顺铂联合原花青素对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用

目的探讨顺铂联合葡萄籽原花青素对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用。方法 2015年10月—2016年1月体外培养宫颈癌Hela细胞,分为对照组、顺铂组、原花青素组及顺铂联合原花青素组,48、72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,CCK8法检测细胞增殖抑制率。三组及以上计量资料比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法;计数资料比较采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果顺铂及原花青素对Hela细胞的增殖抑制呈现剂量和时间相关性,随着药物浓度的升高和作用时间的延长,Hela细胞的增殖抑制率升高。联合用药组9、18、37μmol/ml的顺铂联合340μmol/ml的原花青素分别作用48 h后Hela细胞的增殖抑制率分别为75.7%、76.1%、76.2%,72 h后Hela细胞的增殖抑制率分别为77.0%、78.0%、78.9%。两者联合用药组细胞增殖抑制率高于单独用药组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论不同浓度顺铂、原花青素对Hela细胞增殖均有抑制作用,原花青素对Hela抑制作用显著,顺铂联合原花青素对宫颈癌细胞Hela有协同抑制作用。     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其对细胞周期影响的研究

目的:观察顺铂对人宫颈癌Hela细胞凋亡及细胞周期的影响,以揭示顺铂治疗宫颈癌的机理。方法:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的人Hela细胞72 h,用流式细胞仪分析其凋亡率及细胞周期。结果:顺铂能以浓度依赖的方式诱导Hela细胞凋亡,并呈现出G0/G1期阻滞作用。结论:顺铂能诱导Hela细胞凋亡并改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期,这可能是顺铂抗宫颈癌作用的重要机制之一。     

盐酸小檗碱及其联合应用顺铂诱导宫颈癌细胞株凋亡研究

目的:研究不同浓度盐酸小檗碱(Ber)单用及联合应用顺铂(DDP)对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,并探讨其抗癌机制。方法:将不同浓度的盐酸Ber、DDP分别或联合作用于宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测细胞体外增殖的抑制作用;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率;免疫组化SABC法检测Hela细胞中NF-κBp65的表达。结果:MTT比色法表明盐酸Ber能抑制宫颈癌Hela细胞的体外增殖,并具有剂量、时间的依赖性(P<0.05);TUNEL法可检测到凋亡细胞,其凋亡率显示盐酸Ber诱导宫颈癌Hela细胞凋亡表现出剂量和时间的依赖性(P<0.05);免疫组化SABC法结果显示,盐酸Ber能引起细胞内NF-κBp65表达下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);盐酸Ber与DDP联合用药表现出明显的协同作用,且高剂量的盐酸Ber可增加DDP的疗效。结论:盐酸Ber对宫颈癌Hela细胞体外增殖具有明显的抑制作用,且能增强DDP对宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并增加其诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡,其作用机制可能与降低NF-κBp65的表达有关。     

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。     

顺铂对人宫颈癌SiHa细胞中TSLC1基因表达的影响

目的:探讨顺铂(DDP)作用于人宫颈癌SiHa细胞时肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因的表达情况。方法:噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度(5、10、15、20、25μg/ml)DDP干预SiHa细胞后的抑制率;采用实时荧光定量(RT-PCR)技术检测不同浓度的DDP处理前、后TSLC1基因mRNA表达水平的变化。结果:DDP呈剂量-时间依赖方式抑制SiHa细胞的生长(P<0.01);且随着DDP浓度的增高,TSLC1 mRNA表达上调(P<0.05)。结论:DDP抑制人宫颈癌SiHa细胞生长的机制可能与上调TSLC1基因mRNA的表达有关。     

