物模型,结扎双后肢股动脉及分支制备下肢缺血动物模型。取经DIL染料标记的人脐带间充质干细胞悬液分15点(每点平均细胞数约为1.67×106)注射于左后肢缺血部位,右后肢缺血部位注射生理盐水,分别于第2,4周后取双侧后肢内收肌和腓肠肌标本,病理切片观察血管新生程度,CD31免疫组化检测毛细血管密度并进行皮温测定。 结果与结论：病理切片显示移植组较对照组侧支血管明显增多,CD31免疫组化标记移植组较对照组毛细血管密度增加,移植组皮温比对照组明显增高,差异有显著性意义(P ≤ 0.05)。实验结果表明人脐带间充质干细胞移植是改善糖尿病下肢缺血的一种有效手段。     

自体骨髓干细胞血管腔内移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症*☆

背景：自体骨髓干细胞通过肌肉注射移植治疗肢体缺血的疗效在动物实验和临床上均得到证实。近年来,小球囊扩张是治疗糖尿病下肢动脉闭塞症的常见方法。然而,通过导管注入自体骨髓干细胞这种干细胞移植和介入治疗结合方式在临床上常见于治疗冠心病,而鲜见于下肢动脉闭塞症的治疗。 目的：多指标客观评估自体骨髓干细胞血管腔内移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症的临床效果。 方法：选择2007-06/2009-06河南省人民医院老年医学部内分泌科收治的糖尿病下肢动脉闭塞症患者51例,男27例,女24例,随机分为两组：实验组：接受小球囊扩张和血管腔内自体骨髓干细胞移植治疗。对照组：仅接受小球囊扩张治疗。移植前后两组患者疼痛、冷感、间歇性跛行及移植后踝肱指数的变化、及并发症发生情况。 结果与结论：移植2周后,实验组患者下肢疼痛症状、冷感、间歇性跛行明显缓解率、好转率、无效率均高于对照组(P < 0.01)。踝肱指数变化差异亦有显著性意义(P < 0.01)。所有患者未出现并发症和不良反应。提示自体骨髓干细胞血管腔内移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症是一种简便、安全、有效的治疗方法。     

自体外周血单个核细胞移植治疗下肢缺血27例

背景：下肢缺血性疾病的治疗经历了传统经典的旁路手术到现代腔内微创治疗的发展过程，但无论何种治疗方法都需要有良好的流出道，对于缺少动脉流出道、不能够耐受手术创伤的患者，动脉搭桥和腔内治疗都无能为力。 目的：观察经自体外周血单核细胞移植治疗下肢缺血的临床效果。 方法：纳入27例下肢缺血患者，细胞移植前均行计算机断层摄影血管造影提示远端流出道闭塞而不能行外科搭桥或腔内隔绝术。采取重组粒细胞集落刺激因子300 μg/d皮下注射，动员3 d后，应用血细胞分离仪3000Plus采集外周血单个核细胞注射于缺血患肢腓肠肌，3个月后随访观察患肢缺血的改善情况。 结果与结论：随访3~60个月，平均22个月，其各项指标均得到改善19例(70%)，无改善8例(30%)。主要观察指标包括患肢皮温、静息痛、间歇性跛行距离、麻木感、皮肤情况、踝/肱指数和经皮氧分压均得到明显改善。提示对于远端流出道完全闭塞的下肢缺血患者，自体外周血干细胞移植是一种安全、有效的治疗方法。     

