胃癌癌旁组织中幽门螺杆菌感染及基因改变

应用ＰＣＲ、ＰＣＲ／ＲＦＬＰ对胃癌及癌旁组织中Ｈｐ感染进行了检测，并应用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＤＮＡ测序探讨了Ｈｐ感染与ｒａｓ基因、ｐ５３基因变化的关系。研究结果发现：２４例胃癌组织Ｈｐ阳性１２例（１２／２４，５０％），２４例癌旁组织Ｈｐ阳性１１例（１１／２４，４８．５％），两者无显著差异，胃癌组基因改变者１７例（１７／２４，７０．８３％），其中Ｈｐ阳性１２例（１２／１７，７０．５９％），７例无基因改变者未发现Ｈｐ感染。癌旁组基因改变者１例，其中Ｈｐ为阴性。２４对胃癌ｐ５３Ｅｘｏｎ４的杂合缺失率为４７．３７％（９／１９）。ｐ５３Ｅｘｏｎ５、６、７、８突变在癌组织中有１１例（１１／２４；４５．８％），癌旁组仅一例，发生Ｈ－ｒａｓ１２位点突变者７例（７／２４，２９．１７％），癌旁组则无突变。胃癌基因改变与Ｈｐ＋相关性比较发现，Ｈｐ感染与基因改变关系密切（Ｐ＜０．０１）。各种基因改变中以ｐ５３改变似与Ｈｐ感染关系更紧密（ｒ＝０．５Ｐ＜０．０５）。结果表明，ｒａｓ基因及ｐ５３基因的协同作用在胃癌的致病机理中显示出重要作用。在癌变过程中，可能Ｈｐ的感染是基因改变进而促进组织恶变的促动因素之一。     

p53基因突变及p53、APC基因缺失与胃癌关系的研究

为明确ｐ５３基因突变、缺失，ＡＰＣ基因缺失在胃癌发病机制中的作用，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对抑癌基因ｐ５３第４、５、６、７、８外显子、第６内含子在８７例胃癌及癌前病变中的突变规律以及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对ｐ５３基因第４外显子、第６内含子、ＡＰＣ基因在２５对胃癌及癌旁组织中的杂合缺失规律进行了探讨。结果发现，ｐ５３突变率在肠化、不典型增生、胃癌分别为３７．５％ （３／８），４２．１％（８／１９），５３．３％（１６／３０）。正常组织、浅表胃炎未发现ｐ５３突变。肠化、不典型增生、胃癌与正常对照组、浅表胃炎组相比均存在显著差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。在肠化、不典型增生病变中未发现Ｅｘｏｎ８的突变，而在胃癌组Ｅｘｏｎ８的突变为４例（４／３０），提示Ｅｘｏｎ８的突变主要发生在晚期。在各病变组未发现Ｅｘｏｎ４、Ｉｎｔｒｏｎ６的突变。对Ｅｘｏｎ４、Ｉｎｔｒｏｎ６、ＡＰＣ基因的杂合缺失研究表明，２５对胃癌标本中有１９对Ｅｘｏｎ４杂合子，杂合率为７６．０％，９对有杂合缺失，ＬＯＨ为４７．４％，２３对Ｉｎｔｒｏｎ６杂合子，杂合率为９２．０％，其中２对为杂合缺失，ＬＯＨ为８．７％，１８对ＡＰＣ杂合子（１８／２５     

原发肝细胞癌N—ras基因突变,APC和DCC基因杂合缺失研究

目的 了解Ｎ－ｒａｓ基因突变。ＡＰＣ和ＤＣＣ基因杂合性缺失在原发性肝癌发生发展中的作用，方法 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态观察（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析技术，对３０例外科手术切除原发肝细胞癌组织中癌基因Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子突变，抑癌基因ＡＰＣ和ＤＣＣ杂合缺失（ＬＯＨ）进行研究。结果 原发肝癌中Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子的突变率为１６．７％（５／３０），ＡＰＣ和ＤＣＣ基因ＬＯＨ率分别为３６．     

老年吸烟者肺癌H-ras基因突变的研究

目的探讨老年吸烟者肺癌Ｈｒａｓ基因变化的意义。方法对３３例吸烟肺癌和２２例不吸烟肺癌患者采用纤维支气管镜毛刷刷取支气管脱落细胞,应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法进行Ｈｒａｓ基因突变检测。结果肺癌中Ｈｒａｓ基因总突变率为５２７％（２９／５５）,其中吸烟组肺癌Ｈｒａｓ基因突变率为６６７％,不吸烟组肺癌为３１８％,二者差异有显著性（Ｐ＜００５）,吸烟组肺鳞癌患者Ｈｒａｓ基因突变率为７００％,明显高于不吸烟组肺鳞癌患者的１６７％（Ｐ＜００５）。结论提示Ｈｒａｓ基因可能是被烟草激活的一个特殊位点,吸烟是导致Ｈｒａｓ基因突变的重要因素。     

