小鼠骨髓间充质干细胞调节T细胞亚群表达趋化因子受体的研究

目的:研究小鼠T淋巴细胞亚群受骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)调控表达趋化因子受体的变化。方法:小鼠骨髓细胞悬液进行贴壁培养法分离出骨髓间充质干细胞,经培养扩增后按不同比例(10%及1%)与经过植物血凝素(PHA)刺激的小鼠淋巴细胞混合培养,流式细胞术检测趋化因子受体CXCR3,CCR5,CCR7在不同T细胞亚群中表达的变化。结果:在CD3+CD8+亚群中,添加了骨髓间充质干细胞的两个培养组均较对照组增高表达CXCR3及CCR7(P0.05),而CCR5仅在10%MSC的高浓度组较对照组有增高表达。在CD3+CD4+亚群中,CXCR3的表达在10%MSC组、1%MSC组及对照组表达差异均无统计学意义(P0.05);CCR5及CCR7在添加了骨髓间充质干细胞的两个培养组均较对照组增高表达,且在该两种骨髓间充质干细胞浓度梯度中呈剂量依赖性。结论:骨髓间充质干细胞在与淋巴细胞呈一定的细胞比例共培养时能不同程度上调T淋巴细胞及亚群表达趋化因子受体CXCR3、CCR5、CCR7,提示骨髓间充质干细胞可提高T淋巴细胞亚群的趋化能力。     

外周血CD4~+T淋巴细胞表面CCR5受体表达水平与HIV感染关系的研究

目的研究人外周血中CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体5(chemokine receptor5,CCR5)的表达,比较健康人群、HIV急性期患者和HIV慢性期患者之间CCR5表达的差异,明确CCR5表达在正常人和HIV感染者之间的差异,以及CCR5表达与HIV病情进展的关系,以明确CCR5在HIV患者外周血CD4+T淋巴细胞表面表达的意义,并为CCR5拮抗剂在HIV临床治疗中的作用提供临床标本依据。方法收集来自首都医科大学附属北京佑安医院的260例HIV感染者和60例健康人的外周血标本,其中急性期感染者98例、慢性期感染者162例,利用淋巴细胞分离液分离外周血中PBMC,在显微镜下进行淋巴细胞计数,应用直接荧光标记的单克隆抗体对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表面CD4分子及CCR5进行染色,利用流式细胞术分析CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达;对流式细胞术所得检测结果进行统计学分析。结果检测结果表明:(1)HIV急性期患者和HIV慢性期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5的表达显著高于正常人,差异有统计学意义(P<0.01);(2)HIV慢性期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5的表达显著高于HIV急性期患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论此项研究表明外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达的差异与HIV的易感性、疾病进展情况密切相关。外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达的检测,将对HIV患者的早期诊断、治疗和判断预后具有一定的临床意义。     

趋化因子受体CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液及滑膜中的表达

目的查明趋化因子C-C亚族受体5(CCR5)及其配体在外周血、关节滑膜和滑液的表达及分布,探讨Th1细胞选择性聚集于类风湿关节炎(RA)患者关节中的机制.方法采用两色和三色免疫荧光标记、流式细胞术及激光扫描共聚焦显微技术,对15例RA患者外周血、关节液及滑膜中Th细胞亚群,以及趋化因子受体CCR5和CXCR3的表达细胞,和C-C亚族趋化因子巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1β的产生细胞,进行了测定和分析比较.结果(1)RA患者关节滑液细胞内细胞因子分泌模式明显向Th1偏移,Th1样细胞在关节内占优势.(2)RA患者滑液中T细胞受体CCR5的表达率为52%±8%,CXCR3的表达率为61%±12%,与自身及正常人(外周血单个核细胞)比较明显升高(P＜0.01).(3)RA患者滑膜组织中大量浸润的T细胞(尤其是CD4+细胞)、单核/巨噬细胞(Mo/Mac)、B细胞多表达CCR5的配体MIP-1β.结论RA患者的关节内,T细胞、B细胞、Mo-Mac产生MIP-1β、RANTERS等趋化因子,能趋化表达CCR5、CXCR3的Th1细胞选择性进入关节组织,导致Th1/Th2细胞失衡.     

超抗原肠毒素B对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

目的 观察超抗原肠毒素B(SEB)活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义.方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应.结果 与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖;而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCR Vβ14亚族.SEB刺激的T细胞早期(8 h)出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达(P<0.01或P<0.05).结论 CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志.     