自体外周血干细胞移植糖尿病足36例血管内皮功能检测

为评价自体外周血干细胞移植对糖尿病足的临床疗效及对血管内皮功能的影响,选取河北医科大学第四医院内分泌科收治的已确诊2型糖尿病伴糖尿病足患者36例,同期选择12例与患者性别、年龄相匹配的健康体检者作为正常对照组。患者组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子进行自体外周血干细胞动员,3~7 d后采集单个核细胞,配成干细胞混悬液,2 h内行双下肢多点肌肉注射,根据血管造影结果选择注射范围。与移植前比较,移植后1周患者双下肢冷感、麻木、疼痛明显好转;移植后1个月溃疡基本愈合;移植后3个月踝肱压指数明显升高(P < 0.05),数字减影血管造影示新生侧支血管数量明显增多,内皮依赖性血管舒张功能明显好转(t=8.28,P < 0.01),但仍低于正常对照组(t =3.08,P < 0.01),未出现严重并发症和不良反应。提示动员后的自体外周血干细胞移植治疗糖尿病足方法简单,安全有效,且可改善血管内皮功能。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗严重糖尿病足：1例报告

背景：研究表明骨髓间充质干细胞在缺血局部可横向分化为血管内皮细胞,并进一步分化形成新生毛细血管,形成新的侧支,改善患者局部血供,从而达到治疗目的,为缺血性下肢血管病的治疗提供了新思路。 目的：观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗严重糖尿病足的临床疗效。 方法：选取1例2型糖尿病患者,严重糖尿病足1肢,经下肢动脉CT血管重建提示下肢血管硬化、狭窄和闭塞,抽取患者骨髓液50 mL,密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁细胞培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,微生物检测安全后静脉输注给患者。移植后7,30 d,3个月和6个月,以疼痛、冷感、间歇性跛行、踝肱指数、溃疡与坏疽变化等检测指标,观察治疗效果;以彩色多普勒、CT血管三维重建等检测,观察下肢血流改善和动脉侧支重建情况。 结果与结论：3个月后患者疼痛、冷感明显缓解,麻木改善;6个月后疼痛消失,踝肱指数明显升高,溃疡完全愈合,下肢得以保留,行走间距延长,下肢动脉造影CT三维重建及彩色多普勒检查可见患肢有明显的新生侧支血管、血流明显改善。治疗过程中无心、肝、肺、肾等重要脏器功能的损伤,随访患者14个月,未见移植相关并发症。提示自体骨髓间充质干细胞移植为糖尿病足的治疗提供了一条新途径。     

自体外周血及骨髓干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞：随机对照

目的：观察自体外周血干细胞和骨髓干细胞联合移植治疗糖尿病下肢闭塞症的临床疗效。 方法：选择2003-09/2007-01河南省人民医院二内内分泌科194例糖尿病下肢闭塞症患者，随机分为对照组（n=95）和干细胞移植组（n=99）,2组均接受内科综合治疗，在此基础上对干细胞移植组进行干细胞移植，95例患者双侧肢体行自体干细胞移植，3例仅缺血较重的一侧肢体行自体干细胞移植，1例因一侧肢体截肢，另一侧行肢体干细胞移植，干细胞移植的肢体为194条，患者对治疗知情同意，并经医院伦理委员会批准。对干细胞移植组患者进行外周血干细胞动员，每天给予人重组粒细胞集落刺激因子450~600 u，皮下注射，第5天局部麻醉下从髂骨处抽取自体骨髓血200 mL，在实验室将骨髓沉淀、离心，分离等处理后制备40 mL干细胞悬浊液备用。第6 天应用COBE6.1血细胞分离机单采单个核细胞，总量60~120 mL。将两种干细胞悬液按3cmx3cm距离进行缺血肢体移植术，移植后2周观察症状、体征改变。 结果：①干细胞移植组疼痛症状明显缓解、好转、无效的肢体分别为94个、 96个、4个，对照组分别7个、156个、27个，2组间显效率及无效率差异显著（P < 0.01）。②干细胞移植组冷感明显缓解、好转、无效的肢体分别为126个、 63个、5个，对照组分别为6个、158个、26个，2组间显效率及无效率差异显著（P < 0.01）。③干细胞移植组间歇性跛行明显缓解、好转、无效的肢体分别为138个、 47个、9个，对照组分别为13个、152个、25个，2组间显效率及无效率差异显著（P < 0.01）。所有患者未出现并发症和不良反应。 结论：自体外周血干细胞移植治疗糖尿病足是一种简便、安全、有效的治疗方法。     

