EDA蛋白在小鼠胚胎颌面部组织中的表达

目的:检测EDA蛋白在小鼠胚胎颌面部组织中的表达。方法:采用免疫组化方法检测EDA蛋白在小鼠胚胎颌面部组织中的表达。结果:在颌面部的软骨可见棕黄色着色,腺体呈黄色着色。从蕾状期到釉质形成期的各个时期的胚胎鼠牙胚均未见到明显的阳性染色。结论:EDA蛋白在小鼠颌面部的软骨和腺体中有阳性表达。在小鼠牙胚中是否有表达还有待进一步研究。     

人牙本质涎蛋白在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：探讨人牙本质涎蛋白(human dentin sialoprotein，hDSP)在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法：用免疫组化方法检测人牙本质涎蛋白在人牙胚不同发育阶段中的表达。结果：hDSP在蕾状期、帽状期釉上皮以及钟状早期内釉上皮有弱阳性表达，钟状中期正在分泌基质的成牙本质细胞、牙本质小管有强阳性表达，钟状晚期，牙本质小管仍有强阳性表达，而成牙本质细胞转为弱阳性表达。前成釉细胞、成釉细胞有一过性表达。前期牙本质始终无阳性表达。牙胚周围骨组织、软骨组织和口腔软组织无阳性表达。结论：提示hDSP可能参与了牙本质的形成。另外前期牙本质阴性表达，表明hDSP蛋白由成牙本质细胞分泌后，可能通过成牙本质细胞突起穿过前期牙本质分泌至矿化前沿，参与牙本质的形成。     

小鼠cbfal多克隆抗体制备及在骨和牙胚中的表达

目的 制备cbfal多克隆抗体并进行鉴定和效价分析，观察其在骨和牙胚中的表达情况。方法 用自制的融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备多抗血清，提取小鼠牙胚、颅骨和肝脏组织的总蛋白进行western blot，同时采用免疫组化染色观察其组织表达特性。结果 cbfal蛋白在小鼠颅骨和牙胚组织中均有表达，在人骨肉瘤细胞系中呈强阳性表达。在免疫组化和western b1ot的有效作用滴度分别为1：400和1：1000。结论 成功地制备了兔抗小鼠cbfal多克隆抗体。     

GLI1蛋白在小鼠胚胎颌面部发育中的表达

目的通过研究GLI1蛋白在小鼠胚胎颌面发育阶段的表达,探讨GLI1蛋白在颌面部发育中的功能。方法利用免疫组化技术研究GLI1蛋白在小鼠胚胎11-14.5dpc(days postcoitum)阶段颌面部的表达情况。结果发现GLI1蛋白在颌面形成阶段11-14.5 dpc时在颌面部不同来源组织中表达不同,且主要在间质表达,在Meckel's软骨中特异性表达。结论 GLI1在颌面不同来源组织中功能不同,主要参与间质来源组织功能调控。     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义

目的：研究肝细胞生长因子受体(c—Met)在大鼠牙胚发育过程中的时空表达模式。方法：用免疫组织化学方法，检测c—Met在大鼠牙胚发育不同阶段表达的位置。结果：c—Met在牙胚发育的不同阶段表达于牙胚中特定的部位：帽状期(胚胎15d)，内釉上皮阳性表达，中间层及部分星网状层细胞弱阳性表达；钟状期(胚胎19d)，内、外釉上皮阳性表达，但内釉上皮较外釉上皮表达弱，中间层及星网状层细胞弱阳性表达；矿化期(生后7d)，成牙本质细胞阳性表达。结论：c—Met在大鼠牙胚发育过程中的表达具有时空特异性，在牙齿形态发生的过程中具有重要的作用，还可能与牙齿的矿化有关。     

Runx2/cbfal在人牙胚发育过程中的表达

观察核心因子Runx2/cbfal在人牙胚发育过程中的表达,探讨cbfal在牙齿发育过程中的作用.方法：制备人牙胚发育各期标本,免疫荧光法观察cbfal在人牙胚发育过程中的表达情况.结果：在牙胚发育的不同时期均可见不同的时空表达模式.蕾状期表达比较广泛;帽状期内外釉上皮细胞和牙囊中呈强阳性表达,中间层也为强阳性,牙乳头为弱阳性;钟状早期,前成牙本质细胞处有强阳性表达;钟状中后期,成釉细胞为强阳性,成牙本质细胞为阴性,而牙囊部位仍为强阳性.结论：Runx2/cbfal转录因子在人牙胚整个发育过程中的表达状况,提示该因子可能在牙胚各期的发育起一定作用,参与了各种成牙相关细胞的分化和硬组织的形成.     

