神经肽Y对血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用

为探讨神经肽Ｙ对血管壁平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象,运用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Ｙ因管平滑肌细胞凋亡基因ｂｃｌ－２,ｂａｘ和ｆａｓ表达的影响,以阐明神经肽Ｙ参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的分子机制。     

放化疗诱导入直肠癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

本文采用离体培养的人直肠癌细胞系为研究对象,比较了5-Fu-CDDP(顺铂)联合应用、单一5-Fu或CDDP、单一X射线以及5-Fu-CDDP-X射线联合诱导人直肠癌细胞凋亡水平的差异及其相关基因表达,以期为临床制定合理的直肠癌综合治疗方案提供理论依据。 材料与方法 一、肿瘤细胞系的培养 HR 8348细胞系源自人直肠低分化腺癌。细胞培养采用DMEM培养基,加10％的胎牛血清,按常规方法培养。     

Vp-16诱导肺癌细胞凋亡过程中相关基因表达变化

以Ｖｐ１６作用于肺癌细胞，利用免疫细胞化学、流式细胞（ＦＣＭ）及ＲＴＰＣＲ等技术，观察在不同药物剂量与作用时间下，凋亡相关基因ｂｃｌ２、ｂａｘ、Ｐ５３、Ｃｍｙｃ与ＩＣＥｍＲＮＡ及蛋白表达的动态改变，从而探讨其对小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）及非小细胞...     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞凋亡及相关基因表达初步研究

随着研究手段的完善与对细胞凋亡作用的认识，现已证明细胞凋亡在免疫系统的发育以及免疫反应的过程中起重要作用。ＳＬＥ患者及实验小鼠体内细胞凋亡紊乱，表明细胞凋亡过程可能参与ＳＬＥ的发病。本研究应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）以及流式细胞技术，检测２９例ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）的凋亡及免作者单位：６１００４１成都，华西医科大学第一临床医学院内科疫组化技术检测ｂｃｌ２、Ｆａｓ蛋白的表达，旨在探讨ＳＬＥ患者的免疫异常与细胞凋亡及其调控之间的关系。１　资料与方法１１　…     

波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。     

三氧化二砷诱导小细胞肺癌细胞凋亡及p53、bcl-2基因表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）诱导小细胞肺癌细胞凋亡及其机制。方法：采用末端脱氧核苷酰转移（TUNEL）法检测细胞凋亡，免疫组织化学（SABC）法分析As2O3对小细胞肺癌细胞（NeI-H细胞）p53、bcl-2基因蛋白表达的影响。结果：As2O30.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L作用72h，NeI-H细胞均可呈现凋亡所特有的亚G1峰，凋亡比率随药物作用浓度增加和作用时间延长而增高。实验组p53基因蛋白表达较对照组明显增多，药物浓度越高表达越多（P=0.001）；bcl-2基因蛋白表达较对照组明显减少，药物作用浓度越高表达越少（P=0.001）。结论：As2O3抗肿瘤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现的，其机制与上调p53基因表达及下调bcl-2基因表达有密切关系。     

长期高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡和功能相关基因表达的影响

目的　探明长期高浓度葡萄糖对体外胰岛细胞功能和凋亡相关基因表达的影响。方法应用放免法检测不同浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞在葡萄糖刺激时培育上清液和细胞内的胰岛素水平 ;应用半定量多重RT PCR和Northern印迹法检测培养后IDX 1(Isletduodenalhomeobox 1) ,葡萄糖激酶 (GK ) ,葡萄糖转运子 2 (GLUT2 ) ,C/EBPβ和Bcl xmRNA的表达情况 ;应用TUNEL法检测培养后的细胞凋亡百分率。结果　 ( 1)长期高浓度葡萄糖培养导致大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应降低和细胞内胰岛素含量的减少 ;( 2 )高糖培养 14天可以使大鼠胰岛细胞IDX 1和GLUT2mRNA表达明显减少 (P <0 .0 5 ) ,C/EBPβmRNA表达明显增加 ,GKmRNA表达无明显变化 ;( 3 )高糖培养可以明显增加大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ;( 4 )大鼠胰岛细胞高糖培养 14天后Bcl xSmRNA水平明显增加 ,Bcl xLmRNA水平无明显变化 ,Bcl xL/Bcl xSmRNA比率明显减少 (P <0 .0 5 )。结论　 ( 1)长期高糖培养可以诱导大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡和功能缺陷 ;( 2 )IDX 1表达的变化在大鼠胰岛细胞功能缺陷中起重要作用 ;( 3 )大鼠胰岛细胞的Bcl xL/Bcl xS比率变化在高糖所致的胰岛细胞凋亡中起重要作用。     