自体骨髓干细胞移植治疗严重下肢动脉硬化闭塞症15例

于2007-01/2009-03锦州市中心医院确诊为糖尿病下肢动脉硬化闭塞症及合并糖尿病足的患者15例,平均年龄67.2岁,患肢均有严重皮温减低;8例静息痛,8例合并糖尿病干湿混合性坏疽,7例伴有干性坏疽。入选患者经内科综合治疗2周后,皮下注射人重组粒细胞集落刺激因子500 U/d,共3 d,第4日于双侧髂后上棘抽取自身骨髓血,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,制成细胞悬液40~50 mL,含单个核细胞1.6×1012 L-1~15.6×1012 L-1。在复合麻醉下行患肢肌肉多点注射,1 mL/点,各点间距约3 cm×3 cm。15例患者中,有2例在2个月内分别进行了2次骨髓干细胞移植,其余13例患者均只进行1次骨髓干细胞移植。移植后6个月,1例因急性心肌梗死死亡;1例移植前为后肢体疼痛、冷感均有改善,但移植后3个月出现患肢胫前脓肿予以截肢;其余13例移植前后下肢动脉造影血管评分差异显著(P < 0.01),肢体冷感、疼痛感差异明显(P < 0.05),而溃疡分级、踝肱比无明显变化(P > 0.05)。应用逐步回归分析显示,单个核细胞数量与新生侧支血管分级呈正相关。总有效率达80%,无效率20%,全部患者均未见注射局部及全身有明显不良反应发生。提示自体骨髓干细胞移植是治疗糖尿病下肢动脉硬化闭塞症简单有效的方法。     

下肢严重缺血的干细胞移植治疗★

背景：近年来研究发现干细胞移植疗法由于能增加新血管生成，促进侧支循环的建立，故有望成为严重下肢缺血的有效治疗措施，但少有文献就此方面进行综述和概括。 目的：综述近年关于干细胞移植治疗下肢严重缺血的最新进展。 方法：应用计算机检索2010-10/2011-01 CNKI、PubMed数据库相关文章，检索词“肢体缺血，干细胞移植，血管新生，peripheral arterial disease，stem cells transplantation，neovascularzation”。共检索到文献68篇，最终纳入符合标准的文献24篇。 结果与结论：严重下肢缺血是外周动脉疾病的终末期，对患者的生活质量产生很大影响，其中一部分患者已经失去血管重建的机会。干细胞移植疗法由于能增加新血管生成，促进侧支循环建立，从而成为严重下肢缺血患者保肢的新选择而备受关注。但其潜在的新血管生成机制尚需通过基础研究和临床大宗随机对照研究来进一步完善，以期使更多的下肢严重缺血患者受益。     

自体外周血干细胞移植治疗糖尿病足

背景：糖尿病下肢血管病变与糖尿病足的传统治疗方法主要有药物、介入或手术治疗。严重的往往需要截肢治疗,显著影响了患者的生活质量。治疗性血管生成是近年来国内外广泛开展的一项新技术。 目的：评估糖尿病足患者行自体外周血干细胞移植的疗效。 方法：选择大连医科大学附属第二医院北院综合治疗科收治的接受降糖药物和改善微循环扩血管药物治疗效果不佳的糖尿病足患者30例,男16例,女14例;年龄46~72岁;其中双下肢病变14例,单肢病变16例,患足共计44例。糖尿病病程3~7年不等;其中有5例在外院建议截肢。全部患者均通过自体外周细胞动员,达到标准后,采集自体干细胞悬液,在患足同侧小腿肌肉局部注射。在外周血干细胞移植的同时给予E1.丁格地尔和刺五加等药物治疗,足部溃疡定期换药及清创治疗。移植成功后,观察经皮氧分压和皮温足部感觉,溃疡及坏疽情况,不良反应等。 结果与结论：纳入糖尿病足患者30例,其中1例同并心脑血管疾病在随访期病故,其余29例患者进入结果分析。对所有病例行6个月定期观察和随访,发现外周血干细胞移植后7~14 d,30例患者(44足)疼痛明显缓解,患足皮氧分压和皮温显著上升,足部感觉明显增强。1~6周后,感染得到控制,12~16周,29例患者溃疡处坏疽明显好转,出现新生肉芽组织。6个月后4例完全愈合。15例患者在血细胞动员时感骨骼和肌肉酸痛,移植后5 d患者均感觉足部及小腿肌肉轻度胀痛。提示自体外周血干细胞移植能有效增加患者下肢血流,促进溃疡愈合,可使一部分患者有免除截肢和改善生活质量的效果。     

