下调DJ-1基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭影响的研究

目的 探讨下调DJ-1基因对甲状腺乳头状癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。方法 下调人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中DJ-1的表达,应用Western印迹法检测细胞经过转染前后DJ-1蛋白表达水平;通过迁移和侵袭实验检测下调DJ-1表达前后甲状腺乳头状癌细胞发生迁移和侵袭行为的情况。结果 转染si DJ-1组DJ-1蛋白的相对表达量明显较空白对照组和转染非特异性对照组减弱(P<0.05),而后两者之间比较,DJ-1蛋白相对表达量相似,差异无统计学意义(P>0.05)。在细胞迁移和侵袭实验中,转染si DJ-1组中迁移穿膜和侵袭穿膜的细胞数量均明显少于空白对照组和转染非特异性对照组(t迁移=4.494,4.481,t侵袭=4.039,3.594,P<0.05),而空白对照组和转染非特异性对照组之间,差异无统计学意义(t=2.068,2.141,P>0.05)。结论 DJ-1基因在人甲状腺乳头状细胞迁移、侵袭中发挥着重要的作用。     

RhoC基因对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖和cyclinDl基因的影响

目的 研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的增殖及cyclinD1 mRNA表达的影响.方法 将正、反义RhoC cDNA真核表达载体,转染人胆管癌细胞QBC939,检测细胞生长曲线,RT-PCR检测cyclinD1在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞（QBC939-V）、转染正义RhoC的QBC939细胞（QBC939-S）、转染反义RhoC的QBC939细胞（QBC939-AS）的mRNA相对表达量.结果 与QBC939及QBC939-V对照细胞相比,QBC939-S体外生长较快,QBC939-AS体外生长较慢,cyclinD1表达在QBC939-AS与对照组减少（P＜0.05）,cyclinD1表达在QBC939-S与对照组增加（P＜0.05）.结论 RhoC可能通过调节cyclinD1来调控QBC939的增殖能力.     

Stathmin对卵巢癌C13K细胞侵袭迁移能力的影响

目的探讨微管调节蛋白Stathmin对卵巢癌C13K细胞侵袭和迁移性的影响及机制研究。方法选择C13K细胞为实验对象,应用siRNA靶向沉默Stathmin,利用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测转染48 h后转染效果,transwell法和细胞划痕实验测定细胞侵袭和迁移能力变化,qRT-PCR检测侵袭相关基因MMP2和MMP9的变化。结果与空白对照组和阴性对照组相比较,Stathmin siRNA明显降低了C13K细胞中Stathmin mRNA的表达量,StathminsiRNA组侵袭的细胞数和细胞损伤愈合的速度明显降低,Stathmin-siRNA组MMP2和MMP9表达量明显降低。结论沉默Stathmin表达能有效抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移能力,其机制可能与抑制MMP2和MMP9的表达有关,为卵巢癌的治疗前景增加新的希望。     

脉冲电场对宫颈癌Hela细胞黏附和侵袭能力影响的实验研究

目的:探讨脉冲电场对肿瘤细胞黏附侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法:分别将场强为0 V/cm、500 V/cm、1 000 V/cm和1 500 V/cm的脉冲电场作用于宫颈癌Hela细胞,采用基质胶黏附实验观察脉冲电场对Hela细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室实验观察脉冲电场对Hela细胞侵袭能力的影响;采用免疫荧光法检测脉冲电场作用后Hela细胞中MMP-2、TIMP-2的表达情况.结果:经脉冲电场作用后,Hela细胞黏附能力下降,侵袭能力受到抑制,MMP-2的表达水平下调,TIMP-2的表达水平上调.结论:脉冲电场能抑制Hela细胞的黏附和侵袭能力,这种抑制作用可能与其下调MMP-2的表达水平和上调TIMP-2的表达水平有关.     