趋化因子受体CCR7及CXCR4在胃癌中的表达

目的 探讨趋化因子受体CCR7及CXCR4在胃癌中的表达情况以及与胃癌临床指标之间的关系，为胃癌患者预后判断提供分子标志。方法 采用RT-PCR分析CCR7及CXCR4在不同胃癌细胞株和胃癌组织标本中的mRNA水平的表达，免疫组化分析CCR7及CXCR4在胃癌组织标本中蛋白水平的表达，进一步分析CCR7及CXCR4的表达与胃癌临床各项指标之间的关系。结果 ①RT-PCR分析发现CCR7及CXCR4在5株胃癌细胞株中均有表达，其中CCR7在SNU-216中表达最强，CXCR4在SNU-620中表达最强。而CCR7在89．7％（35／39）的胃癌组织中有表达，CXCR4则在100％（39／39）的胃癌组织中均有表达。②免疫组化检测发现，CCR7蛋白胃癌组织标本中的阳性率为20．1％，CXCR4蛋白表达阳性率为41．3％。③统计学分析发现CCR7在分化型胃癌中的表达明显高于在未分化胃癌中的表达（P〈0．01），CXCR4在肠型胃癌中的表达明显高于在弥散型胃癌中的表达（P〈0．01）。且CCR7及CXCR4的表达与胃癌淋巴结的转移相关（P〈0.05）。结论 趋化因子受体CXCR4和CCR7在胃癌组织中高表达，其表达水平与胃癌的病理分化程度、临床分期等相关。     

外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞检测在不同宫颈病变患者的应用价值

目的:研究对不同宫颈病变的患者检测外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞临床价值。方法:选取2017年5月-2018年8月本院拟行阴道镜检查和液基薄层细胞学检查的健康女性30例为对照组。另选取同期接受上述两项检查的宫颈癌患者、慢性宫颈炎与CIN1患者、CIN2～CIN3患者各30例,设为宫颈癌组、A组以及B组。采集上述四组清晨空腹静脉血,进行外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞表达水平的检测。分析外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞在不同临床分期宫颈癌患者中的表达情况。结果:在外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平方面比较,对照组、A组、B组、宫颈癌组呈逐渐降低趋势;而在外周血CD8~+水平方面比较,对照组、A组、B组、宫颈癌组呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。在外周血CD4~+CD25~+CD127~-水平方面比较,对照组、A组、B组、宫颈癌组呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。宫颈癌临床分期为Ⅲ期的患者外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平明显低于Ⅰ～Ⅱ期患者,而CD8~+、CD4~+CD25~+CD127~-水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P0.05)。结论:不同宫颈病变的患者外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞表达水平存在明显差异,检测上述指标表有利于辅助诊断宫颈病变。     

胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的研究

目的检测胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能状态,探讨其与胃癌新临床病理分期(TNM)及组织病理学类型的关系.方法流式细胞仪测定胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞数量,以胃溃疡患者及正常人作对照分析.结果胃癌患者外周血CD3 、CD4 、NK细胞数量及CD4 /CD8 比值较正常对照组和胃溃疡组均明显下降(P＜0.01),而CD8 细胞水平显著升高.T淋巴细胞亚群及NK细胞数量的改变与胃癌组织病理学类型无关,而与胃癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3 细胞、CD4 细胞、CD4 /CD8 细胞比值及NK细胞数量越低,CD8 细胞水平越高;在Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间存在显著差异(P＜0.05或P＜0.01).结论胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能低下,且临床病理分期越晚,其免疫功能越低.积极的外科手术治疗以及免疫治疗有助于恢复其免疫功能.     

退银汤对中重度寻常性银屑病患者外周血及皮损中CCR4表达的影响*

目的：探讨趋化因子受体4（CCR4）在中重度寻常性银屑病患者与健康人外周血及皮损组织液的表达差异,及其与银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）的相关性,探讨退银汤在寻常性银屑病治疗中的作用机制。方法：采用流式细胞仪检测40例中重度寻常性银屑病患者在使用退银汤治疗前后外周血CCR4在T细胞表达率,与40例正常对照组进行比较;另采用酶联免疫吸附法检测40例寻常性银屑病患者在使用退银汤治疗前后皮损组织液中CCR4表达水平,与40例正常对照组进行比较。结果：中重度寻常性银屑病患者外周血CCR4在T细胞表达率治疗前与正常对照组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）;经退银汤治疗12周后,CCR4在T细胞表达率未见明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）。皮损组织液中CCR4表达水平在治疗前高于正常对照组,经退银汤治疗12周后,CCR4表达水平明显低于治疗前,差异均有统计学意义（P<0.05）,并患者相应的PASI呈明显正相关性。结论：退银汤可以降低中重度寻常性银屑病患者皮损组织液中CCR4表达水平,且CCR4随病情而变化,而外周血T细胞CCR4表达率则与病情无明显相关性。     

