高压氧对周围神经损伤后再生作用机理的探讨

通过手术切断大白鼠右侧坐骨神经，应用显微外科技术进行端－端吻合并辅以高压氧治疗；观察该神经功能的恢复、组织学改变及神经吻合口瘢痕的含量，探讨高压氧对周围神经损伤后再生的影响。结果表明：高压氧治疗对周围神经损伤后不同时期的修复过程有明显的促进作用，可减轻神经间质水肿、减少神经吻合口的瘢痕、加快轴索再生和神经功能恢复。     

周围神经端侧吻合新方法大鼠实验模型的建立

目的 设计制作端侧吻合新方法的动物实验模型，并进行检测。方法实验用Wistar大白鼠，共28只。按拟行神经吻合的方式，将大鼠的左下肢定为实验侧，右下肢定为对照侧。实验侧：切断大鼠左侧胫神经，将胫神经的近断端与腓总神经端侧吻合；对照侧：切断大鼠右侧腓总神经，将腓总神经的远断端与胫神经端侧吻合。3个月后，进行电生理检查，比较两侧固定刺激量的波幅、潜伏期、最大波幅。比较实验侧吻合口远、近端的腓总神经纤维计数。结果实验侧与对照侧相比，波幅、潜伏期、最大波幅差异无统计学意义。实验侧吻合口远侧的神经纤维计数多于近侧神经纤维计数（P〈0．05）。结论端侧吻合新方法的轴突再生机制为胫神经轴突发芽，再生的轴突通过吻合口沿着腓总神经外膜或束膜管道向靶肌肉生长。     

大鼠坐骨神经损伤后运动神经元死亡数量的研究

目的 :研究周围神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元胞体的死亡数量。方法 :先计算正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量是否对称 ,再切断并原位吻合右侧大鼠坐骨神经 ,左侧不作任何处理、作为对照 ,于术后不同时间取L4 ～L6节段脊髓作H·E染色 ,计算脊髓前角运动神经元胞体数量的变化。结果 :正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量呈对称分布 ;右侧坐骨神经损伤后 ,其脊髓前角运动神经元胞体数量较左侧减少。结论 :大鼠坐骨神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元的胞体有死亡 ,其死亡具有一定的特征。     

大鼠周围神经损伤后感觉神经元死亡数量的研究

目的 :研究周围神经损伤后 ,脊神经节感觉神经元的死亡数量。方法 :先计算正常SD大鼠两侧的脊神经节感觉神经元胞体数是否对称 ,再切断并原位吻合右侧大鼠坐骨神经 ,左侧不作任何处理、作为对照 ,于术后不同时间取L4～L6脊神经节作HE染色计算脊神经节感觉神经元胞体数量的变化。结果 :正常SD大鼠两侧的脊神经节感觉神经元胞体数量呈对称分布 ;右侧坐骨神经损伤后 ,其脊神经节感觉神经元胞体数量较左侧减少。结论 :大鼠坐骨神经损伤后 ,脊神经节感觉神经元的胞体有死亡 ,其死亡具有一定的特征。     

透明质酸对周围神经修复后瘢痕形成的预防作用研究

目的 探讨外周神经损伤后，神经吻合口局部应用透明质酸（hyaluronic acid，HA）对神经吻合口瘢痕形成的预防作用。方法 48只成年SD大鼠分别行切断坐骨神经后神经外膜吻合术，随机分为实验组（HA组，吻合口周围应用HA凝胶）和对照组（等渗盐水组）。分别于术后4周和12周观察吻合口周围瘢痕的产生状况，包括：（1）大体观察皮肤和肌肉、筋膜愈合情况以及神经吻合口与周围肌腔隙的粘连情况；（2）Masson染色；（3）Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化染色；（4）透射电镜观察。结果（1）大体观察：HA对大鼠皮肤及肌肉筋膜的正常愈合无不良影响，实验组与对照组差异无统计学意义；实验组在4周、12周神经吻合口与周围组织粘连情况均轻于对照组（P〈0．05）。（2）Masson染色和Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化结果显示，实验组神经吻合口胶原纤维含量比对照组明显减少（P〈0．05）。（3）透射电镜观察可见HA组吻合口处神经纤维排列整齐，胶原纤维含量少、排列规则；而对照组胶原纤维含量较多，排列紊乱。结论 HA可以有效减少周围神经吻合口神经外膜胶原纤维的形成，进而促进周围神经的再生。     

