神经干细胞相关研究进展

1992年Reynolds等首次报道了从成鼠脑纹状体中分离出能够在体外增值并且具有向神经元及胶质细胞分化潜能的神经干细胞。近年来,神经干细胞的研究及应用对目前迅速发展的生命科学产生了巨大的影响,神经干细胞能够促进神经元细胞的再生及脑组织的修复,并且可以应用于神经系统的基因治疗,表达神经营养因子、代谢酶及神经递质,为神经系统疾病的治疗提供了新的有效途径。本文就神经干     

神经干细胞的局部毒性实验研究

<正>自20世纪90年代Reynolds和Weiss成功在成年小鼠的脑组织中分离出了具有分化增殖和分裂潜能的神经干细胞,并很快在人胚胎脑和成人脑组织中得到了证实[1]。神经干细胞的发现打破了神经元不会再生的传统观念,目前神经干细胞已经在临床上用于脑瘫     

神经干细胞与脑源性神经生长因子

神经干细胞对于损伤后的脑组织的修复、再生起着关键作用,脑源性神经生长因子对于干细胞的增殖分化起着重要作用。现有关于神经干细胞研究多为体外细胞研究,对于脑源性神经生长因子等因子对于内源性神经干细胞影响的研究较少。中医药诱导脑源性神经生长因子等其他因子增殖,进而影响神经干细胞增殖分化,可能成为一个新的研究切入点。     

内源性干细胞修复脑损伤的研究进展

神经干细胞对机体的自我修复起着重要的作用。脑损伤可以促发脑内神经干细胞增殖产生新生的神经元,神经生长类因子可以促进这种新生。并且,脑组织的损伤能够刺激新生神经元向损伤区迁移,迁移到损伤区的这些新生细胞有可能存活并分化为成熟细胞甚至整合进入局部的神经网络,从而帮助修复损伤的脑组织。由于这种反应尚不足以有效修复缺损的神经元,进一步明确脑损伤对内源性神经干细胞的影响将有助于找到合适的治疗措施刺激其增殖、迁移和分化从而有效促进神经功能的恢复。     

新生小鼠神经干细胞体外培养、分化及鉴定

目的 简化神经干细胞原代培养的取材及步骤,明确体外定向诱导分化条件,为进一步神经干细胞移植相关实验提供基础条件。方法 新生24 h昆明种小鼠无菌条件下冰上取大脑组织,经机械分离加胰酶消化吹打后,加入含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和B27的DMEM/F12培养基中培养;加入不同浓度胎牛血清诱导其分化,应用免疫荧光技术行巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2染色,对培养细胞鉴定。结果 新生小鼠提取神经干细胞可形成神经球,并稳定增殖传代,经诱导可定向分化为神经元及星形胶质细胞。结论 新生小鼠较胎鼠取材简单,可培养高质量神经干细胞,血清浓度同向星型胶质细胞方向的分化概率呈正相关。     

SD大鼠经鼻腔给予神经干细胞方法初探

目的：采用大鼠鼻腔给药,建立可模拟干细胞给药新途径的临床前给药方法,为开展干细胞临床前安全性评价奠定基础。方法：将32只Sprague Dawley(SD)大鼠,随机分为2组：溶媒对照组、受试物组,每组16只动物,雌雄各半。采用鼻腔给药法,溶媒对照组给予生理盐水,受试物组给予人源神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs),给药剂量为1×107 cells·kg-1。于给药后24 h和6 d,对大鼠实施麻醉后暴露心脏,完成心脏采血并进行心脏灌流固定,取脑(纹状体、黑质、皮层、海马、小脑)、血、 心、肝、脾、肺、肾、睾丸及附睾(雄性)、卵巢(雌性),脏器、组织进行固定,取材后进行免疫荧光试验,研究神经干细胞在上述组织器官中的分布情况。结果：大鼠鼻腔给予神经干细胞后24 h和6 d, 脑组织的纹状体、黑质、皮层、海马、小脑部位均可见神经干细胞分布。外周组织心、肝、脾、肺、 肾、睾丸及附睾(雄性)、卵巢(雌性)、外周血均未见有阳性细胞。结论：临床前研究表明,神经干细胞可以通过鼻腔给药方式吸收入脑治疗脑部疾病。     

体外诱导人胚胎干细胞向神经细胞分化的研究进展

研究表明胚胎干细胞（embryonic stemcells,ES细胞）在体外可以发育分化出神经组织细胞,这对于了解神经发育的机制和研究神经组织退化性或脑组织损伤性疾病的治疗具有重要的意义。本文就胚胎干细胞分化为神经组织细胞的常用方法和机制做一综述。     