Autologous transplantation of peripheral blood stem cells as an effective therapeutic approach for severe arteriosclerosis obliterans of lower extremities

Treatment of severe arteriosclerosis obliterans of lower extremities (ASOLE) remains a clinical challenge. To develop a more effective approach, we evaluated the clinical efficacy of autologous transplantation of mobilized peripheral blood stem cells (PBSCs) in 5 patients with ASOLE. The patients received recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rhG-CSF, 600 micro g/day) for 5 consecutive days. On day 5, PBSCs were collected, sorted from blood circulation of patients, and then intramuscularly injected into their ischemic lower limbs. A significant improvement of clinical manifestations including severe pain, skin temperature and ulcer, was observed, without obvious adverse effect. The patient's limb was successfully saved. Satisfactory remission was obtained 3 months after transplantation as shown by significant improvement in ankle-brachial pressure index (ABI), blood flow in personal vascular laboratory (PVL), laser Doppler blood perfusion, and the angio-graphic scores. Our data suggest for the first time that autologous transplantation of mobilized PBSCs provides a practical, safe, and effective method of treatment for lower limb ischemia.     

Nerve growth factor in muscle afferent neurons of peripheral artery disease and autonomic function

In peripheral artery disease patients, the blood supply directed to the lower limbs is reduced. This results in severe limb ischemia and thereby enhances pain sensitivity in lower limbs. The painful perception is induced and exaggerate during walking, and is relieved by rest. This symptom is termed by intermittent claudication. The limb ischemia also amplifies autonomic responses during exercise. In the process of pain and autonomic responses originating exercising muscle, a number of receptors in afferent nerves sense ischemic changes and send signals to the central nervous system leading to autonomic responses. This review integrates recent study results in terms of perspectives including how nerve growth factor affects muscle sensory nerve receptors in peripheral artery disease and thereby alters responses of sympathetic nerve activity and blood pressure to active muscle. For the sensory nerve receptors, we emphasize the role played by transient receptor potential vanilloid type 1, purinergic P2X purinoceptor 3 and acid sensing ion channel subtype 3 in amplified sympathetic nerve activity responses in peripheral artery disease.     

异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡及血管内皮生长因子的表达☆

背景：目前在临床多采用自体骨髓干细胞及自体外周血干细胞治疗糖尿病足溃疡,少见利用骨髓间充质干细胞治疗糖尿病足溃疡的基础研究。 目的：观察局部移植异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡的效果及血管内皮生长因子的全身及局部表达情况。 方法：取雄性Wistar大鼠90只,随机数字表法分为3组：对照组(正常足部溃疡)、干细胞治疗组、糖尿病对照组。干细胞治疗组、糖尿病对照组建立2型糖尿病足溃疡模型,造模后分别注射同种异体骨髓间充质干细胞、干细胞培养基DMEM。造模后第1,4,8天观察各组大鼠溃疡面积、细胞核染色示踪及病理学检查,ELISA法测外周血血管内皮生长因子浓度、Western-blotting法测局部血管内皮生长因子浓度。 结果与结论：与糖尿病对照组比较,干细胞治疗组溃疡愈合速度迅速,但仍较对照组愈合缓慢,外周血中血管内皮生长因子表达增高,也未达到正常水平。异体干骨髓间充质干细胞治疗前期(1~4 d)能明显提高局部血管内皮生长因子浓度,但在后期(8 d)局部浓度提高不足。干细胞治疗组愈合缓慢,表皮覆盖不完全,但较糖尿病对照组愈合明显提前,表皮覆盖较明显;细胞核染色示移植后干细胞均聚集于溃疡区周围。提示异体移植骨髓间充质干细胞可促进大鼠糖尿病足溃疡的愈合,其促进愈合的可能机制为其上调了血管内皮生长因子在全身尤其局部的表达。     

