高压培养对血管内皮细胞t-PA和PAI-1的影响及卡托普利干预的效果

目的：高血压常伴有纤溶功能的异常,但其机制尚不清楚。本研究拟观察高静水压培养对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）t-PA和PAI-1的影响以及卡托普利的干预效果,并探讨其可能的作用机制。方法：选用第4～6代HU-VECs,接种于24孔培养板中。依培养压力分为3组：大气压组（0mmHg）,中压组（90mmHg）,高压组（180mmHg）。在同一压力组,根据不同药物干预又分为两个亚组。即对照组（Ctrl）和卡托普利组（Cap,10^-5mol/L）。每组6份标本。采用ELISA法测定上清液t-PA和PAI-1的抗原浓度,并用细胞内总蛋白进行标化（单位：ng/μg proteins）。同时测定细胞内Ca^2＋浓度（nmol/L）。结果：与大气压组相比,中压和高压组t-PA浓度均显著降低,PAI-1浓度显著增高,t-PA/PAI-1比值显著降低,[Ca^2＋]i也显著增高。卡托普利对大气压组的t-PA、PAI-1和[Ca^2＋]i无显著影响,但在两个高压组,卡托普利显著升高t-PA浓度,显著降低PAI-1浓度,t-PA/PAI-1比值显著升高,[Ca^2＋]i显著地降低。结论：高静水压可损害内皮细胞的纤溶功能,而卡托普利的干预可降低高压所升高的[Ca^2＋]i,并改善高静水压对内皮细胞纤溶功能的影响。     

高压培养对血管内皮细胞t-PA和PAI-1的影响及卡托普利干预的效果

目的:高血压常伴有纤溶功能的异常,但其机制尚不清楚。本研究拟观察高静水压培养对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)t-PA和PAI-1的影响以及卡托普利的干预效果,并探讨其可能的作用机制。方法:选用第4～6代HU-VECs,接种于24孔培养板中。依培养压力分为3组:大气压组(0mmHg),中压组(90mmHg),高压组(180mmHg)。在同一压力组,根据不同药物干预又分为两个亚组。即对照组(Ctrl)和卡托普利组(Cap,10-5mol/L)。每组6份标本。采用ELISA法测定上清液t-PA和PAI-1的抗原浓度,并用细胞内总蛋白进行标化(单位:ng/μg proteins)。同时测定细胞内Ca2 浓度(nmol/L)。结果:与大气压组相比,中压和高压组t-PA浓度均显著降低,PAI-1浓度显著增高,t-PA/PAI-1比值显著降低,[Ca2 ]i也显著增高。卡托普利对大气压组的t-PA、PAI-1和[Ca2 ]i无显著影响,但在两个高压组,卡托普利显著升高t-PA浓度,显著降低PAI-1浓度,t-PA/PAI-1比值显著升高,[Ca2 ]i显著地降低。结论:高静水压可损害内皮细胞的纤溶功能,而卡托普利的干预可降低高压所升高的[Ca2 ]i,并改善高静水压对内皮细胞纤溶功能的影响。     

辛伐他汀对内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的影响

目的　研究HMG CoA还原酶抑制剂辛伐他汀对内皮细胞分泌t PA和PAI 1的影响。方法　培养肺静脉内皮细胞 (ECV30 4 ) ,分别用不同浓度TNF α刺激 ,在 5 0ng/mlTNF α刺激的基础上用辛伐他汀 ( 0 .1、1.0、5 .0、10 .0 μmmol/L)共育 ,用ELISA方法检测培养上清中的t PA和PAI 1的浓度。 结果　各浓度的TNF α刺激 2 4h后PAI 1的浓度明显增加 ,与空白对照相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ,而t PA变化没有统计学差异 ;各浓度的辛伐他汀明显抑制TNF α( 5 0ng/ml)诱导的PAI 1分泌增多 (P <0 .0 1) ,而该作用可被甲基戊酸逆转 ,同样t PA的变化不明显。结论　TNF α可以增加内皮细胞PAI 1的分泌 ,辛伐他汀可以抑制TNF α诱导的PAI 1的分泌 ,而该作用可被甲基戊酸逆转 ,t PA则不受TNF α、辛伐他汀、甲基戊酸等因素的影响。     

