IGF-Ⅱ、EGF对ICR小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的:研究胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、表皮生长因子(EGF)在含葡萄糖、胰岛素的CZB培养液中对ICR小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法:①在含有葡萄糖、胰岛素的CZB培养液中分别添加0,0.1,1,10,100μg/L的IGF-Ⅱ,体外培养观察其对ICR小鼠1-细胞胚胎的作用,并设单独CZB培养液对照组。②在含葡萄糖、胰岛素和0.1μg/L IGF-Ⅱ的CZB培养液中分别添加0,0.1,1,10,100μg/LEGF,体外培养观察其对ICR小鼠1-细胞胚胎的作用,并设单独CZB培养液对照组。比较各组囊胚率、孵化率和胚胎细胞数的变化。结果:①0μg/LIGF-Ⅱ组囊胚率、孵化率及囊胚细胞数高于对照组(P<0.05)。100μg/L IGF-Ⅱ组囊胚率、孵化率及囊胚细胞数低于0,0.1,1,10μg/L IGF-Ⅱ各组(P<0.05);0.1μg/LIGF-Ⅱ组囊胚细胞数最高(P<0.05)。②0μg/L EGF组囊胚率、孵化率及囊胚细胞数高于对照组(P<0.05)。0.1,1,10μg/L EGF各组囊胚率、孵化率高于0,100μg/L EGF组(P<0.01);0.1μg/L EGF组孵化率最高(P<0...     

黄芪多糖通过PI3K/Akt途径抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡的机制研究

目的探讨黄芪多糖对小鼠胰岛βTC-6细胞中PI3K/Akt信号通路和棕榈酸诱导的细胞凋亡的影响及其机制。方法Western blotting检测黄芪多糖对βTC-6细胞中Akt磷酸化的影响;将βTC-6细胞随机分为对照组(不做任何处理)、PA组(给予0.5 mmol/L棕榈酸处理24 h)、PA+APS组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸和0.1 g/L黄芪多糖作用24 h)和PA+APS+LY组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸、0.1 g/L黄芪多糖和50μmol/L LY294002作用24 h),MTT法检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果黄芪多糖能够呈剂量-时间依赖性诱导βTC-6细胞中Akt磷酸化。与对照组相比,PA组、PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05);与PA组相比,PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05);且PA+APS+LY组的变化幅度明显低于PA+APS组。结论黄芪多糖可通过激活PI3K/Akt信号通路,上调GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和下调Bax表达,进而抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡。[营养学报,2019,41(3):265-269]     

姜黄素对小鼠脑缺血再灌注的脑组织中NO含量和Bcl-2、Bax表达的影响

目的通过观察姜黄素对脑缺血再灌注小鼠脑组织中NO含量及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨姜黄素对缺血性脑损伤的神经保护作用及机制。方法 180只雄性健康昆明种小鼠,随机分为A(假手术组)、B(溶剂对照组)和C(姜黄素治疗组)。各组于缺血再灌注后分为3、6、24、48和72 h 5个亚组。采用线栓法建立小鼠局灶性脑缺血再灌注模型。各组于24 h后进行小鼠神经功能学评分:HE染色后于光学显微镜下观察组织学变化;用硝酸还原酶法测定脑组织中NO含量;应用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 24 h神经功能评分B组明显高于A组,C组与B组相比差,异有统计学意义(P0.05)。NO含量B组与A组相比,3、6、24 h差异有统计学意义(P0.05)。C组与B组比较,6、24 h差异有统计学意义(P0.05)。B组随时间延长脑组织中Bcl-2、Bax的表达增加,Bcl-2/Bax的比值下降;C组Bcl-2表达显著增加,降低了Bax的表达。结论姜黄素对脑缺血再灌注性脑损伤具有保护作用,其作用机制可能与降低NO含量及提高Bcl-2蛋白表达水平、抑制Bax蛋白表达减少细胞凋亡来减少脑缺血后迟发性神经元损伤有关。     

