不明原因复发性流产患者早孕期流产蜕膜组织CD3~-CD(56+16)~+NK细胞数量改变及分析

目的分析不明原因复发性流产(URSA)患者及人工流产患者流产蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞数量的变化,探讨早孕期蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞与稽留流产的关系。方法选取不明原因复发性流产患者20例作为URSA组,人工流产患者10例作为人工流产组,流式细胞仪检测两组的蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞数量。结果 URSA组患者的流产蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞比例显著少于人工流产组患者(P <0.05)。结论早孕期蜕膜组织CD3~-CD (56+16)~+NK细胞比例失调可能是孕早期胚胎丢失的病因之一。     

人工流产与复发性自然流产蜕膜淋巴细胞亚群FAS表达的研究

目的:研究不明原因复发性流产(RSA)患者外周血、蜕膜组织T细胞、NK细胞数量,NK细胞亚群数量及FAS抗原的表达,探讨其在RSA中的作用。方法:选取确定妊娠并难免流产者26例为实验组,25例正常妊娠行人工流产者作为对照组,用流式细胞仪检测两组外周血和蜕膜组织T细胞、NK细胞数量,NK细胞亚群数量及FAS抗原的表达。结果:①对照组外周血T细胞和NK细胞,蜕膜组织T细胞和NK细胞分别为(65.54±11.91)%、(12.26±6.46)%、(5.63±5.10)%、(56.50±19.80)%;实验组分别为(42.41±10.03)%、(12.24±6.40)%,(5.62±4.74)%、(60.14±21.52)%;两组差异无统计学意义(P>0.05)。②对照组外周血CD3-CD56+CD16+和CD3-CD56+CD16-细胞,蜕膜组织CD3-CD56+CD16+和CD3-CD56+CD16-细胞分别为(65.54±11.91)%、(6.06±3.05)%,(2.84±1.59)%、(83.79±6.02)%;实验组分别为(74.93±11.42)%、(5.58±2.72)%,(5.36±4.76)%、(74.12±11.32)%;P值分别是0.014,0.592,0.031,0.001,除外周血CD56+CD16-细胞两组无差异外,其余3组差异有统计学意义。③对照组外周血CD3-CD56+CD16+FAS和蜕膜组织CD3-CD56+CD16-FAS表达分别为(49.15±9.77)%和(4.97±2.32)%;实验组分别为(38.21±9.42)%,(9.59±6.42)%;P值分别是0.001、0.004,差异有统计学意义。结论:FAS/FASL系统可能是外周血和蜕膜组织NK细胞亚群凋亡的主要途径之一。     

非孕与早孕妇女外周血及宫内膜和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的变化

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤(NK)细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织NK细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织NK细胞表面标记CD56和CD16分子,以及用放射免疫沉淀法测定外周血清雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平,并进行比较分析。结果:早孕外周血组NK细胞的CD56+CD16-、CD56+CD16+和CD56-CD16+3组亚群的百分率均明显高于非孕外周血组(分别为P≤0.013、P<0.001、P≤0.001);非孕宫内膜组的NK细胞以CD56+为主,为20.82%,且其CD56+CD16-的百分率明显高于其外周血组,而CD56-CD16+的百分率明显小于外周血组(P≤0.001),两组的CD56+CD16+的百分率无差异(P>0.05),非孕宫内膜组CD56+CD16-的百分率明显高于CD56+CD16+和CD56-CD16+(均为P<0.001),非孕外周血组的NK细胞以CD16+为主,且其CD56-CD16+的百分率明显高于CD56+CD16-和CD56+CD16+(均为P<0.001)。早孕蜕膜组的NK细胞以CD56+为优势,为62.42%。早孕蜕膜组NK细胞的CD56+CD16-、CD56+CD16+和CD56-CD16+3组亚群的百分率均明显高于非孕宫内膜组(均为P<0.001),而早孕周围血中的NK细胞以CD56+CD16+和CD16+为主,分别为9.93%和10.65%,且与CD56+CD16-比较均有显著性差异(均为P<0.001),早孕外周血组CD16+NK细胞的百分率明显高于蜕膜组(P≤0.001),且两组CD56+CD16+的百分率无差异(P>0.05)。结论:孕激素能明显促进宫内膜CD56+NK细胞的增殖和分化,雌、孕激素水平的协同升高可增加外周血和宫内膜组织的CD56+、CD56+CD16+、和CD16+NK细胞亚群的百分率;CD56+CD16+NK细胞在早孕外周血和蜕膜组织之间,以及在非孕外周血和宫内膜组织之间均可能起免疫调控作用。     

