黑色素瘤细胞株对盐霉素的敏感性及其细胞周期变化研究

目的探讨不同黑色素瘤细胞株对盐霉素的敏感性,及盐霉素对敏感细胞株细胞周期的影响。方法 8种不同黑色素瘤细胞株,采用不同浓度盐霉素(40、20、10、5、1.25、0.625、0.312 5μmol/L)作用3d,计算盐霉素对8种黑色素瘤细胞株的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),挑选对盐霉素敏感的黑色素瘤细胞株;将敏感黑色素瘤细胞株分为对照组、0.1μmol/L盐霉素组、0.3μmol/L盐霉素组和1.0μmol/L盐霉素组,分别给予0、0.1、0.3、1.0μmol/L盐霉素处理细胞,处理48h时采用流式细胞仪观察各组细胞周期变化情况,1.0μmol/L盐霉素组处理24、48h后观察细胞形态的变化情况。结果 SK-MEL-19细胞对盐霉素的IC50[(0.82±0.60)μmol/L]最低,低于其他7种细胞株,SK-MEL-19细胞对盐霉素最敏感;作用48h后,1.0μmol/L盐霉素组SK-MEL-19细胞G0G1期[(39.90±3.43)%]、G2M期[(4.03±1.51)%]、S期[(33.99±1.09)%]细胞比例明显低于对照组[(48.92±1.14)%、(6.39±0.77)%、(44.69±1.36)%]、0.1μmol/L盐霉素组[(44.65±1.13)%、(8.23±0.96)%、(47.12±1.18)%]和0.3μmol/L盐霉素组[(46.18±2.88)%、(8.20±2.17)%、(45.62±1.83)%](P0.05),对照组及0.1、0.3μmol/L盐霉素组细胞周期比例两两比较差异均无统计学意义(P0.05);1.0μmol/L盐霉素组作用24h后部分SK-MEL-19细胞出现空泡,作用48h后细胞出现明显死亡,且细胞周期有小凋亡峰(subG1峰)出现,有细胞凋亡存在。结论盐霉素对SK-MEL-19黑色素瘤细胞株有较强杀伤作用,此杀伤作用可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

通过流式细胞计计数的细胞周期分析检测α肿瘤坏死因子对急性髓细胞白血病患者骨髓吸取物的作用

α肿瘤坏死因子(TNFα)对肿瘤细胞具有细胞毒和抗增殖作用,已经用作实体瘤和血液学的恶性肿瘤的治疗药物。由于TNFα有相当大的副反应,故需要一快速的试验方法以明确急性髓性白血病和慢粒患者对TNFα的反应性,作者报道了12例急性髓细胞自血病(AML)、4例慢性粒细胞白血病(CML)。AML 中M_11例、M_26例、M_42例、M_5l 例。CML 中原始细胞危象1例,加速期3例。首先抽取病人骨髓5—10ml,然后分离原始细胞作短期悬浮培养,把培养液分成2组,1组加入重组人类α肿瘤坏死因子(rhuTNFα),另1组不加rhuTNFα作为阴性对照.分别从培养0.5、2、4、6、8、10、22、25小时后的骨髓培养悬液中抽取4ml 液体。     

肿瘤坏死因子诱导肿瘤细胞凋亡及其调节机制的研究

背景肿瘤坏死因子(TNF)在体外能诱导某些正常细胞和大多数肿瘤细胞株(包括Hela细胞株)凋亡,其凋亡发生机制与细胞周期的关系中尚有许多问题需要探讨.目的研究细胞周期时相对TNF诱导Hela细胞凋亡的影响.设计非随机非对照实验研究.地点和对象实验在广东医学院生物化学与分子生物学研究所完成,对象为重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α,Sigma产品),Hela细胞株引自中国科学院上海细胞生物研究所.干预通过胸腺嘧啶核苷酸(TdR)阻断法阻滞Hela细胞的细胞周期,采用MTT法、流式细胞术和荧光染色分析TdR阻滞细胞和周期化的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性.主要观察指标TNF诱导TdR阻滞和周期化Hela细胞凋亡数.结果TdR阻滞细胞周期较周期化的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性降低.结论TNF诱导Hela细胞凋亡与细胞周期有关.     

