mTOR-自噬通路对脓毒症小鼠海马小胶质细胞表型的影响

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-自噬通路对脓毒症小鼠海马小胶质细胞表型的影响。方法 54 只雄性 ICR 小鼠,按照随机数字表法分为 3 组（n=18）：假手术组（Sham 组）、脓毒症组（CLP 组）和脓毒症+mTOR抑制剂雷帕霉素组（CLP+Ra组）。Sham组只进行开腹手术操作;CLP组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型;CLP+Ra 组于造模前 6 h腹腔注射雷帕霉素（1.5 mg/kg）。于造模后 24 h各组取 6只,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测海马组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-10和转化生长因子（TGF）-β水平;采用免疫荧光染色法检测海马组织切片离子钙接头蛋白分子（Iba）-1/CD86和 Iba-1/CD206阳性细胞数量;采用蛋白免疫印迹法测定海马组织 mTOR磷酸化（p-mTOR）水平、自噬相关蛋白微管相关蛋白 1轻链 3Ⅱ（LC3Ⅱ）和 Beclin-1表达情况。结果 与 Sham组比较,CLP组 TNF-α、IL-1β、IL-10和 TGF-β水平升高,Iba-1/CD86和 Iba-1/CD206阳性细胞数量增加,p-mTOR水平上调,LC3Ⅱ和 Beclin-1表达下调（均 P＜0.05）。与 CLP组比较,CLP+Ra组 TNF-α和 IL-1β水平降低,IL-10和 TGF-β水平升高,Iba-1/CD86阳性细胞数量减少,Iba-1/CD206阳性细胞数量增加,p-mTOR水平下调,LC3Ⅱ和 Beclin-1表达上调（均 P＜0.05）。结论 mTOR-自噬通路通过调节小胶质细胞表型转化,影响脓毒症小鼠海马炎症反应。     

基于PI3K/AKT通路探究柚皮素改善多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用机制

目的　基于磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路,初步探究柚皮素防治大鼠多囊卵巢综合征（PCOS）胰岛素抵抗的分子机制。方法　SD大鼠颈背部每日皮下注射脱氢表雄酮建立PCOS模型,将造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、柚皮素组、PI3K抑制剂组、柚皮素+PI3K抑制剂组,每组15只;相同时间段取SD大鼠15只,于颈背部皮下注射油剂2 mL/kg,作为正常对照组。检测各组大鼠血糖、胰岛素、血脂、生殖激素水平,计算胰岛素抵抗指数;HE染色观察卵巢形态;免疫组化法检测磷酸化PI3K（p-PI3K）阳性表达;Western blot法检测PI3K/AKT通路磷酸化蛋白及通路相关蛋白胰岛素受体底物-1（IRS-1）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、葡萄糖转运蛋白因子-4（GLUT4）、人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因（PTEN）蛋白表达。结果　与正常对照组相比,模型组大鼠卵巢组织出现卵泡囊性扩张、黄体数量及颗粒细胞层减少、闭锁卵泡增多等病理损伤症状,血脂、血糖、胰岛素水平升高,胰岛素抵抗增加,生殖激素分泌紊乱,PI3K/AKT通路磷酸化蛋白及通路相关蛋白IRS-1、GSK-3β磷酸化蛋白表达、GLUT4蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高（P＜0.05）。柚皮素可减轻卵泡囊性扩张等病理损伤,促进PI3K/AKT通路及通路相关蛋白IRS-1、GSK-3β磷酸化蛋白及GLUT4蛋白表达,改善生殖激素分泌紊乱现象,减轻胰岛素抵抗,降低血糖、血脂水平及PTEN蛋白表达（P＜0.05）。PI3K抑制剂可减弱柚皮素的上述作用（P＜0.05）。结论　柚皮素可通过促进PI3K/AKT通路活化,降低血糖、血脂水平及胰岛素抵抗,改善PCOS大鼠生殖激素紊乱及卵巢多囊改变。     

盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠巨噬细胞炎症蛋白-1α水平变化的研究

目的研究脓毒症大鼠早期肺泡灌洗液巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)水平的变化及其与脓毒症的关系。方法 60只SD大鼠随机分成A组假手术组,n=30、B组脓毒症组,n=30,A组仅行盲肠探查术,B组采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作大鼠脓毒症模型。两组术后即刻皮下注射生理盐水5 ml。各组均于术后3、6、12、24、48 h时点,留取肺泡灌洗液检测MIP-1α。结果 CLP术后3 h肺泡灌洗液MIP-1α即开始升高,明显高于A组(P<0.05),且逐步升高,到术后12 h达峰值,随后逐渐下降,但在48 h时点仍然显著高于A组(P<0.05)。结论脓毒症致急性肺损伤后MIP-1α水平明显升高,其升高可能是脓毒症导致急性肺损伤的原因之一,在脓毒症导致急性肺损伤发生发展中具有重要作用。     

利多卡因对脓毒症大鼠预后的影响

目的：探讨利多卡因对脓毒症大鼠预后的影响。方法在96只雄性Wistar大鼠进行盲肠结扎穿孔（ CLP）造模。48只大鼠分为对照组（ C组）,模型组（ CLP组）,早期利多卡因处理组（ Lido＋CLP组）和晚期利多卡因处理组（ CLP＋Lido组）,每组12只。每组大鼠分别在CLP后24 h和48 h处死,收集血和肺组织样品用来检测血清中HMGB1水平,肺组织中HMGB1 mRNA表达和重要器官功能指标;同时另取48只大鼠进行生存率分析。结果血清中HMGB1和肺组织中HMGB1 mRNA呈正相关（ r ＝0．94, P ＜0．05）;血清中HMGB1和肺组织中HMGB1 mRNA在CLP组,Lido＋CLP组和CLP＋Lido组明显高于C组（P ＜0．05）;但在Lido＋CLP组和CLP＋Lido组明显低于CLP组（ P ＜0．05）。和CLP组相比,丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（ AST）、尿素氮（ BUN）、肌酐（ Cr）和肌酸磷酸激酶（CK）水平在Lido＋CLP组和CLP＋Lido组明显降低（ P ＜0．01）。大鼠生存率在Lido＋CLP组和CLP＋Lido组明显高于CLP组（ P ＜0．01）。结论利多卡因可以明显改善生存率,抑制HMGB1表达和保护脓毒症大鼠肝、肾、心等重要器官。     

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

目的 探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine, BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法 将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ROS(mtROS);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果 过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率（P<0.05）,并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8...     

紫檀芪通过PI3K/Akt通路对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 分析紫檀芪（PTS）对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其可能作用机制。方法 将大鼠30只随机分为假手术组、脓毒症组和PTS组,每组10只,脓毒症组和PTS组（25 mg/kg）均通过盲肠结扎穿刺术建立大鼠脓毒症模型,24 h后处死大鼠;TUNEL染色法检测肺组织细胞凋亡,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量,Western blot检测肺组织中p-PI3K和p-Akt的表达。结果 与假手术组比较,脓毒症组肺组织TUNEL阳性细胞数、血清TNF-α、IL-6、MCP-1含量均升高（P<0.05）,肺组织p-PI3K和p-Akt蛋白含量均下降（P<0.05）;而与脓毒症组比较,PTS组肺组织TUNEL阳性细胞数、血清TNF-α、IL-6、MCP-1含量均下降（P<0.05）,肺组织p-PI3K和p-Akt蛋白含量均增加（P<0.05）。结论 PTS通过PI3K/Akt途径抑制脓毒症所致大鼠肺损伤的凋亡和炎性反应,为脓毒症所致肺损伤的药物治疗提供候选。     