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的　用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法　SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果　伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论　Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。     

坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元死亡性质的探讨

目的:研究大鼠坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元的死亡性质,以便加以保护,促进神经损伤后运动功能的恢复。方法:切断大鼠右侧坐骨神经,再原位吻合,于术后不同时间取L_4～L_6节段脊髓,作石蜡切片,通过H·E染色和Hoechst33258染色,光镜下分别观察前角运动神经元胞体的形态学变化特征;作超薄切片,电镜下观察前角运动神经元胞体超微结构的变化规律。结果:光镜下,右侧脊髓前角运动神经元胞体尼氏体和细胞核染色质浓缩;电镜下,细胞膜内陷,将细胞分割成凋亡小体,然后裂解,细胞体消失;而左侧前角运动神经元胞体均一、无变化。结论:坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元有死亡,死亡性质是细胞凋亡。     

大鼠坐骨神经损伤后显微及超微结构的三维重建

利用大鼠坐骨神经损伤后再生神经组织连续切片重建其显微及超微结构的三维图像。用硅胶管桥接90只大鼠左侧坐骨神经长6mm缺损，术后7、15、30、60、90天取坐骨神经行光、电镜检查，经显微摄像和扫描仪采集输入微机进行图像配准和分割，采用直接体素绘制模型实现三维重建和显示。结果显示，利用光镜和电镜图像完成了坐骨神经损伤后变性、再生过程中神经纤维及附属结构的形态变化的三维图像重建。重建结果能直观、形象地揭示大鼠再生坐骨神经纤维与正常神经纤维结构形态的差异，可作为周围神经损伤研究的一种新手段。     

TrkA在周围神经损伤后的表达

目的:确定Trk(Tyrosine kinase)A在损伤周围神经的表达分布。方法:切断大鼠坐骨神经再吻合后,不同时段上,取脊髓、脊神经节和吻合的神经段作LSAB免疫组化染色,光镜进行观察。结果:TrkA只在损伤的脊神经节感觉神经元胞体和坐骨神经呈免疫组化阳性反应。结论:TrkA只在损伤的脊神经节感觉神经元胞体和坐骨神经表达。     

周围神经损伤后高压氧治疗的病理观察

为了观察高压氧对神经损伤后的治疗作用,80只大鼠用于此实验,实验组40只,对照组40只。用无齿蚊式钳造成右侧坐骨神经轴索断裂伤,伤后实验组行高压氧治疗。术后2～8周活杀取材行Roger法染色观察轴索再生;Loyez法染色观察髓鞘再生及透射电镜观察超微结构。结果表明实验组神经纤维再生明显优于对照组。提示:高压氧能促进神经间质水肿的吸收,改善组织缺氧状态;高压氧能加速雪旺氏细胞的增生,促进神经纤维的再生。     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓病理改变

目的　研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓的病理改变。方法　火器伤组致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点 ,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经 ,分别在光电镜下观察伤后 1天、3天 ,1周、2周、4周、12周时腰段脊髓的病理改变。结果　火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化 ,切割伤组则未见这些病理改变。结论　火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重 ,运动神经元存活数量显著减少     

TrkA在损伤坐骨神经的表达部位

目的:确定Trk(Tytosine kinaae)A在损伤坐骨神经的表达部位。方法:切取大鼠坐骨神经0.8cm,再行吻合术后,不同时段上,取吻合的神经段作LSAB免疫组化染色,通过免疫电镜方法进行观察。结果:TrkA只在损伤神经的轴突呈免疫组化阳性反应。结论:TrkA只在损伤的轴突表达,而髓鞘不表达。     

