千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡机制研究

目的探讨Bcl-2/Bax信号通路在千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡中的作用及其分子机制研究。方法HL-60细胞培养体系中分别加入大、中、小剂量千金子甾醇溶液,甾醇溶液作用细胞24h后,采用CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2/Bax、Caspase-9和Caspase-3mRNA转录水平,ELISA法检测Caspase-9和Caspase-3蛋白活性。结果 CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,千金子甾醇能明显抑制HL-60细胞增殖（F=42.97,P〈0.001）,各个浓度之间进行比较,差异有统计学意义,P〈0.05。流式细胞术检测细胞凋亡率显著增加（F=56.74,P〈0.001）,经10、20和40μg/mL千金子甾醇处理24h后,HL-60细胞早期凋亡率分别为（23.4±3.1）%、（35.7±4.3）%和（53.2±3.9）%,细胞呈典型凋亡形态学改变。千金子甾醇作用后,Bax mRNA转录水平显著升高,Bcl-2mRNA转录水平显著降低,且呈化合物剂量依赖性（F=53.45,P〈0.001）,Caspase-9和Caspase-3 mRNA转录水平升高,且呈化合物剂量依赖性（F=34.21,P〈0.001）,千金子甾醇对HL-60细胞作用24h后Caspase-9和Caspase-3蛋白活性显著升高（F=54.33,P〈0.001）,且随着千金子甾醇浓度增加蛋白活性逐渐升高。结论千金子甾醇通过调节Bcl-2/Bax凋亡信号通路,诱导HL-60细胞凋亡,其作用呈明显剂量依赖性。     

白杨素诱导白血病细胞HL-60凋亡及其机制

目的:检测白杨素诱导白血病细胞HL-60凋亡及其机制。方法:分别利用MTT实验和Annexin V-FITC/PI双染实验检测细胞增殖和凋亡。Western blot技术检测相关通路蛋白变化。结果:白杨素可以明显诱导白血病细胞HL-60凋亡。白杨素处理后细胞的p-AKT蛋白水平明显下降。结论:白杨素能够通过AKT通路诱导HL-60细胞凋亡。     

ALA-PDT诱导白血病细胞株HL-60凋亡

背景与目的:基于5-氨基乙酰丙酸的光动力疗法(ALA-PDT)利用肿瘤细胞对ALA产生的内源性光敏剂原卟啉IX(PpIX)的优先摄取,使肿瘤细胞在受到一定的光照后被选择性地杀伤。到目前为止,ALA-PDT引起肿瘤细胞破坏的确切机制尚未完全阐明。本研究探讨ALA-PDT对白血病细胞株HL-60的凋亡诱导作用。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA PDT组。用MTT法检测细胞的存活率,瑞氏染色观察细胞形态学改变,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,并用共聚焦激光显微镜(LSCM)观察凋亡细胞的特征。结果:ALA PDT组光照后细胞形态学可见凋亡改变;MTT法显示细胞存活率明显下降,24 h为(46±9)%,48 h为(26±8)%,两者比较差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测显示光照后4、5和24 h细胞凋亡率分别为(26±9)%、(29±11)%和(51±6)%,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);LSCM观察AnnexinV-FITC单阳性及AnnexinV-FITC/PI双阳性细胞均具有典型的凋亡特征,而单纯ALA组、单纯光照组及对照组则无上述改变。结论:ALA-PDT能杀伤白血病细胞株HL-60,主要通过诱导凋亡的方式实现的,并呈一定的时间依赖性。     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白     

甲异靛对白血病骨髓基质细胞调节白血病细胞增殖的影响

 【摘要】　目的　探讨甲异靛对白血病骨髓基质细胞干预白血病细胞增殖的影响。方法 　利用白血病骨髓单个核细胞培养骨髓基质细胞,并建立白血病细胞和骨髓基质的共培养体系。用锥虫蓝拒染实验测定甲异靛对共培养体系中白血病细胞增殖的影响;流式细胞术检测白血病细胞膜上CXCR4的表达。结果　白血病骨髓基质细胞可抑制白血病细胞的增殖。低浓度的甲异靛（5 μmol／L）可促进白血病和骨髓基质细胞共培养体系中白血病细胞的增殖。白血病细胞膜异常高表达CXCR4,甲异靛可明显抑制HL-60细胞和原代白血病细胞膜上CXCR4的表达,骨髓基质细胞可以促进白血病细胞膜上CXCR4的表达。结论　甲异靛可能通过下调白血病细胞膜上CXCR4的表达起抗白血病作用。     

