NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响

探讨NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响。采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)载体pEGFP-N3-NOD2wt,并构建NF-κB结合位点2个碱基缺失突变的载体,将构建的重组质粒瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果显示重组质粒转染HEK293细胞后,在倒置荧光显微镜下均能看到绿色荧光,其中pEGFP-N3-NOD2wt重组质粒在HEK293细胞中荧光表达较强,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱。说明NF-κB结合位点是驱动NOD2基因转录的重要元件,且在NOD2基因启动子的调控中发挥了正调节作用,为进一步研究NOD2基因表达及调控机制提供了新的思路。     

NF-κB在重症社区获得性肺炎中的作用

核因子-κΒ(nuclear factor kappa B,NF-κB)是一种重要的转录调控因子,可与多种基因启动子区域的固定核苷酸序列结合而启动基因转录功能,它参与机体的炎症、免疫反应、细胞凋亡及其他应激反应等.近年来研究发现,NF-κΒ的过度活化与重症社区获得性肺炎的发生、发展密切相关,对NF-κΒ进行调控将成为治疗重症社区获得性肺炎的重要手段.     

P53结合位点对人 NOD8 基因的调控

目的: 探讨P53结合位点在 NOD8 基因调控中的作用。方法: 利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的 NOD8 基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板, PCR扩增含有人 NOD8 基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的 NOD8 基因启动子驱动的、表达绿色荧光蛋白-NOD8融合蛋白的质粒p NOD8 (760 bp)-EGFP- NOD8 和mp NOD8 (750 bp)-EGFP- NOD8 ;将构建的重组质粒经阳离子聚合物JetPei^TM介导瞬时转染HEK293细胞中,并加入不同浓度的P53抑制剂pifithrin alpha(PFT-α)处理HEK293细胞,用RT-PCR和Westren blotting 方法检测NOD8 mRNA和蛋白的表达;此外,用p NOD8 (760 bp)-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用染色质免疫共沉淀法(ChIP)观察P53是否与 NOD8 启动子结合。结果: 经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。ChIP实验证实P53能与 NOD8 启动子结合。 p NOD8 (760 bp)-EGFP- NOD8 转染组中NOD8 mRNA的表达显著高于pEGFP-C2转染组(P＜0.05),并且NOD8 mRNA 在缺失人P53结合位点的mp NOD8 (750 bp)-EGFP- NOD8 转染组中的表达明显降低(P＜0.01);同时发现加入 PFT-α的p NOD8 (760 bp)-EGFP- NOD8 转染组NOD8 mRNA的表达显著下降,并呈剂量依赖关系,其中90 μmol/L PFT-α 对NOD8 mRNA表达的抑制作用最为显著(P＜0.01)。与mRNA检测结果一致的是p NOD8 (760 bp)-EGFP- NOD8 转染组NOD8蛋白的表达量显著高于对照组pEGFP-C2; 而mp NOD8 (750 bp)-EGFP- NOD8 转染组NOD8蛋白的表达量明显低于p NOD8 (760 bp)-EGFP- NOD8 转染组和加入 PFT-α的p NOD8 (760 bp)-EGFP- NOD8 转染组(P＜0.01)。结论: P53结合位点在 NOD8 基因调控中起着重要的作用,并且P53结合位点与 NOD8 基因之间可能存在正反馈调节。     

NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用

目的:探讨NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用。方法:选取16周龄的雄性BXSB小鼠(狼疮性肾炎模型组)和同周龄C57BL/6小鼠(正常对照组)作为研究对象,透射电镜和PAS染色观察肾组织的超微结构形态改变;RT-PCR技术检测小鼠全血中HMGB1mRNA的表达变化。采用ELISA方法检测血清中HMGB1蛋白浓度;免疫组织化学检测肾组织中HMGB1和PCNA蛋白的表达变化;Western blot和流式细胞术检测肾组织中RAGE、p-NF-κB和IκB蛋白的表达。结果:16周时,与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠血清中BUN水平及尿中微球白蛋白水平明显升高;与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠全血中HMGB1mRNA水平和血清中HMGB1蛋白浓度明显升高;16周时,与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB基底膜明显增厚,部分足突融合,内皮细胞下可见团块状电子致密物沉积;与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠肾组织的肾小球中可见较多的PCNA阳性表达,肾小管上皮细胞核内也可见少量的表达;BXSB小鼠肾组织中HMGB1蛋白表达升高,HMGB1蛋白尤其在细胞增生明显而肥大的肾小球呈高表达,主要位于细胞浆和细胞外;而在C57BL/6小鼠肾脏组织中以小管细胞核表达为主;与对照组相比,BXSB小鼠肾组织p-NF-κB和RAGE蛋白表达明显升高;而IκB蛋白表达明显降低;HMGB1蛋白与p-NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.833,P=0.000);p-NF-κB蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.621,P=0.018);HMGB1蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.848,P=0.000);p-NF-κB蛋白与IκB蛋白表达呈显著负相关(r=-0.759,P=0.002)。结论:HMGB1在小鼠狼疮性肾炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体RAGE,激活NF-κB信号途径,促进肾小球固有细胞的增生,从而导致增生性肾小球肾炎形成而实现的。     