针刺和神经干细胞联合治疗脑瘫幼鼠的效果评价

目的：探讨针刺和神经干细胞联合治疗脑瘫幼鼠的效果。方法：随机选择新生SD幼鼠8只作为正常组,选择成功脑瘫模型32只,随机分为4组,包括模型组8只、针刺组8只、神经干细胞组8只、针刺联合神经干细胞组8只。模型制作成功后开始进行治疗,其中,针刺治疗1次/d即可,连续治疗21次。神经干细胞治疗时,先分离海马组织并进行培养,选择尾静脉法注射,1次/2d,连续9次。治疗结束后,进行行为学检测、细胞凋亡检测,评价其效果,再取脑组织进行染色检测,评价疗效。结果：通过进行多种实验,比较各组的脑细胞神经细胞凋亡率,证明联合组疗效显著优于针刺组与神经干细胞组,差异有统计学意义（P＜0.05）。染色检测结果表明,联合组海马组织的正常细胞数目显著多于其他两组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：针刺联合神经干细胞与单纯治疗方法相比,能改善脑瘫幼鼠的记忆能力,提高其肢体功能并维持一定数量的正常脑神经细胞。     

脊髓损(战)伤及其神经干细胞疗法

治疗脊髓损伤是医学界的难题与研究重点,发现神经干细胞为神经损伤的治疗指引了新的方向。许多研究表明神经系统的多个区域存在具有多向分化潜能的神经干细胞,移植外源性神经干细胞可以适应性地与宿主中枢神经整合。本文就脊髓损伤的机制、脊髓战伤特点、干细胞分类、神经干细胞的来源及其作用机制和应用神经干细胞治疗脊髓损伤的相关研究与临床应用做一简介。     

组蛋白去乙酰化酶参与调控神经干细胞分化的研究进展

神经干细胞是一种多能干细胞,具有自我更新及多向分化潜能,在一定条件下能分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞。神经干细胞的分化不仅由细胞周围微环境决定,且受基因调控。神经干细胞的分化复杂,其中组蛋白去乙酰化酶[1]结合细胞内转录因子和信号通路可调节神经干细胞的分化,主要影响神经干细胞分化过程中的转录,从而影响细胞的发育。     

成体神经千细胞应用研究进展

成体脑内神经干细胞，成体周围组织干细胞诱导产生的神经干细胞都具有更新及分化的潜能。用于治疗神经系统疾病如缺血性卒中、神经退行性疾病及脊髓损伤等有其独特的优势和应用前景。     

神经干细胞研究的几个问题

神经干细胞的发现是神经科学研究的里程碑，改变了成熟神经系统不会出现新生神经元的认识。神经干细胞生长分化特性的研究使人们对神经细胞生长、发育及可塑性的认识更加深入，也为一些神经疾病的治疗带来了希望。1神经干细胞概念和特性神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶     

人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒转染C17.2神经干细胞增殖及分化的影响

目的观察人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒(Ad-IGF-1)转染对C17.2神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法体外培养及鉴定C17.2神经干细胞,Ad-IGF-转染C17.2神经干细胞;Western-blotting法检测IGF-1蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IGF-1蛋白的表达曲线;MTT检测C17.2神经干细胞增殖,NSE及MBP免疫组化观察C17.2神经干细胞体外分化。结果转染AdIGF-1的C17.2神经干细胞成功表达IGF-1蛋白;IGF-1蛋白在病毒转染5～7d达高峰,13d仍高于转染前,Ad-IGF-1转染后各时间C17.2神经干细胞的增殖与对照组相比有显著差异,Ad-IGF-1转染对c17.2神经干细胞向神经元细胞及神经胶质细胞的分化与对照组相比有显著差异。结论Ad-IGF-1转染c17.2神经干细胞可稳定表达IGF-1,Ad-IGF-1转染促进C17.2神经干细胞的增殖及向神经元细胞和少突胶质细胞的分化。     

神经干细胞提取及培养方法的体会

神经干细胞提取及体外培养的方法有多种, 但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考, 总结出神经干细胞的提取步骤、 提取要点、 培养基的选择依据、 接种密度的选择、 培养方法、 换液方法、 传代时机、 传代方法, 最终获得大量活力和稳定性均较高的神经干细胞, 并将其应用于相关方面的基础研究。     

