分枝杆菌药物敏感试验快速荧光检测法的研究

目的 建立一种Mycobacterium(分枝杆菌)药敏试验的快速荧光检测法。方法 用自己研制的荧光检测管检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EB)、丁胺卡那霉素(AMK)、左旋氧氟沙星(LVFX)对分枝杆菌的体外抑菌活性,并用41例临床菌株与改良罗氏法进行了配对比较,确定各药物在药敏试验中的应用浓度：结果 5种药物的应用浓度分别确定为INH：0．1μg/ml、RFP;1μg/ml、EB：2μg/ml、AMK：2μg/ml、LVFX：2μg/ml;本法进行分枝杆菌的药敏试验仅需7—10d,较改良罗氏法的28d缩短了18—21d。2种方法的药敏试验结果无显著性差异。结论 本法经济实用并缩短了分枝杆菌药敏的报告时间。     

荧光定量PCR/熔解曲线分析法快速鉴定葡萄球菌菌种

目的：建立一种基于葡萄球菌16～23s rRNA间隔区序列特征的荧光定量PCR／熔解曲线分析鉴定方法，以快速鉴定葡萄球菌菌种。方法：在葡萄球菌16s rRNA 3′端和23s rRNA5′端分别设计上、下游引物．用荧光定量PCR方法扩增各个实验菌株的16～23s rRNA间隔区序列。然后分析各扩增产物的熔解曲线．以确定各个菌种熔解曲线特征，并以此为依据对15株葡萄球菌临床分离株进行鉴定。结果：设计的引物对成功地扩增了葡萄球菌所有实验菌株，对扩增产物的熔解曲线分析可初步鉴定金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌。以VITEK2鉴定结果为标准，荧光定量PCR／熔解曲线分析法鉴定菌种的准确率为67％（10／15）．整个实验可在1h内完成。结论：荧光定量PCR／熔解曲线分析法有望成为临床实验室快速鉴定葡萄球菌菌种的新方法。[著者文摘]     

谷胱甘肽的快速荧光检测法

目的建立一种灵敏、特异、稳定、快速的谷胱甘肽（ＧＳＨ）检测方法。方法用二硫苏糖醇还原,邻苯二醛柱前衍生,用长（１５０ｍｍ ）或短（３０ ｍｍ）反相Ｃ１８柱色谱分离,再用荧光检测器测定血浆ＧＳＨ。结果用 Ｃ１８反相长柱和Ｃ１８反相短柱进行ＧＳＨ色谱分析结果基本一致,两组标准曲线的相关系数为 ０．９９８４。用短柱分析的时间为长柱的 １／７,灵敏度为＜ ２μｇ／Ｌ,在 ２～２００ｍｇ／Ｌ范围内,日内变异系数和日间变异系数均小于 １０％。正常人血浆ＧＳＨ水平为 １１．１６±４．２２ ｍｇ／Ｌ。结论用 Ｃ１８反相短柱进行ＧＳＨ色谱分析,用荧光分光光度计定量是一种灵敏、特异、快速并易于临床开展的检测方法,可用于血浆或器官组织ＧＳＨ水平的研究。     

快速敏感的血清脂蛋白电泳法

国内对血清脂蛋白电泳多采用的是琼脂糖凝胶电泳法。有少数实验室用乙酸纤维素膜电泳法,分离和显色效果均不是很满意。因此,不少     

快速敏感的尿液白蛋白免疫吸附测定法

目前,人们渴求有较试纸法更灵敏的尿液白蛋白分析方法。常规应用的免疫扩散法在测定<6mg/L 的尿液白蛋白时,不够敏感。为克服上述不足及避免产生人白蛋白与牛血清白蛋白的交叉反应,作者采用Kramer 所介绍的办法,在洗液及稀释液中加入酪蛋白,以改善试验的敏感性。试剂:纯化人血清白蛋白及蛋白标准血清,酪蛋白、邻苯二胺、吐温20,兔抗人白蛋白免疫球蛋     

超灵敏的甲胎蛋白时间分辨荧光分析法

作者对时间分辨荧光免疫系统所应用的标记试剂作了改进,使该系统的灵敏度明显提高。在双抗体夹心结构上,以甲胎蛋白(α-FP)作试样,以单克隆“俘获”抗体和单克隆(或多克隆)生物素化抗体为双抗体,用铕螯合剂4,7-二(氯磺苯基)—     