少腹逐瘀汤对输卵管炎性不孕大鼠NLRP3炎症小体的作用研究

目的 研究少腹逐瘀汤对输卵管炎性不孕大鼠Nod样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体的作用。方法 采用金黄色葡萄球菌法构建大鼠输卵管炎性不孕模型,造模成功雌性大鼠随机分为3组：模型组、少腹逐瘀汤（以生药计5g·kg^-1,临床等效剂量）组、盐酸左氧氟沙星（阳性药,80mg·kg^-1）组,另取10只大鼠作为对照组。各组于成模后第8天开始ig给药,每天1次,连续30d,对照组和模型组ig等量0.9%氯化钠注射液。各组雌鼠与成熟雄鼠按2∶1合笼,观察受孕率;HE染色观察各组大鼠输卵管病理变化;Western blotting法检测输卵管组织中NLRP3蛋白表达;实时荧光定量PCR（qRTPCR）法检测输卵管组织中NLRP3和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA水平。原代培养大鼠输卵管上皮细胞,10nmol·L^-1脂多糖（LPS）刺激24h制备炎症模型,造模同时给予10mg·L^-1盐酸左氧氟沙星、10mg·L^-1少腹逐瘀汤处理,Western blotting法检测细胞NLRP3蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中NLRP3、IL-1β、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA水平。结果 对照组的受孕率为60%,模型组的受孕率为40%,盐酸左氧氟沙星组和少腹逐瘀汤组的受孕率均为80%。对照组大鼠输卵管结构清晰,黏膜皱褶丰富,黏膜上皮细胞排列整齐,管腔通畅;模型组大鼠的输卵管结构分界欠清,黏膜皱褶消失,黏膜上皮细胞排列紊乱,管腔狭窄,出现梗阻和大量炎性细胞浸润等情况;盐酸左氧氟沙星组与少腹逐瘀汤组大鼠输卵管结构有改善,管壁组织结构尚清晰,黏膜上皮细胞排列欠规整,管腔通畅,仅少量炎性细胞浸润。与对照组比较,模型组大鼠输卵管组织的NLRP3蛋白和NLRP3、IL-1βmRNA水平显著上调（P＜0.001）;与模型组比较,少腹逐瘀汤组输卵管组织的NLRP3蛋白和NLRP3、IL-1βmRNA水平显著下降（P＜0.05、0.001）。与对照组比较,模型组输卵管上皮细胞NLRP3蛋白和NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平显著上调（P＜0.05、0.01、0.001）;与模型组比较,少腹逐瘀汤组NLRP3蛋白和NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平显著下降（P＜0.05、0.01）。结论 少腹逐瘀汤治疗输卵管炎性不孕症的作用机制可能与调节NLRP3介导的炎症反应有关。     

基于NLRP3炎症小体的抑瘤汤联合紫杉醇对上皮性卵巢癌的作用研究

目的 研究抑瘤汤对上皮性卵巢癌中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体的作用。方法 通过免疫组化法比较人体的良性肿物和卵巢癌组织中NLRP3和白细胞介素（IL）-1β的表达水平;体外培养人上皮性卵巢癌细胞系A2780,分成对照组、化疗（给予DMSO溶解的紫杉醇100nmol·L^-1）组、化疗＋抑瘤汤（1、10、100mg·L^-1）组,对照组加入等量DMSO,干预12、24、48、72h后,CCK-8法检测细胞存活率,选取合适的抑瘤汤浓度及干预时间进行后续实验;Western blotting法检测NLRP3的蛋白表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和IL-1β的mRNA水平;ELISA法检测细胞上清液中NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白水平。结果 与卵巢良性肿物组相比,卵巢癌患者的卵巢组织中NLRP3及IL-1β蛋白表达显著上调（P＜0.05）;干预24、48、72h后,与对照组相比,化疗组的细胞存活率显著降低（P＜0.05、0.001）;与化疗组相比,化疗＋100mg·L^-1抑瘤汤组的细胞存活率显著降低（P＜0.01、0.001）,选取100mg·L^-1抑瘤汤干预48h进行后续研究。与对照组相比,化疗组的细胞中NLRP3蛋白表达水平降低,但无统计学意义;与对照组及化疗组相比,化疗＋抑瘤汤组的细胞中NLRP3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05、0.001）。与对照组相比,化疗组和化疗＋抑瘤汤组的NLRP3 mRNA和上清中蛋白水平显著降低（P＜0.05、0.001）;与化疗组相比,化疗＋抑瘤汤组的NLRP3mRNA和上清中蛋白水平显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,化疗组的Caspase-1、ASC、IL-1β的mRNA水平降低,但无统计学意义;化疗＋抑瘤汤组的Caspase-1、ASC、IL-1β mRNA水平显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,化疗组和化疗＋抑瘤汤组细胞上清中的Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白水平显著降低（P＜0.01、0.001）;与化疗组相比,化疗＋抑瘤汤组的Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白进一步降低,其中Caspase-1、ASC差异显著（P＜0.05、0.001）。结论 NLRP3炎症小体在卵巢癌中高表达,抑瘤汤可抑制卵巢癌细胞NLRP3炎症小体的表达。     

