热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的影响

目的：研究辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的影响。方法：辛伐他汀（5μg／mL，10μg/mL）分别预处理细胞8h后加入100ng／mL的脂多糖（ipopolysaccharides，LPS）共同孵育，用ELISA方法检测不同时间点（1、12和24h）JL-6和IL-8含量变化。结果：空白对照组细胞在不施加任何刺激的情况下可以分泌少量IL-6和JL-8，并随时间的延长分泌量不断增加；LPS刺激组IL-6和IL-8分泌量比对9鼐组明显增加．差异有统计学意义（P〈0．05）；经过辛伐他汀预处理组IL-6和IL-8分泌量明显低于LPS单独刺激（P〈0．01）。结论：辛伐他汀具有抑制LPS刺激血管内皮细胞分泌炎症因子JL-6和JL-8的作用。     

通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素β1、白细胞介素10表达的影响

目的：探讨中药复方“通脉口服液”对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖及其产生白细胞介素融（IL-β1）和白细胞介素10（IL-10）的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定通脉口服液含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PEn）法测定系膜细胞IL—β1 mRNA和IL-10mRNA表达及其蛋白水平。结果：通脉口服液含药血清在5％～20％浓度范围明显抑制脂多糖（LPS）刺激的系膜细胞增殖；在观察的2个时间点（6h、24h）上，LPS均可刺激系膜细胞IL-β1 mRNA的表达及提高IL-β1 分泌水平，在6h时间点上LPS可刺激系膜细胞IL-10mRNA的表达及提高IL-10分泌水平；而通脉口服液在10％浓度上能够明显抑制LPS诱导的系膜细胞IL-β1 分泌及其mRNA的表达，在6h时间点上促进LPS诱导的系膜细胞IL-10分泌及其mRNA的表达。结论：中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-β1 的产生，促进LPS诱导的系膜细胞IL-10的产生；肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之-。     

内毒素刺激诱导人外周血细胞促炎细胞因子的释放

目的：探讨内毒素（LPS）体外刺激对人外周血细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-6和IL-10分泌的影响.方法：采集20例健康志愿者外周血,与培养基等体积混合后体外培养,给予不同浓度LPS（100 ng/ml,500 ng/ml）刺激,分别于刺激后0、2、6、12、24 h收集细胞培养上清液,ELISA法检测其HMGB1和TNF-α、IL-6、IL-10的含量.结果：体外LPS刺激诱导外周血细胞分泌HMGB1增加,12 h后表达持续升高（P〈0.01）,分泌水平呈明显时间依赖性;TNF-α、IL-6产生亦呈时间、剂量依赖性,分别于24 h和6～12 h达分泌高峰（P〈0.01）;IL-10表达量均较低.结论：TNF-α、IL-6为早期炎症介质,HMGB1为介导内毒素所致迟发死亡的重要晚期炎症介质,它们在脓毒症的发生、发展中可能扮演重要角色.     

罗格列酮对脂多糖诱导肾小管上皮细胞趋化因子分泌的影响及可能机制

目的 探讨罗格列酮（RGL）对脂多糖（LPS）诱导人近端肾小管上皮细胞（HK-2）趋化因子分泌的影响及可能机制。 方法 用RGL（10 μmol/L）预处理HK-2细胞2 h后加入LPS（1 mg/L）,与单纯LPS组、单纯RGL组及未加任何刺激（CON）组进行比较。用实时定量PCR方法检测细胞中白细胞介素8（IL-8）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1） mRNA表达水平;用ELISA法检测细胞培养上清中IL-8和MCP-1蛋白水平。通过RNAi技术沉默肾小管上皮细胞过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ（PPARγ）,观察RGL的作用是否依赖于PPARγ。用Western印迹法检测细胞核中NF-κB蛋白水平;用EMSA方法检测NF-κB DNA结合活性。 结果 在HK-2细胞中,与CON组相比,单纯LPS刺激使IL-8、MCP-1 mRNA分别升高（4.30±0.45）倍和（4.80±1.29）倍（均P < 0.05）,使培养上清中IL-8、MCP-1分别升高（1.39±0.18）和（2.11±0.47）倍（均P < 0.05）;与LPS组相比,RGL预处理组IL-8和MCP-1在mRNA水平分别下降66.37%和71.88%（均P < 0.05）,在蛋白水平分别下降41.68%和47.87%（均P < 0.05）。在PPARγ沉默的HK-2细胞中,RGL预处理2 h后再加LPS刺激,IL-8和MCP-1 mRNA仅分别下降18.16%、16.83%,培养上清中IL-8和MCP-1仅分别下降11.39%、11.86%,与单纯LPS组相比差异无统计学意义。RGL预处理2 h不能抑制LPS诱导的NF-κB核易位,但可显著降低NF-κB DNA结合活性。 结论 RGL以PPARγ依赖的方式抑制LPS诱导HK-2细胞分泌IL-8和MCP-1,其机制可能与降低NF-κB DNA结合活性有关。     