碘过量对胰岛β细胞功能的影响及机制

目的探索碘过量暴露对小鼠胰岛素瘤细胞系β-TC-6胰岛素分泌功能影响及机制。方法β-TC-6细胞在对数生长期暴露于0、0.01、0.1、1、10和100 mmol/L碘24 h,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率。细胞经0.01、1、和100 mmol/L碘干预24 h后,用5.6 mmol/L葡萄糖刺激细胞1 h,酶联免疫分析(ELISA)法检测上清胰岛素含量。蛋白印迹法(Western blot)检测GRP78、IRE1α、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,1~100 mmol/L碘处理组细胞存活率显著降低(P<0.05);1 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),100 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著下降(P<0.05),1和10 mmol/L组GRP78、IRE1α和Bax蛋白表达量显著增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。5.6 mmol/L葡萄糖+0 mmol/L碘组、5.6 mmol/L葡萄糖+0.01 mmol/L碘组和5.6 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L碘组分别与相应对照组比较,细胞胰岛素分泌量组间差异显著(P<0.05)。结论过量碘可降低β-TC-6细胞胰岛素分泌量,损害胰岛素分泌功能,其机制很可能与内质网应激和Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡密切相关。     

镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究氯化镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响。方法原代培养的小鼠大脑皮质星形胶质细胞分别于终浓度为0(对照)、0.25、0.5、1.0 mmol/L氯化镧无血清培养基处理24 h后,采用RT-PCR法检测星形胶质细胞B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X基因(Bcl-2-associated Xgene,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9 mRNA的表达水平。结果与对照组比较,0.25、0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均显著升高,0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bcl-2 mRNA的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氯化镧染毒剂量的升高,小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2 mRNA的表达水平呈下降趋势。而各组小鼠星形胶质细胞caspase-8 mRNA的表达水平间比较,差异无统计学意义。结论氯化镧对星形胶质细胞产生毒作用的机制可能与氯化镧致促凋亡基因Bax和caspase-3、caspase-9表达升高以及抑凋亡基因Bcl-2表达下降有关。     

高胆红素血症新生大鼠脑组织胰岛素样生长因子-1表达的实验研究

目的观察胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)在高胆红素血症新生大鼠脑组织中的表达及其对细胞凋亡的影响。方法选取7日龄新生SD大鼠120只。随机分成对照组(A组,40只)和高胆红素血症组(B组,40只; C组,40只)。A组腹内注入生理盐水100μg/g,B组和C组分别腹内注入胆红素溶液100μg/g和150μg/g。每组根据处死大鼠的时间点的不同又分为6 h、12 h、24 h、48 h和72 h共5个亚组,每个亚组8只。观察各大鼠的异常神经行为;每组不同时间点断头取脑组织,行苏木精-伊红(HE)染色,在光学显微镜下观察大鼠海马区神经细胞的病理变化;免疫组化法分析脑组织海马区IGF-1的表达;TUNEL染色法测脑组织海马区细胞凋亡个数。结果 A组新生大鼠脑组织海马区IGF-1和细胞凋亡无或仅少量表达; B组和C组新生大鼠在不同时刻IGF-1和细胞凋亡均有表达,且48 h达高峰,72 h恒定高表达; A组、B组和C组同一时间点对比,IGF-1和细胞凋亡的表达均为C组>B组>A组,差异有统计学意义(P<0. 05),且脑组织海马区IGF-1阳性细胞的表达与细胞凋亡率呈正相关(P<0. 05)。结论高胆红素血症时新生大鼠脑组织海马区IGF-1表达上调,参与海马区细胞凋亡的病理生理过程,可能对高胆红素血症脑损伤起到重要的神经保护作用。     

缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

目的：探讨缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的相关机制。方法取体外新生大鼠心肌细胞作为试验样本,将其随即平均分配为四组,A组为对照组,B组为模拟缺血组,C组为缺血2 h后再灌注1h组,D组为缺血持续3 h组。采用TUNEL法对各组样本心肌细胞凋亡情况进行检测,并采用免疫组织化学法对Bcl-2/Bax基因的表达情况进行检测。结果在心肌细胞I/R后,检测到明显的阳性凋亡细胞,同时D组和C组细胞凋亡指数明显高于B组,差异具有显著性（P〈0.05）;免疫组织化学检测结果表明,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2基因表达明显下调。结论缺血和缺血再灌注均会造成心肌细胞凋亡,同时心肌细胞的凋亡同Bcl-2/Bax基因的表达之间存在一定的相互作用关系。     

铝致大鼠海马神经细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

[目的]探讨铝对大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。[方法]健康雄性SD大鼠40只,按体重随机分为4组:生理盐水组(对照组)、Al3+2.5mg/kg组、Al3+5mg/kg组、Al3+10mg/kg组。AlCl3溶液腹腔注射染毒,60d后处死,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法测Bcl-2、Bax的表达,并用图像分析系统进行结果分析。[结果]随着染铝剂量的增高,大鼠海马神经细胞凋亡指数升高,存在剂量-效应关系(P<0.05)。各染铝组Bcl-2表达下降,Bax表达显著升高,Bcl-2/Bax逐渐下降,存在剂量-效应关系(P<0.05);海马神经细胞凋亡指数与Bcl-2呈负相关(r=一0.924,P<0.01),与Bax呈正相关(r=0.804,P<0.01),与Bcl-2/Bax表达比值呈负相关(r=-0.872,P<0.01)。[结论]铝可以诱导大鼠海马神经细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调,Bax表达上调以及Bcl-2/Bax表达比值下降有关。     