CTLA-4及协同刺激信号与孕早期不明原因反复自然流产的关系

目的:研究孕早期不明原因反复自然流产(URSA)患者外周血、蜕膜组织CTLA-4及相关免疫分子的表达及其在母胎免疫调节中的作用。方法:采集10例正常育龄妇女(正常非孕组)黄体期、12例正常育龄妇女早孕期(正常妊娠组)和23例孕早期不明原因反复流产患者(URSA组)流产时的外周血,同时留取正常育龄妇女及反复流产患者早孕期行人工流产时蜕膜组织,应用流式细胞仪进行分析,比较CTLA-4、CD4+CD25+、CD80、CD86的表达水平。结果:CTLA-4在3组外周血中表达差异无统计学意义(P>0.05),正常妊娠组外周血淋巴细胞CD4+CD25+的表达显著高于URSA组与正常非孕组,差异有统计学意义(P<0.05),URSA组外周血淋巴细胞中CD80、CD86的表达显著高于正常妊娠组及正常非孕组,差异有统计学意义(P<0.05),正常妊娠组蜕膜组织CTLA-4、CD4+CD25+的表达显著高于URSA组,差异有统计学意义(P<0.05),URSA组蜕膜组织CD80、CD86的表达显著高于正常妊娠组(P<0.05)。结论:蜕膜组织淋巴细胞CTLA-4、CD4+CD25+、CD80、CD86的表达情况在母胎界面免疫耐受调控中起重要作用,外周血淋巴细胞CD4+CD25+、CD80、CD86的表达水平与孕早期反复流产有一定的相关性。     

外周血自然杀伤T细胞与原因不明复发性流产的相关性分析

目的探讨外周血自然杀伤T (NKT)细胞的水平与原因不明复发性流产(URSA)的相关性,为临床诊治提供参考依据。方法选取确诊为URSA的患者35例,其中怀孕者14例为URSA怀孕组,未孕者21例为URSA非孕组;选取37例正常体检者,其中正常怀孕者16例为正常妊娠组,未生育过的妇女11例为正常未生育组,有过妊娠史的10例为正常已生育组。采用流式细胞仪测定各组外周血中的CD3~+、CD3~+CD16~+CD56~+、CD3~+CD16-CD56~+细胞的表达水平。结果 URSA怀孕组孕妇的外周血NKT细胞比其他4组都高,且差异有统计学意义(均P0. 05);正常妊娠组妇女外周血NKT细胞比URSA非孕组、正常未生育组、正常已生育组都高,且差异有统计学意义(均P0. 05);而URSA非孕组与正常未生育组、正常已生育组之间的NKT细胞差异无统计学意义(均P0. 05)。5组妇女的CD3~+和CD3~+CD16-CD56~+细胞水平差异无统计学意义(均P0. 05)。结论 URSA患者怀孕时外周血中的NKT细胞表达水平上升,NKT细胞可能参与了URSA的发生。     

不明原因复发性流产患者主动免疫治疗后外周血及子宫内膜CD3~+CD(56+16)~+NK T细胞比例的变化

目的通过分析不明原因复发性流产(URSA)患者,淋巴细胞免疫治疗(LIT)后外周血及子宫内膜CD3~+CD(56+16)~+NK T比例的变化,揭示LIT作用机制。方法选取2016年4-9月该院收治的20例URSA患者,应用流式细胞仪对其LIT前后外周血及子宫内膜CD3~+CD(56+16)~+NK T细胞比例变化进行分析。结果 LIT后子宫内膜CD3~+CD(56+16)~+NK T细胞比例显著性升高(P0.05);外周血CD3~+CD(56+16)~+NK T细胞比例LIT后未发生显著性变化(P0.05);外周血与子宫内膜CD3+CD56+NK T细胞比例不存在相关性。结论 LIT后NK T细胞比例改变主要发生在子宫内膜局部;LIT通过改变子宫内膜局部细胞因子平衡,引起子宫局部NK T细胞比例升高,可能是LIT作用机制之一;子宫内膜NK T细胞比例是评价LIT疗效的潜在指标。     

Th17/Treg细胞及其细胞因子在原因不明性复发性流产发病中的作用

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)女性患者外周血中Th17/Treg细胞及其相关细胞因子的表达和意义。方法选取2011年1月-2015年12月本院妇产科门诊收治的URSA患者32例和20例正常早孕女性,采用流式细胞术(FCM)检测外周血中Th17细胞和CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg细胞频数;同时检测血清中IL-17、IL-22、IL-10和IL-35细胞因子表达水平,荧光定量PCR检测外周血和蜕膜中Treg细胞的转录因子(Foxp3)和Th17细胞的转录因子ROR-γt的相对mRNA表达水平。结果 URSA组外周血Th17细胞的百分率高于正常对照组,CD4~+CD25~+Treg细胞和Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg细胞的百分率低于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。URSA组外周血的IL-22和IL-17A表达水平高于正常对照组,IL-10和IL-35表达水平低于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。URSA组的外周血和蜕膜组织中的Treg细胞的转录因子Foxp3的mRNA表达低于正常对照组,Th17细胞的转录因子ROR-γt的mRNA表达高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Th17/Treg细胞平衡失调,可能是URSA发生的重要原因。     