苦参碱联合顺铂对 SiHa细胞 TSLC1基因表达的影响

目的：探讨苦参碱联合顺铂抑制人宫颈癌SiHa细胞及对肺癌肿瘤抑制因子1（TSLC1）基因表达的效果。方法取对数生长期的SiHa分为对照组、苦参组、顺铂组和联合组,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（ MTT）测定4组联合干预SiHa细胞2d后的抑制率;采用实时荧光定量（ RT－PCR）技术检测各组处理后TSLC1基因mRNA表达水平的变化。结果对照组、顺铂组、苦参碱组和联合组的SiHa细胞抑制率分别为0、61．24％、70．31％和74．20％,药物干预组均高于对照组（ t 值分别为14．21、17．44、11．20,均P＜0．05）,同时联合组高于苦参碱和顺铂单独干预（t值分别为4．47、3．21,均P＜0．05）,而顺铂和苦参碱组间差异无统计学意义（t＝0．71,P＞0．05）。对照组、苦参碱组、顺铂组和联合组干预SiHa细胞后TSLC1mRNA表达量分别为1．00±0．00μg／mL,23．53±0．01μg／mL,84．33±0．03μg／mL和90．23±0．01μg／mL,苦参碱组、顺铂组和联合组干预组明显高于对照组（ z值分别为9．41、10．72、13．23,均P＜0．05）,其中苦参碱组和联合组TSLC1mRNA表达量组间比较差异无统计学意义（z＝1．24,P＞0．05）,但均高于顺铂组（z值分别为6．04、5．47,均P＜0．05）;析因设计方差分析结果表明顺铂和苦参碱均为SiHa细胞抑制率和TSLC1基因表达的影响因素,而且两者存在交互作用,联合应用使效果增加。结论苦参碱联合顺铂能抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖,提高TSLC1mRNA表达量。     

顺铂对ERCC1在293细胞中表达的影响

顺铂所致肾损害的主要部位是外髓外侧带的Ｓ3段近端肾小管。顺铂在近端肾小管上皮细胞内的浓度是血浆中的 5倍 ;在细胞内 ,胞浆、线粒体、细胞核、微粒体内均可见到高浓度的顺铂〔1〕。Ｐｏｉｒｉｅｒ等的研究表明 ,接受顺铂治疗的病人以及实验动物 ,在给予顺铂后 ,肿瘤组织、骨髓、肾脏、肝脏、脾脏、淋巴结、外周神经和脑内都有Ｐｔ-ＤＮＡ加合物的广泛形成〔2〕;Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ等发现Ｐｔ -ＤＮＡ加合物水平与顺铂肾毒性相关〔3〕。说明肾小管细胞内Ｐｔ-ＤＮＡ加合物的形成 ,在肾毒性中可能起重要作用。本研究通过在肾细胞中过表达…     

干扰Livin对HEC-1-A细胞化疗增敏作用的研究

目的 研究Livin在提高人子宫内膜癌HEC-1-A细胞对顺铂化疗敏感性方面的作用及可能机制。方法 将Livin的小分子干扰RNA(Livin-siRNA)转染HEC-1-A细胞,qRT-PCR及Western blot法检测转染siRNA后Livin mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测转染siRNA并暴露于顺铂后,细胞增殖能力的变化。Western blot法检测干扰Livin后,相关蛋白Caspase-3、Caspase-7 、Caspase-9、Smac的表达情况。结果 抑制Livin表达并暴露于顺铂后,细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),Caspase-3、Caspase-7 、Caspase-9、Smac蛋白的相对表达量显著增加(P<0.01)。结论 干扰Livin可显著抑制顺铂诱导下的HEC-1-A细胞的增殖能力,其化疗增敏作用是通过解除对Caspase的抑制和减少Smac降解两条途径来实现的。     

Livin靶向RNA干扰对人胃癌细胞SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Livin靶向RNA干扰对SGC7901细胞株生物学特性的影响,探索胃癌基因治疗的新途径。方法设计和构建Livin特异性的siRNA真核表达载体,转染SGC7901细胞,应用RT-PCR分析LivinmRNA的表达情况,采用MTT法检测细胞的生长状况,通过流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。结果构建真核表达载体p-siRNA1并转染SGC7901细胞后,RT-PCR结果显示2条Livin siRNA真核表达质粒均能有效抑制Livin mRNA的转录表达,干扰组细胞与未转染组细胞比较,生长受到明显抑制,凋亡率明显增加。结论成功构建了Livin干扰真核表达载体,siRNA重组体能有效抑制人胃癌细胞Livin mRNA表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。     