大肠癌组织APC/MCC基因杂合的缺失

目的研究大肠癌ＡＰＣ／ＭＣＣ基因杂合缺失的作用。方法采用ＰＣＲ技术，并配合限制性片段长度多态现象（ＲＦＬＰ）分析，对４１例外科手术切除大肠癌组织ＡＰＣ／ＭＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）进行检测。结果在大肠癌４１例中ＡＰＣ基因属信息个体者２５例，检出ＬＯＨ７例，占２８．０％；ＭＣＣ基因属信息个体者２２例，检出ＬＯＨ８例，占３６．４％。若将ＡＰＣ和ＭＣＣ基因进行综合分析，则信息个体者３６例，检出ＬＯＨ１４例，占３８．９％。ＡＰＣ和ＭＣＣ基因的ＬＯＨ与肿瘤大小、组织学类型、浆膜浸润、淋巴结转移及Ｄｕｋｅｓ分期无关（Ｐ＞０．０５）。结论ＡＰＣ和ＭＣＣ基因ＬＯＨ是大肠癌的常见改变     

PCR检测原发肝癌YNZ22位点VNTR的杂合性丢失

目的探讨ＹＮＺ２２位点串联重复序列（ＶＮＴＲ）的杂合性丢失在原发肝癌发生发展中的作用．方法应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增３５例原发肝癌和正常肝组织ＹＮＺ２２位点的ＶＮＴＲ区，对原发肝癌的杂合缺失进行分析．结果原发肝癌３５例，属信息个体２５例，占７１４％．信息个体中２５例检出ＹＮＺ２２位点杂合缺失（ＬＯＨ）１２例，杂合缺失率为４８０％．分析ＬＯＨ与临床病理参数间的关系发现，原发肝癌ＹＮＺ２２位点杂合缺失与血清ＨＢｓＡｇ和ＡＦＰ水平、组织学分级、肿瘤大小及远处转移无关．结论ＹＮＺ２２位点杂合缺失是原发肝癌的常见改变，可能参与了原发肝癌的发生与发展．     

p53基因突变及p53,APC基因缺失与胃癌关系的研究

为明确ｐ５３基因突变，缺失，ＡＰＣ基因缺失在胃癌发病机制中的作用，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对抑癌基因ｐ５３第４，５，６，７，８外显子，第６内含子在８７例胃癌及癌前病变中的突变规律以及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对ｐ５３基因第４外显子，第６内含子，ＡＰＣ基因在２５对胃癌及癌旁组织的杂合缺失规律进行了探讨，结果发同，ｐ５３突变率在肠化，不典型增生，胃癌分别为３７．５％（３／８），４２．１％（８／１９），５３．     

胃癌组织5q微卫星不稳定性与APC/MCC基因杂合性缺失的研究

目的探讨５ｑ微卫星不稳定性（ＭＳＩ）与ＡＰＣ／ＭＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）的关系。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＬＰ及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术分析５２例手术切除胃癌组织中ＭＳＩ及ＡＰＣ／ＭＭＣ基因ＬＯＨ。结果５ｑＭＳＩ检出率为３４．０％（１６／４７）,ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ率为３１．４％（１１／３５）。早期胃癌５ｑＭＳＩ阳性率为６６．７％（２／３）,ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ率为５０％（１／２）;进展期分别为３１．８（１４／４４）,３０．３％（１０／３３）。两组间无显著差别（Ｐ＞０．０５）。ＭＳＩ及杂合缺失与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及临床分期无关。粘液（印戒）细胞癌ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ率（５５．６％）显著高于高、中分化管状腺癌（Ｐ＜０．０５）。胃、肠两型胃癌５ｑＭＳＩ及ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ差异无显著性及５ｑＭＳＩ与ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ无相关性（Ｐ＞０．０５）。结论染色体５ｑＭＳＩ有ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ在两型胃癌的早期发生及发展中起一定作用。染色体５ｑ可能是胃癌的易感部位。     