利拉鲁肽对脓毒症小鼠肾损伤保护作用及机制

目的 观察利拉鲁肽对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及机制。方法 将20只雄性小鼠随机分为假手术组(sham组),假手术组+利拉鲁肽(sham+l组),模型组(clp组)和治疗组(clp+l组),每组5只。sham+l组和clp+l组小鼠预先24h腹腔注射利拉鲁肽100μg/kg(生理盐水稀释)间隔12 h一次;sham组和clp组小鼠相同时间腹腔注射等体积生理盐水。clp组和clp+l组小鼠均行盲肠结扎穿孔（CLP）手术,建立脓毒症小鼠生存模型。术后24 h,检测小鼠血清尿素氮(Urea)、肌酐(Cr)、TNF-α、IL-6水平,HE染色观察肾组织形态学变化;Tunel染色观察肾脏细胞凋亡;QPCR法检测小鼠肾组织TNF-α、IL-6水平;Westernblot测定肾组织中NLRP3、caspase-1表达。结果 与模型组相比,治疗组血清Urea、Cr、TNF-α,IL-6水平明显降低;肾组织损伤明显改善;肾组织TNF-α、IL-6、NLRP3及caspase-1表达降低。结论 利拉鲁肽可减轻脓毒血症小鼠肾脏损伤,其作用机制可能与其抑制NLRP3炎症小体信号通路,减少炎症反应发生有关。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...     

热打击通过活化NLRP3炎性小体增加肺毛细血管的通透性

目的 验证热打击通过活化 NLRP3炎性小体增加肺毛细血管通透性的机制。方法 C57BL/6小鼠和肺微血管内皮细胞,用 42 ℃热打击。体内实验分组包括：对照组和热打击组,每组 12只小鼠;体外实验分组包括：对照组、热打击组、热打击+2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物（TEMPO）组、热打击+半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）抑制剂（Z-VAD-FMK）组、热打击+白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）组,每组 4例。检测肺组织和肺微血管内皮细胞活性氧（ROS）表达;Western blot 和（或）免疫荧光检测 caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）、紧密连接蛋白 ZO-1、occludin、claudin-5的表达;用伊文氏蓝检测小鼠肺毛细血管的通透性。结果 体内实验结果显示,与对照组比较,热打击组小鼠肺组织伊文氏蓝浓度明显升高、ROS表达上调、NLRP3炎性小体活化、IL-1β表达上调和紧密连接蛋白的表达下调（P＜0.01）。体外实验结果显示,用 TEMPO 清除 ROS 后,NLRP3炎性小体活化被抑制（P＜0.01）;用 ZVAD-FMK抑制 caspase-1作用后,IL-1β表达显著下调（P＜0.01）;用 IL-1Ra阻断 IL-1β作用后,紧密连接蛋白表达显著上调（P＜0.01）。结论 热打击可通过活化 NLRP3炎性小体促进 IL-1β的表达,进而下调紧密连接蛋白的表达,导致肺微血管通透性增加。     

Astragaloside IV attenuates sepsis-induced intestinal barrier dysfunction via suppressing RhoA/NLRP3 inflammasome signaling

Intestinal barrier dysfunction is a trigger for sepsis progression. NLRP3 inflammasome and RhoA contribute to sepsis and intestinal inflammation. The current study aimed to explore the effects of Astragaloside IV (AS-IV), a bioactive compound from Astragalus membranaceus, on sepsis-caused intestinal barrier dysfunction and whether NLRP3 inflammasome and RhoA are involved. Septic mice modeled by cecal ligation and puncture (CLP) operation were administered with 3 mg/kg AS-IV intravenously. AS-IV decreased mortality, cytokines release, I-FABP secretion, intestinal histological score and barrier permeability, and increased tight junction (TJ) expression in intestine in CLP model. Also, in Caco-2 cells subjected to lipopolysaccharide (LPS), 200 μg/mL AS-IV co-incubation reduced cytokines levels and enhanced in vitro gut barrier function without cytotoxicity. Subsequently, NLRP3 inflammasome and RhoA were highly activated both in intestinal tissue in vivo and in Caco-2 cells in vitro, both of which were significantly suppressed by AS-IV treatment. In addition, the benefits of AS-IV on Caco-2 monolayer barrier were largely counteracted by RhoA agonist CN03 and NLRP3 gene overexpression, respectively. Furthermore, LPS-induced NLRP3 inflammasome activation was abrogated by RhoA inhibitor C3 exoenzyme. However, NLRP3 knockdown by siRNA hardly affected RhoA activation in Caco-2 cells. These data suggest that AS-IV protects intestinal epithelium from sepsis-induced barrier dysfunction via inhibiting RhoA/NLRP3 inflammasome signal pathway.     