姜黄素对人类绒癌JAR细胞株侵袭粘附的影响

目的:观察姜黄素对人类绒癌JAR细胞株侵袭粘附能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:用姜黄素作用于JAR细胞,MTT法检测药物对JAR细胞生长增殖的影响;应用Transwell小室检测药物对JAR细胞侵袭能力的影响;以人工重组基底膜实验检测药物对JAR细胞粘附能力的影响;应用RT-PCR和Western-blot方法检测药物对JAR细胞粘附相关基因Ets-1 mRNA的表达与影响。结果:经不同浓度(10,20,40μmol/L)药物处理一定时间后,JAR细胞的侵袭能力与粘附能力均低于对照组(P<0.01),Ets-1表达水平均较对照组明显降低。结论:姜黄素能有效地抑制JAR细胞的侵袭、粘附,其机制可能与Ets-1的表达有关。     

干扰MTDH基因表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖及侵袭研究

目的：研究干扰MTDH基因表达对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法：构建MTDH shRNA表达质粒，将其转染Hela细胞并设置相应的对照组，Western-blot检测各组细胞中MTDH、VEGF-A、E-Cadherin蛋白表达情况；同时MTT法检测各组细胞增殖情况；Transwell检测各组细胞侵袭能力。结果：与对照组相比，MTDH干扰组Hela细胞中MTDH、VEGF-A蛋白表达明显下降，E-Cadherin蛋白表达显著上升。MTDH干扰组Hela细胞增殖受到明显抑制，且细胞侵袭能力显著下降。结论：干扰Hela细胞中MTDH基因表达能够下调VEGF-A表达并增强E-Cadherin的表达，从而抑制Hela细胞增殖及侵袭。     

沉默VEGF基因对腺样囊性癌细胞侵袭的影响

目的：利用RNAi技术沉默腺样囊性癌细胞株ACC-2中VEGF的表达,探讨其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法：利用RNAi技术沉默VEGF表达,用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果：与对照组比较,VEGF的siRNA能有效地抑制实验组ACC-2细胞的侵袭能力。结论：沉默VEGF减弱腺样囊性癌的侵袭能力。     

MK-siRNA对人乳腺癌细胞的生长、粘附及迁移能力的影响

目的:探讨siRNA MK转染对乳腺癌MCF-7细胞增殖和转移能力的影响。方法:构建特异性抑制Midkine基因siRNA片段,转染至乳腺癌MCF-7细胞中,CCK-8法比较细胞增殖能力的改变,体外迁移实验比较细胞运动能力的改变,基质胶粘附实验比较细胞粘附率的变化。结果:MK表达下调后,MCF-7细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),体外迁移能力显著降低(P<0.05),siRNA细胞对基质胶的粘附率明显降低(P<0.05)。结论:MK基因表达下调能降低乳腺癌细胞迁移运动和降低细胞对基质胶的粘附率,并降低肿瘤细胞的增殖,提示MK在乳腺癌恶性进展中起重要作用。     

RNA沉默Slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响

目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-Slug作用于Slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(P<0.05),抑制MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P<0.05)。结论:Slug-shRNA-1作用于Slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。     

Hiwi基因表达对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响

目的探讨Hiwi基因表达对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法使用western blot法分析62例乳腺癌患者的病理组织标本和24例确诊乳腺组织功能正常无癌变现象的志愿者的组织标本的Hiwi表达水平。结果 Hiwi在乳腺癌组织中的表达水平(1.708±0.065)显著高于正常乳腺组织中的表达水平(0.706±0.044),P0.05。正常表达组的穿膜乳腺癌细胞数为(73.55±6.43)个,显著高于下调表达组的穿膜乳腺癌细胞数(46.71±6.15)个,P0.05。结论 Hiwi基因表达水平与乳腺癌癌细胞侵袭和转移能力正相关。Hiwi基因有可能成为良好的乳腺癌检测指标和治疗靶点。     

Caveolin-1过表达抑制宫颈鳞癌Hela细胞的体外生长研究

目的 探讨转染caveolin-1基因对宫颈鳞状细胞癌Hela细胞株体外生长的影响.方法 用脂质体法把caveolin-1真核表达质粒导入Hela细胞内,筛选出稳定高表达caveolin-1的细胞克隆,并用RT-PCR、细胞免疫荧光和免疫印迹法鉴定.MMT法检测细胞的生长能力,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况,免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶（extracellular regulated protein kinases,Erk）1/2的磷酸化水平.结果 转染caveolin-1基因后,成功筛选得到稳定高表达caveolin-1的Hela细胞克隆,与未转染对照组相比,转染后的Hela细胞生长速度明显减慢（P〈0.05）,更多的细胞阻滞在G0/G1期[（68.04±2.57）%vs（53.41±1.01）%],凋亡细胞比例增高[（19.18±2.20）%vs（5.63±0.55）%,P〈0.05],Erk1/2相对磷酸化水平明显下降（0.28±0.05 vs 0.81±0.07,P〈0.05）.结论 caveolin-1基因能够抑制宫颈鳞癌Hela细胞株的生长、促进细胞凋亡;Erk1/2磷酸化水平下降可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