超抗原SEB对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

[摘要] 目的 观察超抗原肠毒素B（SEB）活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义。方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞、RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应。结果与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖,而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCRVβ14亚族。SEB刺激的T细胞早期（8 h）出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达（P ＜0.01或P ＜0.05）。结论CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志。     

胃癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞检测的临床意义

目的：探讨胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法：采用流式细胞仪测定胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照分析。结果：胃癌患者外周血CD3^＋、CD4^＋、NK细胞数量及CD4^＋／CD8^＋比值较正常对照组均明显下降（P〈0．05）,而CD8^＋细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞业群和NK细胞数量的改变与胃癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3^＋、CD4^＋及NK细胞数量CD4^＋／CD8^＋细胞比值越低,CD8^＋细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异（P〈0．05）。结论：检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于胃癌患者的免疫状态监测。     

趋化因子受体CCR7在口腔鳞癌中的表达及其临床意义

目的检测口腔鳞癌中趋化因子受体CCR7蛋白的表达情况。方法采用免疫组化技术检测64例口腔鳞癌中CCR7蛋白的表达。结果CCR7蛋白在口腔鳞癌中呈阳性表达,且CCR7蛋白的阳性表达率为65.6%(42/64),而在正常口腔黏膜无表达或较弱表达。此外,CCR7在伴有淋巴结转移病例中的表达显著高于无淋巴结转移者(P<0.0001)。同时,CCR7的表达也与肿瘤的分化程度(P<0.05)、侵袭模式(P<0.05)和TNM分期(P<0.001)密切相关。但与年龄、性别、肿瘤大小无关。结论CCR7在口腔鳞癌中高表达,其表达水平与口腔鳞癌的分化程度、临床分期、侵袭和淋巴结转移有关。     

胃癌患者血清VEGF-C和VEGF-A的水平变化及VEGF-C在胃癌组织中的表达

目的：探讨胃癌患者血清VEGF-C和VEGF-A水平与临床病理特征的相关性及血清VEGF-C水平与组织VEGF-C蛋白表达的关系。方法：采用酶联免疫吸附技术（ELISA）对28例胃癌患者及21例正常健康人血清VEGF-C和VEGF-A水平进行检测,同时应用免疫组化技术对28例胃癌组织标本进行VEGF-C蛋白表达进行 检测。结果：胃癌患者血清VEGF-C和VEGF-A水平明显高于健康对照组(均P<0.01)。胃癌组织标本VEGF-C表达阴性和阳性两组间血清VEGF-C水平比较,差异无显著性（P>0.05）。胃癌患者血清VEGF-A水平与淋巴结转移、远处转移、浸润程度及TNM分期有关(P<0.01) ;血清VEGF-C水平与淋巴结转移、浸润程度及TNM分期有关(P<0.05)。结论：血清VEGF-A和VEGF-C均可作为胃癌的标记物,对术前判定淋巴结转移具有一定的临床价值;血清VEGF-C水平与组织标本中VEGF-C表达无明显关联。     

趋化因子受体CCR7在人胃癌组织中的表达及其与胃癌转移的关系

目的 观察趋化因子受体CCR7在胃癌中的表达情况,探讨CCR7表达水平与临床病理特征的关系.方法 采用Real-time PCR、Western blot及免疫组化技术检测CCR7在60例胃癌组织及相应的癌旁组织中的表达分布情况,并分析其表达差异与胃癌临床病理特征的相关性.结果 在60例胃癌组织中,CCR7在胃癌组织中mRNA表达水平均显著高于癌旁组织(P＜0.05).免疫组化检测结果显示CCR7在胃癌组织中的蛋白表达定位于细胞质,且CCR7蛋白在癌旁组织与胃癌组织中的阳性表达率分别为25％(15/60)和73％(44/60).经x2检验,两者差异有统计学意义(x2=24.000,P＜0.001).Western blot结果显示CCR7蛋白在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织.胃癌组织中CCR7表达水平在胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期差异有统计学意义(P＜0.05),在患者性别、年龄及肿瘤大小差异无统计学意义.结论 CCR7在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌侵袭转移密切相关,有望成为胃癌治疗新靶点.     