Sonic hedgehog在小鼠胚胎下颌突Meckel＇s软骨发育过程中的表达

目的：研究Sonic hedgehog（Shh）基因在小鼠胚胎颌面部Meckel＇s软骨发育不同阶段的表达,探讨Shh基因在下颌骨体发育骨化中的功能。方法：利用原位杂交和免疫组化技术检测Shh基因mRNA在小鼠胚胎11～14.5 dpc（days post coitum）阶段下颌突Meckel＇s软骨中的表达情况。结果：在颌面形成的早期阶段（11～12.5 dpc）,Shh基因mRNA和蛋白在Meckel＇s软骨有表达且有增强趋势,但在颌面发育完成（14.5 dpc）后表达消失。结论：Shh基因可能参与下颌骨体早期发育。     

Maspin蛋白在唾液腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的：检测乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（marray serine proteinase inhibitor，Maspin）在唾液腺黏液表皮样癌中的表达．及其与唾液腺黏液表皮样癌患者临床病理特征之间的关系。方法：应用免疫组织化学方法，分别对58例唾液腺黏液表皮样癌的癌组织及其癌旁正常腺体组织标本行Maspin蛋白含量的半定量测定，与各临床病理指标进行统计学分析，采用SPSS13．0统计学软件进行非参数检验。结果：Maspin蛋白在唾液腺黏液表皮样癌的癌组织中的表达显著高于癌旁正常腺体组织（P〈0．001），唾液腺黏液表皮样癌组织中Maspin蛋白的表达与淋巴结转移（P=0．020）、术后转移（P=0．008）呈负相关，与总体生存状况呈正相关（P=0．028）。结论：Maspin蛋白的检测在唾液腺黏液表皮样癌患者中可能具有较好的预后判断价值。     

β-连环蛋白和腺瘤性结肠息肉病蛋白在小鼠牙胚发育中的表达及相互关系的研究

目的观察β-连环蛋白（β-catenin）和腺瘤性结肠息肉病（APC）蛋白在胎鼠下颌第一磨牙牙胚中的表达,探讨两者的作用及相互关系。方法将昆明小鼠按雌雄比2∶1合笼,发现阴栓视为妊娠,定为E0.5 d,制作E13.5 d、E14.5 d、E15.5 d、E16.5 d、E17.5 d胎鼠下颌第一磨牙石蜡切片,免疫组化SP法检测β-catenin和APC蛋白的表达与分布。结果β-catenin在牙胚蕾状期、帽状期、钟状期上皮内均有表达,且随着发育的成熟,其表达逐渐增强,着色于细胞膜、质及核。APC蛋白在蕾状期牙蕾上皮呈强阳性表达,随着牙胚发育其表达逐渐减弱,着色在细胞膜、质。β-catenin与APC蛋白有显著的负相关性（P<0.01）。结论β-catenin表达于牙胚早期细胞核及细胞质内,提示其参与了牙胚早期的细胞增殖过程。β-catenin与APC蛋白的时空表达有重叠现象,并呈显著负相关,这符合WNT经典信号通路中两者的作用关系。     

Dnmt1和Dnmt3b在唾液腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的： 探讨DNA 甲基转移酶（DNA methyltransferase, Dnmt）在唾液腺黏液表皮样癌（mucoepidermoid carcinoma,MEC）中的表达及意义。方法： 选取2010 年1 月—2013 年9 月间中国医科大学附属盛京医院口腔颌面外科手术切除的唾液腺术后的标本43例,正常唾液腺组织17例,应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测正常组织及MEC组织中Dnmt1和Dnmt3b 的表达。采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析。结果： Dnmt1在MEC组织中的阳性表达率为37.21%,与正常唾液腺组织的17.65%相比,差异无显著性（P>0.05）;Dnmt3b在MEC组织中的阳性表达率为83.72%,显著高于正常唾液腺组织的11.76%（P<0.01）;但两者的高表达与临床病理参数之间无显著相关性（P>0.05）。结论： Dnmt3b在唾液腺MEC 的发生中可能发挥一定作用。     