LPS耐受巨噬细胞致炎和抗炎细胞因子表达和分泌的特点

目的：分析巨噬细胞LPS耐受形成过程中致炎和抗炎细胞因子（TNF-α、IL-6和IL-10）释放的特点和规律,探讨其在巨噬细胞建立LPS耐受机制中的作用.方法：培养小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7 细胞.实验分为两部分：①LPS刺激细胞不同时间（4 h,8 h,20 h）或用PBS培养细胞4 h;②LPS耐受实验（LPS预刺激巨噬细胞20 h后,换液并洗去LPS,再次加入LPS刺激4 h）.ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-6和IL-10的浓度,RT-PCR法相对定量分析巨噬细胞TNF-α和IL-10 mRNA 表达水平.结果：细胞培养上清中TNF-α、IL-6和IL-10的浓度随着LPS刺激时间的延长而增加;LPS刺激20 h后建立耐受的巨噬细胞再次受到LPS打击时,其TNF-α释放量低于非耐受细胞,而IL-6和IL-10释放量则大幅增加,与TNF-α释放减少截然相反.TNF-α和IL-10mRNA 表达水平与其蛋白分泌量呈现相似的变化规律.结论：巨噬细胞对LPS的耐受建立在致炎因子和抗炎因子共同作用的基础上;LPS预刺激细胞再次受到LPS打击时,抑炎因子表达和分泌大幅增加是介导巨噬细胞对LPS耐受的重要机制.     

表面活性蛋白-A对脂多糖诱导的人肾小管近曲上皮细胞白介素-6表达的影响

目的：探讨表面活性蛋白-A（SP-A）的表达改变对脂多糖（LPS）诱导的人肾小管近曲上皮细胞（HK-2细胞）白介素-6（IL-6）表达的影响及机制。方法培养HK-2细胞,ELISA方法检测不同浓度的LPS（0、0．1、1、2、5、10 mg／L）作用8 h及5 mg／L的LPS于不同时间（0、2、4、8、16、24 h）作用HK-2细胞后IL-6蛋白表达的变化;应用脂质体转染法将SP-A SiRNA转染入HK-2细胞,筛选稳定转染细胞株,采用5 mg／L的LPS刺激SP-A SiRNA稳定转染的HK-2细胞8 h,ELISA方法检测细胞上清中IL-6的分泌量,Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白的表达。结果应用1、2、5、10 mg／L的LPS刺激HK-2细胞8 h后,IL-6蛋白表达水平较0、0．1 mg／L的LPS刺激后显著升高（P＜0．05）;同时,应用5 mg／L的LPS作用HK-2细胞4、8、16、24 h后,IL-6蛋白的表达水平较5 mg／L的LPS作用0、2 h显著升高（P＜0．05）。SP-A SiRNA转染的HK-2细胞经LPS刺激后,其NF-κBP65和IL-6蛋白表达较未转染经LPS刺激细胞明显升高（P＜0．05）。结论 SP-A可能通过抑制NF-κB p65的表达进而下调LPS诱导的HK-2细胞IL-6的表达,在脓毒症急性肾损伤时发挥保护作用。     