丙型肝炎病毒抗体的时间分辨荧光分析法检测

解离 增强时间分辨荧光免疫分析法 (ＤＥＬＦＩＡ)以具有双功能基团的镧系元素螯合物铕标二抗 (羊抗人ＩｇＧ)为示踪物[1] ,采用固相夹心法 ,在免疫反应完成后加入特殊的增强液 ,将铕从标记抗体上解离下来 ,并与增强液中的组分形成新的具有强烈荧光的螯合物 ,荧光强度与被测标本的浓度成正比。我们采用ＤＥＬＦＩＡ对丙型肝炎抗体进行定量分析 ,以酶联免疫法对照 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　苏州大学附属第二医院 ,江苏省肿瘤医院 ,南京钟阜医院抗 ＨＣＶ阳性标本 ,静脉采血分离血清 - 2 0℃保存。1 2　试剂　由美生公司提…     

抗HBc时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的　用竞争法建立抗HBc时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)方法。方法　以基因重组HBcAg包被板 ,Eu3 -异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 (Eu3 DTTA)标记抗HBc IgG单克隆抗体 ,建立抗HBcTRFIA方法。数据采用Log Logit函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。结果　方法的批内和批间变异系数分别为 2 30 %和 6 30 % ,回收率为 96 72 % ,灵敏度为 0 2NCU/ml。本方法与抗HBs和抗HBe无交叉反应 ,Eu3 标记物稳定 6个月以上。结论　TRFIA是一种新的抗HBc免疫检测技术 ,具有灵敏度高和稳定性好等优点 ,能够用于定量测定抗HBc IgG     

时间分辨荧光免疫分析法及其临床应用

时间分辨荧光免疫分析法(Time-ResolvedFluoroimmunoassay,TR-HA)同荧光免疫分析法(FIA)的不同之处在于标记物不是荧光素,而是采用稀土元素铕(Eu)标记抗原或抗体。基于Eu~(3+)独特的光谱学性质,配合荧光检测仪的时间门电路的使用,从而解决了FIA 的自然本底荧光干挠问题,大大提高了免疫分析的灵敏度(10~(-17)mol/L),接近或略高于RIA 法,且没有放射性危害和放射性废物。该技术具有测量范围宽、特异性强、标记物稳定及货架寿命长、检测速度快、操作较简便等优点。因此,自八十年代初期崛起后,迅速得     

荧光原位杂交快速产前诊断唐氏综合征

唐氏综合征是一种最常见的常染色体三体征。它是由于第21号染色体比正常人多了一条所引发的,故又称“21三体综合征”,也称作先天愚型。唐氏儿生长迟缓,神经系统发育障碍,且容易并发心脏病、白血病,患儿早期死亡率较其他异常,生活不能自理。此病在新生儿中的发生率为1／600—1／800,孕妇年龄越大,怀唐氏胎儿的风险性就越高。     

结核分枝杆菌快速培养荧光检测法

目的　为寻找一种快速培养结核分枝杆菌的方法。方法　用荧光检测管检查各种不同稀释度的结核分枝杆菌H37Rv菌株 ,每天在荧光检测仪上检测红色荧光强度 ,记录出现阳性结果的日期 ,并与改良罗氏培养进行配对比较。结果　荧光检测管的检出时间 ,在各种不同菌量管 ,均明显早于改良罗氏培养管 ,平均检出时间是 9 6± 6 2天。临床痰标本 10 0例 ,荧光检测法比改良罗氏培养基法平均提早报告 2 1天。结论　本室研制的荧光检测管能快速检出结核分枝杆菌并适用于基层医院     

