低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

目的 为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。 方法 我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的DNA混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，48 h后收集II细胞期胚胎细胞。结果 (1) 精子可转染上外源DNA，转染率达53%；(2) 转染有外源DNA的精子可使II细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为11.5%。结论 小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源DNA转染并可作为载体将此外源DNA带入早期胚胎。     

绿色荧光蛋白在KM小鼠体内的表达

目的探讨并建立KM小鼠胚胎的可视化研究平台。方法采用GFP雄鼠附睾尾部精子与KM雌鼠的卵母细胞在培养液中进行体外受精和体外培养，通过荧光显微镜观察胚胎。结果在荧光显微镜下观察GFP雄鼠的精子没有绿色荧光表达，当让其与KM雌鼠进行体外受精后，得到的受精卵有绿色荧光表达，并且荧光的表达有强有弱。结论绿色荧光表达的强弱可以作为小鼠胚胎生活力的标志。     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。方法我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的ＤＮＡ混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，４８ｈ后收集Ⅱ细胞胚胎细胞。结果（１）精子可转染上外源ＤＮＡ，转染率达５３％；（２）转染有外源ＤＮＡ的精子可使Ⅱ细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为１１．５％。结论小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源ＤＮＡ转染并可作为载体     

GDNF基因转染诱导神经干细胞向神经元分化的作用

目的探索转染GDNF基因到大鼠神经干细胞(neural stemcell,NSC)的方法,并研究其诱导大鼠神经干细胞向神经元和多巴胺能神经元分化的作用。方法体外扩增GDNF基因,并构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体PcDNA3-GDNF-GFP质粒。悬浮培养大鼠胚胎神经干细胞,脂质体介导PcDNA3-GDNF-GFP质粒转染神经干细胞,荧光显微镜观察转染及表达情况;免疫细胞化学鉴定β-微管蛋白Ⅲ(β-Tubulin III)和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH),以确定神经干细胞的分化为神经元和多巴胺能神经元情况。结果转染后72 h,荧光蛋白大量表达。脂质体介导PcDNA3-GDNF-GFP质粒转染神经干细胞后,神经干细胞分化为神经元和多巴胺神经元的比例明显增高。结论脂质体介导GDNF基因转染神经干细胞的方法简单、有效,是一较为理想的基因转染方法。GDNF基因能明显促进神经干细胞分化为神经元和多巴胺神经元的比例。     

GDNF表达载体的构建及其转染STO细胞的研究

目的：制备过表达GDNF的转基因 STO 细胞,用于富集精原干细胞。方法：构建 GDNF、EGFP 双顺反子表达载体,采用XhoⅠ、SspⅠ酶切法鉴定重组质粒,用脂质体介导法将质粒转入STO细胞,经G418抗性筛选后,分离扩增培养表达绿色荧光蛋白的抗性细胞,采用PCR法鉴定转基因细胞。结果：成功构建重组GDNF表达载体,将其转染STO细胞后,能够稳定整合到细胞染色体中,获得了表达绿色荧光蛋白的转GDNF基因STO细胞。结论：通过构建表达载体,制备GDNF转基因STO细胞,为富集精原干细胞的研究奠定了基础。     

节律基因Clock干扰对小鼠精子受精能力的影响

目的 通过干扰小鼠睾丸圆形精子期节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠精子受精能力的影响.方法 小鼠睾丸注射Clock干扰质粒,Western Blotting检测注射后睾丸组织Clock表达的变化,体内实验观察注射干扰质粒前后引起雌鼠胎仔数变化,体外实验观察精子数量、精子活力、体外受精率以及对顶体发育的影响.结果 Clock干扰质粒使小鼠睾丸CLOCK蛋白的表达明显下调.体内实验结果显示注射Clock干扰质粒影响了雄性鼠致雌鼠的胎仔数,体外实验结果显示,虽然注射Clock干扰质粒后精子计数、精子活力无明显变化,但体外受精能力明显下降.顶体酶活性明显下降.结论 节律基因Clock与雄性小鼠的生殖功能有密切的关系.节律基因Clock可能通过调节顶体酶活性来影响雄性小鼠精子的受精能力.     

不同转染方式对GFP表达质粒在小鼠肝脏的表达影响

目的 研究经流体力学注射、门静脉和腹腔常规注射3种不同途径注射GFP表达质粒后,目的基因在小鼠肝脏的表达情况及其转基因效率.方法 将裸质粒或脂质体包裹的质粒DNA分别应用流体力学注射、门静脉及腹腔常规注射法注入同种异体小鼠体内,48h后分别取血和肝组织,通过荧光显微镜观察3种转染途径对质粒DNA在小鼠肝脏的表达影响.结果 流体力学注射组及门静脉常规注射组均可见大量绿色荧光蛋白表达,两组的荧光表达量差异无统计学意义(P>0.05),腹腔注射组小鼠的肝脏仅见少量的绿色荧光表达,但3组内脂质体/质粒DNA复合物组绿色荧光表达量均明显高于裸质粒组(P<0.05).结论 应用流体力学注射及门静脉常规注射脂质体/质粒DNA复合物途径,目的基因均在小鼠肝脏高效表达,两种途径无明显差异,流体力学注射可广泛用于肝靶向性的活体基因转染.     

Lipofectamine^TM 2000介导pIRES2-EGFP-NT3转染小鼠耳蜗成纤维细胞的实验研究

目的检测真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3在阳离子脂质体介导下对新生小鼠耳蜗成纤维细胞的转染情况。方法培养新生小鼠耳蜗成纤维细胞，用阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000介导的方法，将含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP．NT3对其进行转染，转染后24h，通过Confocal显微镜观察新生小鼠耳蜗成纤维细胞的转染情况。结果通过阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000介导，真核表达质粒载体plRES2-EGFP-NT3能有效转染新生小鼠耳蜗成纤维细胞。结论含有目的基因NT3的真核表达质粒载体plRES2-EGFP-NT3在阳离子脂质体介导下对新生小鼠耳蜗成纤维细胞的有效转染为研究NT3基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。     

pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞条件的优化

目的构建含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体pSecTag-EGFP,用以研究pSecTag/HygroB转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,为目的基因的成功表达奠定基础。方法用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,设计优化实验,通过脂质体介导的方法转染鸡胚胎成纤维细胞,在荧光显微镜下直接观察该基因的表达。用B radford法检测不同组合的细胞培养液中的EGFP蛋白的相对含量。结果脂质体介导的方法能有效转染鸡胚胎成纤维细胞,实验中EGFP蛋白相对表达量随质粒量的增加而明显升高(P<0.01)。其中脂质体2μl、质粒1.0μg时目的蛋白相对表达量最高。结论pSecTag-EGFP质粒构建成功,并成功优化了转染条件。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。