C/EBPβ通过pim-1介导足细胞损伤的作用机制

目的　探讨CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）/丝氨酸/苏氨酸激酶1（pim-1）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）轴介导小鼠肾脏足细胞损伤的作用机制。方法　体外培养及转染足细胞后分为Control组、siRNA-NC组（用siRNA-NC转染足细胞）、siC/EBPβ组（用siC/EBPβ慢病毒转染足细胞）、Vector-NC组（空载体转染足细胞）和pim-1-OE组（pim-1过表达慢病毒转染足细胞）。脂多糖（LPS）与腺苷三磷酸（ATP）刺激足细胞后分为LPS+ATP组、LPS+ATP+siRNA-NC组、LPS+ATP+siC/EBPβ组、LPS+ATP+siC/EBPβ+Vector-NC组和LPS+ATP+siC/EBPβ+pim-1-OE组。实时荧光定量PCR（qPCR）检测C/EBPβ和pim-1 mRNA水平。Western blot检测C/EBPβ、pim-1、NLRP3、p20半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-1、Gasdermin D（GSDMD）、p17白细胞介素（IL）-1β蛋白水平。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎性因子IL-1β和IL-6水平。染色质免疫共沉淀（chip）实验及双荧光素酶报告基因实验检测C/EBPβ与pim-1基因启动子结合。结果　与Control组和siRNA-NC组相比,siC/EBPβ组的C/EBPβ及pim-1 mRNA水平明显下降（P＜0.01）。与Control组相比,LPS＋ATP组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β蛋白水平及IL-1β、IL-6水平明显升高（P＜0.01）。与LPS+ATP+siRNA-NC组相比,LPS+ATP+siC/EBPβ组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β蛋白水平及IL-1β、IL-6水平降低（P＜0.01）。chip实验及双荧光素酶报告基因实验显示C/EBPβ可与pim-1基因启动子结合。与Control组和Vector-NC组比较,pim-1-OE组pim-1 mRNA水平明显升高（P＜0.05）。与LPS+ATP+siC/EBPβ+Vector-NC组相比,LPS+ATP+siC/EBPβ+pim-1-OE组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β、GSDMD蛋白水平及IL-1β、IL-6水平升高（P＜0.05）。结论　C/EBPβ/pim-1/NLRP3轴可能参与足细胞损伤,并作为LN治疗的潜在靶点。     

犀角地黄汤合方含药血清调节ITP患者Teff/Treg分化及功能的研究#br#

目的　探究犀角地黄汤合方含药血清对免疫性血小板减少症（ITP）患者效应性T细胞（Teff）/调节性T细胞（Treg）分化的影响,并探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的作用机制。方法　采用随机数字表法将20只大鼠分为含药血清组和空白血清组,每组10只,分别使用犀角地黄汤合方颗粒和蒸馏水连续灌胃3 d,收取2组大鼠全血制备含药血清和空白血清。收集健康志愿者和ITP患者外周血,提取外周血单个核细胞（PBMC）,磁珠分选CD4+ T细胞,抗CD3/CD28抗体培养体系活化后,分为对照组、模型组和实验组。对照组为健康志愿者CD4+ T细胞,模型组及实验组为ITP患者CD4+ T细胞,实验组采用含药血清干预72 h,对照组及模型组采用大鼠空白血清干预72 h。流式细胞术检测各组CD4+ T细胞中Teff/Treg比例;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组培养上清液中白细胞介素（IL）-2、干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6、IL-17及Treg细胞因子转化生长因子（TGF）-β、IL-10水平;Western blot检测PI3K、Akt、mTOR蛋白及磷酸化蛋白水平。结果　CD4阳性率为（99.44±0.01）%。与对照组相比,模型组CD4+ T细胞中Teff细胞比例明显升高,Treg比例明显降低,Teff/Treg比值增大,IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平升高,TGF-β、IL-10、p-Akt蛋白水平降低（P＜0.05）;与模型组相比,实验组CD4+ T细胞中Teff细胞比例降低,Treg细胞比例升高,Teff/Treg比值减小,IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平降低,TGF-β、IL-10水平升高（P＜0.05）。结论　犀角地黄汤合方含药血清能够调节ITP患者Teff/Treg的分化及细胞因子的分泌,可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K、mTOR蛋白表达及其磷酸化水平有关。     