B淋巴细胞刺激因子的研究进展及药学前景

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)是Shu等[1-4]于1999年首先发现并克隆的一种新的细胞因子,是肿瘤坏死因子(TNF)家族的第13位成员.BLyS作为B淋巴细胞的共刺激因子,参与体液免疫调控,在维持B细胞动态平衡中发挥重要作用.     

IL-2,TNFα激活的脐血单核细胞对K562细胞株杀伤作用的研究

目的　评价IL - 2 ,TNFα ,IL - 2联合TNFα激活的脐血单核细胞 (Mφ)对白血病细胞株K5 6 2的细胞毒作用。方法　将IL - 2 ,TNFα ,IL - 2联合TNFα分别激活的脐血单核细胞按效靶比 2 0 :1,5 0 :1加入白血病细胞株K5 6 2共同培养 4 8小时 ,采用MTT法检测各组的细胞毒效应。结果　IL - 2 ,TNFα分别激活的脐血单核细胞对白血病细胞株K5 6 2有杀伤作用 ,但较弱 ,而将IL - 2联合TNFα激活的单核细胞对其杀伤作用明显增强 ,杀伤率为 (35 .9± 2 .7) %及 (48.8± 3.5 ) % ,与单用IL - 2或TNFα比较有显著性差异。结论　激活的脐血单核细胞对K5 6 2细胞株有杀伤作用 ,IL - 2和TNFα联合应用能显着增加脐血Mφ的细胞毒效应 ,并呈现效靶比依赖关系。     

细胞因子调控的治疗学前景

细胞因子(cytokine)是大量肽类因子的总称,包括白细胞介素、细胞毒性因子(肿瘤球死因子,TNF—β)、分化因子(如克隆刺激因子)、生长因子、血小板因子4族,RANTES/STS 族等,这些因子生长迅速,功能多样,与传统激素相比具有以下待点:1)一种细胞可产生多种细胞因子;2)生物学作用有重叠现象;3)作用距离较短;4)大多通过细胞表面受体产生效应。细胞因子参与的组织病理学“双刃剑”是对细胞因子适当的描述,生长因子参与胚胎发育,生长、分化并可维持体内平衡。其     

肿瘤坏死因子诱导肿瘤细胞凋亡及其调节机制的研究

背景：肿瘤坏死因子(TNF)在体外能诱导某些正常细胞和大多数肿瘤细胞株(包括Hela细胞株)凋亡，其凋亡发生机制与细胞周期的关系中尚有许多问题需要探讨。目的：研究细胞周期时相对TNF诱导Hela细胞凋亡的影响。设计：非随机非对照实验研究。地点和对象：实验在广东医学院生物化学与分子生物学研究所完成，对象为重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α，Sigma产品)，Hela细胞株引自中国科学院上海细胞生物研究所。干预：通过胸腺嘧啶核苷酸(TdR)阻断法阻滞Hela细胞的细胞周期，采用MTT法、流式细胞术和荧光染色分析TdR阻滞细胞和周期化的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性。主要观察指标：TNF诱导TdR阻滞和周期化Hela细胞凋亡数。结果：TdR阻滞细胞周期较周期化的Hela细胞对TNF诱导凋亡的敏感性降低。结论：TNF诱导Hela细胞凋亡与细胞周期有关。     

肿瘤坏死因子临床免疫治疗肿瘤的研究进展

<正> 人们早就发现由于细菌感染而使机体内肿瘤自然消退的现象,从而推测细菌或其产物具有抗肿瘤作用。但这种作用并不是直接的,而是由于在细菌或其产物的刺激下,机体内产生某些细胞因子作用的结果。1975年Carswell等发现,经卡介苗(BCG)感染的小鼠静注大肠杆菌内毒素(LPS)2小时后,其血清中含活性较高的肿瘤细胞毒因子,此种因子可使带瘤动物肿瘤发生明显坏死,并对体外培养的肿瘤细胞具有细胞毒作用,而对正常组织细胞无素性。由OID等命名为肿瘤坏死因子(TNF)。TNF是单核巨噬细胞系统细     

