K562细胞的诱导分化与表型

Ｋ＿５６２细胞的诱导分化与表型临床生化教研室泰建平综述蒋纪恺，王霞文审校中图分类号Ｒ７３３．７目前对于白血病的治疗主要是用化疗、骨髓移植等，但疗效都不能令人满意。因此，探讨新的治疗途径显得十分必要而迫切。自从ＬｅｏＳａｃｈｓ于１９７８年报告恶性肿瘤细...     

N-乙酰氨基葡萄糖诱导白血病细胞K562向巨噬细胞分化

目的 :研究N 乙酰氨基葡萄糖对白血病细胞K5 6 2的诱导分化效果 .方法 :利用hexamethylenebisacetamide(HMBA)和N 乙酰氨基葡萄糖 ,分别用不同浓度对白血病K5 6 2细胞进行诱导分化实验 ,通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向 .结果 :化学诱导剂N 乙酰氨基葡萄糖对K5 6 2细胞在0 .5mmol·L-1浓度作用 2d后有良好的诱导分化效果 ,诱导K5 6 2向巨噬细胞分化 .与HMBA相比 ,N 乙酰氨基葡萄糖在作用浓度和作用时间上都有明显优势 .结论 :N 乙酰氨基葡萄糖可能诱导K5 6 2细胞向巨噬细胞方向分化     

丹参酮ⅡA对K562细胞株的诱导分化

目的了解丹参酮ⅡA ( TanⅡA)对 K562细胞株的生长影响及红系诱导分化作用,探讨其可能的作用机制.方法细胞培养、形态观察和流式细胞术检测等. 结果 TanⅡA对K562细胞有生长抑制作用,而适当浓度的TanⅡA可诱导K562细胞向红系分化.用0.5μg/ml 的TanⅡA 处理后,K562细胞的凋亡细胞增加,G0/G1期细胞堆积,c-myc 、bcl-XL和H-ra s的表达下降,p53和Rb的表达增加.结论 TanⅡA对K562细胞有生长抑制及诱导红系分化的作用,同时伴有细胞的凋亡.     

姜黄素对人类红白血病细胞（K562）的抑制及诱导分化作用

用人类红白血病细胞（Ｋ５６２）为通过细胞计数、ＭＴＴ法测定,形态学观察、ＮＢＴ还原试验及联七胺反应等方法检测了不同浓度姜黄素对体外人Ｋ５６２细胞的作用。结果表明,姜黄素对Ｋ５６２细胞有明显的抑制作用。随浓度增加,抑制作用逐渐增强,形态学观察可见轻微诱导分化作用。鉴于姜黄素对人类红白血病细胞兼有轻微诱经和增殖抑制人艇,提示姜黄素有可能应用于人类红白血病的治疗。     

人参皂苷对K562细胞增殖与分化相关基因表达的影响

目的 探讨人参皂苷影响K562细胞增殖、分化的可能分子机制.方法 采用real-time PCR技术和SYBR Green染料法检测人参皂苷(20 μg/mL)作用于K562细胞36 h时间点Lif、Ccnd1、Mdm2、Erbb2、p53和myc等6个基因mRNA相对表达水平.结果 人参皂苷能显著促进K562细胞Li...     

三氧化二砷对K562细胞细胞周期的影响及其机制的研究

最近，有关三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）有效治疗急性早幼粒细胞白血病，且无严重毒副作用及骨髓抑制的报道［１，２］，再度引起人们对Ａｓ２Ｏ３治疗白血病甚至其他恶性肿瘤的浓厚兴趣。为阐明Ａｓ２Ｏ３治疗慢性髓细胞白血病的机制，并为其临床应用提供理论依据，我们以Ｋ...     

丹参酮ⅡA对K562细胞株的诱导分化

目的：了解丹参酮ⅡA（TanⅡA)对K562细胞株的生长影响及红系诱导分化作用，探讨其可能的作用机制，方法：细胞培养，形态观察和流式细胞术检测等。结果：TanⅡA对K562细胞有生长抑制作用，而适当浓度的TanⅡA可诱导K562细胞向红系分化。用0．5ug/ml的TanⅡA处理后，K562细胞的凋亡细胞增加，G0/G1，期细胞 堆积，c-myc,bcl-XL和H－ras的表达下降，p53和Rb的表达增加。结论：TanIIA对K562细胞有生长抑制及诱导红系分化的作用，同时伴有细胞的凋亡。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