内毒素耐受对脓毒症大鼠肠道功能的保护作用

目的：动态观察内毒素耐受大鼠在内毒素血症时肠道炎症反应和免疫功能的变化,探讨内毒素耐受对内毒素血症大鼠肠道的保护作用及其机制。方法：选择健康成年雄性SD大鼠70只,随机分成3组：正常对照组（10只）、内毒素（LPS）组（30只）和内毒素耐受组（30只）。内毒素耐受组大鼠于实验第1日经腹腔注射LPS 0.25 mg/kg,24h后经腹腔注射LPS 0.5 mg/kg,LPS组在上述时间均给予等量生理盐水;实验第5日上述两组大鼠均腹腔注射大剂量LPS 10 mg/kg,于注射大剂量LPS前（0h）和注射后2、4、6、12h取大鼠肠组织制备肠黏膜上清液,用双抗体夹心法测定肠黏膜组织中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的含量,用免疫组化技术检测肠组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达,并与正常对照组进行比较;光学显微镜下观察3组大鼠肠组织病理学变化,并进行病理学评分。结果：内毒素耐受组在给予小剂量LPS后没有出现体重下降。内毒素耐受组肠黏膜中slgA的含量较正常对照组明显升高,6 h最为明显（P〈0.05）,LPS组sIgA含量2 h明显升高（P〈0.05）,从6 h开始下降（P〈0.05）。内毒素耐受组给予大剂量LPS后肠黏膜ICAM-1的表达没有呈上升趋势,各时间点ICAM-1的表达与正常对照组比较差异有显著性,以6h ICAM-1的表达最低,而LPS组肠黏膜ICAM-1的表达随时间的延长逐渐升高,明显高于内毒素耐受组。肠组织病理学观察可见：LPS组肠黏膜水肿,绒毛脱落,并伴有大量炎性细胞浸润;内毒素耐受组上述表现较LPS组减轻。两组肠黏膜炎症损伤病理学评分[LPS组（3.89±0.45）分;内毒素耐受组（2.65±0.36）分]差异有显著性（P〈0.01）。结论：内毒素耐受可减轻内毒素血症导致的肠道黏膜屏障的损害,升高sIgA水平,减少ICAM-1表达,从而起到肠保护作用。     

白细胞介素6刺激人近端肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的观察重组人白细胞介素6（rIL-6）在体外对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达的影响。方法浓度为25ng／mL的IL-6刺激HK-2细胞,在0h、24h、48h、72h不同时间点,分别应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫荧光技术检测HK-2细胞中α—SMA mRNA及蛋白的表达。结果与刺激前比较,IL-6以时间依赖方式上调HK-2细胞α—SMA mRNA的表达、α—SMA蛋白表达逐渐增强。结论IL-6可诱导体外培养的肾小管上皮细胞表达α—SMA。     

JAK2／STAT3信号通路在IL-6介导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的：研究Janus激酶（JAK2）和信号转导因子和转录活化因子（STAT3）途径的激活在IL-6介导人近端肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法：（1）细胞培养及分组：待生长状况良好的HK-2细胞株60%-80%细胞贴壁后,无血清培养基同步24 h,然后根据分组给予相应的刺激。（2）指标检测：采用荧光定量PCR技术检测0 h、24 h、48 h7、2 h不同时间点α-SMA mRNA、E-cadherin mRNA的表达。采用Western blot方法检测25 ng/ml浓度的IL-6刺激24 h、48 h、72 h后α-SMA、E-cadherin蛋白的表达;检测0、5、10、25、50 ng/ml浓度的IL-6刺激30 min,以及IL-6（25 ng/ml）刺激0、15 min、30 min、60 min、120 min后P-STAT3蛋白的表达水平;检测AG490预处理细胞4 h,IL-6（25 ng/ml）分别刺激30 min后及48 h后P-STAT3、P-JAK2和α-SMA、E-cadherin蛋白的表达水平。结果：与刺激前比较,IL-6以时间依赖方式上调HK-2细胞α-SMA mRNA、蛋白的表达,下调E-cadherin mRNA、蛋白的表达;IL-6以时间和剂量依赖方式上调HK-2细胞P-STAT3的表达,高峰发生在30 min;AG490部分抑制STAT3、JAK2的磷酸化,部分抑制IL-6诱导的α-SMA蛋白表达的上调、部分抑制IL-6诱导的E-cadherin蛋白表达的下调。结论：HK-2细胞中,JAK2/STAT3信号通路的激活可能参与了IL-6介导的肾小管上皮细胞转分化的发生。     

Inosine exerts a broad range of antiinflammatory effects in a murine model of acute lung injury