肿瘤坏死因子与白血病

肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)是由Coley和Carswell等人发现的,其可引起肿瘤组织的坏死。近年来发现TNF在体外可抑制白血病细胞的生长,这给白血病的治疗带来新的启发。一、肿瘤坏死因子的产生及生物特性 Coley最先描述了肿瘤病人接受链球菌和沙雷氏菌后,肿瘤可发生坏死的现象,以后证明是由内毒素所致,即G杆菌的细胞壁的脂多糖成分(Lipopolysaccaride,简称LPS)引起肿瘤的坏死。1975年Carswell报告预先接种BCG后再注射内毒素的动物血清中存在一种因子,这种因子可引起小鼠和兔体内的肿瘤出血性坏死,称之为肿瘤坏死因子。有一些实验证据提示巨噬细胞是TNF     

肿瘤坏死因子在恶性血液病中的作用

本文就肿瘤坏死因子(TNF)对白血病细胞的毒性作用,包括抑制和促进自血病细胞增殖的双向作用,恶性血液病时TNF的水平等问题作一综述。     

白血病细胞系纤溶酶原活化物抑制物2(PAI-2)的产生与分泌

作者研究细胞分化诱导剂咐(口拜)豆蔻醋酸盐(phorbol myristate acetate,PMA),维甲酸(RA)、地塞米松(Dex)和重组细胞因子,如肿瘤坏死因子(TNF)-α,转化生长因子(TGF)-β、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和白细胞介素(IL)-6对早幼粒细胞细胞株(PL-21)细胞分化和PAI-2产生的影响。1.PL-21向巨噬细胞分化和产生PAI-2的关系:在PL-21培养液内添加PMA10～100nm,细胞培养上清液和细胞溶解产物中PAI 活性均明显上升,增加70倍,PAI-1和PAI-2都增加。PAI-2比PAI-1在培     

肿瘤坏死因子-α与充血性心力衰竭的关系研究进展

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种重要的细胞因子，与其受体结合后能产生多种生物学效应．如抑制肿瘤生长、细胞毒作用、免疫刺激等。近年研究发现，该因子参与了充血性心力衰竭(CHF)的病理生理过程，与CHF的发生、发展密切相关。     

原发性肾小球肾炎病理改变和肿瘤坏死因子的关系

肿瘤坏死因子(TNF_α)是由单核巨噬细胞产生的一种细胞因子,它不仅对人与动物的多种肿瘤细胞有细胞毒和细胞静止作用,而且是机体炎症和免疫的重要调节因子。近年来,国外许多实验研究证实,TNF_α可以刺     

外周血单核细胞来源树突状细胞体外扩增及诱导抗乳腺癌免疫的研究

目的研究外周血来源树突状细胞(DC)的体外扩增及诱导特异性抗乳腺癌细胞的免疫效应。方法(1)从外周血中分离单个核细胞后,获得单核细胞(monocyte,Mo)。粒-单集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化扩增培养7d后,应用流式细胞术进行表型分析。(2)诱导单核细胞分化的第3天加入人乳腺癌细胞株3A0的冻融抗原培养4d后,获得负载肿瘤抗原的成熟DC;将致敏DC与从外周血中分离的同种异体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝法检测CTL及上清液对人乳腺癌细胞株3A0、人胚肾细胞株293T(对照细胞)、人肝癌细胞株HCCC-9810的细胞毒作用。结果(1)外周血来源Mo在GM-GSF和IL-4作用下,第7天后可分化生成成熟的DC,高表达DC特异性抗原CDla、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)HLA-DR、CD83。(2)DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活同种异体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生。不同浓度CTL及上清液对乳腺癌细胞3A0有特异性杀伤、抑制作用(P<0.05)。结论外周血中Mo可体外分化扩增为成熟的功能性DC,并诱导出特异性杀伤乳腺癌细胞的免疫效应。     

“检验医学新技术和新进展”继续教育试题答案

第1期一、单选题1.B;2.B;3.C;4.D;5.A;6.A;7.A;8.C;9.C;10.D二、问答题1.答:肿瘤坏死因子(TNF)是炎症反应过程中最早产生的细胞因子之一,由它可激发细胞因子反应网络的连锁反应,产生大量的IL-1、IL-6等,促进炎症反应;同时TNF能增加人类组织相容性抗原的表达,促进T、B细胞增殖及免疫球蛋白的合成,进行有效免疫调节,其中与TNF浓度密切相关。2.答:肝脂酶由肝实质细胞合成,转运到肝窦状隙内皮细胞表面而发挥生理作用。存在于肝内皮细胞表面的肝脂酶参与中密度脂蛋白(IDL)向低密度脂蛋白(LDL)转变过程,分解后的IDL被肝细胞摄取;也…     

