肠系膜细动脉平滑肌细胞的分离及其ATP敏感钾通道特性

旨在探索一种分离细动脉平滑肌的方法，并研究其ＡＴＰ敏感钾通道（ＫＡＴＰ）的特性。采用酶链蛋白Ｅ消化及机械分离的方法分离细胞，以膜片钳技术之细胞贴附式和内面向外式记录ＫＡＴＰ通道电流。该平滑肌的分离方法简单；细动脉平滑肌ＫＡＴＰ通道在高钾平衡液中电导为１１１±６．５ｐＳ，门控动力学表现明显的ＡＴＰ的电压依赖性，通道开放概率低，提示其对缺血，缺氧，酸中毒等病理条件下细动脉张力和组织血流分布的调节具有潜     

过敏性哮喘豚鼠气道平滑肌三磷酸腺苷敏感钾通道动力学特性

目的探讨过敏性哮喘豚鼠气道平滑肌三磷酸腺苷敏感钾通道(KATP通道)的单通道动力学特性变化。方法将12只4月龄豚鼠随机分为对照组和过敏性哮喘组,每组6只。急性分离出豚鼠3～4级支气管的平滑肌细胞,应用膜片钳内面向外式记录气道平滑肌KATP通道单通道电流,并分析其动力学特性。结果当钳制电压在-60 mV时,过敏性哮喘组通道平均开放时间明显短于对照组(P<0.05);当钳制电压在-40 mV和-60 mV时,过敏性哮喘组通道平均关闭时间明显长于对照组(P<0.05)。当钳制电压在-40 mV和-60 mV时,过敏性哮喘组通道开放概率明显低于对照组(P<0.01)。结论过敏性哮喘时KATP通道单通道动力学特性发生改变,使气道平滑肌对抗去极化能力减弱,可能是气道高反应性中平滑肌收缩反应增强的重要原因之一。     

MitoK_(ATP)-PKC通路对人体肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道的影响

目的 以人体肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)为研究对象,研究线粒体膜上ATP敏感的钾通道(MitoKATP)对HPASMCs膜电位及电压门控钾通道(KV1.5)表达的影响,以及蛋白激酶C(PKC)在其信号转导中的可能作用.方法 从人正常肺组织分离出HPASMCs进行培养.利用激光共聚焦显微镜技术检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),全细胞膜片钳技术记录细胞膜电流变化,Western blot检测KV1.5蛋白和PKC-α的表达情况.结果 ①Diazoxide组肺动脉平滑肌细胞PKC-α的表达比正常对照组明显增强(P<0.05);这种作用可被5-羟基癸酸盐(5-HD)的作用所逆转;单独应用5-HD,平滑肌细胞PKC-α的表达与对照组比较差异无显著性意义.② Diazoxide作用24 h可明显抑制Kv电流以及下调Kv1.5蛋白的表达(P<0.05);佛波酯(PMA) 作用24 h也可明显抑制Kv电流以及下调Kv1.5蛋白的表达(P<0.05),而加入R0-31-8220可以逆转PMA的这一作用;Diazoxide和PMA同时应用较其中之一单独应用对人肺动脉平滑肌细胞Kv电流和Kv1.5表达有更加明显的抑制作用(均P<0.05);Diazoxide与R0-31-8220同时应用则部分逆转了Diazoxide对肺动脉平滑肌细胞Kv电流和Kv1.5表达的抑制(均P<0.05).结论 MitoKATP的开放和ΔΨm的增加可抑制Kv通道的活性和表达,可能参与并影响了肺动脉高压的发生发展, PKC在其中可能起介导作用.     

线粒体ATP敏感的钾通道和缺血再灌注损伤

细胞上存在两种ATP敏感的钾通道,一是位于细胞膜上的ATP敏感的钾通道;二是位于线粒体膜上的ATP敏感的钾通道。最近的药理学和分子生物学研究认为线粒体ATP敏感的钾通道开放对器官缺血再灌注损伤有保护作用。这些研究表明线粒体ATP敏感的钾通道在器官保护中具有关键作用。本文介绍了线粒体ATP敏感钾通道的结构和生理学特性,线粒体在缺血再灌注损伤中的生理变化及可能的机制,还有在器官保护中的研究进展。     

线粒体ATP敏感钾通道研究进展

1983年Noma利用膜片钳技术发现[1],在豚鼠心室肌膜存在一类K+通道,它们主要受细胞内ATP浓度的调节.这类通道被定名为ATP敏感性(或依赖性)K+通道.后进一步发现了多种组织线粒体内膜上存在ATP敏感性钾通道[2,3].     