Caveolin-1过表达抑制宫颈鳞癌Hela细胞的体外生长研究

Objective To investigate the effects of caveolin-1 overexpressing on the growth of cervical squamous cell cancer Hela cell line. Methods Eukaryotic expression vector of human caveolin-1 gene was introduced into Hela cells by Lipofectamine. The clones stably overexpressed caveolin-1 were identiffed by RT-PCR, immunofluorescence cell staining techniques and Westernblotting. Cells proliferation viabihty was tested by MTT assay, and flow cytometry was used to assay the cell cycle and apoptosis, and the relative phosphorylation level of extracellular regulated protein kinases (Erk1/2) were detected by Westernblotting. Results The clones stably overexpressed caveolin-1 were obtained. Compared with the parental Hela cells, the tranfected cells exhibited a slower rate of growth. FAGS analysis results revealed that overexpression of caveolin-1 resulted in the cell cycle arrest in the G0/G1 [ ( 68. 04 ± 2. 57 ) % vs ( 53.41 ±1.01)%] phase and increased the apoptotic cell fraction[ (19. 18 ±2.20)% vs (5.63 ±0.55)%, P <0. 05 ]. Western blotting results showed that overexpression of caveolin-1 reduced the phosphorylation of Erk1/2(0.28 ±0.05 vs 0.81 ±0.07, P <0.05). Conclusions Overexpression of caveolin-1 suppressed the growth of Hela cells and induced apoptosis, down-regulation of Erk1/2 phosphorylation might be involved in its mechanism.     

普伐他汀对人肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭能力影响的初步研究

目的 观察普伐他汀(Pra)抑制肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭、运动的作用及机制.方法 培养HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度Pra对HepG2细胞增殖的抑制效应,并与对照组作比较.以Matrigel侵袭实验和迁移实验检测Pra对HepG2细胞的侵袭、运动能力的影响;p38活性试剂盒测定p38活性;Western印迹法测定磷酸化p38(p-p38)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP-1)、RhoC及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达.结果 MTT比色法及Matrigel侵袭和迁移实验显示,Pra明显抑制HepG2细胞增殖及侵袭、运动能力;Pra可抑制p38活性,并抑制p-p38、RhoC及MMP-2表达,同时上调MKP-1表达.以0.01 g/LPra组为例,其抑制HepG2细胞增殖率为(89.51±9.55)%,对照组为100.00%(F=19.76,P＜0.05);对p38活性的影响:0.01g/L Pra组为p38活性为(87.45±8.22)%,对照组为100.00%(F=22.29,P＜0.05).结论 Pra通过抑制p38活性及p-p38表达、提高MKP-1表达,抑制肝癌HepG2细胞株增殖,并通过下调RhoC及MMP-2表达,抑制其侵袭、运动能力.     

莱菔硫烷抑制PMA诱导宫颈癌细胞迁移与侵袭

目的:观察莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)对宫颈癌细胞迁移和侵袭的抑制情况,并探讨其分子机制。方法:体外培养宫颈癌细胞系HeLa细胞,经100 nmol/L佛波脂PMA诱导24 h后,加入不同浓度的SFN继续孵育24 h。MTT法检测HeLa细胞的生长抑制情况;DCF染色法检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的产生,细胞伤口愈合试验和小室侵袭实验分析SFN对PMA诱导HeLa细胞的迁移与侵袭情况。提取细胞总RNA,逆转录PCR检测基质金属蛋白酶-9(matrix met-alloproteinase-9,MMP-9)的表达,明胶酶谱实验检检测其酶活性。萤光素酶报告基因法检测SFN对核因子κB(Nuclear Fac-tor kappa B,NF-κB)活性的影响。结果:0～30μmol/L SFN对HeLa细胞的生长增殖无明显毒性作用。DCF染色显示PMA处理能使HeLa细胞ROS的含量增高5倍,而30μmol/L SFN处理能使ROS的产生降低44%;SFN也能使HeLa细胞迁移和侵袭率分别降低60%和75.5%。RT-PCR结果显示SFN能以剂量依赖性方式抑制PMA诱导的MMP-9表达,明胶酶谱实验显示MMP-9酶活性也明显降低。报告基因实验显示SFN能以剂量依赖性方式抑制NF-κB的活性。结论:SFN抑制NF-κB介导的MMP-9表达,从而影响宫颈癌细胞的迁移和侵袭。     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。     