K562细胞红系诱导分化方法的实验研究

目的建立一种高效K562细胞红系诱导分化方法。方法比较不同方法对K562细胞红系诱导分化的效果,优化诱导剂成分组合和剂量组合,建立一种高效的红系诱导,鉴定指标选用细胞形态学、联苯胺染色阳性率计数及RT-PCR测定红系细胞标志物膜带3蛋白(band3)的表达。结果多因素协同诱导K562细胞红系分化120 h后,显微镜下观察细胞形态呈红系中、晚期特征,联苯胺染色阳性率可达(52.7±8.2)%,红系标志物band3在mRNA水平明显高于对照组(P<0.01)。结论多条信号途径协同参与K562细胞红系分化的过程,多因素共同诱导可显著提高K562细胞的红系分化。     

人参总皂甙对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

采用细胞体外培养,流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对Ｋ＿６５２细胞增殖与分化的影响。结果表明：ＴＳＰＧ对Ｋ＿５６２细胞增殖具有明显的抑制作用,并能阻止Ｋ６５２细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｇ２／Ｍ＋Ｓ期过渡：经２００μｇ／ｍｌ的ＴＳＰＧ诱导后,Ｋ５６２细胞形态趋向成熟分化;联苯胺染色、糖原染色和ＨＩＲ２．ＣＤｗ４１阳性表达细胞数显著提高,且阳性强度增加。推测ＴＳＰＧ是能抑制白血病细胞增殖并诱导其分化的天然诱导剂,但对其机理有待进一步探讨。     

红芪总黄酮对慢性粒细胞系K562细胞周期及凋亡影响研究

目的观察中药红芪总黄酮对K562细胞周期及凋亡的影响。方法以不同剂量的药物处理K562细胞，MTT法检测红芪总黄酮对细胞的抑制作用，流式细胞仪检测其周期及凋亡的改变。结果与对照组比较，不同浓度红芪总黄酮作用K562细胞24h、48h和72h，K562细胞增殖表现为明显抑制；有一定的时间剂量依赖关系。IC50分别为263．757μg,／ml、120．502μg／ml、117．075μg／ml。药物作用48小时，各药物组与对照组相比吸光度值（A值）均明显降低，有统计学意义（P〈0．01），但无明显凋亡现象，表现为K562细胞阻滞于G0／G1、G2／M期时相。结论红芪总黄酮对K562细胞生长有抑制作用，但其抑制机制不是通过诱导细胞凋亡，而是通过诱导K562细胞的G0／G1、G2／M期阻滞。     

白龙片与HMBA对人胃癌周期细胞分化作用的比较研究

目的:对比研究白龙片与HMBA对人胃癌细胞的诱导分化作用。方法:采用高压笑气法将MGc803细胞进行同步化,分别收集G_1、S、G_2、M四期细胞,将中药复方白龙片与已知诱导合化剂HMBA分别处理各期细胞。结果:实验结果表明两种药物均可使MGC803细胞生长受到抑制、软琼脂集落形成减少及微丝结构增长。且以G_1期细胞效果最为明显。结论:表明白龙片与HMBA对人胃癌MGC803细胞的诱导分化作用具有明显相似的特点。     

恩替诺特对K562人慢性粒细胞白血病细胞株G_0/G_1细胞周期的影响

[目的]探讨恩替诺特对K562人慢性粒细胞白血病细胞株G_0/G_1细胞周期的影响.[方法]采用CCK-8试剂盒观察恩替诺特对体外培养的K562人慢性粒细胞白血病细胞生长抑制的影响,并利用流式细胞仪检测细胞周期.[结果]CCK-8试剂盒观察结果显示,与对照组比较,随着恩替诺特药物浓度的增加及作用时间的延长,K562细胞抑制率显著升高(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示,恩替诺特可使K562细胞阻滞于G_0/G_1期,且阻滞细胞的数量与药物浓度呈正相关(P<0.05);恩替诺特作用48h时对细胞周期的阻滞作用最强.[结论]恩替诺特通过阻滞细胞周期于G_0/G_1期而抑制K562细胞增殖.     