Smac联合顺铂对人肝癌细胞凋亡调控因子影响

目的研究第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(Smac)基因联合顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9和细胞色素c(Cyt c)蛋白表达的影响。方法利用脂质体介导的方法将Smac转染入SMMC-7721,G418筛选后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法检测筛选所得SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;顺铂处理后采用免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白的表达。结果SMMC-7721/Smac细胞中Smac mRNA和蛋白表达均明显增加,12～120 h A₄₉₀值为0.28～0.70,均明显低于同一时间点的SMMC-7721(0.31～1.10)(P<0.05);与SMMC-7721比较,SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3和Cyt c蛋白表达均增高,累积光密度值(IOD)分别从19 939/14 924增至28 347/21 017(P<0.05);顺铂作用下,SMMC-7721和SMMC-7721/Smac细胞中caspase-3、caspase-9和Cyt c蛋白表达均增加,且后者更明显;剂量为25μg/mL时,SMMC-7721/Smac的caspase-3、caspase-9的IOD分别从对照的28 347/22 412增至46 696/39 728(P<0.001)。结论Smac稳定过表达联合顺铂可明显增强细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9和Cyt c表达,从而促进细胞凋亡。     

多西他赛联合野生型p53对Hela细胞的抑制作用

目的 探讨多西他赛单用及与野生型p53基因联合应用对宫颈癌Hela细胞的抑制作用.方法 Hela细胞分两组培养,p53转染实验组(p53-Hela组)和空白对照组(Hela组),野生型p53基因表达用逆转录-多聚酶链反应鉴定.多西他赛作用于p53-Hela细胞及Hela细胞,24小时与48小时后形态学观察并使用活细胞计数试剂盒检测吸光度值OD450,计算细胞抑制率.结果 用逆转录-多聚酶链反应法检测到p53-Hela细胞的p53 mRNA表达,与对照组Hela细胞的p53 mRNA表达相比,差异有统计学意义(t=-17.504,P<0.01).多西他赛对p53-Hela及Hela细胞作用时,不同时间都有抑制作用(Fp53-Hela=53.500,P<0.01;FHela=430.225,P<0.01),该抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性.结论 多西他赛单独应用时可对宫颈癌Hela细胞产生抑制作用,与野生型p53基因联用时,其药物抑制作用增强.     

内质网应激途径在天花粉蛋白诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激在天花粉蛋白诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中的作用,进一步分析天花粉蛋白诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,并用RT-PCR及实时荧光定量PCR分析天花粉蛋白对内质网应激标志分子GRP78和CALPAIN基因表达的影响。结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,对照组Hela细胞体外生长活跃,实验组分别经20、40、80μg/ml TCS处理24、48、72 h后,细胞生长均不同程度地受到抑制,呈时间-浓度依赖性。流式细胞直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰(sub-G1 peak),随着天花粉蛋白浓度的增加,内质网应激分子GRP78和CALPAIN的表达逐渐增强。结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,内质网应激作为细胞凋亡的重要途径参与了天花粉蛋白诱导的HeLa细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。     

越橘提取物花色苷对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:研究越橘提取物花色苷对宫颈癌Hela细胞的影响作用。方法:以不同浓度的越橘提取物花色苷作用于宫颈癌Hela细胞48h,采用MTT法观察越橘花色苷对Hela细胞的生长抑制作用,荧光染色观察细胞形态学改变,以流式细胞术观察DNA含量和细胞凋亡的变化情况,同时检测细胞培养上清液中IL-10、IFN-γ、TNF-α的变化。结果:Hela细胞用10、20、30、40mg/ml的越橘提取物花色苷处理48h后,随越橘花色苷浓度加大,细胞抑制率显著升高;荧光染色可见,浓染致密的颗粒状荧光,并呈现凋亡核固缩形态;流式细胞仪检测,细胞周期改变明显;IFN-γ和IL-10高于对照组,但IFN-γ与对照组有显著差别(P0.05);各组之间TNF-α变化不明显(P0.05)。结论:越橘提取物花色苷在体外对宫颈癌Hela细胞的生长有明显地抑制作用,可能与其改变细胞DNA周期、促进调亡有关。     