枸橼酸芬太尼对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭的影响

目的:探讨枸橼酸芬太尼对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖和侵袭的影响。方法:分别用0.000 1μmol/L、0.01μmol/L、1μmol/L的枸橼酸芬太尼处理MCF-7细胞,MTT比色法检测MCF-7细胞增殖;流式细胞仪检测MCF-7细胞细胞周期;采用划痕实验及侵袭小室法检测MCF-7细胞侵袭能力。结果:MTT比色法显示不同浓度枸橼酸芬太尼处理的MCF-7细胞的增殖率分别为(58.84±11.31)%、(54.37±9.89)%和(51.83±10.33)%,明显低于对照组;各组MCF-7细胞停滞在G2/M期的比例增加,S期比例减少;各实验组及对照组划痕实验显示48 h时间段的愈合率分别为(70.41±6.86)%、(64.36±3.87)%、(62.52±4.95)%和(83.34±4.59)%;侵袭小室实验显示枸橼酸芬太尼在体外具有抑制MCF-7细胞侵袭转移作用。结论:芬太尼可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖、使细胞周期停滞于G2/M期,并且降低其侵袭能力,对MCF-7细胞的生物学性状产生较大的影响。     

RhoC及PTEN在非小细胞肺癌中的表达及临床意义的探讨

目的 观察Ras同源性原癌基因C（RhoC）及张力蛋白同源的磷酸酶基因（PTEN）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达程度及其与临床病理学之间的关系,探索RhoC与PTEN在肺癌发生及演变过程中的作用机制及两者之间的关系,为非小细胞肺癌的发生机制提供理论基础,并为NSCLC的早期诊断提供新思路.方法 （1）试验分组：60例非小细胞肺癌标本及40例正常对照肺组织.（2）采用免疫组织化学方法检测RhoC及PTEN表达情况及其与临床病理学之间的关系. 结果 60例NSCLC组织中, RhoC蛋白阳性表达率分别为68.33%（41/60）,显著高于正常肺组织,RhoC在NSCLC组织中阳性表达率与吸烟史、年龄及组织学类型无关,而与癌组织的分化程度、临床分期密切相关.PTEN在非小细胞肺癌组织中的阳性率为36.70%,显著低于非肺癌组织的阳性率80.00%（P〈0.01） PTEN的表达与肺癌患者的细胞分化程度、TNM分期、肿瘤直径相关.RhoC和PTEN两者表达强度之间呈显著负相关（P〈0.01）.结论 （1）在非小细胞肺癌组织中RhoC的高表达与PTEN的低表达密切相关,可能参与了NSCLC的演进.（2）PTEN基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度的非小细胞肺癌发生、发展中存在重要意义,可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标.     

ILK在宫颈癌组织中的表达及宫颈癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨整合素链接激酶（ ILK）在宫颈癌组织中的表达情况及其与宫颈癌细胞的侵袭能力的相关性。方法采用免疫组化法对湖南省益阳医专附属医院妇产科收集的59例宫颈上皮瘤变（ CIN）标本、44例术后病例确诊的宫颈癌标本及30例病理检查为正常宫颈组织的标本进行检测,分析ILK在上述几种组织标本中的表达水平,并分析ILK表达与宫颈癌患者的临床病理特征的关系。结果宫颈癌组织中的ILK表达阳性率（86．36％）显著的高于CIN I级标本的（62．5％）、CIN Ⅱ～Ⅲ级标本的（65．71％）及正常宫颈组织标本的（23．33％）（χ2值分别为5．144、4．725、29．737,均P＜0．05）。 CINⅠ级标本患者的ILK表达阳性率（62．5％）、CINⅡ～Ⅲ级标本的（75．71％）均显著的高于正常宫颈组织标本（23．33％）（χ2值分别为8．472、11．675,均P＜0．05）。 ILK在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌的低分化程度、发生淋巴结转移、深度的肌层浸润具有相关性（χ2值分别为5．173、4．810、4．020,均P＜0．05）,与年龄、FIGO分期、组织学类型无显著相关性（χ2值分别为0．275、1．991、0．129,均P＞0．05）。结论 ILK在宫颈癌组织中显著的高表达,同时与宫颈癌的分化程度、发生淋巴结转移、深度的肌层浸润具有相关性。     

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。