芸香诱导K562细胞凋亡时细胞色素C表达变化

【目的】研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中细胞色素C的表达。【方法】体外培养K562细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western Bloting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。【结果】芸香浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现,Western Bloting检测4×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。【结论】芸香诱导白血病细胞发生凋亡,可能与线粒体途径有关。     

小干扰RNA对白血病细胞K562的生长和蛋白表达的影响

目的:检测小干扰RNA对慢性粒细胞白血病细胞系K562的影响。方法:脂质体转染细胞,MTT实验检测转染后的细胞活性,并绘制生长曲线,用Western blot检测p210蛋白表达水平的变化,并用Annexin-V-FITC法检测细胞凋亡水平。结果:与对照组相比,有2条小干扰RNA序列可以有效地降低细胞活性,诱导细胞凋亡并降低p210蛋白的表达水平。结论:小干扰RNA可抑制K562细胞活性,降低融合蛋白表达水平并诱导细胞,有望成为治疗慢性粒细胞白血病的有效方法。     

siRNA诱发K562/Adr细胞凋亡的机制研究

目的研究siRNA引起K562/Adr细胞凋亡的机制。方法siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染K562/Adr细胞,透射电镜观察K562/Adr细胞超微结构变化;W estern b lot检测凋亡相关蛋白Bc l-2的改变。结果透射电镜下,pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组细胞胞浆浓缩、线粒体出现肿胀空泡样变、胞核内染色质浓集、染色质形成新月体样改变并有凋亡小体形成等典型的凋亡改变;W estern b lot结果表明pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组发生凋亡的K562/Adr细胞中,Bc l-2含量明显减少,与mock相比差异具有显著性意义(P<;0.05)。结论siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ通过抑制Bc l-2表达诱导K562/Adr细胞发生凋亡,逆转其多药耐药的发生,从而为siRNA逆转白血病多药耐药提供坚实的理论依据。     

有丝分裂阻滞剂Nocodazole诱导HL-60细胞的凋亡

目的　以细胞有丝分裂阻滞剂 Nocodazole为诱导物 ,诱导白血病细胞系 HL- 6 0细胞凋亡 ,并进行形态学和生物化学指标的检测 .方法　首先 ,观察 1nmol· L- 1 ～ 10μmol· L- 1递增浓度的 Nocodazole对 HL- 6 0细胞的作用 ,然后选取浓度 5 0 0 nm ol· L- 1 诱导凋亡 ,通过 HE染色、荧光染色、DNA片段化 (DNA fragmentation)及流式细胞仪分析研究其凋亡的特征 .结果　 5 nm ol· L- 1～ 10 μm ol· L- 1的Nocodazole都可以诱导 HL - 6 0细胞的凋亡 .在 5 0 0 nmol·L- 1 的 Nocodazole作用下 ,HE染色、荧光染色显示从 6 h开始即出现胞质嗜碱性增强、细胞核固缩断裂、凋亡小体形成等凋亡的形态学特征性改变 .基因组 DNA电泳检测显示从 8h开始出现微弱的梯状 DNA.流式细胞仪检测了不同时间点的细胞周期显示了 G2期阻滞 ,未能检测到亚二倍体峰 .结论　我们用 Nocodazole不仅诱导了典型的白血病细胞凋亡 ,而且在 G2 /M期阻滞与凋亡之间建立了联系 ,可用于凋亡机制或细胞周期调控与凋亡关系的研究     

Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控

目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。     

黄芩苷对白血病细胞耐药株逆转耐药效果及机制研究

目的:观察黄芩苷对白血病耐药株细胞的耐药逆转作用,并初步探讨其可能的机制。方法:MTT法检测阿霉素及黄芩苷对白血病亲本细胞及耐药株细胞的抑制率,通过计算阿霉素对耐药株细胞及亲本细胞的半数抑制浓度(IC50)评价耐药倍数,通过阿霉素与黄芩苷联用的IC50评价黄芩苷的逆转作用,流式细胞计数法检测黄芩苷作用后对耐药细胞内阿霉素药物蓄积的影响,RT-PCR检测黄芩苷对耐药细胞中多药耐药相关基因MDR1、MRP1以及LRP1表达的影响。结果:耐药细胞株的耐药倍数为17.384倍,黄芩苷10μg/ml和20μg/ml对白血病耐药株的逆转倍数分别为4.230和7.812,相对逆转率分别为0.81和0.93,黄芩苷作用后耐药株细胞内阿霉素蓄积明显增加,MDR1基因表达显著下降。结论:黄芩苷对白血病耐药细胞株具有显著的逆转作用,其机制可能与下调了细胞内的MDR1基因表达进而抑制P糖蛋白对阿霉素的泵出有关。