色素上皮衍生因子在创面中的表达变化及对人真皮微血管内皮细胞的作用与机制

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在创面愈合过程中的表达变化情况以及对人真皮微血管内皮细胞(hDMEC)的作用和潜在机制.方法 运用生物信息学方法,通过NCBI GEO数据库行基因芯片分析,明确PEDF在创面愈合过程中表达变化情况;选择3只SD大鼠,制作创面模型,收集皮肤组织样本进行实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法...     

重组腺相关病毒对大鼠神经干细胞的体外转染及其对细胞生长的影响

目的 研究重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）载体对原代培养的神经干细胞（neural stemcells，Nsc）的体外转染及其对细胞增殖、分化和迁移能力的影响。方法 取新生24h内的Wistar大鼠的海马进行神经干细胞原代培养，用不同滴度的rAAV为载体，以增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因作为报告基因进行体外转染NSC，通过观察有绿色荧光的NSC的数量，测定rAAV对NSC的体外转染情况；用MTT法测定不同病毒滴度下rAAV对NSC增殖能力的影响，用免疫组化法鉴定NSC、神经元及神经胶质细胞，并在倒置荧光显微镜下直接测定细胞的迁移距离。结果 rAAV对NSC的体外转染效率随着病毒滴度的增加而提高，在转染后的第11天表达水平最高，用MOI为10^4、10^5、10^6的rAAV转染后第11天的转导率分别是9．81％、56．30％、64．67％；不同滴度rAAV转染NSC后不同时间点的MTT测定A值随着病毒滴度的增加而明显减小，差异均有统计学意义；但不同滴度rAAV转染NSC，其分化为神经元和神经胶质细胞的比率以及迁移的距离未见差异。结论 较高滴度（MOI为10^5和10^6）的rAAV可以在体外有效地转染神经干细胞，且不影响神经干细胞的分化和迁移能力，但对其增殖能力有明显抑制，并表现为病毒滴度依赖性。     

慢性肾衰及血液透析过程中多肽生长因子与凋亡因子表达

目的：探讨慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）患者及血液透析（ＨＤ）过程中多肽生长因子及凋亡因子的含量变化及相互关系。方法：采用流式细胞术及放射免疫分析分别测定ＣＲＦ及ＨＤ前后外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤ９５、Ａｐｏ２．７和ＢＣｌ－１蛋白的阳性细胞数及血清中ＴＧＦ－α、ＩＧＦ－Ⅱ的含量。结果：ＣＲＦ（非透析组）ＣＤ９５、Ａｐｏ２．７、ＩＧＦ－Ⅱ明显高于对照组，差异显著。ＢＣｌ－２与ＴＧＦ－α含量均明显低于     

基质细胞衍生因子对骨髓干细胞迁移分化的影响

骨髓干细胞具有很强的可塑性，可向多种组织细胞横向分化，是细胞移植的最好种子之一。体内外许多试验证实，某些细胞因子可以影响移植细胞的微环境，进而影响骨髓干细胞的动员、迁移及分化。基质细胞衍生因子属于趋化因子中CXC亚家族，特异性引起表达CXCR4的骨髓干细胞趋化反应，就基质细胞衍生因子对骨髓干细胞动员、迁移及分化的影响作一综述。     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞凋亡影响的研究进展

人巨细胞病毒（HCMV）属B疱疹病毒亚科，在人群中普遍感染。研究表明HCMV感染导致临床病症与细胞凋亡有密切关系，HCMV感染与细胞凋亡关系具有多样性和复杂性，在不同的阶段表现为不同的作用。研究HCMV与细胞凋亡的关系不仅有助于阐明HCMV感染细胞及细胞对其反应的分子机制和研发新的抗病毒制剂，而且能为HCMV引起临床疾病的治疗提供新的方案。     

菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的: 探讨菩人丹超微粉(PRD)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法: 36只Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组,每组12只。糖尿病模型组和PRD治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。模型成功建立后,PRD治疗组大鼠给予PRD灌胃3个月。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠视网膜神经细胞的凋亡;SP免疫组织化学染色法检测视网膜B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)、B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果: 糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜神经细胞凋亡指数、Bax、 caspase-3蛋白及mRNA的表达均明显升高(P＜0.01),Bcl-2蛋白及mRNA的表达、Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01);PRD治疗组与模型组比较,大鼠视网膜神经细胞凋亡指数、bax、caspase-3蛋白及mRNA的表达均明显降低,Bcl-2 蛋白及mRNA的表达、Bcl-2/Bax比值显著升高(P＜0.01)。结论: PRD可通过上调Bcl-2的表达及下调Bax及caspase-3的表达,抑制糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,发挥对糖尿病视网膜的保护作用。     