不同培养条件对人脐静脉内皮细胞分泌t-PA及PAI-1抗原的影响

目的观察不同培养条件对内皮细胞(EC)纤溶活性的影响.方法用ELISA法测定人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养上清液中的纤溶酶原激活物(t-PA)及I型纤溶酶原灭活剂(PAI-1)总抗原,观察不同代EC分泌t-PA,PAI-1抗原的变化,以及不同血清浓度对两种抗原含量的影响.结果传代和血清均可刺激PAI-1抗原的合成分泌;HUVEC 在第3～4代分泌PAI-1抗原量相当;10%血清浓度时PAI-1抗原含量最高.结论传代和不同浓度血清可影响HUVEC分泌PAI-1抗原,但不影响t-PA抗原的分泌.     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞分泌tPA、PAI-1抗原的影响

目的:探讨缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生组织型纤溶酶原激活物(tPA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)抗原的影响.方法:用酶消化法收集并培养HUVECs,将不同浓度的AngⅡ(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)与HUVECs共同孵育12 h;10-7mol/L AngⅡ和HUVECs作用不同时间(0、2、6、12、24、48 h);10-7mol/L AngⅡ和不同浓度缬沙坦(10-5、10-6、10-7、10-8mol/L)与HUVECs作用12 h;10-6mol/L缬沙坦与HUVECs作用12 h.用酶联免疫吸附法测定上清液中tPA和PAI-1抗原浓度.结果: AngⅡ呈浓度依赖性升高HUVECs的PAI-1抗原水平,10-7mol/L达高峰效应[(211.00±9.34)ng/mL vs (85.67±8.53) ng/mL,P《0.01];10-7mol/L AngⅡ与HUVECs作用2 h,PAI-1含量即升高,12 h达高峰[(198.08±7.85)ng/mL vs (22.93±4.73) ng/mL,P《0.01];缬沙坦呈浓度依赖性降低AngⅡ促HUVECs分泌PAI-1,10-6mol/L缬沙坦达高峰效应[(164.73±5.36)ng/mL vs (211.00±9.34) ng/mL,P《0.01];AngⅡ和缬沙坦对tPA抗原没有明显影响.结论:AngⅡ通过促进HUVECs分泌PAI-1而降低纤溶活性,缬沙坦通过抑制AngⅡ的促PAI-1分泌作用而提高纤溶活性,有助于动脉粥样硬化血栓性疾病的防治.     

RT-PCR半定量法检测人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1 mRNA表达

目的 建立一种敏感的检测组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）及其抑制剂（ＰＡＩ－１）基因表达的方法。方法 用异硫氰酶胍一步法提取细胞总ＲＮＡ。用单管ＲＴ＿ＰＣＲ法逆转录－扩增ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１和内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡ，扩增产物经电泳分离后，用凝胶图像分析仪照相和扫描分析，测定各条带分子量和光密度值。结果 ＰＣＲ产物均与预期长度相吻合，且ＰＣＲ产一与扩增初始模板量之间存在良好的     

纤维蛋白原、极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1mRNA含量的影响

目的　拟建立逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量法,探讨纤维蛋白原（Ｆｇ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）、Ｉ型纤溶酶原灭活剂（ＰＡＩ－ｌ）ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　（ｌ）用异硫氰酸胍一步法（ＴＲＩｚｏｌ试剂）提取细胞总ＲＮＡ,用单管ＲＴ－ＰＣＲ 法、三对引物分别逆转录、扩增ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１ 及内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的特异性片段,扩增产物经２．０％ 琼脂糖凝胶电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相、计算各条带分子量并扫描其光密度值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｄｅｎｓｉｔｙ ｖａｌｕｅ,ＩＤＶ）,ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ的ＩＤＶ 用ＧＡＰＤＨ ｍ ＲＮＡ 的ＩＤＶ 进行校正,其相对表达量用各实验组与对照组比较的倍数表示。（２）以ＥＬＩＳＡ 法测定内皮细胞（ＥＣ）培养上清液（ＣＭ）中ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１总抗原的含量。（３）ＥＣ与不同浓度Ｆｇ（２,２０,２００,２０００ μｇ／ｍ ｌ）或ＶＬＤＬ（５,１０,２０,３０,４０ μｇ／ｍ ｌ）共同孵育１２ ｈ 或２４ ｈ 后,观察ＥＣｔ－ＰＡ 和ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ 水平及ＣＭ 中抗原含量的变化。（４     