环氧化酶-2和基质金属蛋白酶-7在老年胃癌组织中表达及预后意义

目的 :研究环氧化酶 2 (COX 2 )和基质金属蛋白酶 7(MMP 7)在老年胃癌中表达及预后意义。方法 :采用免疫组化法检测了 87例老年胃癌COX 2、MMP 7表达情况 ,分析它们与胃癌临床病理特征关系及对预后的影响。结果 :COX 2、MMP 7在胃癌的表达明显高于慢性萎缩性胃炎 ,进展期癌的表达又高于早癌 (P <0 .0 1)。COX 2、MMP 7表达呈正相关 (P <0 .0 5 )。COX 2、MMP 7表达与肿瘤大小、淋巴结转移、血管癌栓、TNM分期呈正相关 (P <0 .0 1) ,COX 2、MMP 7表达阳性组的整体生存率明显低于COX 2、MMP 7阴性组 (P <0 .0 1) ,二者共同表达预后更差。多因素分析表明 :淋巴结转移、TNM分期、MMP 7阳性表达是老年胃癌预后独立因素。结论 :COX 2、MMP 7表达呈正相关 ,与胃癌生长、浸润转移关系密切 ,可作为评估老年胃癌预后的重要指标     

Survivin与P16蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的 观察Survivin与P16 蛋白在胃癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测60例胃癌患者的胃癌组织及从中随机抽取的20例癌旁组织的Survivin与P16蛋白的表达情况.结果 胃癌组织中Survivin与P16蛋白的阳性例数分别为40例和18例,而相应的20例癌旁黏膜组织中的Survivin与P16蛋白的阳性例数分别为4例和17例,两组间差异有统计学意义（P＜0.05）.胃癌组织中Survivin基因的阳性表达与组织学分级无关（P＞0.05）,而与临床分期、淋巴结转移情况相关（P＜0.05）;胃癌组织中P16蛋白表达的缺失与组织学分级、临床分期和淋巴结转移情况均相关（P＜0.05）.结论 Survivin蛋白的过表达和P16蛋白的表达缺失与胃癌的侵袭性及预后相关.     

转移抑制基因KAI1/CD82在胃癌的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82mRNA在胃癌组织中的转移表达及其临床意义。方法用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测62例胃癌患者胃癌组织、癌旁组织及远处淋巴结组织中KAI1/CD82mRNA的表达水平,通过测定所得KAI1/CD82基因表达率的中位数来界定,分为高表达组（31例）和低表达组（31例）,比较2组临床病理特征。结果 KAI1/CD82mRNA表达水平在TNMⅠ-Ⅱ、无肿瘤周围静脉侵袭以及无远处淋巴结转移的患者明显高于TNMⅢ-Ⅳ、有肿瘤周围静脉侵袭和有远处淋巴结转移者（P〈0.05）。结论 KAI1/CD82mRNA表达水平可能与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结远处转移有关,检测KAI1/CD82mRNA表达水平可作为预测胃癌预后的指标之一。     

KAI1、MMP-9蛋白表达及微血管密度与胃癌浸润和转移的相关性

目的:探讨KAI1、MMP-9蛋白表达以及微血管密度(MVD)值与胃癌浸润转移的相关性。方法:在71例胃癌组织及20例正常胃黏膜组织中,应用免疫组织化学SP法检测KAI1、MMP-9的蛋白表达,用CD34标记新生血管内皮细胞并于显微镜下计数MVD,进而分析它们与胃癌临床病理特征间及彼此之间的关系。结果:胃癌中KAI1的表达明显降低,MMP-9的表达明显升高,MVD值在胃癌中也较正常胃黏膜中明显增高,两组间差异有显著意义(P<0.05);KAI1与MMP-9的表达均与浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),此外,KAI1的表达还与TNM分期有关(P<0.05);MVD值与分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。经统计分析KAI1表达阴性组MVD值显著高于阳性组,而MMP-9表达阳性组MVD值显著高于阴性组(P<0.05)。结论:KAI1、MMP-9及MVD值与胃癌的侵袭转移密切相关,可作为评价胃癌的进展与预后的有力指标;KAI1、MMP-9可能通过影响血管生成参与胃癌的进展过程,为临床针对胃癌的抗血管治疗提供新的思路。     

MMP-2、Cox-2蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的：检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和环氧化酶-2（Cox-2）在胃癌中的表达,并分析MMP-2、Cox-2的表达与胃癌淋巴结转移之间的关系。方法：以40例经病理确诊的胃癌组织为实验组,以20例正常胃黏膜为对照组,采用免疫组化法检测MMP-2和Cox-2蛋白的表达,并进行临床病理特点分析。结果：MMP-2、Cox-2蛋白在胃癌组织中表达的阳性率分别为67.5%和62.5%,二者之间呈正相关,MMP-2、Cox-2蛋白在TNMⅠ期表达阳性率分别为53.8%,61.5%;在Ⅱ期阳性率分别为57.1%、64.2%;在Ⅲ期阳性率分别为85.7%、85.7%;在Ⅳ期阳性率分别为100%（6/6）,100%（6/6）。结论：MMP-2、Cox-2蛋白在胃癌中的表达明显增高,与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期有关。检测胃癌组织MMP-2、Cox-2可作为判断胃癌浸润转移的重要指标。