尿白细胞介素18和血清高迁移率族蛋白1对新生儿窒息后急性肾损伤的诊断价值

摘要：目的 探讨尿白细胞介素（IL）-18和血清高迁移率族蛋白1（HMGB1）对新生儿窒息后急性肾损伤的诊断 价值。方法 选取本院儿科2015年6月—2017年12月诊治的128例窒息新生儿（轻度窒息组80例,重度窒息组48 例）作为研究组,根据出生后1周内是否发生急性肾损伤（AKI）情况分为急性肾损伤组（AKI组,56例）和非急性肾损 伤组（非AKI组,72例）;选取本院产科同期出生的64例健康新生儿作为对照组。检测出生后24 h内尿IL-18、血清 HMGB1、肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平;应用受试者工作特征曲线（ROC）评价尿IL-18和血清HMGB1对新生儿窒 息后AKI的诊断价值。结果 轻度窒息组和重度窒息组尿IL-18、血清HMGB1、Scr和BUN的水平高于对照组（P＜ 0.05）;轻度窒息组尿 IL-18、血清 HMGB1、Scr 和 BUN 的水平低于重度窒息组（P＜0.05）。AKI 组尿 IL-18、血清 HMGB1、Scr和BUN的水平高于非AKI组（P＜0.05）;尿IL-18和血清HMGB1与Scr和BUN呈正相关（P＜0.05）。ROC 曲线分析结果显示,尿IL-18和血清HMGB1对新生儿窒息后AKI的诊断价值优于血清Scr和BUN。结论 尿IL-18 和血清HMGB1可作为早期诊断新生儿窒息后AKI的标志物。     

Involvement of endoplasmic reticulum stress in angiotensin II-induced NLRP3 inflammasome activation in human renal proximal tubular cells in vitro

Aim:

NLRP3 inflammasome plays an important role in renal injury and may be a therapeutic target in the treatment of patients with progressive chronic kidney disease. In this study we investigated whether angiotensin II (Ang II)-induced NLRP3 inflammasome activation was linked to endoplasmic reticulum stress (ERS) in human renal proximal tubular cells in vitro.

Methods:

Human kidney proximal epithelial cells (HK-2) were pretreated with telmisartan or 4-PBA, and then treated with Ang II. The expression levels of mRNAs and proteins related to NLRP3 inflammasomes and ERS was examined by real-time PCR, Western blot and immunofluorescence.

Results:

Treatment with Ang II (10, 100, and 1000 nmol/L) increased the expression of the inflammasome markers NLRP3 and ASC, as well as caspase-1, IL-1β, and IL-18 in dose- and time-dependent manners with peak levels detected at 100 nmol/L and 12 h. Ang II-induced increases in the expression of NLRP3, ASC, caspase-1, IL-1β, and IL-18 were significantly reduced by pretreatment with telmisartan (1 μmol/L). Immunofluorescence studies showed that Ang II increased the expression of NLRP3 and ASC, which was inhibited by telmisartan. Furthermore, Ang II treatment increased the expression of ERS markers GRP78 and p-eIF2α in dose- and time-dependent manners, which was significantly reduced by telmisartan. Moreover, Ang II-induced increases in the expression of NLRP3, ASC, caspase-1, IL-1β, and IL-18 were significantly inhibited by pretreatment with the ERS inhibitor 4-PBA (5 mmol/L).