CRP对人脐静脉内皮细胞释放ET、PAI-1的影响

目的：探讨CRP对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放内皮素-1(ET—1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI—1)的影响。方法：用不同浓度的C反应蛋白(CRP)与HUVEC培养不同时间后，用放射免疫法分析及用ELISA法检测培养液中ET-1、PAI-1的含量。结果：用CRP作用HUVEC后，ET—1、PAI—1的浓度随CRP浓度增加和CRP作用时间延长而呈递增趋势。结论：CRP可促进HUVEC释放ET—1、PAI-1，从而促使血管痉挛、血栓形成和急性冠脉综合征的发生发展。     

疏血通对培养脑微血管内皮细胞分泌t-PA和PAI的影响

目的研究疏血通注射液对脑微血管内皮细胞(BMECs)分泌组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响.方法培养至第3代鼠BMECs,不同药物浓度组和不同处理时间组分实验组和对照组,各组n=9,按3×104个细胞/孔接种,培养至第9天细胞长满孔底用于实验.观察BMECs的生长情况并测定t-PA和PAI-1的活性.结果疏血通注射液明显促进BMECs生长.不同浓度组按1:4、1:16、1:32稀释浓度疏血通注射液处理BMECs 24h,不同时间组按1:16稀释浓度疏血通注射液处理鼠BMECs 8h、24h、48h,实验组BMECs分泌t-PA活性明显高于各自对照组,有显著差异(P＜0.01).结论疏血通治疗脑血管疾病,促进内皮细胞分泌t-PA但不影响PAI-1的产生,是其主要的药理作用之一.     

TNF-α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1的影响及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)或弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI-1的活性。用Northern印迹分析法检测PAI-1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C穴PKC雪或促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂干预上述诱导实验。结果TNF-α或mmLDL作用HUVEC后,PAI-1活性和mRNA基因表达均明显增加。促分裂原活化蛋白激酶-激酶穴MAPKK雪的抑制剂PD98059(60μmol/L)能明显阻断TNF-α穴100U/ml雪或mmLDL穴50μg/ml雪对PAI-1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)和H7(15μmol/L)无显著阻断作用。结论(1)TNF-α或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI-1活性与mRNA表达;穴2雪PAI-1活性提高与其mRNA表达增加有关;(3)MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI-1表达中起重要作用。     

高脂血症对血浆t-PA和PAI-1活性的影响

目的 探讨高脂血症患者的纤溶系统的变化。方法 选取正常人及高脂血症者，测定其血脂、血浆t—PA和PAI-1活性。结果 高脂血症组比正常人血浆t—PA活性下降，而PAI-1的活性有升高；在TG及LDL-C升高者，其血浆t—PA活性比正常人血浆t—PA活性降低，而血浆PAI-1活性比正常人升高；单纯TC升高者血浆PAI-1活性接近正常人组，而血浆t—PA活性比正常人组明显降低。结论 高脂血症对纤溶系统有一定的影响，其中甘油三酯和LDL-C对纤溶系统的影响更明显，而胆固醇对纤溶系统也有一定的影响。     

高压培养促进人血管内皮细胞和人单核细胞的粘附

目的 探讨体外高压培养对人血管内皮细胞粘附功能的影响,为高血压和血管动脉粥样硬化的发病关系提供实验依据. 方法 体外培养血管内皮细胞,分别以不同的压力(0、120、150、180、210 mmHg)培养细胞,细胞计数法测定内皮细胞与单核细胞的粘附率. 结果 高压培养明显增加内皮细胞和单核细胞的粘附率,180 mHg高压培养细胞较大气压力(0 mmHg)培养24 h粘附率增加约3.6倍;但MG132预处理抑制了180mmHg高压培养诱导的内皮细胞与单核细胞的粘附率. 结论 高压培养促进血管内皮细胞的粘附功能.     