颗粒酶B和CD8在不明原因复发性流产蜕膜组织中的表达

目的:比较不明原因复发性流产(URSA)与正常早孕蜕膜CD8和颗粒酶B的表达,从蛋白水平探讨不明原因复发性流产的发病机制。方法:用免疫组织化学方法测定两组蜕膜CD8和颗粒酶B蛋白表达,采用双盲法随机取5个视野,400倍下观察蜕膜组织处阳性细胞,计数后取其平均数进行半定量分析。结果:与正常早孕相比,URSA组蜕膜组织处颗粒酶B表达明显升高(P<0.01);CD8的表达两组比较无明显差异(P>0.05)。结论:早孕期蜕膜组织颗粒酶B蛋白表达异常是URSA的机制之一;颗粒酶B死亡途径可能是早期诱导URSA发生的重要因素。     

足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4~+CD25~+T细胞的变化

目的:检测足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4+CD25+T细胞的变化情况,探讨它们与分娩发动的关系。方法:对40例健康足月孕妇按临产情况分为足月未临产组和足月临产组,收集孕妇蜕膜组织,密度梯度离心法分离出淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、CD4+CD25+T细胞含量。结果:足月临产组的蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(36.3±6.5)%,足月未临产组蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(33.9±3.0)%,差异无统计学意义;足月临产组的蜕膜NK细胞表面CDl6的表达明显高于足月未临产组,两者分别为(8.9±1.1)%与(4.6±0.9)%(P<0.05);足月临产组的蜕膜CD4+CD25+T细胞含量明显小于足月未临产组CD4+CD25+T细胞的含量,两者分别为(4.5±0.7)%与(9.1±1.0)%(P<0.05)。结论:足月妊娠分娩发动前、后蜕膜中的NK细胞及CD4+CD25+T细胞发生变化,推测NK细胞与CD4+CD25+T细胞可能参与了分娩发动。     

主动免疫疗法对复发性流产患者子宫内膜黄体期淋巴细胞各免疫表型的影响

目的分析主动免疫疗法(LIT)对原因不明复发性流产(URSA)患者子宫内膜免疫状态的调节作用,探讨LIT疗效的可能预测指标。方法选取2015年7月至2015年12月在我院就诊的30例URSA患者,均予LIT治疗,对比治疗前后患者子宫内膜黄体期淋巴细胞表型比例。结果治疗后患者子宫内膜黄体期CD4+/CD8+、CD56+CD16+/CD56+CD16-、Th1/Th2均明显下降,Treg/Th17明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论主动免疫疗法对URSA患者子宫内膜黄体期T淋巴细胞亚群、NK细胞亚群、Treg细胞、辅助T细胞免疫表型均有明显影响,上述指标中可能包含预测LIT对URSA患者疗效的可靠指标。     

手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及临床意义

目的:探讨手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测80例卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及CD4+CD25+调节性T细胞水平。结果:与对照组相比,卵巢癌患者外周血中CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05);随着疾病进展Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05)。卵巢癌患者外周血CD4+CD25+细胞比例高于正常对照组(P0.05);手术后卵巢癌患者T细胞亚群比例与术前比较并未明显恢复(P0.05),但CD4+CD25+调节性T细胞水平有所恢复(P0.05)。结论:卵巢癌患者免疫功能低下,术后短期并不能恢复,CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,术后明显恢复,提示其在免疫耐受中起重要作用。     

CD56、CD25与复发性自然流产的相关性研究

目的:探讨CD56、CD25与复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)发病的关系。方法:采用流式细胞技术分析50例RSA妊娠患者(病例组)和60例正常妊娠者外周血和蜕膜组织中CD56、CD25表达量及二者的相关性。结果:①RSA妊娠组患者外周静脉血及蜕膜组织中CD56、CD25的水平较正常妊娠组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);②RSA妊娠组患者外周静脉血中CD56与CD25的表达呈正相关,并与蜕膜组织中CD56的表达呈正相关。结论:CD56、CD25与复发性自然流产有关,且CD25与CD56在复发性自然流产的发病过程中有协同作用。     

Increase in CD57 + CD16 - lymphocytes in workers exposed to benzidine and beta-naphthylamine: assessment of natural killer cell subpopulations