大鼠自体神经移植与外周神经挤压再生模型脊髓背角c-fos表达的比较研究

目的建立大鼠外周神经挤压神经再生模型和大鼠外周神经自体神经移植神经再生模型,观察对比各模型神经恢复过程中机械痛觉超敏的变化及脊髓背角c-fos表达的改变,探讨两种神经再生模型中神经再生与神经性疼痛的联系。方法雄性Wistar大鼠60只随机均分成3组,A组为坐骨神经挤压模型组;B组为自体神经移植模型组;C组为假手术组。分别制成模型后,术后18d起检测机械刺激阈值及c-fos表达计数。结果A、B组各项指标与C组比较有显著差异;A组各指标与B组有显著差异。结论两种模型再生神经生长进入去神经支配区域时,均出现支配区域的痛觉超敏和疼痛相关行为,神经性疼痛的发生时间、强度以及恢复均有不同,并和神经再生情况相关,提示神经性疼痛是评估神经功能恢复的一个重要的参数。     

兔坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元及胶质细胞凋亡规律

目的：探讨坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元及胶质细胞凋亡规律。方法：65只大耳白兔分为正常对照组，高速弹丸震荡伤组（震荡伤组）和功能伤组，震荡伤组致伤靶点为兔右大腿外侧坐骨神经体表投影线中点，切割伤组在同一水平切断右坐骨神经，应用DNA电泳，原位末端标记法（TUNEL）染色和流式细胞仪进行细胞凋亡定性定量检测。结果：震荡伤组伤后2周运动神经元数明显减少，伤后1，2周，可见TUNEL阳性运动神经元及胶质细胞，DNA电泳出现凋亡梯形带，流式细胞仪检测可见亚二倍体峰，震荡伤组伤后1，2周，细胞凋亡百分比分别为10．6％和26．4％，切割伤组仅在4周时有少量阳性运动神经元，结论：与切割伤组比较，震荡伤组细胞凋亡发生早，数量多，凋亡是坐骨神经高速弹丸震荡伤后运动神经元数量减少的主要机制。     

神经生长因子及三磷酸腺苷联合应用修复大鼠周围神经损伤及对失神经肌肉的作用

目的 探讨腹腔联合应用鼠源性神经生长因子(NGF)及三磷酸腺苷(ATP)对周围神经损伤修复及失神经肌肉的作用. 方法 选取SD大白鼠96只,体重(250±15)g,雌雄不限,按随机数字表法分为等渗盐水组(NS组)、ATP组、NGF组、ATP+NGF组;选取大鼠坐骨神经,暴露后人为切断造成3 mm缺损损伤,通过硅胶管连接两神经断端,建立神经再生室.术后立即对各组分别予以腹腔内注射等渗盐水0.4 ml、ATP0.4 ml(1 mg/ml)、NGF0.4 ml(0.2 μg/ml)、NGF+ATP 0.4 ml(ATP 1 mg/ml、NGF 0.2 μg/ml),之后每3 d通过腹腔注射1次.在第2,4,6,8周各组分别取6只大门鼠行坐骨神经指数测定、大体观察、坐骨神经肌电图检查,处死大鼠后切取标本观察再生室区段神经再生状况、腓肠肌湿重,HE染色观察腓肠肌纤维直径及截面积. 结果 术后第2,4,6,8周各组分别取6只大白鼠测定实验数据,NGF+ATP组坐骨神经指数、神经传导速度、腓肠肌湿重优于NS组及单纯ATP或NGF组(P＜0.05).大体观察可见NGF+ATP组患侧足趾红肿程度较其余三组轻,局部溃烂亦相对少,未见足趾脱落者.术后2周,各组神经再生室内可见纤细神经纤维生长,但未将神经断端连接一起.术后4,6,8周,神经再生室内可见神经纤维通过,NGF+ATP组相对其余三组神经纤维生长生长情况较好,且局部炎性反应及纤维粘连轻.NGF组神经纤维生长情况好于ATP组,但二者均优于NS组.第2,4,6,8周神经电生理及腓肠肌湿重NGF组优于ATP组,第4,6,8周坐骨神经指数、肌纤维直径及截面积NGF组优于ATP组(P＜0.05),且各时相点NGF组及ATP组的观测指标均明显优于NS组(P＜0.05). 结论 (1)联合应用NGF+ATP对神经损伤修复及失神经肌肉作用明显,优于单纯应用NGF及ATP;(2)单纯应用ATP对神经损伤修复及失神经肌肉有一定作用,但效果劣于NGF及NGF+ATP.     