切应力对内皮祖细胞t-PA基因表达和小径人工血管移植通畅率的影响

 【目的】研究切应力对内皮祖细胞组织纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,t-PA)基因表达和种植内皮祖细胞小径聚氨酯人工血管移植通畅率的影响。【方法】诱导健康成人外周血的单个核细胞分化成为内皮祖细胞。种植内皮祖细胞到小径人工血管表面后,分为静态组、低切应力组(5dyn/cm2)、中切应力组(15dyn/cm2)和高切应力组(25dyn/cm2)4种不同处理组,用酶联免疫吸附法测定不同时间点培养液中t-PA的水平,并用荧光定量RT-PCR分析内皮祖细胞t-PA的基因表达。19只家犬随机分为2组,实验组10只用中切应力处理后内皮祖细胞种植的小径聚氨酯人工血管移植犬颈总动脉,对照组9只用未经切应力处理内皮祖细胞种植的人工血管移植。移植术后2个月,比较2组小径人工血管的移植通畅率。【结果】外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典形的"纺锤样"梭形细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和VWF免疫荧光抗体染色均为阳性。流体切应力增加内皮祖细胞t-PA的产生,并上调内皮祖细胞t-PA的基因表达。行移植术后2个月,实验组10只人工血管均获通畅,对照组通畅率为55.6%。【结论】切应力处理可上调内皮祖细胞t-PA的基因表达,并改善内皮祖细胞种植后小径人工血管的移植通畅率,这为解决临床小径人工血管通畅率低提供了新的策略。     

切应力对内皮祖细胞t-PA基因表达和小径人工血管移植通畅率的影响

【目的】研究切应力对内皮祖细胞组织纤溶酶原激活物（tissue—type plasminogen activator,t—PA）基因表达和种植内皮祖细胞小径聚氨醇人工血管移植通畅率的影响。【方法】诱导健康成人外周血的单个核细胞分化成为内皮祖细胞。种植内皮祖细胞到小径人工血管表面后。分为静态组、低切应力组（5dyn／cm^-2）、中切应力组（15dyn／cm^-2）和高切应力组（25dyn／cm^-2）4种不同处理组，用酶联免疫吸附法测定不同时间点培养液中t-PA的水平。并用荧光定量RT-PCR分析内皮祖细胞t-PA的基因表达。19只家犬随机分为2组，实验组10只用中切应力处理后内皮祖细胞种植的小径聚氨酯人工血管移植犬颈总动脉．对照组9只用未经切应力处理内皮祖细胞种植的人工血管移植。移植术后2个月。比较2组小径人工血管的移植通畅率。【结果】外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞。倒置荧光显微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞。ac—LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性，FIX-1和VWF免疫荧光抗体染色均为阳性。流体切应力增加内皮祖细胞t—PA的产生。并上调内皮祖细胞t-PA的基因表达。行移植术后2个月，实验组10只人工血管均获通畅，对照组通畅率为55．6％。【结论】切应力处理可上调内皮祖细胞t-PA的基因表达，并改善内皮祖细胞种植后小径人工血管的移植通畅率，这为解决临床小径人工血管通畅率低提供了新的策略。     

围产期缺血缺氧对新生大鼠肺组织t-PA和PAI-1表达影响的研究

目的通过对新生大鼠围产期缺血缺氧肺组织t-PA和PAI-1表达变化的观察,以探讨围产期缺血缺氧后新生大鼠肺损伤的机制,为临床治疗提供依据。方法通过建立宫内急性缺血缺氧动物模型,分别采用免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法动态观察肺组织t-PA和PAI-1蛋白和mRNA表达的变化。结果宫内急性缺血缺氧20min时新生大鼠肺组织t-PA蛋白含量增加,t-PAmRNA表达明显增强,均高于正常对照组(P<0.05),随着缺血缺氧时间延长,其表达与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。宫内急性缺血缺氧20min时新生大鼠肺组织PAI-1蛋白含量增加,PAI-1mRNA表达明显增强,均高于正常对照组(P<0.05),于缺血缺氧30、40min时仍显著高于对照组(P<0.01)。结论宫内急性缺血缺氧可致新生大鼠肺组织t-PA表达一过性增强,PAI-1表达持续增强,新生大鼠肺组织处于一种高凝状态。这可能是围产期急性缺血缺氧引起新生大鼠肺损伤的原因之一。