肺癌中P53基因突变分析及人乳头瘤病毒检测

拟从分子生物学水平探讨肺癌的早期诊断问题。实验采用ｐ５３基因中第６，７，８外显子各设计一对引物，对３４例肺癌手术标本进行聚合酶链反应扩增（ＰＣＲ），产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行单链构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄ－ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｏｒ－ｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ），发现３０例发生突变，突变率为８８．２％，其中鳞癌１０／１２例，腺癌８／１０例，小细胞癌３／３例，大细胞癌１／１例，肺泡细胞癌５／５例，腺鳞癌３／３例。在突变的１例鳞癌中同时伴有杂合性缺失。统计学分析表明，ｐ５３突变与组织分型、分化程度、临床分期及吸烟史无密切相关。提示ｐ５３突变在肺癌发生过程中起某种作用，可能主要影响肺癌发生的早期。本实验还运用多重引物ＰＣＲ方法对３４例肺癌标本进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶＤＮＡ）检测，发现４例阳性，且皆为鳞癌；而其中３例检测出ｐ５３突变。     

肺癌K－ras基因突变的检测及临床应用

为探讨基因检测在肺癌中的应用价值，应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测１０２例肺癌患者手术标本中Ｋ－ｒａｓ基因第１２密码子突变的状况。并将肺腺癌按临床病理特征分组进行对比分析。结果显示，肺癌中总突变率为２４％，腺癌中为４９％，鳞癌为１５％，而小细胞癌中无一例突变。吸烟是促发Ｋ－ｒａｓ基因突变的重要因素（Ｐ＜０．０５），肺腺癌突变组淋巴结转移早、部位远，其一年复发率达８５％，明显高于未突变组（Ｐ＜０．０１）。Ｋ－ｒａｓ基因突变的检测具有重要的临床意义和应用价值。     

血清HBsAg阳性患者肝癌及癌旁组织中P^53和K—ras基因突变及其相…

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对２４例血清ＨＢｓＡｇ患者肝癌及癌旁组织中Ｐ＾５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变进行了检测。肝癌组织中Ｐ＾５３基因突变率为３３％，Ｋ－ｒａｓ基因突变率为２５％，癌旁正常组织中无Ｐ＾５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变，癌旁硬化组织中Ｋ－ｒａｓ突变为１５％，无Ｐ＾５３基因突变。     

应用多种方法检测胃癌演变过程中ras基因的突变

为了解胃癌演变过程中相关基因ｒａｓ的变化，应用聚合酶链反应（ＲＣＲ）－限制性片段长度多肽性分析法（ＲＦＬＰ），单链构象多肽性分析法，ＰＣＲ－ＤＮＡ测序的方法对中国人胃癌及癌前病变中的ｒａｓ基因家族变化规律进行了探讨。结果发现：Ｈ－ｒａｓ１２位点的突变率在肠化、不典型增生、进展期胃癌分别为１６．７％（６／３６），３１．２％（１５／４８），３４．７％（２５／７２）。在正常对照组、浅表性胃炎组均未发现Ｈ     

肺癌K—ras基因突变的检测及临床应用

为探讨基因检测在肺癌中的应用价值，应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测１０２例肺癌患者手术标本中Ｋ－ｒａｓ基因第１２密码子突变的状况。并将肺腺癌按临床病理特征分组进行对比分析。结果显示，肺癌中总突变率为２４％，腺癌中为４９％，鳞癌为１５％，而小细胞癌中无一例突变。吸烟是促发Ｋ－ｒａｓ基因突变的重要因素（Ｐ〈０．０５），肺腺癌突变组淋巴结转移早、部位远，其一年复发率达８５％，明显高于未突变组（Ｐ〈０．０１）。     

急性髓系白血病H—ras表达和点突变—流式细胞术和聚合酶链反 …

目的：了解髓系白血病细胞Ｈ－ｒａｓ Ｐ＾２１表达与点突变的相关性，以及免疫组化法的临床实用价值。方法：用流式细胞术（ＦＣＭ）分析６７例初治急性髓系白血病（ＡＭＬ）Ｈ－ｒａｓ Ｐ＾２１表达；对所有Ｐ＾２１阳性和部分Ｐ＾２１阴性者作聚合酶链反应（ＰＣＲ），观察Ｈ－ｒａｓ１５位密码子点突变。结果：６７例ＡＭＬ ＦＣＭ Ｐ＾２１阳性者４５例（６７．２％），Ｐ＾２１阴性者２２例（３２．８％）。Ｐ＾２１阳性４     