羟基喜树碱诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的 :探讨国产羟基喜树碱 (HCPT)对 HL - 6 0细胞的作用机制和规律。方法 :应用细胞形态学检查 ,DNA凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果 :HCPT 1mg/ L和 5 mg/ L作为 HL - 6 0细胞 4h细胞凋亡率分别为 5 0 .6 %和 6 8.6 %。光镜检查见细胞核固缩、碎裂 ;电镜检查见染色质向核周边凝集。 DNA电泳显示典型的梯状条带。当 HCPT浓度超过 5 mg/ L或作用超过 4h,细胞凋亡率无明显增加 ,出现饱和现象。HL - 6 0细胞经 HCPT作用后 ,S期细胞显著减少 ,G0 / G1 期细胞增加。结论 :HCPT诱导 HL - 6 0细胞出现凋亡并具有饱和效应 ,HCPT为 S期特异性药物。临床上 HCPT应与细胞周期非特异性药物联合用药。     

白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡机制的实验研究

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratml,Res)诱导人早幼粒白血病HL60细胞凋亡的机制.材料与方法:用不同浓度Res作用HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞的形态学变化,MTY法检测Res对HL-60细胞增殖的抑制作用,确定Res作用于HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50).Western blot法检测Res作用HL-60后Caspase-3活性的变化及GADD45a、Annexin A1、Bcl-2/Bax、Cleaved-Caspase 3表达的变化.结果:Res处理后,HL-60细胞体积变小,细胞的折光性减弱,细胞内出现颗粒样物质,且随着Res浓度的增加上述形态变化增强.12.5～200 μmol/L浓度的Res可明显抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和剂量依赖性(P<0.05),24 h的IC50为75.64 μmol/L.Res处理后,HL-60细胞Caspase-3活性增强,12 h达高峰,24 h开始下降;细胞的Annexin A1、GADD45α、Bax、Cleaved-Caspase 3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,Bcl-2/Bax比值下降.结论:Res抑制HL-60细胞增殖,并通过依赖Caspase-3途径诱导HL-60细胞凋亡,GADD45α、Annexin A1参与了凋亡过程.     

苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 :研究苯丙氨酸解氨酶(L phenylalanineammonia lyase ,PAL)对白血病HL 60细胞生长的抑制作用 ,探讨其作用机制。方法 :应用MTT比色法观察PAL对HL 60细胞的生长抑制作用 ,应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果 :PAL与HL 60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 3 0 2U/mL ;细胞呈典型的凋亡形态学改变 ,细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,可见新月形 ;细胞DNA裂解成 180～ 2 0 0bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带 ,凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系。结论 :PAL能抑制HL 60细胞的生长 ,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

全反式维甲酸对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨 HL- 6 0细胞经全反式维甲酸 (ATRA)作用后对化疗药物阿糖胞苷 (Ara- C)诱导凋亡敏感性的变化。方法 :应用光镜检查凋亡细胞形态 ,DNA电泳检查梯状条带及流式细胞仪检测细胞周期分布、凋亡细胞率和 bcl- 2蛋白表达的阳性细胞率和相对荧光强度 (MFI)。结果 :ATRA0 .3mg/ L 作用 HL- 6 0细胞 72 h后 ,S期细胞显著减少至 32 .9% (P<0 .0 5 ) ,G0 / G1 期细胞明显增加达 5 8.5 % (P<0 .0 5 ) ,bcl- 2阳性细胞率和 MFI分别下降至 18%和 0 .6 3(P<0 .0 5 ) ;Ara- C1.5 m g/ L 作用 HL- 6 0细胞 4h,凋亡细胞率为 5 5 .1% ,DNA电泳见明显的梯状条带。当 HL- 6 0细胞经 ATRA0 .3m g/ L 作用 72 h后再加 Ara- C1.5 m g/ L 继续培养 4h,细胞凋亡率明显减少至 34 .4% (P<0 .0 5 ) ,DNA电泳见梯状条带亮度减弱。结论 :ATRA降低 HL- 6 0细胞对 Ara- C诱导凋亡敏感性 ,其机制可能与 ATRA阻滞 G0 / G1 期细胞进入 S期有关     

二烯丙基二硫作用于HL-60细胞后凋亡相关基因的差异表达

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对多种肿瘤细胞有促凋亡作用,白血病是儿童最常见的恶性肿瘤,近期研究提示DADS能够在体外诱导人白血病细胞发生凋亡,但其具体作用机制尚不清楚.本实验旨在研究DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的生物学效应,并探讨其分子机制.方法:运用DNA含量分析、Annexin V/PI双标记流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳以及透射电子显微镜形态学观察等方法来证实细胞凋亡.通过基因芯片检测60 μmol/L DADS作用于HL-60细胞4 h后凋亡相关基因的表达谱,采用RT-PCR技术验证上调基因Fas-L和下调基因Bag-1.结果:15、30、60和120 μmol/L DADS作用于HL-60细胞24 h后,DNA含量分析出现了明显的亚二倍体峰;60 μmol/L DADS作用4、8、12、24 h后,Annexin V/PI双标流式细胞仪检测表明早期凋亡细胞显著增加.60 μmol/L DADS作用24 h后,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯形条带.电子显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成等典型的形态学改变.通过基因芯片检测发现,60 μmol/L DADS作用4 h后有8个凋亡相关基因表达差异显著,选择其中Fas-L和Bag-1两个基因运用RT-PCR技术进行验证,其结果与基因芯片结果一致.结论:DADS能够诱导人白血病细胞HL-60凋亡,这可能是多个基因和多条信号转导通路共同作用的结果.     