Intermittent intravenous urokinase for critical limb ischemia in diabetic foot ulceration

Patients with diabetic foot ulceration and critical limb ischemia have a high risk of major amputation, especially if limbs can not be revascularized. Urokinase is effective in improving microcirculation in critical limb ischemia and might improve outcomes. There are no data on the efficacy and safety of urokinase treatment (survival free of major amputation, ulcer healing and the rate of minor and major bleeding). Therefore, we aimed to investigate the effect of urokinase treatment in a phase II clinical trial. We performed an open, prospective, non-controlled, multicenter phase II cohort study in 77 type-2 diabetic patients with critical limb ischemia and diabetic foot ulceration. Patients had no surgical or endovascular treatment option based on interdisciplinary consensus. Urokinase (1 Mio IU if plasma fibrinogen >/=2.5 g/l, 0.5 Mio IU if fibrinogen <2.5 g/l) was administered for 21 days as an intravenous infusion over 30 minutes. Each patient was followed up for 12 months. Treatment for a median of 21 days resulted in 33% of patients being alive, having no major amputation and completely healed ulcers after 12 months. Total survival rate was 84.6%, amputation-free survival 69.2% and rate of major amputation 21.1%. Eighty-two percent of patients experienced at least once a complete ulcer healing within the course of study. Three serious adverse events were urokinase-related. Urokinase treatment in diabetic patients with critical limb ischemia appears to be effective, feasible and safe. Although this calls for a larger, randomized and controlled trial, the results are highly relevant for clinical practice to prevent these patients from receiving major amputation due to diabetic foot syndrome.     

Therapeutic neovascularization by transplantation of mobilized peripheral blood mononuclear cells for limb ischemia. A comparison between CD34+ and CD34- mononuclear cells

Autolougous transplantation of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF)-mobilized human peripheral blood mononuclear cells (PBMNCs) improves limb ischemia in patients with arteriosclerosis obliterans of lower extremities and with diabetic foot. However, the mechanism of action of PBMNCs remains elusive. Here, we studied comparatively the effects of the G-CSF-mobilized PBMNCs and CD34-depleted G-CSF-mobilized PBMNCs in an ischemia model of athymic nude mice. Fluorescence- labeled human PBMNCs [1 x 10(6)] were intramuscularly injected into the unilateral ischemic hindlimbs of mice. Laser Doppler imaging analysis revealed a significantly augmented blood perfusion at day 7, 14 and 28 after operation. The capillary density was also markedly increased and the rate of limb loss was significantly reduced in cell-transplanted groups when compared with those in PBS group. In comparison with G-CSF-mobilized PBMNCs, the therapeutic efficiency of G-CSF-mobilized PBMNCs deprived of CD34+ cells was impaired. Transplanted cells were found to accumulate around arterioles and scatter in capillary networks. Incorporation of transplanted cells into new capillaries was observed in the G-CSF-mobilized PBMNCs group, but was not detected in the group deprived of CD34+ cells. There was an elevated expression of VEGF in ischemic tissue. Colocalization of VEGF and transplanted mononuclear cells within adductor tissue was demonstrated. These findings indicate that G-CSF-mobilized PBMNCs promote vascular growth not only by incorporating into vessel walls but also by supplying angiogenic factors. The depletion of CD34+ cells attenuated the therapeutic efficiency of G-CSF-mobilized PBMNCs in response to ischemia-induced neovascularization.