ATP敏感性钾通道与气道高反应性研究进展

哮喘是由多种细胞和细胞成分参与，以嗜酸性粒细胞浸润为主并导致与之相关的气道高反应性（AHR）的气道慢性炎症性疾患。AHR作为哮喘的重要特征之一，在其发生发展中起重要作用，目前对其发生机制的研究涉及很多方面，现对气道平滑肌细胞中ATP敏感性钾通道在AHR的发生机制做一综述。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对原代培养猪冠脉平滑肌ATP敏感钾通道、钙激活钾通道的影响

目的 :探讨丹参酮ⅡA磺酸钠 (DS 2 0 1)对原代培养猪冠脉平滑肌上ATP敏感的的钾通道 (KATP)、钙激活钾通道 (KCa)的作用。方法 :采用膜片钳单通道电流记录技术进行定量研究。结果 :KATP(33 15pS)可被 30 μmol/L优降糖特异性阻断 ,而KCa(2 46 .5 3pS)则表现出明显的钙离子依赖性和TEA阻断作用等特点。内面向外式膜片下 ,浴液中加入DS 2 0 1可激活KATP及Ca。膜电位为 5 0mV时 ,5、10、15 μmol/LDS 2 0 1分别使KATP开放概率 (NPo)从0 0 0 4± 0 0 0 1增加到 0 44 9± 0 0 0 4(n =5 ,P <0 0 1)、0 6 0 2± 0 0 32 (n =5 ,P <0 0 1)、0 90 4± 0 10 5 (n =5 ,P <0 0 1) ,2 0 μmol/LDS 2 0 1使KCa的NPo从 0 0 0 0增加到 0 0 11± 0 0 0 2 (n =3,P <0 0 1)。结论 :DS 2 0 1对KATP和KCa均有直接激活作用。     

自噬与哮喘中气道平滑肌细胞表型转化关系的研究进展

支气管哮喘是常见的呼吸道疾病,发病机制尚未完全阐明。气道重塑作为哮喘的关键特征之一,在哮喘早期即可发生。气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cell,ASMC）是哮喘气道重塑的关键靶细胞,其表型从正常收缩型向增殖/合成型转化是气道重塑的重要特征之一。ASMC具有可塑性,其表型可受多种因素调节。自噬作为真核细胞生物的一种防御性保守生物过程,近年来被证实可通过调节ASMC的表型参与气道重塑。本文针对哮喘中自噬对ASMC表型的调控机制进行综述,以期对未来研究有所启发。     

气道平滑肌钾通道对哮喘作用的研究进展

钾离子通道是细胞非常重要的离子通道之一,广泛存在于气道平滑肌细胞,深入了解其的结构和功能,有助于揭示其调控机制,进一步为临床治疗哮喘提供新的有效的治疗策略。本文结合近年来钾通道对哮喘作用的文献,就气道平滑肌细胞张力调控、增殖、迁移和表型转变的研究做一综述。     

线粒体ATP敏感钾通道在低氧预处理抗低氧性肺损伤中的作用

目的 探索线粒体ATP敏感钾通道在低氧预处理抗低氧性肺损伤中的作用。方法 利用线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-HD和开放剂DE采用离体肺灌流方法造成大鼠肺预缺氧／缺氧损伤模型。30只大鼠随机分成5组：对照组、缺氧组、低氧预处理（HPC）＋缺氧组、Diazoxide（DE）＋缺氧组、5-HD＋HPC＋缺氧组。通过形态学观察,灌流液总蛋白含量测定,以及肺干湿重比测定,反映各组肺受损程度。结果 与单纯缺氧组相比,DE＋缺氧组及HPC＋缺氧组肺泡及肺组织充血水肿和红细胞渗出明显减轻,肺干／湿重比较大,灌流液蛋白含量较低（P〈0．05）,而5-HD＋HPC＋缺氧组与缺氧组无显著差异（P〉0．05）。结论 肺线粒体ATP敏感钾通道在低氧预处理抗低氧性肺损伤中具有保护作用。     