四乙胺对Aβl-40致伤的神经干细胞的存活及其Caspase-3表达的影响

目的探讨钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethy-lammonium,TEA)在Aβl-40致伤的神经干细胞增殖及凋亡中的作用。方法 Aβl-40与神经干细胞共孵育,诱导神经干细胞损伤,以TEA作用于Aβl-40致伤的神经干细胞,利用MTT法和比色法分别检测神经干细胞在不同的时间点的存活率及Caspase-3活性。结果 Aβl-40可使神经干细胞的存活率降低,呈时间依赖性;Aβl-40与神经干细胞在不同的时间点共孵育后,Caspase-3活性逐渐增加,在24h达到高峰;加入TEA后,Aβl-40致伤的神经干细胞的存活率增加,Caspase-3活性表达下降。结论 Aβl-40对神经干细胞的致伤作用可能与钾通道的激活相关,TEA能够降低Aβl-40对神经干细胞的致伤作用,减少神经干细胞的凋亡为治疗阿尔茨海默病提供了新的方法。     

脑类器官技术及在脑卒中治疗中的应用进展

脑类器官是一种由胚胎干细胞(ESCs)或诱导多能干细胞(iPSCs)诱导产生的三维神经培养物,能够模拟人脑的结构和功能。随着脑类器官培养技术的不断优化,并与器官移植、基因编辑和类器官芯片等新兴技术相结合,产生了功能性血管结构和神经回路等复杂脑组织结构,为研究人类大脑发育和疾病提供了新方法、新思路。就脑类器官技术的最新进展进行综述,阐述了其在神经系统疾病中的应用,以及在脑卒中建模和移植治疗中的进展。     

腺苷促进体外培养神经干细胞增殖作用研究

目的研究腺苷促进体外培养神经干细胞（NSCs）增殖作用。方法取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,观察神经球生成情况,特异性蛋白质免疫细胞化学染色和BrdU标记鉴定并判断其增殖能力;将腺苷按0.4,2.0,10.0 μmol&#8226;L 13个浓度加入神经干细胞培养基,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过观察神经球形态、神经球生成数目及 MTT法定量比较,分析不同浓度腺苷对神经干细胞分裂增殖的影响。结果培养物中有大量神经球生成,神经干细胞特异性蛋白质免疫细胞化学染色呈阳性,BrdU标记亦呈阳性反应,所培养的细胞为神经干细胞,具有增殖能力;腺苷中、高浓度组神经球数目、MTT比色结果明显高于溶媒对照组。结论腺苷具有促进NSCs增殖作用。     

脑缺血大鼠脑脊液对神经干细胞存活及分化的影响

目的：探讨脑缺血大鼠脑脊液对新生大鼠海马神经干细胞生存及分化的影响。方法：将脑缺血大鼠脑脊液加入神经干细胞的培养液中，观察神经干细胞存活及贴壁细胞团的分化．并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果：悬浮培养细胞实验组较对照组有明显差异；贴壁培养细胞分化的细胞数量较对照组明显增多。结论：脑缺血大鼠脑脊液可促进体外培养神经干细胞存活，并且促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化。     

去分化肌肉干细胞神经分化潜能的探讨

目的探讨去分化肌肉干细胞经条件培养诱导,具有神经干细胞性质并分化为终末神经细胞的潜能。方法依次用神经干细胞增殖及神经细胞分化条件培养基,对去分化肌肉干细胞进行体外诱导,促使其向神经干细胞转变以及向终末神经细胞分化,并通过形态学、免疫细胞化学、RT-PCR等实验手段研究其性质并加以鉴定。结果 (1)去分化肌肉干细胞在神经干细胞增殖条件培养基诱导下,可形成神经球,EdU标记阳性,抗Nestin、Neurofilament-m(NFm)、GFAP、CNPase阳性;Myogenin表达水平下调,而Nestin、Sca-1表达上调;(2)经神经细胞分化条件培养基诱导,神经球细胞可分化为形态学上典型的、抗NFm阳性神经元,以及抗GFAP、CNPase阳性神经胶质细胞。结论去分化肌肉干细胞具有神经系的多分化潜能。     

胶质瘤细胞诱导神经干细胞迁移作用的实验研究

目的观察胶质瘤细胞在体外培养条件下对神经干细胞是否有诱导迁移的作用。方法①从新生1～2dSD大鼠脑皮层分离培养神经干细胞,进行神经干细胞及其增殖能力鉴定。②胶质瘤细胞与神经干细胞限定区域联合培养,观察神经干细胞的生长及其形态学变化。结果①所获得神经细胞球Nestin染色阳性,传代神经细胞球抗BrdU染色阳性。②可观察到神经干细胞球周围长出细胞突起,在靠近胶质瘤细胞的一侧,细胞突起的密度及长度均大于其他方向上的突起并且可见部分干细胞向胶质瘤细胞方向的移动。结论胶质瘤细胞在体外对神经干细胞有诱导迁移作用。