膜联蛋白A2对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡的影响

 目的：研究膜联蛋白A2（annexin A2, ANXA2）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法：以HeLa细胞为研究对象,构建过表达载体以及ANXA2-siRNA,转染入细胞。将细胞分为正常对照组、scrambled组、ANXA2过表达组及ANXA2-siRNA组。应用real-time PCR法检测ANXA2 mRNA表达水平及Western blotting检测ANXA2蛋白表达水平。分别采用MTT法、Boyden小室法和流式细胞术观察ANXA2对HeLa细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。结果：ANXA2过表达组可以显著促进HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2-siRNA组明显抑制HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2对HeLa细胞凋亡几乎无影响。结论:沉默ANXA2对人宫颈癌细胞的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖能力和迁移能力。ANXA2可能在宫颈癌的发生发展中具有十分重要的作用,提示它有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点。     

舒洛地特对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨舒洛地特(sulodexide,SDX)对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影响及其分子机制。方法:对HDMECs进行分组培养:常氧对照组在常氧状态下培养;低氧对照组于1%O_2、5%CO_2、37℃条件孵箱培养24 h;处理组用不同浓度(0.25、0.5和1 LSU/m L)舒洛地特作用于HDMECs低氧培养24 h。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;caspase-3活性检测试剂盒测定细胞内caspase-3活性;Western blot和real-time PCR检测促凋亡因子P53、Bax和caspase-3及凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白及m RNA表达。结果:低氧状态下舒洛地特可提高HDMECs生长活力,降低其凋亡率,抑制促凋亡因子P53、Bax和caspase-3的表达以及caspase-3的活性,提高抑凋亡因子Bcl-2的表达。结论:舒洛地特可以抑制低氧状态下人真皮微血管内皮细胞的凋亡,其分子机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

重组9型腺相关病毒载体转染小鼠心脏及对心功能的影响

目的 探讨重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated serotype 9,rAAV9)载体对小鼠心脏的转染效果及对心功能的影响.方法 16只昆明种小鼠经尾静脉将携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)报告基因的rAAV9(rAAV9-eGFP)转染入小鼠,于7、14、21、28 d留取标本,使用荧光显微镜观察eGFP在心肌、肝、肺、肾、脑、骨骼肌的荧光表达,Western blot法检测eGFP)的蛋白表达.另20只昆明种小鼠随机分为2组,每组10只,分别经尾静脉注射rAAV9-eGFP)和生理盐水,28 d后行心脏超声及血流动力学检查.结果 rAAV9-eGFP经尾静脉注射21 d时eGFP表达在心脏达到高峰,转染效率可达32%,在其他脏器表达量少或无表达.rAAV9-eGFP组较生理盐水组心功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rAAV9可通过外周静脉注射在心脏较高表达,且对心功能无不良影响.     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞凋亡影响的研究进展

人巨细胞病毒(HCMV)属β疱疹病毒亚科,在人群中普遍感染。研究表明HCMV感染导致临床病症与细胞凋亡有密切关系,HCMV感染与细胞凋亡关系具有多样性和复杂性,在不同的阶段表现为不同的作用。研究HCMV与细胞凋亡的关系不仅有助于阐明HCMV感染细胞及细胞对其反应的分子机制和研发新的抗病毒制剂,而且能为HCMV引起临床疾病的治疗提供新的方案。     

T细胞Trail受体表达及Trail诱导的T细胞凋亡

目的 :观察人T细胞Trail(TNF relatedapoptosis inducingligand)受体表达及Trail诱导T细胞凋亡的作用。方法 :通过荧光双标记 ,使用流式细胞仪检测Trail受体阳性细胞和凋亡细胞。结果 :静息Jurkat细胞表达高水平Trail受体〔(49 19±12 2 5 ) %〕 ,激活Jurkat细胞对Trail受体表达无影响。Trail诱导显著的Jurkat细胞凋亡〔(90 0 1± 2 6 71) %〕。正常人外周血淋巴细胞 (PBL)仅激活后表达Trail受体〔(2 5 2 7± 6 42 ) %〕 ,但无细胞凋亡发生。结论 :人T细胞表达Trail受体 ,Trail受体和Trail的相互作用对细胞凋亡有调控作用。     