射麻止喘液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞作用研究

目的：探讨哮喘大鼠模型建立及其气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性,通过研究射麻止喘液中药血清对气道平滑肌细胞增殖效应,为研究哮喘病预防及治疗提供理论及实验支持。方法：制作慢性哮喘大鼠模型,用酶联法培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,MTT检测生长曲线。结果：以酶联法培养7天可见细胞贴壁,14天左右融合90%左右。传代后细胞＂谷峰＂生长明显。结论：本实验提供了一种常见简单的哮喘模型,培养的细胞为平滑肌细胞,射麻止喘液血清具有抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用,低剂量药物血清组相对于中高剂量组抑制作用更强。     

射麻止喘液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞作用研究

目的:探讨哮喘大鼠模型建立及其气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性,通过研究射麻止喘液中药血清对气道平滑肌细胞增殖效应,为研究哮喘病预防及治疗提供理论及实验支持。方法:制作慢性哮喘大鼠模型,用酶联法培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,MTT检测生长曲线。结果:以酶联法培养7天可见细胞贴壁,14天左右融合90%左右。传代后细胞"谷峰"生长明显。结论:本实验提供了一种常见简单的哮喘模型,培养的细胞为平滑肌细胞,射麻止喘液血清具有抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖作用,低剂量药物血清组相对于中高剂量组抑制作用更强。     

缺氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响

[目的]研究缺氧对阴茎海绵体平滑肌细胞(cavernosum smooth muscle cel s ,CCSM）表型转化的影响。[方法]用酶消化法获取SD大鼠的原代CCSM,并用细胞免疫荧光法进行鉴定。将原代CCSM置于缺氧小室中（37℃,5%CO2,1%O2,94%N2）培养,按缺氧时间分为0h组、24h组、48h组、72h组,用western-blot法检测四组的α-SMA、OPN蛋白表达量。[结果]低氧可以诱导CCSMα-SMA蛋白表达下降,且在72h内随着缺氧时间延长差异显著性增加。低氧24h组细胞OPN蛋白表达增加（P<0.05）;低氧48h组细胞OPN蛋白表达显著增加（P<0.01）;48h后随着时间延长差异可能会减小（P>0.05）。[结论]缺氧可以诱导CCSM由收缩型向合成型转化。     

IL-19对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨IL-19对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法通过对大鼠进行雾化卵清蛋白,制备哮喘模型大鼠。提取哮喘大鼠ASMCs进行培养,分别以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度IL-19对ASMCs增殖的影响。结果与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠ASMCs增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经10μg/L、100μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例减少,增殖亦减弱。且两组间比较有明显差异。而经1μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例及增殖均无明显变化。结论一定浓度的IL-19可能抑制慢性哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

纤维粘连蛋白在哮喘气道平滑肌细胞免疫功能调控中的作用

目的探讨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)免疫功能调控机制中的作用,同时建立一种优化培养ASMC的方法。方法利用组织贴块法和消化酶法原代培养大鼠ASMC,并用细胞形态学和免疫组化SABC染色方法鉴定;将正常和哮喘大鼠ASMC种植在涂覆有FN的和空白(无FN涂覆)的玻片上,免疫组化方法检测爬片中粘着斑蛋白的表达;ELISA方法检测各组培养上清中调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(regulated on activated normal T expressed and secreted,RANTES)蛋白水平。结果①原代培养的细胞呈典型的"谷峰状"生长,胞质内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。②FN作用的哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达明显增加,但未经FN作用的哮喘大鼠ASMC及经(或未经)FN作用的正常大鼠ASMC粘着斑蛋白表达均呈阴性表现。③FN处理组细胞培养上清中的RANTES蛋白水平较未经FN处理组显著增加(P<0.05),哮喘组培养上清中的RANTES蛋白水平较正常组明显增加(P<0.05)。结论 FN可能通过上调哮喘大鼠ASMC粘着斑蛋白的表达、促进RANTES的分泌而参与ASMC的免疫功能调控机制。     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞caveolae的变化及罗红霉素的调控作用