Previously, we found a decrease in CD4+CD45RA+T lymphocytes in workers exposed to the aromatic amines (AAs) [benzidine (BZ) and beta naphthylamine (BNA)]. For further investigation of the effects of AAs on lymphocyte subpopulations, we measured natural killer (NK) cell subpopulations using two-color staining with anti-Leu7 (CD57) and anti-Leu11 (CD16) monoclonal antibodies in peripheral blood in 78 male dyestuff workers. The workers had been exposed to AAs before 1972 at a chemical plant, either in the production of AAs (40 workers, high-exposure group) or in other work that involved handling dye-stuffs (38 workers, low-exposure group). The controls were 30 “healthy” male volunteers without a history of occupational exposure to AAs or hazardous chemicals. The number of CD57+CD16-cells in the high-exposure group was significantly higher than that in the controls (P<0.01, analysis of covariance with age as a covariate). No significant differences were found in CD57+CD16-, CD57+CD16+ and CD57-CD16+NK cells between the low-exposure group and the controls. It is suggested that a decrease in the number of CD4+ T lymphocytes following exposure to AAs might be compensated by the increase in CD57+CD16- cells, i.e. circulating peripheral lymphocytes with poor NK cell activity.     

实验性抗磷脂综合征小鼠CD4~+CD25~+调节性细胞及foxp3表达的变化

目的:观察实验性抗磷脂综合征(experimental anti-phospholipid antibody syndrome,EAPS)进展过程中小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量和功能变化。方法:以重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)主动免疫BALB/c小鼠建立实验性APS模型,免疫12周后检测抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)、抗心磷脂抗体(ACA)、流产率(%)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、血小板计数(PLT PBC)。以流式细胞术检测小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率,RT-PCR检测转录因子Foxp3 mRNA的表达水平。结果:模型小鼠anti-β2-GP1、aCL水平明显升高,aPTT延长,PLT PBC降低,流产率提高,差异有统计学意义(P0.05)。模型小鼠PBMC中foxp3基因表达在4周短暂高于对照组(P0.05),8周后随着APS进展开始逐渐降低,12周后明显低于对照组(P0.05)。PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率8周前与对照组相比差异无统计学意义(P0.05),12周后逐渐减少,明显低于对照组(P0.05)。结论:CD4+CD25+Treg数量和功能下降参与抗磷脂综合征的发病机制。     

miR-146a-5p在不明原因复发性流产蜕膜组织中的表达及其意义

目的:探讨miR-146a-5p在不明原因复发性流产(URSA)蜕膜组织中的表达变化并分析其可能作用机制.方法:选取2019年1—12月在成都西囡妇科医院因URSA行清宫术患者(URSA组)及因无生育计划行人工流产术的正常妊娠者(正常妊娠组)各10例,收集2组所有对象的蜕膜组织.比较2组蜕膜组织中miR-146a-5p...     

过继免疫治疗对手术后肺癌患者外周血免疫细胞表型影响的研究

目的:探讨C IK过继免疫治疗对手术后肺癌患者免疫功能的影响。方法:采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血T细胞、B细胞和NK细胞表型。结果:肺癌患者CD3+、CD4+、CD4/CD8比值明显低于对照组并呈显著性差异,而CD8+细胞高于对照组(P<0.01)。经C IK治疗后CD3+、CD4+、CD3-/CD16+56+细胞和CD4/CD8比值都升高,其中CD4+、CD3-/CD16+56+细胞与治疗前比较呈显著性差异(P<0.05),而CD8+细胞与治疗前比较降低(P<0.05);CD19在治疗后稍有增高趋势,但无显著性差异。结论:C IK过继免疫治疗对肺癌患者免疫功能的恢复具有促进作用。     

子痫前期患者蜕膜中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性 T细胞及NK细胞的相关研究

目的:对子痫前期(PE)患者蜕膜中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)和NK细胞进行相关研究,探讨子痫前期发病机制中相关的免疫学变化。方法:选择子痫前期患者30例(轻度13例、重度17例)、正常晚期妊娠妇女30例。采用免疫组织化学法检测胎盘蜕膜CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞和NK细胞后计数并检测其平均灰度值。结果:①子痫前期患者蜕膜CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞阳性表达率均明显低于正常晚期妊娠者(P均<0.05);②子痫前期患者蜕膜NK细胞数高于正常孕妇(P均<0.05)且NK细胞CD56组化染色平均灰度值高于正常孕妇(P均<0.05)。结论:子痫前期患者蜕膜的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞均低于正常孕妇;蜕膜的NK细胞数均高于正常孕妇,这一结果造成母胎免疫耐受失衡且NK细胞呈激活状态,杀伤活性增强,导致子痫前期。