EDA蛋白对人牙乳头间充质细胞一般生物学活性及EGFR表达的影响

目的:研究EDA蛋白对人牙乳头间充质细胞一般生物学活性及EGFR表达的影响。方法:测定转染和未转染pIRES2-EGFP-EDA的人牙乳头间充质细胞的生长曲线和碱性磷酸酶活性;免疫荧光法观察转染和未转染EDA的人牙乳头间充质细胞EGFR的表达,对荧光照片进行灰度扫描,统计学分析。结果:和未转染者相比,转染EDA的人牙乳头间充质细胞的增殖有轻度减弱,其碱性磷酸酶活性则有显著减弱。正常人牙乳头间充质细胞有EGFR的微弱表达,而转染EDA的人牙乳头间充质细胞中EGFR的表达明显增强。结论:EDA基因对人牙乳头间充质细胞的增殖和活性有抑制作用;这可能与其上调人牙乳头间充质细胞的EGFR的表达有关。     

转化生长因子β1对口腔鳞癌及腺样囊性癌细胞纤维黏连蛋白基因EDA片段调节作用的探讨

目的探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）对口腔鳞癌及腺样囊性癌细胞中纤维黏连蛋白（fibronectin，FN）基因EDA片段的调节作用。方法应用免疫组织化学及半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR），分别从蛋白及mRNA水平观察口腔鳞癌及腺样囊性癌高、低转移潜能细胞中加入外源性TGF-β1后FN基因EDA片段的表达变化情况。结果3株细胞加入TGF-β1组与未加TGF-β1组EDA片段蛋白表达阳性细胞率比较显示，口腔鳞癌细胞株（Tca83）阳性细胞率由15．4±4．1增加到50．7±10．5，差异有统计学意义（P〈0．01），腺样囊性癌低转移株（SACC-83）阳性细胞率由71．9±4．8增加到86．1±5．5，差异也有统计学意义（P〈0．05），但腺样囊性癌高转移株（SACC-LM）阳性细胞率由93．3±2．4增加到94．1±3．4，差异无统计学意义（P〉0．05）。3株细胞加入TGF-β1组EDA^＋ mRNA表达较未加TGF-B1组明显升高，而EDA-mRNA的表达下降。且差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论高浓度TGF-β1可以影响口腔鳞癌及腺样囊性癌细胞中FN基因EDA片段的剪切并促进EDA片段的表达，可能成为影响肿瘤细胞黏附能力及肿瘤侵袭和转移的相关因素。     

舍格伦综合征患者唇腺中CCL28的表达和分布研究

目的:研究舍格伦综合征患者唇腺中粘膜相关上皮趋化因子CCL28的表达和分布情况。方法:收集35名患者的唇腺组织分别进行半定量RT-PCR及免疫组化。结果:患者的唇腺组织中表达CCL28 mRNA,但表达量较健康组织少。未被破坏的腺上皮细胞、导管上皮细胞及腺管内黏液可见棕色染色。结论:舍格伦综合征患者唇腺中 仍有CCL28的表达及分泌,为我们日后探寻该类患者的龋病及口腔感染的预防奠定了基础。     

成骨蛋白-1在人牙髓组织中的表达研究

目的：探讨成骨蛋白-1在正常人牙髓组织中的免疫定位、分布规律。方法：采用免疫组织化学技术,检测正常人牙髓组织中成骨蛋白-1表达。结果：正常人牙髓组织中成牙本质细胞成骨蛋白-1呈强阳性染色,毛细血管内皮细胞呈阳性表达,邻近成牙本质细胞的少数牙髓细胞可见阳性染色。结论：成骨蛋白-1参与成牙本质细胞的合成和分泌,在诱导新生牙本质样细胞形成和分化过程中可能起重要作用。     