大肠癌组织APC／MCC和DCC基因杂合缺失的研究

为评估ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因在大肠癌发生和发展中的作用，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，并配合限制性片段长度多态现象（ＲＦＬＰ）分析，对４１例大肠癌患者的组织ＡＰＣ／ＭＣＣ（位于染色体５ｑ２１）和ＤＣＣ基因（位于染色体１８ｑ２１．３）杂合缺失（ＬＯＨ）进行研究。ＡＰＣ基因ＬＯＨ率为２８．０％（７／２５），ＭＣＣ基因ＬＯＨ率为３６．４％（８／２２），两者综合分析ＬＯＨ率为３８．９％（１４／３８）。ＤＣＣ基因ＬＯＨ率为５５．３％（２１／３８）。ＤＣＣ基因在有淋巴结转移组的ＬＯＨ率（８０．０％）显著高于无淋巴结转移组（３９．１％）（Ｐ＜０．０５），在ＤｕｋｅｓＣ、Ｄ期组的ＬＯＨ率（７１．４％）显著高于Ａ、Ｂ期组（３５．３％）。以上结果提示，ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因的ＬＯＨ是大肠癌常见的基因改变，ＤＣＣ基因ＬＯＨ的测定有可能成为大肠癌病人预后估计的指标。     

非小细胞肺癌生物学特性检测的临床意义

目的研究１３７例各期手术治疗的非小细胞肺癌的生物学特性和期别、类型和生存率的关系。方法采用电镜、免疫组化、流式细胞仪等方法，以前瞻随机对照法进行，生存率以Ｋ－Ｐ曲线计数，用Ｃｏｘ单因素、多因素来分析。结果（１）光镜下为鳞癌及腺癌者经电镜显示各有４０％为鳞、腺混合型癌。（２）Ｐ５３基因表达率随期别晚而增高，阳性表达组术后生存率低。（３）Ｃｏｘ多因素分析显示在Ⅱ期和混合型中Ｈ－ｒａｓ基因表达阳性者和术后生存率相关，值得深入研究。（４）细胞分裂指数、细胞增殖指数异常者，术后生存率明显降低。（５）其它：ｃ－ｅｒｂＢ２和ＰＣＮＡ基因表达分别和腺癌及电镜证实的混合型癌相关。结论ｐ５３、Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２基因和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、ＰＩ、ＤＩ分别和期别、类型和生存率相关     

原发性肝癌转移与ras p53基因及其蛋白表达的关系

目的了解ｒａｓ，ｐ５３基因及其蛋白表达与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）转移的关系．方法应用免疫组化、狭缝杂交分别对１４例ＨＣＣ有转移者和１６例无转移者癌组织中ｒａｓ，ｐ５３基因蛋白和ＲＮＡ表达进行了研究．结果经微波修复抗原后，在１４例有转移ＨＣＣ组织中，Ｐ２１和Ｐ５３蛋白的阳性例数分别为１１例和１２例，在１６例无转移ＨＣＣ组织中，其阳性例数分别为５例和７例，两组间具有极显著性差异（Ｐ值分别为００１４和００２６）．ＨＣＣ有转移组ＮｒａｓＲＮＡ为无转移组的３～５倍，而两组间Ｐ５３ＲＮＡ量则几乎相等．结论经微波修复抗原后，Ｐ２１和Ｐ５３蛋白的免疫组化染色可作为衡量ＨＣＣ转移潜能的指标．     

肝细胞癌抑癌基因p53异常的研究

目的：分析我国重庆地区肝细胞癌ｐ５３基因失活机制及突变谱，方法：采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ直接测序技术对来自我国重庆地区２８例肝细胞ｐ５３抑癌基因结构异常进行了分析。结果，６１．５％的肝癌存在的ｐ５３基因的杂合缺失；５０％肝癌伴有ｐ５３基因突变，其突变模式为突变散在于５，６，７和８外显子，其中第７外显子２４９位密码子突变率最高（２１％）；具有突变的肝癌多同时伴有缺失，伴有ｐ５３     

原发肝癌N-ras基因点突变研究

目的研究Ｎｒａｓ基因第１２位密码子突变与原发性肝癌（ＨＣＣ）发生发展的关系．方法采用聚合酶链延伸反应限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对３０例ＨＣＣ手术切除标本Ｎｒａｓ第１２密码子点突变进行检测．结果在３０例ＨＣＣ中，发现Ｎｒａｓ第１２密码子点突变５例，突变率为１６７％．点突变与肿瘤大小、分化程度、有无转移及ＨＢＶ感染无显著相关（Ｐ＜００５）．结论Ｎ－ｒａｓ基因第１２位密码子突变参与了部分ＨＣＣ的发生与发展．     

ras癌基因第12密码子点突变和胃癌患者预后关系的研究

对福尔马林固定，石蜡包埋的胃癌组织使用移聚酶链式反应－限制性片段长度多态性（简称ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术同时进行ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位和６１位，Ｎ－ｒａｓ基因第１２位，ｋ－ｒａｓ第１２位和１３位密码子点突变的研究，发现３３．３％（１４／４２），的胃癌有ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变；４．８％（２／４２）的病例有ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变，点突变的发生与患者的预后，淋巴结转