肿瘤坏死因子受体的生理作用及在疾病检测中的意义

肿瘤坏死因子受体（TNF－R）在抗TNF、抗炎、刺激细胞增殖、诱导细胞毒等方面具有重要的生理活性，其表达量的多少与某些疾病密切相关．TNF－R的检测对这些疾病的诊断、治疗及预后等具有一定意义。     

Th17细胞与自身免疫性疾病

根据最近的研究,CD4+T细胞根据发育、功能及分泌细胞因子的作用不同,分为Th1、Th2、Treg和Th17四大亚群[1].作为CD4+效应T细胞的新亚群,来源于Th0的Th17主要分泌白介素IL 17A、IL 17F、IL 22、IL 26和肿瘤坏死因子(TNF)等细胞因子.这些炎性因子介导了炎性反应(防御胞外病原菌的感染)、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等.     

淋巴细胞功能亢进与造血组织损伤

越来越多的证据表明,淋巴细胞功能亢进与造血组织损伤的关系非常密切。现就该方面研究作一综述。1　淋巴细胞及其功能亢进所致血液系统疾病　1990年Ro magnami等[1 ] 研究证实人类辅助性T细胞(Th)存在辅助性T细胞1(Th1细胞)、辅助性T细胞2 (Th2细胞)两种亚型,分别分泌Ⅰ类细胞因子和Ⅱ类细胞因子。Th1细胞优势分泌γ干扰素(IFN γ)及IL 2 ,以分泌IFN γ为主要特征,主要介导细胞免疫,活化细胞毒性T淋巴细胞(CTL)或激活CD8 T细胞,进而产生大量凋亡配体[如肿瘤坏死因子(TNF)等];Th2细胞主要产生IL 4、IL 6、IL 10 ,以IL 4的分泌…     

姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制

目的:观察中药提取物姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞株A549生长抑制率和对细胞凋亡相关因子表达的影响,探索姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制。方法:实验于2003-10/2004-10在上海东方医院中心实验室完成。用购于中科院上海细胞所肺腺癌细胞株A549,将培养的A549细胞暴露于姜黄素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及两者联合中,分4组,每组6孔,姜黄素组(40μmol/L姜黄素)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组(25μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)、联合组(40μmol/L姜黄素与25μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合)、对照组(RPMI1640细胞培养液)。①用四氮唑蓝法测定姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组以及联合组的吸光值,根据吸光度值计算肺癌细胞株A549细胞生长抑制率。②应用ApoAlert半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系列比色法凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达。③反转录聚合酶链反应测定凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达。结果:①抑制率:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺腺癌A549细胞的抑制明显低于姜黄素,25μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用24h细胞抑制率仅有(2.65±1.416)%;两药联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用明显增加[高达(30.97±1.318)%,P<0.01]。②凋亡相关因子:联合组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达明显高于姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组、对照组[联合组:(50.77±0.812),(73.31±0.730)μmol/L;姜黄素组:(23.61±0.398),(26.84±1.511)μmol/L;肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组:(9.63±1.024),(14.21±0.138)μmol/L;对照组:(3.69±0.486),(2.87±0.633)μmol/L,P<0.01];联合组、姜黄素组的bcl-2/bax明显高于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组(2.55±0.138,2.24±0.197,0.58±0.046,P<0.01)。结论:肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞耐受,姜黄素可能通过调整bcl-2/bax的表达,进而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族,增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性。     

抗原提呈细胞对T细胞产生细胞因子的影响

抗原提呈细胞(APC)是影响细胞因子性质的因素之一。本研究采用已建立的T细胞株分析表达不同粘附分子的各种APC对T细胞增殖和细胞因子分泌的影响。对CD_4~+、抗原特异性、同种异体特异性T细胞株进行了分析,各种细胞株在PMA和Ionomycin的刺激下均能产生IL-2、IL-4、γ干扰素和α-肿瘤坏死因子,但IL-4和γ干扰素或α-肿瘤坏死因子之间的比率变化很大。受抗原刺激后所产生的