甘草提取物(GL-1)对Hela细胞增殖抑制及促凋亡作用

目的 提取甘草抗肿瘤成份（GL-1）,探讨其对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法 通过水提法、丙酮萃取、甲醇分离提取得到甘草提取物GL-1,并通过液质连用技术分析其主要成分,通过MTT比色法观察GL-1对HeLa细胞增殖抑制作用;AO （吖啶橙）/EB （溴化乙锭）双荧光染色法检测HeLa凋亡情况;透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果 GL-1含有9种主要组成成份。GL-1对HeLa细胞的生长增殖有抑制作用,其作用于Hela细胞12、24、48 h的半数抑制浓度分别为51.90、22.30、16.10 μg/mL （P<0.05）;AO/EB染色观察到25、50 μg/mL剂量组HeLa细胞均有不同程度的凋亡作用;透射电镜观察可见典型细胞凋亡形态。结论 GL-1具有抑制HeLa细胞生长增殖作用,并可诱导HeLa细胞凋亡。     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

端粒酶催化亚基hTERT调控Hela细胞周期的实验研究

目的探讨hTERT基因与细胞周期因子之间的关系,从细胞周期调控的角度研究反义hTERT影响肿瘤细胞生长的机制。方法脂质体介导将hTERT反义寡核苷酸（hTERT-ASODN）转染到Hela细胞中,运用RT—PCR方法分析hTERT-ASODN对细胞周期相关基因表达水平的改变,流式细胞仪技术检测细胞周期分布的变化。结果hTERT—ASODN可在mRNA水平封闭Hela细胞中hTERT基因的表达,并使细胞周期相关基因如CyclinE1,CyclinB1,CyclinD1的表达水平出现明显变化。流式细胞仪的检测结果显示,hTERT-ASODN转染组的细胞数在G0／G1期增多,而在S期及G2／M期减少,但无特征性的凋亡峰出现。结论hTERT基因参与调控肿瘤细胞中相关细胞周期因子的表达。     

丙戊酸钠联合顺铂对HO-8910细胞增殖的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合顺铂(DDP)对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖抑制和凋亡作用及机制。方法:3 mM浓度的VPA、1μg/m l的DDP及VPA联合DDP分别处理人卵巢癌细胞株HO-8910不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR检测p53基因mRNA水平表达变化;W estern b lot法检测p53及Stat3蛋白表达变化。结果:VPA对卵巢癌HO-8910细胞株有生长抑制作用,且VPA联合DDP优于单独用药(P<0.05);Hochest 33258荧光染色结果显示,用药后细胞呈现明显的核碎裂、核固缩等典型凋亡改变,VPA联合DDP组细胞凋亡改变较单独用药组明显(P<0.05);RT-PCR检测显示VPA单独用药及联合DDP用药均能提高p53基因的mRNA表达水平;W estern b lot结果显示VPA联合DDP显著增强卵巢癌HO-8910细胞中p53蛋白表达,降低Stat3蛋白的表达,联合用药组效果更明显。结论:VPA单独用药在体外可有效杀伤卵巢癌HO-8910细胞株,与DDP联合应用具有明显的协同作用,推测其可能的作用机制是诱导p53表达水平上调及Stat3表达水平下调。     

RA对宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的研究RA对宫颈癌Hela细胞中Cx26和Cx43表达的影响,探讨RA对Hela细胞增殖的影响及其机制。方法培养Hela细胞,用计数法和MTT比色法观察并比较不同浓度RA对细胞增殖的影响情况,用免疫细胞化学方法检测Hela细胞中Cx26和Cx43蛋白的表达。结果①RA抑制Hela细胞增殖,抑制率与RA浓度相关。②Cx26和Cx43蛋白定位于Hela细胞的胞膜和胞质,RA组Cx26和Cx43蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05)。结论 RA可抑制Hela细胞增殖,其机制可能与Cx26和Cx43的表达上调有关。