中波紫外线诱导小鼠表皮细胞Bax和Bcl-2的表达

[目的]探讨中波紫外线(UVB)对正常小鼠表皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bax和Bcl-2的调控。[方法]将正常ICR小鼠随机分为对照组(假照射组)、500J/m2、1000J/m2、1500J/m2、2000J/m2紫外线照射后2h组(每组10只小鼠)。1500J/m2紫外线照射后4h组、8h组、12h组、24h组、48h组、72h组(每组10只小鼠)。采用链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法(streptavidin-peroxidase,SP)染色检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的蛋白表达。[结果]小鼠皮肤用不同剂量紫外线照射2h后Bax的表达,随紫外线剂量增大而变大,Bcl-2表达减小,呈剂量依赖性。用1500J/m2紫外线照射小鼠后12hBax表达达到高峰,Bcl-2表达减弱;24h后Bax表达开始减弱,而Bcl-2则开始表达,72h恢复正常,Bax和Bcl-2的表达与紫外线照射后时间有关。[结论]中波紫外线照射小鼠皮肤后,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,促进小鼠紫外线损伤的表皮细胞凋亡。     

高浓度葡萄糖对小鼠囊胚细胞线粒体和细胞色素氧化酶的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚细胞线粒体和细胞色素氧化酶的影响,探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚有氧代谢的影响,为糖尿病妊娠导致胎儿畸形的机制和预防提供理论依据。方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5天小鼠囊胚,随机分成三组,即对照组(空白)、低糖组(葡萄糖浓度为7.5 mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为28.0 mmol/L),分别培养在含0、7.5 mmol/L和28.0 mmol/L葡萄糖的M199培养基中,培养24 h后,然后再吸山囊胚。每组随机吸取30个囊胚用罗丹明123荧光染料标记线粒体和组织化学方法显示细胞色素C氧化酶,观察囊胚细胞线粒体和细胞色素C氧化酶(Cytochrome C Oxidase)的变化。结果:①高糖组小鼠囊胚线粒体功能活性明显降低,荧光密度值较低,且线粒体的位置分布发生了明显变化,空白组和低糖组囊胚胞浆中线粒体分布均匀,荧光密度值较高,线粒体仍具有一定的活性。空白组与低糖组囊胚荧光密度值无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.05);②细胞色素氧化酶(COX)活性的变化:高糖组小鼠囊胚胞浆淡染,反应产物呈浅黄色,COX活性明显降低;空白组和低糖组囊胚胞浆可见明显的棕褐色物质,COX活性较高,统计学分析,空白组与低糖组囊胚灰度值无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.05)。结论:高浓度葡萄糖对小鼠囊胚线粒体的分布、功能以及COX活性均有影响。     

乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

二甲基甲酰胺致心肌细胞凋亡线粒体通路的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）致H9c2心肌细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的影响。方法 采用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测不同剂量DMF（0 mM、50 mM、100 mM、200 mM）染毒24 h后胞浆内活化的Caspase-3（cleaved caspase-3）、Bax、Bcl-2以及细胞色素C（Cyt-c）水平的改变。结果 不同剂量DMF（0 mM,50 mM,100 mM,200 mM）染毒24 h后胞浆Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义（Cleaved caspase-3:F=23.33,P<0.001;Bax:F=60.31,P<0.001;Bcl-2:F=577.8,P<0.001;Cyt-c:F=104.0,P<0.001）。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 mM、200 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax在50 mM、100 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）,200 mM染毒组与对照组相比差异无统计学意义（P=1.000）。Bcl-2水平在50 mM、100 mM、200 mM染毒组较对照组均降低,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax/Bcl-2比值增加,100 mM,200 mM组较对照组差异均有统计学意义（均有P<0.05）。结论 DMF染毒后可上调H9c2心肌细胞Cleaved caspase-3、Cyt-c以及Bax/Bcl-2水平,下调Bcl-2水平。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞凋亡的过程。     