NF-κB调控IL-1刺激人脐静脉内皮细胞合成PGI_2

白细胞介素 １(ＩＬ １)是在炎症反应中起重要作用的细胞因子。它能激活在炎症过程中调控相关基因表达的核因子 κＢ（ＮＦ κＢ）及刺激内皮细胞分泌炎症介质ＰＧＩ２。以往研究表明 ,ＮＦ κＢ可调控ＬＰＳ刺激的Ｊ７７４巨噬细胞分泌ＰＧ２〔１〕,但其是否可调节ＩＬ １诱导内皮细胞分泌ＰＧＩ２ 目前还不清楚。因此 ,我们研究了ＮＦ κＢ活化的抑制剂Ｎ α ｔｏｓｙｌ Ｌ ｌｙｓｉｎｅｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅ（ＴＬＣＫ）对人脐静脉内皮细胞合成ＰＧＩ２ 的影响 ,讨论了ＮＦ κＢ在ＩＬ １刺激内皮细胞合成ＰＧＩ２ 中…     

NF-κB在不同时期糖尿病大鼠肝中的表达

目的研究NF-κB在糖尿病大鼠肝中的表达。方法取不同时期糖尿病大鼠的肝组织,石蜡切片,免疫组化染色,光镜观察。结果NF-κB在糖尿病肝脏组织中表达增高,且随着病程的延长而增加。结论NF-κB在糖尿病的发生发展及其并发症中起了一定作用。     

NF-κB信号通路在骨及相关疾病中的作用的研究进展

NF-κB是一类核转录因子,可与其靶基因启动子区的DNA序列结合,而启动基因转录的功能。它们广泛参与胚胎发育、细胞增殖、细胞凋亡、免疫反应、炎症反应、病毒感染等过程。目前研究已经证实NF-κB信号通路在骨的发育和形成中具有重要的调控作用,NF-κB信号通路的阻断可导致骨发育异常或相关疾病的发生。NF-κB通过调控成骨细胞、破骨细胞、骨细胞和软骨细胞的增殖、分化和凋亡等生物学过程,调控骨的发育和重塑,并在骨相关疾病的发生中发挥重要的调控作用。     

NF-κB在急性胰腺炎中的研究进展

NF-κB(转录因子核因子-κB)是一类主要参与机体炎性分子表达调控的转录分子，在急性胰腺炎中，其表达也受到很大的影响，苓主要对近几年NF-κB在急性胰腺炎中的研究作一综述。     

转录因子NF-κB在内毒素休克中的作用

目的探讨内毒素休克大鼠组织炎性介质的表达特征及其和核转录因子NFκB(nuclearfactorkappaB)的关系。方法应用免疫组织化学技术检测脂多糖(lippolysaccharice,LPS)内毒素休克大鼠肝肾组织转录因子NFκB、炎性介质ICAM1、VCAM1、iNOS的表达。结果LPS内毒素休克大鼠肝肾组织转录因子NFκBp65,炎性介质ICAM1、VCAM1、iNOS阳性细胞率高于正常对照组;炎性介质ICAM-1、VCAM-1、iNOS阳性细胞率与NF-κBp65阳性细胞率成正相关。用吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidinedithiocarbmate,PDTC)抑制转录因子NFκB的内毒素休克大鼠炎性介质ICAM1、VCAM1、iNOS阳性细胞率低于LPS组。结论核转录因子NFκB在LPS引起的大鼠内毒素休克炎性介质的表达中起调节作用。     

NF-κB与神经退行性疾病

NF-κB 是一种具有多向转录调节作用的蛋白质.它分布广泛,并调节多种基因的转录调控,参与炎症反应、免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的生理病理过程.最近研究表明, NF-κB与中枢神经系统中神经细胞的生长、发育、塑型有关,并在急、慢性神经退行性变如脑损伤、脑缺血、癫痫、阿尔茨海默病及帕金森病等病理过程中起重要作用.     