植物黄酮抗人白血病HL-60细胞增殖的结构-效应关系

背景与目的:植物黄酮为植物多酚化合物,广泛存在于植物性膳食与草药中,其多项有益人体的生物活性已经被研究证实,本研究观察比较23种植物黄酮对人白血病HL-60细胞株增殖的影响,并分析其结构-效应关系.方法:选用纯度单一、结构明确的23种植物黄酮,分别作用于HL-60细胞,MTT法检测细胞增殖抑制状况,计算半数抑制浓度(IC50),比较不同植物黄酮抑制能力的强弱,分析特定结构元件对IC50的影响.结果:23种植物黄酮中21种对HL-60细胞具有显著增殖抑制作用,并呈现浓度依赖性趋势,但不同植物黄酮作用差异很大,印棉黄素和桑黄素显示出显著促进作用.抑制效应强弱依次为:3,6-二羟基黄酮＞毛地黄黄酮＞3'-甲氧基,3,7,4'-三羟基黄酮＞2'-羟基二氢黄酮＞5,7,4'-三羟基黄酮＞3,7-二羟基黄酮＞杨梅黄酮＞漆树黄酮＞黄芩黄酮＞槲皮素＞二氢黄酮＞白杨黄素＞高良姜黄素＞4'-羟基二氢黄酮＞6-羟基黄酮＞染料木黄酮＞黄酮＞7-羟基黄酮＞大豆黄素＞橙皮素＞柚皮素.构效关系分析显示,C环2,3位双键、一定数目的羟基、3位羟基、B环邻位羟基、B环定位于2位,对于植物黄酮抗HL-60细胞增殖效应的发挥可能是至关重要的,是其中的关键结构效应元件.相反,C环2,3位双键的缺失、羟基数目的过少或过多、5位羟基、7位羟基、B环间位羟基及异黄酮结构则会降低其抑制效应.结论:C环2,3位双键、一定数目的羟基、3位羟基、B环邻位羟基、B环定位于2位可能是植物黄酮抗HL-60细胞增殖的关键结构效应元件.     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的研究

明确化疗药物诱导急性白血病细胞凋亡的规律及在急性白血病化疗中的意义。方法应用光镜、电镜,结合ＤＮＡ电泳及流式细胞仪分析技术,观察阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）诱导的急性髓系白血病细胞系ＨＬ－６０凋亡模式。结果Ａｒａ－ｃ诱导的细胞凋亡在０～３６小时过程中持续存在,逐渐增强,其诱导效率呈剂量性增强。而且,经其他６种化疗药物诱导后,ＨＬ－６０以及经ＤＡ方案化疗的１例急性髓系白血病患者外周血白细胞,均表现典型的ＤＮＡ梯形图谱。进一步分析表明,化疗诱导凋亡与其下调ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达有关。结论化疗药物诱导的细胞凋亡是化疗的关键机制     

苦参碱诱导HL-60细胞株凋亡作用的实验研究

 目的　研究苦参碱（MAT）诱导HL-60细胞株凋亡的作用及其机制。方法　采用 CCK-8法检测不同浓度MAT对HL-60细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡以及线粒体跨膜电位的变化;分光光度法检测Caspase-9活性。结果　0.25～2.0 mg／ml MAT对HL-60细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（F＝67.83,P＜0.05）;MAT处理48 h后,细胞凋亡率明显增高,并呈剂量依赖性（t值分别为4.685、6.300、9.641、6.786,均P＜0.05）;1.0 mg／ml MAT处理后48 h内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（F＝54.83,P＜0.05）,Caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性（F＝72.31,P＜0.05）。结论　MAT可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活Caspase-9而诱导HL-60细胞凋亡。     

阿斯匹林抑制白血病细胞增殖的实验研究

目的以人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60为模型,研究非甾体类抗炎药阿斯匹林(ASA)对HL-60细胞生长的影响.方法利用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,并分析剂量反应曲线;通过流式细胞仪(FCM)了解其对细胞周期的影响.结果(1)ASA在浓度为(2.5～10.0)mmol/L作用72h后,HL-60细胞增殖抑制随浓度增加而增加,其IC 50值为8.97mmol/L;并且2.5mmol/L ASA与100μg/ml Ara-c有协同作用;(2)ASA处理后HL-60细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.结论结果提示一定浓度ASA在体外能抑制HL-60细胞增殖,抑制率与ASA剂量相关;ASA抑制HL-60细胞增殖可能与其干扰细胞周期有关.     