叶酸与维生素B12对2型糖尿病大鼠心肌组织凋亡 相关蛋白表达的影响

摘要:目的　观察2型糖尿病大鼠心肌凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达变化及叶酸、维生素B12的干预作用。方法　6周龄SD大鼠60只,糖尿病造模成功后,随机分为对照组（A组）、模型组（B组）、叶酸和维生素B12干预组（C组）。12周后取血检测各组同型半胱氨酸（Hcy）、叶酸、维生素B12的水平;取大鼠心肌组织,免疫组化法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达,并用计算机图像分析系统测平均灰密度值。结果　12周后B组Hcy明显增高,与A组和C组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,C组叶酸、维生素B12与A组和B组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;心肌组织中,B组Bax、Caspase-3的表达明显高于A组（P＜0.01）,Bcl-2的表达明显低于A组（P＜0.01）;C组Bax、Caspase-3的表达较B组明显下降（P＜0.01）,Bcl-2的表达明显高于B组（P＜0.01）;A组与C组Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　2型糖尿病大鼠血液中Hcy的升高,可能在促进心肌细胞凋亡过程中发挥重要作用,而叶酸、维生素B12的干预可以有效缓解病变进程。     

丙泊酚对Wistar大鼠肝癌模型中Bax与Bcl-2表达的影响

目的：探讨不同浓度丙泊酚对Wistar大鼠肝癌模型中凋亡促进基因Bax和凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响。方法：将50只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为五组,每组10只,分别为正常对照组（A组）,肝癌模型组（B组）,低剂量丙泊酚（3 mg/kg）组（C1组）,中等剂量丙泊酚（6 mg/kg）组（C2组）,高剂量丙泊酚（12 mg/kg）组（C3组）。给药结束后24 h处死大鼠,取肝脏标本观察肝脏特征,并做组织切片行苏木精-伊红（HE）染色及S-P免疫组化检测Bcl-2及Bax的表达,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数（AI）。结果：（1）大体标本检查及H E染色：与A组比较,B组大鼠肝脏表面粗糙,部分肝叶表面出现黄色斑点,肝细胞脂肪变性,点状坏死及炎细胞浸润,少量胶原纤维增生;与B组比较,C1、C2、C3组肝细胞变性坏死以及胶原纤维增生程度有所减轻;（2）TUNEL检测结果：随丙泊酚剂量增加,肝癌细胞中凋亡细胞逐渐增多,AI逐渐递增,具有显著差异性（P〈0.05）;（3）与A组比较,B组肝脏细胞Bcl-2表达上调,Bax表达下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）;与B组比较,C组（C1、C2、C3）肝脏细胞Bcl-2表达均下降,且随着丙泊酚剂量的增加而呈递减趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）;Bax表达均上调,且随着丙泊酚剂量的增加而呈递增趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：丙泊酚可导致Wistar大鼠肝癌细胞中Bcl-2/Bax表达比例降低,促进肝癌细胞的凋亡,进而抑制肝癌细胞的增殖能力。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元Bax、Bcl-2表达的影响

目的:探讨参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,把实验分成两部分:①观察缺氧缺血后3、7、14、28天各组的体重变化以及各组28天内生存率;②观察缺氧缺血前2h,缺氧缺血后2、12、24h,3、7、14、28天各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。每组实验随机分为4组:假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附预处理组(P组)、参附治疗组(SF组)。结果:SF组和P组较C组Bax表达明显下调(P<0.05,P<0.01),而Bcl-2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),生长发育和生存情况明显好于C组。结论:参附改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其生存率;可明显下调新生大鼠HIBD后海马神经元Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白的表达。     

辛伐他汀对骨质疏松大鼠血清细胞因子IL-6、IGF-I水平的影响

目的:观察辛伐他汀对去卵巢大鼠血清细胞因子IL-6和IGF-I水平的影响。方法:选择健康雌性Wistar大鼠27只,3月龄,体重(200±30)g,随机分为A、B、C3组,每组9只。A组行开关术,其余两组行双侧卵巢切除术。术后1周A、B两组均灌服生理盐水1.5ml/只/d,C组给予辛伐他汀5mg/kg/d,共10周。双能X线骨密度仪测量股骨和胫骨骨密度(BMD);ELISA定量测定血清细胞因子IL-6、IGF-I水平。结果:B组血清IL-6水平明显高于A、C组(P<0.001)。C组血清IGF-I水平与B组比较差异无显著性(P>0.05);A组血清IGF-I水平明显高于B组(P<0.001)。股骨BMD和胫骨BMD与血清IL-6水平均呈显著负相关(P<0.001),而与血清IGF-I水平均呈显著正相关(P<0.05)。结论:他汀类药物能够下调IL-6的表达水平;但对IGF-I影响作用不大。     