天花粉蛋白诱导人类白血病细胞株HL-60细胞凋亡的研究

目的:研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白(TCS)诱导人类白血病细胞株HL-60细胞发生凋亡的作用及放线菌酮(CHX)对此作用的影响。方法:采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL-60细胞发生凋亡的情况。结果:流式细胞术分析表明TCS能够诱导HL-60细胞发生明显的凋亡现象,TCS(20mg/L)处理48h细胞凋亡百分率为48.7%±2.3%(x±s),明显高于对照组的凋亡率(6.3%±1.0%)(P＜0.05),而CHX(5mg/L)相同条件下诱导的凋亡率为65.3%±3.9%。TCS诱导的凋亡现象进一步为荧光显微镜的观察及DNA凝胶电泳所证实,TCS处理的细胞中有许多细胞呈现典型的凋亡细胞核形态改变,如染色体凝缩、核碎裂等;DNA凝胶电泳显示TCS处理的细胞呈典型的梯级格局。进一步研究表明预先以低浓度CHX(0.2mg/L)处理可显著加强TCS的作用,而在这个浓度下单独CHX并不诱导明显的细胞凋亡。TCS诱导HL-60细胞的凋亡呈时间和剂量依赖关系。结论:TCS能够诱导HL-60细胞发生明显的凋亡,CHX可加强这种作用。这些结果提示TCS诱导的凋亡不依赖于新的蛋白质合成。     

成年SD鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡关系的研究

目的: 探讨体外诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化和凋亡间的关系,为进一步延长神经元样细胞的存活提供理论和实验依据。方法: 采用全骨髓法分离培养成年SD鼠骨髓基质干细胞至第5代,以β-巯基乙醇(1mmol/L)及维甲酸(RA,10^-6mol/L)诱导分化,于诱导后1h、3h、5h分别行神经元特异性抗原MAP-2免疫组化鉴定,并计数神经元样细胞数,计算分化率。核荧光染料DAPI检测诱导后5h和24h细胞核的凋亡特异性形态学改变,流式细胞仪对细胞凋亡峰的分析检测诱导后1h、3h、5h细胞凋亡率。结果: 成年鼠骨髓基质干细胞经β-巯基乙醇(1mmol/L)及维甲酸(RA,10^-6mol/L)诱导30min后可见神经元样细胞出现,经MAP-2免疫组化鉴定,此类细胞呈阳性,诱导后1h、3h、5h神经元样细胞分化率分别为41%、44%、73%和24%、37%、61%。但诱导后5h见细胞漂浮并死亡,此时DAPI染色显示部分细胞核浓缩,出现核碎片。流式细胞仪检测经β-巯基乙醇诱导后1h、3h、5h细胞的凋亡率分别为1.5%、6.1%、21.5%,经RA诱导后的凋亡率分别为1.5%、1.7%、12.3%。结论: ①¹β-巯基乙醇及RA诱导骨髓基质干细胞分化成为神经元样细胞的能力不同。②骨髓基质干细胞在向神经元样细胞分化的过程中同时发生凋亡,分化率和凋亡率间呈正相关。     

Norrin基因对人视网膜微血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的：体外培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞（HRCECs），并探讨Norrin基因高表达对HRCECs增殖和周期的影响。方法： 体外分离、培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞，抗第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定细胞。利用脂质体lipofectamine 2000将AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染HRCECs，RT-PCR、免疫组化和Western blotting方法检测Norrin/myc的表达确定转染效率。采用MTT法测定转染后细胞的增殖能力，流式细胞术分析其细胞周期变化。结果： 所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性。AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染后 24 h，RT-PCR显示实验组Norrin表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。转染后48h免疫组化及Western blotting均显示实验组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTT法显示细胞增殖高于对照组，细胞周期检测示实验组G2期细胞高于阴性对照组，P<0.01。结论：脂质体能成功转染AP-3myc-hNorrin/pRK5进入HRCECs。Norrin高表达能促进HRCECs的增殖，并促进细胞DNA合成，提示Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。     