非甾体抗炎药对胃癌细胞凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的明确非甾体抗炎药(NSAID)对胃癌细胞凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法应用MTT比色法检测NSAID对胃癌细胞生长活力的影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色、AnnexinV/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡;RTPCR、Westernblot法检测凋亡相关基因bcl2、bax表达水平的改变。结果吲哚美辛(Indo)和阿司匹林(Asp)对胃癌细胞株AGS均有生长抑制作用,且呈时间/浓度依赖性;在药物作用6～24h生长抑制率改变最为明显;NSAID使AGS细胞发生细胞凋亡的形态学改变,Indo800μmol/L作用24h凋亡率为9.34%±1.99%,48h为38.97%±3.36%;Asp8mmol/L48h凋亡率为17.60%±3.30%,Indo的凋亡诱导作用更为明显;随着药物作用时间的延长,bcl2mRNA表达逐渐减弱,bax基因及蛋白表达逐渐增强,在药物作用6～24h改变最为明显,Bcl2蛋白未检测到。结论NSAID可诱导胃癌细胞凋亡,为NSAID的抗肿瘤应用提供了理论依据;NSAID可能通过调控bcl2、bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。     

三氧化二砷选择性诱导人肝癌细胞凋亡及 相关基因的实验研究

目的 明确三氧化二砷对人肝癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制。方法 用四甲基偶氮唑蓝法、AO/EB荧光染色法、透射与扫描电镜观察、DNA电泳、流式细胞术、TUNEL法及免疫组织化学等方法,观察了三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株QGY-7701、QGY-7703和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响。结果 三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞QGY-7701和QGY-7703的生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡形态学和生化学改变,并使细胞周期阻滞于S期,且bcl-2基因表达明显下降,bax和Fas基因表达显著增强;三氧化二砷对正常人肝细胞株L-02无明显作用。结论 三氧化二砷对人肝癌细胞有显著的选择性诱导凋亡作用,且受到多种基因调控,这一结论为应用三氧化二砷治疗原发性肝癌提供了可靠的实验依据。     

多柔比星联合X射线照射诱导胶质瘤细胞凋亡效果观察

用多柔比星联合X射线照射诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡,HE染色显微镜下观察细胞凋亡情况,用流式细胞仪计算细胞凋亡率.结果HE染色显微镜下观察可见诱导后细胞皱缩,密度增高,染色质边集,多核巨细胞形成,凋亡小体形成.联合治疗组肿瘤细胞凋亡率为13.64%,低于化疗组的29.14%和半量联合治疗组的30.52%(P均0.05).认为联合化疗、放疗可诱导胶质瘤细胞凋亡;半剂量联合治疗效果强于全剂量.     

5-氟脲嘧啶诱导人胆囊癌细胞凋亡的研究

为研究 5 -氟脲嘧啶 (5 - FU)对胆囊癌细胞凋亡的影响 ,在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的 5 -FU ,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期变化。在 5 - FU作用下 ,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变 ;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带 ;流式细胞仪测定出现典型的凋亡峰 ;其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高 (与对照组比较 ,P<0 .0 5 )。认为 5 - FU可诱导胆囊癌细胞发生凋亡 ,其凋亡率随药物浓度的提高而升高     

沉默Survivin人耐药肺癌细胞凋亡相关基因表达变化及临床意义

目的探讨沉默Survivin基因后人耐药肺腺癌(A549DDP)细胞系凋亡相关基因表达变化及临床意义。方法应用RT-PCR法及Western印迹法比较Survivin在人肺腺癌A549细胞系及其耐药A549DDP细胞系的表达水平;通过小分子RNA干扰沉默Survivin基因,并采用微阵列PCR基因芯片(PCR-Array)技术比较沉默Survivin后A549DDP细胞凋亡相关基因表达水平变化。结果 (1)Survivin mRNA、Survivin蛋白在人耐药非小细胞肺癌细胞系呈现高表达。(2)沉默Survivin后A549DDP细胞部分抗/促凋亡基因表达发生改变,促凋亡基因TP53、CASP3、CASP7呈高表达,抗凋亡基因bcl-2、TRAF1、BFAR呈低表达。结论 (1)Survivin与部分抗/促凋亡基因共同参与了非小细胞肺癌耐药的发生。(2)封闭Survivin可改变耐药肺癌细胞的促/抗凋亡基因的表达,Survivin可能作为上游调控点参与调控部分促/抗凋亡基因组的表达。(3)Survivin可能成为逆转肺癌耐药的一个新靶点。     

非小细胞肺癌的同步放化疗

非小细胞肺癌的同步放化疗黄海茵郭映华赵丽华林琴娟目前，对于不能手术的原发性非小细胞肺癌患者的治疗仍未取得满意的疗效。临床上约２／３的Ⅲ期患者已失去手术指证［１］，单用化疗或放疗的远期生存率不高。同步放、化疗是近年发展起来的肿瘤综合治疗的一种新形式，对...     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人胃癌耐药细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)是最近发现的肿瘤坏死因子 (TNF)家族新成员 ,因其独特结构和作用特点 ,有可能成为临床上重要的抗肿瘤因子[1] 。许多研究证实 ,TRAIL可诱导许多恶性肿瘤细胞凋亡 ,包括血液系统恶性肿瘤细胞、乳腺癌等[2 ,3 ] 。我们在另一实验中已证实TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡 ,现进一步研究TRAIL体外诱导胃癌耐药细胞的凋亡作用 ,为临床上解决胃癌多药耐药这一难题提供新的思路和方法。一、材料和方法1.材料 :SGC790 1 VCR胃癌耐药细胞引自第四军医大学西京医院消化病研究所 ,为SGC 790 1胃癌细胞经长…     