二甲基甲酰胺致人肝细胞凋亡及其对Bcl-2及Bax和Caspase-3表达的影响

目的 初步探讨二甲基甲酰胺(DMF)对正常成人肝细胞的致凋亡作用和对Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法 以终浓度为0、50、100、150、200mmol/L的DMF作用于正常成人肝细胞12 h后,应用流式细胞术和western blotting法检测细胞凋亡率及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的变化.结果 与阴性对照组比较,各DMF剂量组凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01).随着染毒剂量的增加,肝细胞凋亡率上升,呈现剂量-反应关系.且染毒后随着DMF剂量的增加,Bcl-2表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,Bax 表达水平无明显变化,Bcl-2/Bax比值随着DMF剂量增加而下降,200mmol/L剂量组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).在DMF150、200mmol/L剂量组可见到Caspase-3切割活化.结论 DMF可诱导肝细胞发生凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值表达下调、Caspase-3发生切割活化有关.     

乙苯对大鼠尿中苯乙醇酸、苯乙醛酸水平、肾组织超微结构及线粒体凋亡相关蛋白表达的影响

目的 探讨亚慢性染毒乙苯对大鼠尿中苯乙醇酸、苯乙醛酸和肾组织超微结构及线粒体凋亡相关蛋白表达的影响.方法 SD大鼠雄性40只,随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只,分别染毒0、433.5、4335.0和6500.0 mg/m~3的乙苯,每天6 h,每周5 d,共13周,建立大鼠乙苯亚慢性染毒模型;高效液相色谱法测定染毒后大鼠尿中苯乙醇酸(MA)和苯乙醛酸(PGA)水平,电镜观察肾组织的超微结构,Western blot法检测肾组织B细胞淋巴瘤-2相关联X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、细胞色素C(cytochromeC,Cytc)、细胞凋亡蛋白酶(Caspase-3)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)等线粒体凋亡相关蛋白的表达.结果 中、高剂量组大鼠尿中MA[(0.303±0.148)、(0.404±0.154)mg/L]和PGA[(0.168±0.104)、(0.174±0.092)mg/L]水平均明显高于对照组和低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05),且MA、PGA均与乙苯外暴露剂鼍呈现一定的剂量-效应关系(r=0.827,r=0.720,P<0.05).高剂量组大鼠肾组织线粒体普遍肿胀,呈空泡状,部分线粒体嵴排列紊乱,线粒体嵴消失.中、高剂量组大鼠肾组织Bax表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);各剂苗组大鼠肾组织Cytc和Caspase-9表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中、高剂量组大鼠肾组织Caspase-3表达水平均明显高于对照组和低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各剂量组大鼠肾组织Bcl-2表达水平均明显下降差异有统计学意义(P<0.05).结论 乙苯致大鼠肾组织细胞线粒体损伤可能是乙苯细胞毒作用机制之一,其机制可能与线粒体凋亡相关蛋白表达有关,大鼠尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸可作为乙苯暴露后生物内剂量指标.     

维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响

目的探讨维生素 C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量 VC 预处理后,DON 对 HPBMC 凋亡及相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察 VC 预处理对 DON 引起的增殖抑制作用的影响。结果FCM 检测结果表明,终浓度为2000μg/L 的 DON 可诱导体外培养的 HPBMC 凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25μmol/L VC 预处理可明显抑制 DON 诱导的体外培养 HPBMC 凋亡(22.39±1.05)%,P<0.05,而100μmol/L VC 预处理则可明显增高 DON 诱导的 HPBMC 凋亡(36.07±2.92)%,P<0.05。Western blotting 分析结果表明,25μmol/L VC 预处理可明显降低 DON 诱导的HPBMC Bax 和 caspase-3蛋白高表达,同时使 DON 抑制的 Bcl-2蛋白表达明显升高。100μmol/L VC预处理可明显促进 DON 诱导的 Bax 和 Caspase-3蛋白的高表达,但对 DON 抑制的 Bcl-2表达无明显影响。不同剂量 VC(25μmol/L 和100μmol/L)预处理均可降低 DON 对 HPBMC 增殖的抑制作用(P<0.05),但不同剂量 VC 之间没有显著差异。结论 25μmol/L VC 预处理可一定程度地抑制DON 诱导的 HPBMC 亡及凋亡相关基因的异常表达,而100μmol/L VC 则促进 DON 诱导的HPBMC 凋亡。不同剂量 VC 预处理可以明显降低 DON 对 HPBMC 的增殖抑制作用。