沙门氏菌快速诊断新的荧光方法

Pontello，M．等在第五届国际快诊方法会议上报导利用Mucap（4，methylumbelliferyl－caprylate）荧光试验检测沙门氏菌中的辛脂酶进行快速诊断获得成功。后来多人相继进行验证和试验，取得了一致的效果。胃肠道感染在许多国家仍然是主要的公共卫生和经济阿题。沙门氏菌及是细菌性腹泻病和食物中毒最常见的病原菌。在肠道致病菌鉴定的研究中[9]，鉴定可疑的沙门氏嘈的标准实验室方法至少需要48h，通常以粪便培养方法检出低而繁琐。为缩短时间快速检测，减少麻烦降低费用诊断沙门氏菌，利用新的荧光试剂Mucap快速鉴定在固体培养基上分离的…     

抗菌药物敏感性试验快速检测新技术

抗菌药物敏感性试验(AST)是一种体外定性或定量测定抗菌药物抑制或杀灭细菌能力的实验。随着耐药病原体的增多和耐药机制的变异,传统药敏试验逐渐无法满足临床快速诊治的需求,因此基于待测病原体表型、基因型及其他耐药机制的药敏快检技术正在不断发展。本文论述了AST快速检测技术的发展现状及存在的问题,所有新技术对临床诊治指南的指导意义均应进行多方面评估和规范化。     

酶联荧光分析法测定肌钙蛋白I的临床应用

目的 探讨酶联荧光分析(ELFA)法测定肌钙蛋白I(cTnI)的临床应用。方法 分别采用ELFA法和化学发光免疫分析(CLIA)法测定血清样品中cTnI的浓度,对ELFA法进行精密度试验、线性试验、回收试验和干扰试验;并对ELFA法与CLIA法测定cTnI的结果进行相关性分析。结果 ELFA法测定cTnI浓度,高值(30.00μg/L cTnI)和低值(0.12μg/L cTnI)的批内变异系数(CV)分别为2.81%和1.62%,批间CV分别为5.67%和3.52%。ELFA法检测cTnI的可信检测范围为0.00~30.00μg/L。当总胆红素浓度小于450μmol/L,血红蛋白浓度小于1.5g/L,三酰甘油浓度小于7.0mmol/L时,ELFA法测定cTnI无干扰。ELFA法与CLIA法测定cTnI浓度具有良好的相关性(r=0.971)。结论 ELFA法具有较好的精密度、回收率和线性范围,与CLIA法具有较好的相关性,且检测快速简便,适用于急诊检验,能满足临床要求。     

荧光分析法动态观察丙氨酸氨基转移酶活性的研究

NADH2具有散发荧光特性,反应中NADH2量的变化可以用荧光分析法来监测.利用丙氨酸氨基转移酶(ALT)酶偶联反应发生NADH2量的变化这一原理建立荧光分析法动态监测ALT活性.结果表明ALT荧光分析法严格控制实验测定条件,其准确度、精密度、灵敏度高,特异性好,试剂、样品耗量少.并对荧光分析法动态观察ALT活性的测定条件、活性计算、方法学评价作较详细的研究.     

时间分辨荧光免疫分析法测定HBsAg的方法学评价

<正>时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)具有灵敏度高、重复性好、标准曲线动态范围宽、标志物存储时间长等优点,已广泛用于临床,特别是近年来,作为检测乙型肝炎标志物的方法之一已逐步受到人们的重视。关于TRFIA的方法学评价较全面的报道并未见到,本文以检测HBsAg为例,对TRFIA方法学评价作了以下探讨。     

测定人肌红蛋白的快速而敏感的放射免疫法

肌红蛋白是骨髂肌和心肌的一个主要成分。在挤压伤、心肌梗塞、烧伤等情况下,血液和尿中的肌红蛋白含量增高。用敏感的放射免疫法测定血液或尿中的肌红蛋白,对诊断心肌梗塞很有价值。但以往文献报导的放射免疫测定所需的时间长达5～24小时,不如诊断心肌梗死的酶谱分析那样快速。作者用~(125)I标记的酯,即N-琥珀酰亚胺基-3-(4-羟基,5-〔~(125)I〕碘苯基)丙酸酯,来标记纯化的肌红蛋白,所得标记物的专一性活性比用改良氯胺T法提高约二倍。使用普通的商品抗肌红蛋白血清,并用分子量6000的聚乙二醇沉淀抗原抗体复合物,在1小时之内就可以完成整个测定。测定方法将100微升样品、对照或标准液分别与等体积的抗肌红蛋白血清稀释液以及200微升