OBJECTIVE: To investigate the effects of inosine on the acute lung inflammation induced by lipopolysaccharide (LPS) in vivo and on the activation and cytotoxicity elicited by proinflammatory cytokines on human lung epithelial (A549) cells in vitro. SUMMARY BACKGROUND DATA: Inosine is an endogenous purine recently shown to exert immunomodulatory and antiinflammatory effects. METHODS: Mice challenged with intratracheal LPS (50 microg) were treated after 1, 6, and 12 hours with inosine (200 mg/kg intraperitoneal) or vehicle. After 24 hours, bronchoalveolar lavage fluid was obtained to measure proinflammatory (tumor necrosis factor-alpha [TNF-alpha], interleukin [IL]-1beta, IL-6), and antiinflammatory (IL-10, IL-4) cytokines, chemokines (MIP-1alpha and MIP-2), myeloperoxidase activity and total cell counts, nitric oxide production, and proteins. Lung histology and immunohistochemical detection of 3-nitrotyrosine, a marker of nitrosative stress, were performed in inflated-fixed lungs. In vitro, cell viability and production of the chemokine IL-8 were evaluated in A549 cells stimulated with a mixture of cytokines in the presence or absence of inosine. RESULTS: Inosine downregulated the LPS-induced expression of TNF-alpha, IL-1beta, IL-6 and MIP-2 and tended to reduce MIP-1alpha, whereas it enhanced the production of IL-4. Total leukocyte counts, myeloperoxidase, nitric oxide production, and proteins were all significantly decreased by inosine. The purine also improved lung morphology and suppressed 3-nitrotyrosine staining in the lungs after LPS. Inosine attenuated the cytotoxicity and the expression of IL-8 induced by proinflammatory cytokines in A549 cells. CONCLUSIONS: Inosine largely suppressed LPS-induced lung inflammation in vivo and reduced the toxicity of cytokines in lung cells in vitro. These data support the proposal that inosine might represent a useful adjunct in the therapy of acute respiratory distress syndrome.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在严重烧伤大鼠枯否细胞肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β产生中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在严重烧伤大鼠枯否细胞(KCs)促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)产生中的作用。方法 健康成年的雄性SD大鼠32只,随机分为：假烫组;假烫 SB203580组;烧伤对照组;烧伤 SB203580组,每组8只。假烫或烧伤24h后分离出肝脏KCs,培养18h后加入50ng／ml的LPS进行刺激,18h后取上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α和IL-1β的含量,并收集KCs,实时逆转录聚合酶链反应检测KCs内TNF-α和IL-1β mRNA表达的改变,蛋白印迹(Western blot)法检测KCs中p38MAPK和JNK活性的变化。结果 烧伤大鼠分离出的KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β含量、KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达均较假烫组的明显增强,同时KCs中p38 MAPK活性和JNK活性升高,SB203580能显著抑制大鼠KCs上清液中TNF-α和IL-1β含量、KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达和p38MAPK活性的升高,对JNK活性无影响。结论p38MAPK信号转导通路介导了严重烧伤大鼠KCs促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的产生。     

YKL-40与IL-6在前列腺癌组织中的表达分析

目的 探讨人软骨糖蛋白-39（YKL-40）与白介素-6（IL-6）在前列腺癌组织中的表达。方法 选取2016年5月至2018年2月在本院接受根治性手术治疗的前列腺癌患者的前列腺组织标本42份纳入实验组,同期选取本院前列腺增生患者手术病理组织38份纳入对照组。分别采取Western blot及荧光PCR法检测两组患者组织标本中的YKL-40与IL-6表达水平,免疫组化法检测其阳性表达率,并分析其与前列腺癌临床病理特征的关系。结果 Western blot结果显示,实验组患者YKL-40、IL-6蛋白相对表达量高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;PCR实验结果显示,实验组患者YKL-40、IL-6 mRNA相对表达量高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Ⅲ期、淋巴结转移及病理分级为低分化的前列腺癌患者YKL-40、IL-6阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期、淋巴无转移以及病理分级为高中分化的前列腺癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）;相关分析结果显示前列腺癌组织中YKL-40、IL-6表达呈正相关性（r=0.861,P<0.05）。结论 YKL-40、IL-6蛋白在前列腺癌中表达量较高,且与患者临床病理特征有一定的关联,此两种蛋白可以作为前列腺癌临床筛查标志物推广应用。     

缺氧条件下前列腺上皮细胞体外培养生长类激素的表达

目的:观察在缺氧条件下前列腺上皮细胞体外培养生长类激素表达的变化。方法:前列腺上皮细胞株RWPE-1体外培养。在缺氧或有氧培养环境中分别于接种后4、8、12、24、48 h检测其生长类激素[表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),转化生长因子β(TGF-β),胰岛素样生长因子-1(IGF-1),血管内皮生长因子(VEGF)]基因和蛋白表达。基因表达采用RT-PCR法检测,蛋白表达采用ELISA法检测。结果:RT-PCR结果显示,随时间延长各类生长因子基因表达均上调,缺氧条件较有氧条件上调尤为明显。以bFGF mRNA表达为例,接种后8 h缺氧条件和有氧条件下bFGF mRNA分别为0.14±0.01和0.12±0.01,差异有统计学意义(P=0.01),至48 h时分别为0.29±0.01和0.14±0.01(P<0.001)。ELISA结果显示,上皮细胞TGF-β表达在缺氧条件下亦显著增加,接种后4 h缺氧和有氧条件下分别为0.32±0.01和0.26±0.01,差异有统计学意义(P=0.017),至48 h时分别为1.56±0.13和0.87±0.06(P<0.001)。其他4种生长因子的蛋白表达在有氧和无氧条件下没有显著性差异。结论:缺氧可刺激前列腺上皮细胞上述各类生长因子基因表达的上调,但仅TGF-β分泌增加。     