兔坐骨神经牵拉伤MTR值与肢体功能的相关分析

目的：探讨兔坐骨神经急性牵拉伤后不同时间点牵拉远段神经磁化传递率（MTR）与肢体功能的相关关系。方法：选取20只新西兰大白兔,右后肢为损伤侧,建立坐骨神经牵拉伤模型;左后肢为假手术侧。随机将实验兔分为两组,A组（n=12）于术前1天、术后1和3天以及1、2、4、6和8周分别行双侧后肢磁化传递MRI扫描,测量牵拉远段神经及假手术侧神经的MTR值;同时对实验兔的肢体功能进行展趾反射和改良Tarlov评分,分析术后1～8周MTR值与肢体功能的相关性;B组（n=8）于上述各时间点进行病理学检查。结果：牵拉远段神经的MTR值于损伤后1天明显降低,2周时达最低值,4～8周逐渐升高至正常水平,各时间点MTR值与假手术侧相比差异均有统计学意义（P〈O．05）。牵拉伤后1天兔展趾反射及Tarlov评分降至最低;伤后1天～1周评分保持较低水平;伤后2～8周评分逐渐增高、肢体功能逐渐恢复。伤后1～8周牵拉远段神经MTR值与肢体功能评分呈正相关（r=0．638,P％0．01）。病理检查显示术后1周神经开始退变,2周时髓鞘退变最显著,4周后开始恢复。结论：牵拉远段神经的MTR值与肢体功能评分呈正相关,提示MTR值可用于监测伤后神经功能退变及再生的情况。     

坐骨神经挤压模型大鼠脊髓背角c-fos表达的研究

目的 建立大鼠坐骨神经挤压模型,观察其神经恢复过程中行为学、机械痛阈值、热缩足反射潜伏期(TWL)以及脊髓背角c-fos表达(对c-fos表达产物:Fos蛋白阳性的神经元进行计数)的改变,探讨外周神经损伤再生与痛觉过敏的关系.方法 雄性Wistar大鼠40只,体重180～200g,随机分为坐骨神经血管钳挤压损伤组(A组)和假手术组(B组),每组20只.前者分离出右侧坐骨神经后于神经中段用止血钳挤压神经直到成为透明膜状,持续30s;后者将坐骨神经于空气中暴露5min后,还复至原位.术后第18、21、24、27、30、33、36、39天重复检测大鼠行为学、机械痛阈值、TWL值.术后21、27、33、39d处死大鼠,免疫组化检测Fos蛋白表达.结果 A组术后各时间点的累积疼痛评分均高于B组(P＜0.05),但A组内各时间点间无差异.A组术后21d后机械痛阈值和TWL均低于B组(P＜0.05).A组术侧L4-5.脊髓背角浅层Fos蛋白阳性反应神经元计数大于B组(P＜0.05).A组39d的机械痛阈和TWL值均大于21d(P＜0.05),但Fos蛋白阳性反应性神经元计数无显著差异.结论 坐骨神经挤压模型中外周神经损伤再生过程诱发脊髓背角浅层c-fos表达,同时出现再生神经支配区域的机械痛觉过敏和疼痛相关行为.     

去细胞神经同种异体移植的运动功能恢复

目的 研究去细胞同种异体神经移植修复大型哺乳类动物粗大和长段周围神经缺损的效果。方法 15只犬分为去细胞神经同种异体移植组（实验组）6只、自体神经移植组（对照组Ⅰ）6只、新鲜神经同种异体移植组（对照组Ⅱ组）3只。右侧坐骨神经主干造成5cm长缺损，分别以上述三种神经移植物桥接修复，术后6个月进行步态分析。结果 实验组和对照组Ⅰ功能恢复一般情况相似，对照组Ⅱ无任何恢复；实验组和对照组Ⅰ的右后肢运动及步态周期非常相似，踝关节跖屈及背伸肌群的肌力均有一定程度的恢复，但不及正常犬。结论 化学去细胞神经同种异体移植修复犬坐骨神经长段缺损，在术后6个月近期运动功能恢复与自体神经移植相似。