Conclusion:

Ang II treatment induces NLRP3 inflammasome activation in HK-2 cells in vitro and ER stress is involved in this process, which may represent a new mechanism for the renal rennin-angiotensin system to induce tubulointerstitial inflammation.     

Crocetin attenuates the oxidative stress,inflammation and apoptosis in arsenic trioxide-induced nephrotoxic rats: Implication of PI3K/AKT pathway

Arsenic trioxide (ATO)-induced renal toxicity through oxidative stress and apoptosis restricts the therapeutic action of acute myelogenous leukemia. Crocetin (Crt) possesses antioxidant and antiapoptosis properties, and has certain renal protective effects, but it has not been reported that it has protective effect on renal injury caused by ATO. The current study explored the effects and mechanisms of Crt on kidney damage induced by ATO. Fifty Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups. Adult rats were given Crt concurrently with ATO for 1 week. On the 8th day, rats were killed and blood and kidney tissues were collected. Histopathological changes were measured, and kidney tissues and serum were used to determine renal function and antioxidant enzyme activity. In addition, the protein expression levels of P-PI3K, PI3K, P-AKT, AKT, CytC, Bax, Bcl-2 and Caspase-3 were determined via western blot analysis. Results revealed ATO induced renal morphological alterations and activated serum BUN and CRE. Compared with the control group, ROS, MDA, IL-1β, TNF-α, protein carbonyls (PC), lipid hydroperoxides (LOOH) and arsenic concentration levels were found to be significantly increased and SOD, CAT, GSH-Px, GSH and total sulphydryl groups (TSH) levels were attenuated in the ATO group. Crt markedly reduced oxidative stress in ATO-induced nephrotoxicity. Further, ATO induced apoptosis by significantly enhancing CytC, Bax and Caspase-3 and inhibiting Bcl-2. Administration with Crt markedly improved the expression of apoptosis factor. Moreover, Crt treatment stimulated the expressions of P-PI3K, PI3K, P-AKT, AKT induced by ATO. This study indicates Crt could prevent renal injury caused by ATO through inhibiting oxidative stress, inflammation and apoptosis, and its mechanism may be related to activation of PI3K/Akt signaling pathway.     

PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨 #br#

目的 探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法 体外培养人绒毛膜滋 养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组（阴性对照组）、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同 源物基因（PTEN）-siRNA 组（抑制 PTEN 表达组）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路抑制剂（GDC-0349）组。 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋 亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制 率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PTEN蛋白表 达水平均显著升高（P＜0.05）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）/PI3K、磷酸化蛋白激酶B （p-AKT）/AKT、磷酸化 mTOR（p-mTOR）/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与高糖组、NC 组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与 PTEN-siRNA 组比较,GDC-0349 组 HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/ SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。     

水飞蓟宾调控NF-κB通路和NLRP3炎症小体改善脂多糖所致大鼠急性肾损伤

目的: 探讨水飞蓟宾(silybin,SB)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠急性肾损伤的保护作用及机制。方法: 选用45只雄性SD大鼠,随机分为空白组(CTRL)、模型组(LPS)和水飞蓟宾给药组(LPS+SB)。LPS+SB组连续5 d灌胃给药(每日100 mg·kg^-1),其他组采用等体积0.9%氯化钠溶液同步处理,第5天时LPS组与LPS+SB组灌胃给药2 h后腹腔注射LPS(10 mg·kg^-1),CTRL组采用0.9%氯化钠溶液同步处理,8 h后经腹主动脉取血并收集肾脏组织;ELISA试剂盒检测血清、TNF-α和IL-6水平变化;生化试剂盒检测肌酐和尿素氮指标;HE染色观察肾组织病理学变化;Western blot法检测肾组织核转录因子-κB(NF-κB)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)和相关蛋白的表达情况。结果: SB能够明显降低血清和组织中TNF-α和IL-6炎症因子水平,显著改善大鼠肾脏功能,减轻肾组织病理性损伤;Western blot结果表明SB可以抑制LPS所致NLRP3炎症相关蛋白的表达和NF-κB通路的激活。结论: SB可有效改善LPS所致大鼠肾损伤,作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体激活以及调控NF-κB信号通路有关。