NF-κB/IκB:重要的转录调节因子

核转录因子ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦκＢ）是一组重要的转录调节因子,可在免疫刺激剂等多种因素作用下激活而调节基因的转录,参与调节许多与免疫功能和炎症有关的基因。ＩκＢ（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ＮＦκＢ）是其抑制分子,对其激活的调控起着关键作用。本文综述了ＮＦκＢ激活及调控的有关机理,为对其进一步研究提供理论依据。     

NF-κB/REL激活的信号机制

NF-κB/REL蛋白是进化学上高度保守的一种免疫反应介质。多种不同的刺激信号都可激活核转录因子参与细胞的生长、分化、发育、凋亡、粘附及炎症反应。激活NF-κB的信号机制十分复杂。不同的刺激信号,不同的细胞种类,以及细胞不同的状态所涉及的NF-κB激活的具体信号通路有可能不同。随着一些IκB家族成员激酶的鉴定及其相关敲剔基因模型的建立,人们对NFκB激活的信号机制有了更深入、全面的认识。     

Salusin-β调控NF-κB通路促进2型糖尿病性干眼病的炎症反应

目的 探究Salusin-β与NF-κB通路在2型糖尿病性干眼病炎症反应中的作用。方法 将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组、Salusin-β低表达组,每组10只。HE染色观察大鼠眼结膜的病理结构变化;酶联免疫吸附法测定泪液炎症因子的水平;蛋白免疫印迹实验分析大鼠结膜组织Salusin-β和NF-κB p65蛋白的表达。结果 与阴性对照组比较,低表达组的大鼠眼表病变情况显著减轻、泪液分泌增加、角膜增厚、炎症细胞浸润和基质水肿的情况均得到改善、泪液中炎症因子显著降低、眼结膜Salusin-β和NF-κB p-p65蛋白表达水平显著降低。结论 Salusin-β可能通过调控NF-κB通路促进2型糖尿病性干眼病的炎症反应。     

NF-κB与心血管疾病

NF-κB是调节细胞基因转录的关键因子之一。它参与许多基因,特别是与机体防御功能有关的即早基因的表达调控。本文综述NF-κB的刺激因子及靶基因,NF-κB在血管内皮细胞、平滑肌细胞中的作用及与动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤的关系。     

小鼠肝癌淋巴道转移细胞系中NF-κB基因的表达及意义

目的 探讨NF-κB基因表达在小鼠肝癌淋巴道转移细胞系中的表达及意义.方法 采用RQ-PCR方法检测NF-κB基因在肝癌淋巴道低转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-P和高转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-F中的表达水平.结果 NF-κB基因在Hca-P和Hca-F细胞系基因表达分别为(1.41±0.48)×10~(-3)、(2.95±0.22)×10~(-3),Hca-P和 Hca-F之间,NF-κB基因表达差异有统计学意义 (P<0.01),其随转移潜能的增高,表达水平增加.结论 NF-κB基因表达水平增高与肝癌淋巴道侵袭转移相关.     

NF-κB拮抗措施的研究进展

核因子-κB(NF-κB)是一种重要的转录调节因子,NF-κB过度激活与多种疾病有关.因此,针对NF-κB激活途径中的不同环节为靶点进行拮抗,可以治疗与之相关的疾病.本文就近年来抑制NF-κB活化的拮抗措施作一简要综述.     

NF-κB与类风湿性关节炎

转录因子核因子 κB(nuclearfactor κB ,NF κB)是普遍存在的真核细胞转录因子 ,在机体免疫反应和细胞增殖等方面发挥中心调节作用。在类风湿性关节炎 (RA)的病理机制中 ,NF κB的异常活化与滑膜组织炎性增生及其对关节局部组织的侵蚀密切相关 ,为以NF κB为作用靶点治疗RA提供了理论依据。