Methods for cell cycle analysis and detection of apoptosis of teleost cells

Flow cytometric techniques have not been previously used on a routine basis to study teleost cell growth and development. In the present chapter, flow instrumentation and cell preparation protocols are given in order to provide evaluation criteria characteristic of different phases of the cell cycle. Flow cytometry is used as an analytical and diagostic tool to measure DNA ploidy as well as to measure alterations in cell cycle profiles characteristic of random DNA fragmentation (necrosis) compared to patterned DNA cleavage (apoptosis). The types of information obtained by flow analysis include the visualization of cell subpopulations with differing DNA content. For each identified nuclei subpopulation, the parameters of population size, fractions of nuclei in each phase of the cell cycle and computation of DNA ratios can be discerned. Data are presented of ex vivo prepared teleost nonspecific cytotoxic cells (NCC) at resting phase compared to NCC undergoing DNA hypoploid changes characteristic of apoptosis. These cells are compared with a teleost tissue cultured cell line maintained under optimum cell growth conditions versus cells undergoing necrotic cellular pathology. Finally, the requirements for optimum flow analysis are described. Techniques including gating strategies, voltage and gain settings, discrimination options and data collection and interpretation are provided.     

杂色曲霉素对小鼠肾脏细胞凋亡与增殖的影响

目的：探讨杂色曲霉素（ST）对小鼠肾脏细胞凋亡与增殖的影响。方法：采用动物实验和流式细胞光度方法定量检测灌喂不同剂量的ST对小鼠肾脏细胞凋亡与增殖的影响。结果：经口灌喂不同剂量的ST（3 μg/kg、30 μg/kg、300 μg/kg、3 000 μg/kg）后12 h，ST处理组小鼠肾脏细胞的凋亡率均明显高于对照组（P<0.01）。在3-3 000 μg/kg剂量范围内，ST剂量与凋亡率之间呈明显的量效正相关（r=0.573, P<0.01）。同时,灌喂剂量为3 000 μg/kg的ST后6-48 h，随着ST处理时间的延长，,肾脏细胞的凋亡率也明显增高，ST处理时间与凋亡率之间呈明显的时效正相关（r=0.830, P<0.01）。但不同剂量的ST和ST处理后不同时间对小鼠肾脏细胞的增殖指数均无明显影响。结论：经口给予ST可诱导、促进小鼠肾脏细胞的凋亡而对其增殖指数无明显影响。     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。     

冬凌草甲素对人肺癌NCI-H460细胞侵袭和迁移的影响

 目的：研究冬凌草甲素对人肺癌NCI-H460细胞侵袭和迁移的影响。方法：将NCI-H460细胞分为高剂量（HD）组、中剂量（MD）组、低剂量（LD）组和对照（N）组,前3组（实验组）加入不同浓度的冬凌草甲素,N组不加冬凌草甲素,观察细胞生长情况;用MTT法测定细胞增殖;比较细胞侵袭能力和迁移能力;Western blotting检测细胞MMP-2和MMP-9表达。结果：实验组细胞数量低于对照组,细胞增殖受抑制,HD组抑制率为48.94%,MD组为36.17%,LD组为19.15%;实验组穿透滤膜细胞数明显减少,HD组为26.67±5.16,MD组为36.17±5.08,LD组为44.33±5.50;实验组的迁移速率及迁移细胞数均降低;实验组的MMP-2和MMP-9表达水平明显低于N组（P<0.01）。结论：冬凌草甲素能抑制NCI-H460肺癌细胞的侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2和MMP-9表达有关。     

毛钩藤碱对缺氧乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察毛钩藤碱对缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取MCF-7细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测毛钩藤碱的细胞毒性作用;采用细胞划痕实验测量细胞迁移率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力;采用Western blot法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平。结果:自32μmol/L开始,随着毛钩藤碱浓度的升高,MCF-7细胞存活率明显降低(P0.05),IC_(50)为62.82μmol/L;在缺氧条件下,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05),HIF-α、Snail和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P0.05),HIF-1α的mRNA水平也显著升高(P0.05);除缺氧MCF-7细胞中HIF-α的mRNA水平未受影响外,上述效应均被毛钩藤碱(16μmol/L)明显抑制(P0.05)。结论:毛钩藤碱可在体外抑制缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭,这可能与毛钩藤碱下调HIF-1α、Snail和MMP-9蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平有关。