地西他滨联合柔红霉素对HL-60细胞株凋亡作用的探讨

目的观察小剂量地西他滨（DAC）单用或联合柔红霉素（DNR）对白血病细胞株HL-60的凋亡作用及对抑癌基因PTENmRNA表达的影响。方法以不同浓度的DAC、DNR单药及联合处理HL．60细胞株,应用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）法、流式细胞术检测不同时相药物对细胞的凋亡作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测不同浓度组中HL-60细胞PTENmRNA表达。结果DAC、DNR单药对HL-60细胞的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,联合用药组的抑制作用则更为明显[72h抑制率为（80．23±1．71）％,P〈0．001];5．0μmol／LDAC联合1．0μmol／LDNR作用72h细胞凋亡率最高,抑制作用均较DAC和DNR单药组明显（F=30．199,P〈0．001）;不同浓度DAC与DNR联用后,细胞PTENmRNA表达量增加,呈浓度依赖性,明显高于对照组及DNR单药组（F=578．218,P〈0．001）。结论DAC能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,与DNR联合对HL-60细胞增殖抑制作用有协同效应,其机制可能与DAC的去甲基化作用使PTENmRNA的表达量增加有关。     

紫草素衍生物SK36对白血病HL-60细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨紫草素衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基-异戊酰紫草素(5,8-dimethyl-2-β-hydroxy-isovaleryl shikonin,SK36)对人白血病细胞株HL-60增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测SK36对HL-60细胞的增殖抑制作用;光学显微镜下观察细胞形态的变化;AnnexinⅤ /PI 双标记法检测细胞凋亡率;FCM法检测caspase-3活性;JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位.结果:SK36能明显抑制HL-60细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;在光学显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化;FCM法检测结果显示,SK36作用HL-60细胞24和48 h时的细胞凋亡率分别为(55.55±2.88)%和(72.12±14.50)%,明显高于对照组;caspase-3活性增加,线粒体跨膜电位发生崩塌,且随着时间的延长其效应更加明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:SK36在体外可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡 .     

地西他滨对人急性髓系白血病细胞株HL-60的调控作用及其机制研究

目的 研究地西他滨(DAC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60体外生长及自然杀伤(NK)细胞活化性受体配体(NKG2DL)表达的调节作用,并探讨JAK-STAT3-SOCS信号通路相关的分子机制.方法 CCK-8法检测DAC对HL-60细胞增殖活性的影响,Annexin-V/PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞术检测HL-60细胞表面NKG2DL分子MICA/B、ULBP的表达,羧基荧光素双乙酸盐(CFSE)法检测NK细胞的杀伤活性,蛋白印迹法分析细胞内JAK-STAT3通路中STAT3、STAT3上游激酶JAK1、JAK2及STAT3活性负调控因子细胞因子信号抑制物(SOCS)-1、SOCS-3的蛋白表达水平,甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)检测DAC处理后SOCS-1、SOCS-3基因甲基化程度.结果 DAC可抑制HL-60细胞活性:0.2、0.5和1.0 μmol/L DAC处理48 h,HL-60细胞活性较对照组分别下降(25±11)%、(39±8)%和(50±7)%(P<0.01);48 h时,细胞凋亡发生率分别为(24.77±7.50)%、(27.10±4.48)%和(30.53±3.93)%,均较对照组细胞的(3.11±0.50)%增加(P<0.01).DAC可诱导HL-60细胞表面MICA/B、ULBP-1及ULBP-3分子的表达增高,增强HL-60细胞对NK细胞的杀伤敏感性.DAC处理后HL-60细胞内STAT3、JAK1、JAK2及p-STAT3、p-JAK1、p-JAK2表达下降,SOCS-1和SOCS-3蛋白表达增高.DAC可抑制SOCS-3基因甲基化.结论 DAC抑制人急性髓系白血病细胞株HL-60增殖,上调HL-60细胞对NKG2DL的表达,增强NK细胞对其的杀伤活性,其机制可能与细胞内JAK-STAT3-SOCS信号通路的活性调控有关.     

三氧化二砷和曲古抑菌素A协同诱导HL-60细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)和曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60凋亡过程中的协同作用.方法 采用MTT法检测As2O3和(或)TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达.结果 As2O3和TSA联用较单独用药能明显抑制细胞,引起细胞周期阻滞和凋亡,Bax基因表达升高,Bcl-2基因表达降低,Bax/Bcl-2比值升高.结论 As2O3和TSA均能够引起HL-60凋亡,二者具有协同效应,其机制是引起细胞周期阻滞,且上调Bax与Bcl-2比值.