Interleukin 6 production by human proximal tubular epithelial cells in vitro: analysis of the effects of interleukin-1{alpha} (IL-1{alpha}) and other cytokines

Proximal tubular epithelial cells (PTEC) from human renal tissueobtained from biopsy or nephrectomy were grown in monocultureand evaluated in vitro at passage 2–4 for interleukin6 (IL-6) production in response to medium alone or to interleukin1 alpha (IL-1), tumour necrosis factor alpha (TNF), interleukin2 (IL-2), interferon gamma (INF) or lipopolysaccharide (LPS).IL-6 bioactivity was quantitated using the IL-6-dependent murinehybridoma cell line (B9) and expressed as IL-6 units/ml/10⁵PTEC. PTEC cell lines exposed to medium alone produced intermediateamounts of IL-6 with substantial variability between cell lines.Introduction of IL-1 resulted in a dose- and time-dependentincrease in IL-6 production by PTEC that was maximal at 1 ng/mlIL-1 at 24 h. All PTEC cell lines showed an increased IL-6 productionon exposure to IL-1 varying from 1.3- to 24-fold increase overbaseline production. This response was completely blocked byanti-rIL-1. No significant IL-6 production by PTEC could beinduced by TNF, IL-2, IFN, or LPS over a broad dosage range.Cycloheximide inhibited IL-6 production without irreversiblecell toxicity, indicating de-novo synthesis. IL-6 produced byPTEC had a molecular weight of 26-29 kDa as demonstrated byWestern blot analysis. Using PCR analysis we could demonstrateupregulation by IL-1 of IL-6 mRNA in a dose-response fashion,indicating that IL-1 regulates IL-6 production at a pretranslationalvalue of protein synthesis. These results show that human culturedPTEC produce IL-6 under both normal and IL-1-stimulated conditions,and suggest that they may have a regulatory function in responseto cytokines in the setting of inflammation in the renal cortex.     

人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究

目的探讨人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell,HAEC）培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基（Dulbecco’s modified Eagle’smedium,DMEM）组（DMEM组）、无血清DMEM与HAEC培养液1：1混合组（混合组）、HAEC培养液组（HAEC组）。传代的角膜上皮细胞贴壁24h后,用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种培养液培养48h后收集细胞。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HAEC培养液中自介素-1受体拮抗剂（interleukin-lreceptor antagonist,IL-1Ra）的含量。采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素（IL）-1B信使核糖核酸（messenger RNA,mRNA）的表达,采用八肽胆囊收缩素（choleeystokinin—octapeptide,CCK-8）法检测3组细胞的增殖情况。结果HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征。HAEC培养液中IL-1Ra的含量为（153．56±0．36）ng／L,无血清DMEM对照中未检出IL-1Ra。3组培养液中,兔角膜上皮细胞的IL-18mRNA表达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组,3组的IL-1BmRNA表达差异均有统计学意义（均为P〈0．05）。兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72h后,HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高于混合组和DMEM组,DMEM组的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组（均为P〈0．05）。结论HAEC可分泌IL-1Ra抑制角膜上皮细胞IL-1B的表达,减少炎症反应及移植排斥作用,并促进角膜上皮细胞增殖。     

IL-6在前列腺增生基质细胞上诱导APRE的研究

目的 研究IL-6在前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)的基质细胞上诱导急性期蛋白反应元件(APRE)的活化及STAT3的敲除抑制其活化,推测STAT3介导的JAK/STAT信号及其所激活的ARPE可能作为BPH治疗的靶点.方法 建立IL-6刺激的前列腺基质细胞的体外模型,使用商品化的siRNA,利用Fugene HD进行siRNA转染来敲除STAT3,通过WB检测STAT3表达情况和APRE的活化程度.结果 使用IL-6刺激前列腺基质细胞后,荧光素酶的表达增加水平到9倍,JAK2和STAT3的磷酸化显著性增加.STAT3敲除后,通过荧光素酶的活性检测结果可知在IL-6刺激的情况下,APRE的活性从大约8倍的水平下降到不到2倍.这证实了IL-6介导的JAK/STAT信号通路被严重抑制.结论 JAK2和STAT3的活化能激活APRE的表达,STAT3所介导的JAK/STAT信号及其所激活的ARPE可能作为BPH治疗的靶点.