稳定转染EDA基因的人牙乳头间充质细胞的建立

目的建立稳定转染EDA基因的人牙乳头间充质细胞。方法构建EDA真核载体pIRES2-EGFP-EDA,用脂质体将其转染人牙乳头间充质细胞,加G418选择培养液筛选稳定转染EDA的人牙乳头间充质细胞,并采用免疫荧光法鉴定。结果成功构建了EDA真核载体pIRES2-EGFP-EDA质粒,并筛选出稳定转染EDA的人牙乳头间充质细胞。结论EDA基因可以在人牙乳头间充质细胞中得到稳定的表达。     

涎腺粘液表皮样癌中Caveolin-1、PCNA的表达及意义

目的：研究Caveolin-1、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）在涎腺粘液表皮样癌中的表达,分析二者的关系及其与肿瘤生物学行为间的关系。方法：采用SP免疫组化技术检测75例涎腺粘液表皮样癌标本及20例正常涎腺组织中Caveolin-1、PCNA的表达,并行统计学分析。结果：Caveolin-1在20例正常涎腺组织中均呈阳性表达。Caveolin--1表达下调与病程短、病理级别及临床分期的增高有关,短病程组和长病程组间（42．1％VS67．6％）、低分化和高分化组问（38．5％VS63．3％）、Ⅲ＋IV期和I＋Ⅱ期组间（33．3％VS64．7％）比较差异有统计学意义（P〈O．05）。PCNA随着病理级别和临床分期的增高阳性表达率升高,低分化和高分化组间（33．38土11．98VS20．12士10．13）、HI＋IV期和I＋Ⅱ期组间（29．45土12．89VS22．49士11．73）比较差异有统计学意义（P〈O．05）。Caveolin--1与PCNA的表达呈负相关（rs－0．28,P－0．017）。Caveolin--1表达降低及PCNA表达增高与肿瘤复发显著相关（P〈O．05）。结论：Caveolin-1的表达对粘液表皮样癌细胞增殖起抑制作用,Caveolin--1是影响粘液表皮样癌发生发展的重要因素之一。     

Expression of muscarinic receptor subtypes in salivary glands of rats, sheep and man

In rat parotid, submandibular and sublingual glands and in ovine parotid and in human labial glands, the expression of muscarinic receptor subtypes was examined by immunoblotting and immunohistochemistry. Functional correlates were searched for in rat salivary glands. In the rat submandibular and sublingual glandular tissues clear signals of muscarinic M1 and M5 receptors could be detected in the immunoblotting and vague bands for muscarinic M3 and, in particular for, M4 receptors. The rat parotid gland differed. In this gland, the signal was less obvious for the muscarinic M1 receptor, and further, muscarinic M4 receptors appeared more strongly marked than in the submandibular glands. The results from the immunohistochemistry could be interpreted as the muscarinic M4 receptors are located on nerve fibres, since the outer layer of lobuli were densely stained. Intraglandular vessels in the rat submandibular and parotid glands showed expression of M3 receptors. In contrast to the parotid gland, the submandibular vessels also expressed M1 and M2 receptors. Occasionally M5 receptors appeared in the arteries and veins also. The functional studies in the rat confirmed muscarinic M1 receptor mediated secretion in the submandibular gland. Since the M1 receptor blockade did not affect submandibular blood flow, indirect vascular effects could not in total explain the secretory inhibition. Also in the human labial glands, muscarinic M1, M3 and M5 receptors occurred. No or low amounts of muscarinic M2 and M4 receptors could be detected. In patients with Sj?gren-like symptoms an up-regulation of M3, M4 and M5 receptors was apparent in the labial glands. In ovine parotid glands all receptors could be detected, but constantly with vague bands for muscarinic M2 receptors. In conclusion, muscarinic M1 receptors seem to be expressed in seromucous/mucous glands. A secretory effect by muscarinic M5 receptors is not to be excluded, since they were expressed in all the glands examined. However, other functions, such as promotion of inflammation, cell growth and proliferation are possible as well.