目的观察支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞微囊（caveolae）及微囊蛋白一1（caveolin一1）的表达变化,并探讨罗红霉素对其表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠24只,采用数学表法随机分为对照组（c组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组8只。以卵白蛋白致敏和激发的方法复制大鼠哮喘气道重塑模型,图像分析软件测定气道壁厚度（Wat／Pbm）及气道平滑肌层厚度（Wam／Pbm）;透射电镜观察eaveolae超微结构;Westernblot法测定caveolin—l的表达变化。结果（1）A组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm大于C组（P〈0．01）;R组大鼠Wat／Pbm、Wam／Pbm小于A组（P〈0．01）,大于C组（P〈0．01）;（2）透射电镜显示c组ASMC胞膜及胞质eaveolae含量丰富、形态多样,A组caveolae含量少、结构单一,R组eaveolae含量明屁减少,但较A组多;（3）Westernblot法显示c组caveolin一1高表达,A组表达明显低于c组（P〈0．01）;R组caveolin-1表达显著高于A组（P〈0．01）,但较c组表达减少;（4）caveolin-1表达与Wam／Pbm呈负相关（r=-0．928,P〈0．01）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞eaveolae结构明显减少,caveolin-1表达减少,提示caveolae缺乏与哮喘气道重塑有密切关系,罗红霉素可能通过caveolae的影响而抑制哮喘气道重塑。     

细胞外基质对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞免疫调节作用

目的 研究在哮喘状态下,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的免疫调节作用.方法 健康雄性Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)及正常对照组(8只).大鼠哮喘模型使用卵清蛋白(OVA)致敏及激发的方法建立.分离培养得到的大鼠ASMCs分别置于包被有LA及COL-1的细胞瓶中进行培养.结果 Western blot法检测结果显示,eotaxin 、TGF-β1的表达,哮喘空白组高于正常对照空白组(P＜0.05),哮喘组内ECM的干预促进表达的增加(P＜0.05),正常对照组表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ECM影响哮喘ASMCs的免疫功能.     

气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制

慢性哮喘患者的气道随着病程的发展会出现平滑肌细胞增生、胶原沉积、基膜增厚等重构现象,其中气道平滑肌细胞在长期慢性炎症刺激下其收缩功能及生长迁移能力均明显增强,同时还可以发生表型转化,胞内具有合成功能的细胞器(如高尔基体等)含量增加,进而分泌各种生物因子参与气道重构。该文就气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制的研究进展予以综述。     

射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响

【目的】观察射麻止喘汤对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠分为哮喘组和正常对照组,哮喘组采用卵清蛋白(OVA)致敏并激发方法复制哮喘模型,造模成功后分别取各组支气管平滑肌进行细胞培养,倒置显微镜观察形态并经免疫荧光染色鉴定;给予大鼠灌胃高、中、低剂量的射麻止喘汤(剂量分别为64、32、6.4 g.kg-1.d-1)制备含药血清;取2～5代ASMC分别给予射麻止喘汤高、中、低剂量含药血清,蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波醇-12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA,10 nmol/L),PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220,5μmol/L)干预;另设空白组(不给予任何药物血清干预)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMC增殖(D值)。【结果】免疫荧光染色鉴定结果显示所培养的细胞为平滑肌细胞。正常大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增高(P0.05),Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值与空白组比较差异均无显著性意义(P0.05)。哮喘模型大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增加(P0.05),Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值均较空白组显著降低(P0.05),但射麻止喘汤各剂量组与Ro-31-8220组比较差异无显著性意义(P0.05)。【结论】射麻止喘汤治疗支气管哮喘的作用可能与其能抑制ASMC增殖,影响哮喘的气道重塑过程有关。     

核因子κB在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B)在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法采用卵清蛋白(OVA)致敏OVA激发的方法制备大鼠哮喘模型。将18只Wistar大鼠分为:①哮喘组;②吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组:OVA激发前腹腔注射NFκ-B的特异性抑制剂PDTC(100 mg/kg);③对照组:注射及吸入等量生理盐水。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法观察ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NFκ-B活性;Western blot检测NFκ-B的抑制蛋白I-κBα表达。结果①PDTC组ASMCs S期比例、A值、PCNA阳性表达率分别为(11.77±3.37)%、(0.283±0.034)、(27.9±6.7)%,与哮喘组[(22.17±3.64)%、(0.469±0.050)、(77.3±8.4)%]比较均显著降低(均P<0.05),与对照组[(12.08±2.86)%、(0.302±0.059)、(25.3±3.8)%]比较差异均无显著性意义(均P>0.05)。②PDTC组ASMCs NFκ-B活性与哮喘组比较显著降低(P<0.05),与对照组比较差异无显著性意义。结论NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,抑制NF-κB活性能降低哮喘大鼠ASMCs增殖。