Bax基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

ｂｃｌ 2及其同源类似物是凋亡调节因子中最重要的家族之一。ｂｃｌ 2家族蛋白能通过多种方式调节细胞死亡途径 :(1)与其他ｂｃｌ 2家族成员二聚化形成同源或异源二聚体 ,且可能通过相互作用改变细胞生与死平衡 ;(2 )与非同源性蛋白结合 ;(3)形成离子通道或孔洞[1] 。Ｂａｘ基因是ｂｃｌ 2家族中的一员 ,与ｂｃｌ 2家族其他成员的氨基酸同源性主要表现在高度保守的ＢＨ1和ＢＨ2 结构域。人Ｂａｘ基因位于第 19号染色体 ,ｑ13 .3～ｑ13 .4内[2 ] 。Ｂａｘ过表达能对抗ｂｃｌ 2抑制细胞死亡的活性 ,在促凋亡因素刺激下 ,ｂｃｌ 2 /Ｂａｘ比值…     

原发性干燥综合征唇腺组织中细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的研究原发性干燥综合征(primarySj觟gren'ssyndrome,pSS)患者唇腺组织上皮细胞凋亡及相关基因表达与pSS组织损伤的关系。方法应用原位末端标记及免疫组织化学的方法,对30例pSS患者及10例对照唇腺组织中凋亡细胞及Fas、FasL、Bc1-2相关基因蛋白的表达进行检测和组织细胞定位。结果pSS患者唇腺组织中腺泡上皮细胞(AEC)及导管上皮细胞(DEC)凋亡率均明显高于对照组(P<0.001),而浸润的单核细胞(IMC)凋亡率与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。pSS患者唇腺AEC、DEC及IMC中,Fas阳性表达的细胞百分比均明显高于对照组(P<0.001),并与细胞凋亡率呈正相关(r=0.431,0.415,0.804;P<0.05);FasL阳性表达的细胞百分比均明显高于对照组(P<0.001),并与细胞凋亡率呈正相关(r=0.654,0.619,0.489;P<0.01);Bcl-2阳性表达的细胞百分比,AEC和DEC均明显低于对照组(P<0.05),而IMC明显高于对照组(P<0.001),DEC和IMC与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.400,-0.364;P<0.05),但AEC与细胞凋亡率无相关性(r=-0.329,P>0.05)。结论pSS患者唇腺组织中上皮细胞凋亡增加和淋巴细胞凋亡减少可能是导致腺体破坏进而功能丧失的原因之一;Fas、FasL增加及Bcl-2减少皆与促进细胞凋亡有关;Bcl-2在pSS唇腺IMC中表达增加暗示IMC似乎逃脱凋亡,形成炎性浸润灶。     

槲皮素诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡的实验研究

目的探讨槲皮素诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法应用透射电镜观察药物作用组及对照组细胞形态学变化;AnnexinV荧光染色和流式细胞仪检测药物作用组及对照组HepG2细胞凋亡和死亡率,以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测药物作用组及对照组凋亡相关基因fas的变化。结果槲皮素对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡,凋亡细胞表现为细胞固缩、核染色质碎裂,流式细胞仪检测凋亡率为13.2%,细胞停在G1和G2期。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存。在槲皮素诱导HepG2细胞凋亡过程中,凋亡相关基因fas转录水平比用药前增强。结论诱导凋亡为槲皮素抑癌的机制之一,槲皮素诱导HepG2细胞凋亡可能与fas基因表达有关。     

中药抗癌方诱导人结肠癌细胞株细胞凋亡的实验研究

目的;研究中药的抗癌方（ＫＡＦ）对人结肠细胞凋亡的影响。方法：选择人结肠癌细胞株ＨＢ８６９３作为靶细胞,用ＭＴＴ掺入试验测定细胞毒作用,用流式细胞仪检测计算ＨＣ８６９３细胞株的亚Ｇ１峰细胞（凋亡）的百分率,并与空白对照组比较。     

白藜芦醇诱导人卵巢癌细胞COC1细胞凋亡的研究

目的 探讨白藜芦醇（resveratrol，Res）对妇女卵巢癌COC1细胞凋亡的诱导作用。方法 采用Hoechst 33258和PI荧光染色法、DNA电泳及流式细胞术分析法，检测Res对COC1细胞的作用。结果 经Res处理的COC1细胞出现核固缩，胞浆凋亡小体形成，琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带。凋亡细胞发生率与药物浓度和作用时间呈正相关。结论 Res对肿瘤细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡。