P53基因蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义

目的探讨P53基因蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测80例食管癌组织、癌旁组织、正常食管黏膜中P53基因蛋白表达，分析其与食管癌分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等情况的关系。结果P53基因蛋白表达的阳性率分别为：高分化组61．5％；中分化组96、2％；低分化组100％，高分化组与中、低分化组之间差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。临床分期Ⅰ期83．3％；Ⅱ期94．5％；Ⅲ期84．2％，3期之间差异无统计学意义（P〉0．05）。有淋巴结转移组97．2％；无淋巴结转移组44．4％，二者间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论P53基因蛋白的表达随食管癌分化程度的降低而增高，且可能在淋巴结转移过程中起重要作用，可作为判断预后及诊断早期癌、浅表癌的重要分子标志物之一。     

p53基因多态性与中国人群食管癌易感性的Meta分析

目的 探讨p53基因多态性与中国人群食管癌易感性的关系.方法 检索CBMdisc,CMCC,CNKI,Medline,Pubmed,ScienceDirect,Springer Link等数据库,并收集未公开发表的文章及硕、博士学位论文,获得有关p53基因多态性与中国人群食管癌易感性的关系的文献.确定文献的纳入和排除标准,对文献进行筛选,然后应用Meta分析软件RevMan 5.1对各研究原始数据进行统计处理,以病例组及对照组p53基因型分布的比值比(OR值)为效应指标,计算合并OR值及95％可信区间,发表偏倚用漏斗图和Egger's线性回归检验来评估并进行敏感性分析.结果 携带杂合基因型(Arg/Pro)的个体发生食管癌的危险性是野生纯合型(Arg/Arg)的1.12倍(OR=1.12,95％CI:1.01～1.25),携带突变纯合基因型(Pro/Pro)的个体发生食管癌的危险性是野生纯合型(Arg/Arg)的1.43倍(OR=1.43,95％CI:1.15～1.78).结论 表明与野生纯合型(Arg/Arg)相比,携带杂合基因型(Arg/Pro)和突变纯合基因型(Pro/Pro)可显著增加食管癌发病风险性.     

用PCR—SSCP方法检测间皮瘤组织中p53基因点突变

为研究石棉纤维在人恶性间皮瘤病因学中的作用，检查了青石棉污染区１２例间皮瘤ＤＮＡ样品的ｐ５３基因点突变。应用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了ｐ５３基因５，６，７，８外显子的４个ＤＮＡ片段，结果显示：４例有异常移动的单链ＤＮＡ电泳带，其中２例位于外显子５，２例位于外显子６。提示：这些病例的ｐ５３基因存在点突变     

人类抑癌基因-p53点突变检测方法研究进展

癌与肿瘤基因的激活及抑癌基因失活有下面三种关系:①癌基因的激活导致肿瘤发生;②抑癌基因的失活导致肿瘤发生;③癌基因的激活与抑癌基因失活同时发生从而导致肿瘤的发生。p53蛋白是一种细胞核磷蛋白,p53基因只存地于脊椎动物中,是生物界长期进化过程中形成的一种保护性机制。在人类基因定位于17号染色体短臂上。p53是至今已克隆到的六个抑癌基因中的一个,p53基因最初被认为是一个核内癌基     

焦炉工人痰细胞p53基因外显子突变检测

目的探讨焦炉工人痰细胞p53基因突变与焦炉暴露关系。方法选取某焦化厂125名焦炉作业工人(炉底38人,炉侧45人,炉顶42人)作为暴露组,同时选取同厂37名材料管理工人作为对照组;个体采样法对作业环境进行监测;高渗盐水超声雾化法诱导取痰,分离痰细胞;高效液相色谱法检测环境空气样本B〔a〕P和尿中1-羟基芘的水平;聚合酶链式反应-单链构象多态性方法(PCR-SSCP)检测痰细胞p53基因突变的情况。结果暴露组中炉顶工人组痰细胞p53基因6、7外显子和p53基因5、6、7外显子总突变率分别为14.3%,21.4%,33.3%,明显高于对照组(0%,5.4%,5.4%),差异有统计学意义(P<0.05),且总突变率有随外暴露水平升高而升高的趋势(χ²=7.457,P<0.01);经多元Logistic回归分析,焦炉暴露、炉顶暴露、炉底暴露和年龄的调整OR值(95%CI)分别为25.278(3.461~184.625)、7.359(1.017~53.267)、22.228(3.146~157.082)、1.106(1.011~1.211),是焦炉工人痰细胞p53基因突变率升高的主要危险因素。结论焦炉逸散物可诱发焦炉工人的痰细胞p53基因突变率升高,且与暴露水平有关。     

双酚A诱导斑马鱼P53基因CDS突变的RT-PCR及序列分析

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)对斑马鱼肝脏p53基因编码序列(CDS)的致突变作用。方法:试验设空白对照组与BPA暴露组,连续染毒30 d后,从斑马鱼肝脏组织中提取RNA,通过RT-PCR方法扩增得到有完整编码区序列的p53基因,并进行测序分析。结果:序列分析表明,斑马鱼P53基因编码区序列长1122 bp,编码373个氨基酸,与网上已经登陆的斑马鱼p53序列有99.9%的相似系数,而与其他生物的P53序列存在一定的差异。在0.6 mg/L浓度下染毒30 d后,BPA暴露组斑马鱼p53基因序列发生了突变。直接测序证明,它们分别在135位、311位密码子发生GAG→GGG、AGG→CGG转变,使其编码的p53蛋白发生Glu→Gly变异。结论:试验结果表明BPA对斑马鱼p53基因CDS有致突变作用,采用RT-PCR技术检测BPA诱导p53基因突变是可行的。     

恶性卵巢上皮肿瘤的P53基因点突变及其意义

目的 为揭示P53抗癌基因与卵巢上皮肿瘤发病学的关系，对P53基因5—8外显子突变进行了检测。方法 采用聚合酶链反应—DNA单链构象多态性分析法，以同期良性卵巢上皮肿瘤作对照组。结果 30例卵巢良性上皮肿瘤中P53基因突变3例(10％)；而50例恶性卵巢上皮肿瘤中发生突变19例(38％)，经x^2检验，差异有显著性(P＜0．05)。但不同组织学分级时P53基因点突变差异不显著(P＞0．05)。结论 恶性卵巢上皮肿瘤P53基因5—8外显子点突变发生率，明显高于卵巢良性上皮肿瘤，该种突变可能与恶性卵巢上皮肿瘤的发生有关。但P53基因5—8外显子点突变与组织学分级天关。     

p53基因甲基化和突变与燃煤污染型砷中毒关系研究

目的 探讨燃煤砷污染对人体p53基因甲基化(启动子区及第5外显子)和突变(第5外显子)的影响,分析其与燃煤型砷中毒的关系.方法 在贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区选择112例砷中毒患者,根据病情将其分为轻度中毒组(38例)、中度中毒组(43例)和重度中毒组(31例);根据有皮肤病理学诊断患者(43例)的病理结果,将其分为非癌变组(24例)和癌变组(19例).选择条件相似的非砷暴露村90名居民作为对照组.在知情同意原则下,采集上述观察对象的外周血,应用限制性内切酶-PCR法检测p53基因启动子区及第5外显子甲基化情况,应用PCR-单链构象多态性技术及PCR产物克隆测序技术检测p53基因第5外显子突变情况.结果 p53基因启动子区甲基化阳性率在轻、中、重度组分别为13.16%(5/38)、27.91%(12/43)、45.16%(14/31),与对照组[1.11%(1/90)]比较差异均有统计学意义(χ2值分别为8.679、23.690、41.199,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为25.00%(6/24)和63.16%(12/19),与对照组[1.11%(1/90)]比较差异均有统计学意义(χ2值分别为18.762、57.497,P值均＜0.025).p53基因第5外显子甲基化阳性率在轻、中、重度组分别为55.26%(21/38)、51.16%(22/43)、48.39%(15/31),与对照组[88.88%(80/90)]比较差异有统计学意义(χ2值分别为18.151、23.168、22.420,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为54.17%(13/24)和42.11%(8/19),与对照组[88.88%(80/90)]比较差异有统计学意义(χ2值分别为15.201、22.075,P值均＜0.025).p53基因第5外显子突变率在轻、中、重度组分别为5.26%(2/38)、16.28%(7/43)、25.81%(8/31),中、重度组与对照组(0.00%)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为15.465、24.870,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为16.67%(4/24)、31.58%(6/19),与对照组(0.00%)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为15.545、30.077,P值均＜0.025).启动子区高甲基化与第5外显子突变相关(列联系数为0.294,P＜0.05);第5外显子低甲基化与第5外显子突变相关(列联系数为0.410,P＜0.05).结论 燃煤砷污染可致人体p53基因启动子区高甲基化、第5外显子低甲基化和突变,上述甲基化改变均与p53基因突变相关联;p53基因甲基化改变可能是砷致p53基因突变以及砷致病或致癌的重要原因之一.

Abstract：

Objective To explore the influence of arsenic pollution caused by coal-burning on methylation(promoter and exon 5 ) and mutation (exon 5 ) of human p53 gene, and to analyze the relationship between methylation, mutation and arsenism. Methods According to the diagnostic criteria of endemic arsenism, 112 patients with arsenism (including 38 mild cases,43 moderate cases and 31 severe cases) were selected in the areas with endemic arsenism from Xingren, Guizhou province. Among the subjects ,43 cases were diagnosed by dermatopathological methods, and they were divided into non-cancerous group (24 cases) and cancerous group ( 19 cases ). 90 controls were selected from the non-arsenic polluted areas. Under the principle of informed consent, blood samples were collected from individuals. The methylation of p53 gene in promoter region and exon 5 were detected by extinction enzyme-PCR,the mutation of p53 gene (exon 5 ) was detected by PCR-SSCP,PCR products cloning and sequencing technology. Results The positive rates of methylation of p53 gene in promoter region were 13. 16% ( 5/38 ), 27.91% ( 12/43 )and 45. 16% (14/31) respectively among mild, moderate and severe arsenism group, which were obviously higher than the rates in the control group (1.11% (1/90), χ2 values were 8.679,23.690, 41. 199,respectively,both P values ＜ 0. 017 ). The positive rates of methylation of p53 gene were 25.00% (6/24)and 63. 16% (12/19)in non-cancerous and cancerous group respectively, which were obviously higher than those in the control group ( 1. 11% (1/90) ,χ2 values were 18. 762,57. 497,respectively,both P values ＜0. 025 ). The positive rates of methylation of p53 gene ( exon 5 ) were 55.26% ( 21/38 ), 51. 16% ( 22/43 )and 48. 39% (15/31)respectively among mild, moderate and severe arsenism group,which were obviously lower than the rates in the control group ( 88. 88% ( 80/90 ), χ2 values were 18. 151 , 23. 168,22. 420,respectively, both P values ＜ 0. 017 ). The positive rates of methylation of p53 gene (exon 5 ) were 54. 17%(13/24) and 42. 11% (8/19) in non-cancerous and cancerous group respectively, which were obviously lower than those in the control group ( 88. 88% (80/90), χ2 values were 15. 201,22. 075, respectively, both P values ＜ 0. 025 ). The mutation rates of p53 gene ( exon 5 ) were respectively 5. 26% ( 2/38 ), 16. 28%(7/43) and 25.81% (8/31 )among mild, moderate and severe arsenism group; while the results in moderate and severe arsenism group were obviously higher than in the control group (0. 00% ,χ2 values were 15.465,24. 870,respectively,both P values ＜ 0. 017). The positive rate of mutation of p53 gene ( exon 5 ) were respectively 16. 67% (4/24) and 31.58% ( 6/19 ) in non-cancerous and cancerous group, which were obviously higher than it in the control group (0. 00%, χ2 values were 15. 545,30. 077, both P values ＜0. 025). The hypermethylation of p53 gene in promoter region was related with the mutation of p53 gene ( exon 5) ( coefficient of association was 0. 294, P value ＜ 0. 05 ); and the hypomethylation of p53 gene (exon 5 ) was related with the its mutation ( coefficient of association was 0. 410, P value ＜ 0. 05 ).Conclusion Arsenic pollution caused by coal-burning can cause the hypermethylation of p53 gene in promoter region, hypomethylation and mutation of p53 gene ( exon 5 ), and the changes of methylation of p53 gene are related with its mutation and might be one of the important etiological factors of arsenic pathogenicity or carcinogenesis.     

河南安阳地区p53基因第72密码子多态性与HPV相关食管癌的研究

目的探讨河南安阳地区p53基因第72密码子多态性与人乳头瘤病毒(HPV)相关食管癌的关系。方法　收集安阳肿瘤医院食管癌病例110例,用PCR方法检测HPV, PCR-RFLP方法分析p53基因第72密码子多态性,病例病例对比研究方法分析在食管癌病例中HPV感染与p53基因第72密码子多态性的关系。结果　PCR检测结果表明,河南安阳地区食管癌组织中HPV检出率为59.1%;HPV阳性者中,Arg/Arg基因型的频率是60.0%,HPV阴性者中仅为17.8%,两者有统计学显著性(P<0.05)。结论　p53基因第72密码子多态性可能是安阳地区HPV相关食管癌的易感因素之一,携带p53 Arg/Arg基因型的个体更容易发生HPV相关的食管癌。     

高危型HPV感染和p53基因多态性与食管癌关系的研究

[目的]阐明人乳头瘤病毒(HPV)感染和p53基因72密码子多态性与食管癌关系的研究,探讨两者在食管癌患者中发生的作用及其相互关系。[方法]收集安阳肿瘤医院食管癌病例110例、安阳对照20例与郑州对照25例,用PCR方法检测HPV,用PCR-RFLP方法分析p53基因第72密码子多态性,用病例对照方法分析HPV感染和p53基因72密码子多态性与食管癌的关系。[结果]PCR检测结果,安阳食管癌病例组织中HPV检出率(49.1%)高于安阳对照(15.0%)和郑州对照(16.0%,P<0.05);食管癌组Arg/Arg基因型频率(42.7%)高于郑州低发区对照(20.0%,P<0.05);HPV16阳性者中,Arg/Arg基因型的频率为55.6%,阴性者仅30.4%(P<0.05)。[结论]高危型HPV16感染可能是食管癌高发区的危险因素,Arg/Arg基因型可能是安阳地区食管癌的易感基因型,携带p53Arg/Arg基因型的个体更容易发生HPV相关的食管癌。     

石棉相关肿瘤p53基因突变的免疫组化及PCR—SSCP研究

为了分析石棉相关肿瘤ｐ５３基因的突变特点，对石蜡包埋的石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变体蛋白的表达进行了免疫组化观察，提取染色体ＤＮＡ，对ｐ５３基因的第５、７、８外显子进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及测序分析。免疫组化观察发现：在分析的１０例病例中有５例阳性。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发现７例（８处）发生突变，其中４处集中在第８外显子上。５例腺癌中有４例发生ｐ５３基因突变。测序发现热点区突变。提示：石棉相关肿瘤ｐ５３基因突变率高。     

P53 mutations in hepatocellular carcinoma patients in Egypt

The p53 gene plays a major role in hepatocellular carcinoma (HCC). Acquired mutations may provide clues to etiology, as some carcinogenic agents are associated with specific genetic changes in p53. Our aim was to analyze the spectrum of p53 mutations in tumor tissues from subjects with HCC in Egypt, where there is a rising incidence of HCC due to hepatitis C virus (HCV). We collected tumor tissues from 41 subjects with HCC diagnosed at the National Cancer Institute of Cairo University during 2000-2003. Sequence mutations were analyzed by the Affymetrix GeneChip technique. HCV RNA was detected in the sera of 37 subjects (90%). Only one patient had a current HBV infection. A total of 17 of the 41 subjects (41%) had p53 mutations. Thirteen of these were in exon 7, of which 10 were in codon 249, but only 8 of the 10 were the R249S mutation, previously reported to be associated with aflatoxin exposure. The other three exon 7 mutations were found in codons 232, 242 and 248. A total of three mutations were detected in exon 5 codons 133, 144 and 176. One mutation was detected in exon 8 codon 275. Unlike previous studies, this population is characterized by a high prevalence of chronic HCV infection. The presence of the R249S mutation in exon 7 may indicate that these subjects with HCC have been exposed to aflatoxin (AFB1), and further investigation is in progress to measure AFB1-albumin adducts in the sera of these subjects.     

环境致癌剂与p53基因突变

p5 3基因是至今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。它不仅作为抑癌基因发挥作用 ,还参与细胞周期调控、DNA损伤与修复、基因转录及细胞凋亡等多个过程。肿瘤病因学的研究表明 ,6 0 %～ 90 %的人类肿瘤是由环境中的化学致癌物引起。环境中的化学致癌物或前致癌物可以造成p5 3基因突变及蛋白表达的改变 ,且p5 3的突变形式也随着致癌物和肿瘤的类型不同而具有特征性的差异 ,相关研究已成为近年来肿瘤分子生物学的热点。本文综述了苯并 [a]芘、烟草、亚硝胺、黄曲霉毒素和氯乙烯等几种环境中存在的主要化学致癌物质的致癌效应以及对p5 3基因和P5 3蛋白的影响。     

p53基因在膀胱肿瘤中的研究进展

p53基因与膀胱肿瘤相关性研究很多,绝大多数研究认为p53的突变与膀胱肿瘤的发生有关。为对其做进一步深入研究,本文综述了近3年有关化学致癌物质引起p53基因突变机制、p53基因的分子生物学行为以及用于膀胱肿瘤基因治疗的最新研究进展。     

PCR-SSCP技术检测矽肺合并肺癌癌组织p53基因突变的研究

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法对３６例矽肺患者的石蜡包埋的原发性肺癌组织ｐ５３基因第５、７、８外显子进行了检测，检出突变１５例。突变在第５、７、８外显子上都有发生，但以第８外显子上发现的阳性突变最多。对肿瘤类型和ｐ５３基因突变的关系进行了分析，发现矽肺病例肺腺癌ｐ５３基因阳性突变率最高，为５３．９％，高于普通型肺癌（３３．０％）。进一步对其中１例样本进行核苷酸序列直接测定，结果显示第５外显子非突变热点区的第１４４位密码子核苷酸由ＣＡＧ突变为ＡＡＧ，氨基酸由谷氨酰胺突变为赖氨酸，以上结果与非职业肺癌明显不同，提示ｐ５３基因突变在矽肺病例肺癌发生中起着重要作用，可能与矽尘作业环境中含有的某些化学致癌物有关。     

鼻咽癌p53蛋白与生物学行为及p53基因突变和EB病毒感染的相关研究

目的　探讨鼻咽癌 (NPC)中p5 3蛋白表达情况及其与临床生物学行为、p5 3基因突变、EB病毒感染的的关系。方法　采用免疫组化检测p5 3蛋白 ,聚合酶链反应 -单链构像多态性 (PCR -SSCP)技术检测p5 3突变 ,聚合酶链反应 (PCR)检测EBV。结果　 43例NPC中p5 3蛋白总的阳性表达率为 76 7%( 3 3 / 43 ) ,临床Ⅲ、Ⅳ期中p5 3阳性率为 80 6%( 2 5 / 3 1)明显高于临床Ⅰ、Ⅱ期66 6%( 8/ 12 ) (P <0 0 5 ) ,且表达强度随肿瘤分期而增加 ;NPC伴颈淋巴结转移患者p5 3表达阳性率 88 9%( 2 2 / 2 6) ,明显高于不伴颈淋巴结转移患者p5 3表达阳性率 5 3 5 %( 11/ 17) (P <0 0 1) ;NPC组织中p5 3基因突变率为 4 7%( 2 / 43 ) ,鼻咽炎症组织中无突变 ;EBV阳性率为 93 %( 4 0 / 43 )。结论　NPC组织中p5 3蛋白表达与p5 3基因突变无关 ,与EB病毒的感染有关。p5 3阳性易发生颈淋巴结转移 ,随着NPC病程的发展p5 3的阳性表达率及表达强度均增加     

林州居民食管癌p53基因突变谱分析与不同地区食管癌和其他类型肿瘤的比较

目的：分析河南省林州市与其他地区食管癌前病变和鳞状细胞癌p53突变谱,探讨食管癌变的发病因素。方法：采用生物信息学和Monte Carlo方法,依据IARC p53突变数据库、Curic研究院p53突变数据库和郑州大学医学院癌症研究所实验室的资料,用FileMark Pro3.0软件系统建立局部资料库进行分析。结果：林州食管癌高发区食管鳞癌碱基替换的发生率低于其他地区食管鳞癌的发生率（32.8 vs 39.8%),但CpG位点G：C→A：T的发生率高于其他地区食管癌（29.6% vs 16.4%)。林州食管癌突变位点具有明显的特征,主要发生在273（占所有错义突变的11.3%)、175（9.7%)、159（6.5%)和282（6.5%)位密码子的CpG位点上。林州地区食管鳞癌p53突变与其他地区食管鳞癌以及头颈部鳞癌p53突变相比,差异有显著性（P=0.02)。结论：林州食管癌p53突变具有内、外源致癌原所致突变的特征,提示慢性炎症、饮食习惯和接触致癌原,可能是林州居民发生食管鳞癌的主要危险因素。     

食管癌与p53突变和人乳头状肉瘤病毒感染

目的探讨p53基因突变与人乳头状肉瘤病毒16（HPV16）感染在食管癌发病中的作用及相互关系。方法应用病例-病例研究方法进行分析，采用聚合酶链反应（PCR）、单链构像多态性（SSCP）、测序等分子生物学技术对110例食管癌组织标本中p53基因的突变与HPV16感染进行了检测。结果110例食管癌组织标本p53基因突变率为49．1％，其中外显exon5—6，exon7，exon8—9的突变率分别为19．1％，27．3％，17．2％。食管癌组织HPV16的检出率为49．1％。吸烟患者p53基因突变率（61．4％）明显高于非吸烟患者p53基因突变率（48．2％），差异有统计学意义；淋巴结转移患者p53基因突变率（65．2％）明显高于无淋巴结转移患者p53基因突变率（37．5％）；HPV16阳性者中，p53突变率是40．7％，HPV16阴性者仅为57．1％，两者差异无统计学意义。结论HPV16感染可能是食管癌高发区的危险因素；p53基因突变与吸烟、淋巴结转移有明显相关性；HPV16感染和p53基因突变可能是2个独立的事件。