HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞周期影响的研究

目的:研究HDAC6siRNA对食管鳞癌EC9706细胞中HDAC6的干扰效果,以及HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞增殖能力、细胞周期的影响。方法:将食管鳞癌EC9706细胞分为未处理组、对照siRNA组和HDAC6siRNA组3组,后2组分别转染对照siRNA和HDAC6siRNA。采用半定量反转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹及免疫细胞化学检测各组食管鳞癌EC9706细胞中HDAC6siRNA对HDAC6的干扰效果;采用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖能力的变化;运用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期的变化。结果:HDAC6siRNA组的HDAC6mRNA表达的相对水平为0.044,HDAC6蛋白表达相对水平为0.114,与未处理组(0.951、0.924)和对照组(0.947、0.905)相比,HDAC6mR-NA和蛋白的表达均显著下调,t值分别为2.24和2.52,P<0.05;细胞增殖明显受抑制,且G0/G1期的比率为(68.55±2.01)%,显著高于未处理组(45.64±1.26)%和对照siRNA组(46.23±1.39)%,S期的比率(25.93±0.73)%显著低于未处理组(33.13±1.02)%和对照siRNA组(32.98±0.91)%,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:HDAC6siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC6mRNA和蛋白的表达;HDAC6表达下调能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖并能诱导细胞周期静止在G0/G1期。     

组蛋白去乙酰化酶在食管鳞癌中的表达及其表达下调对EC9706细胞生物特性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。     

miR-21-3p通过下调CCT4抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨miR-21-3p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:通过数据库检索miR-21-3p的下游靶基因,GEPIA2数据库预测CCT4在食管鳞癌中的表达和对食管鳞癌患者预后的影响,培养食管鳞癌细胞TE-1、KYSE150,将miR-21-3p inhibitor、SiCCT4、Plenti-CMV-CCT4-GFP/Puro转染至TE-1和KYSE150细胞中,分为miR-21-3p inhibitor组和inhibitor NC组、SiCCT4组和SiNC组、Plenti-CMV-CCT4组和inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-21-3p和CCT4 mRNA的表达水平,Transwell迁移侵袭实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测转染后各组细胞CCT4蛋白的表达水平。结果:数据库预测结果显示CCT4在食管鳞癌中过表达,与食管鳞癌患者总体生存期相关,与miR-21-3p呈正相关。qRT-PCR显示miR-21-3p和CCT4在食管癌细胞相较于正常上皮细胞表达显著升高,且在抑制miR-...     

NF-κBp65对食管鳞癌细胞上皮间质转化的影响*

目的:探讨NF-κ Bp65对食管鳞癌细胞EC9706上皮间质转化的影响。方法:NF-κ Bp65反义寡核苷酸（NF-κBp65-ASODN ）转染食管鳞癌细胞EC9706,采用RT-PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测NF-κ Bp65-ASODN 转染前后EC9706细胞中NF-κ Bp65、上皮性标志物E-cadherin 及间质性标志物Vimentin mRNA 及蛋白表达的变化,观察转染前后细胞形态学的改变,细胞划痕实验检测转染前后细胞运动能力的变化。结果:转染NF-κ Bp65-ASODN 的EC9706细胞,其NF-κ Bp65mRNA（0.14±0.06）及蛋白（免疫细胞化学:11.33± 1.40% ,流式细胞术:11.78%）的表达低于转染前（mRNA :0.45± 0.05;蛋白:免疫细胞化学:17.17± 1.66% ,流式细胞术:15.76%）（P<0.05）,上皮性标志物E-cadherin mRNA（0.36± 0.08）及蛋白（免疫细胞化学:17.58± 1.86% ,流式细胞术:14.98%）的表达高于转染前（mRNA :0.22± 0.06;蛋白:免疫细胞化学:14.42± 1.63% ,流式细胞术:12.22%）（P<0.05）,间质性标志物Vimentin mRNA（0.75± 0.07）及蛋白（免疫细胞化学:16.00± 1.41% ,流式细胞术:12.90%）的表达低于转染前（mRNA :0.89± 0.09;蛋白:免疫细胞化学:19.50± 0.89% ,流式细胞术:17.76%）（P<0.05）。 转染NF-κ Bp65-ASODN 后,EC9706细胞形态发生改变,细胞迁移距离（0.45± 0.08）较转染前（0.81± 0.11）明显缩短（P<0.05）。 结论:NF-κ Bp65可能参与食管鳞状细胞癌的上皮转化。NF-κ Bp65-ASODN 转染可抑制食管鳞癌细胞上皮间质转化,上皮性标志物E-Cadherin 表达上调、间质性标志物Vimentin 表达下调,且细胞形态发生改变、细胞运动能力降低。      

PTPN6 基因对人食管鳞状细胞癌Eca109 和Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6（non-receptor protein tyrosine phosphatase 6,PTPN6）基因在不同食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对Eca109、Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响。方法：应用qPCR 法检测不同食管鳞癌细胞株（TE1、Eca109、Kyse150、Kyse170、Yes-2）中PTPN6 mRNA的表达水平,以pcDNA3.1-PTPN6 质粒分别瞬时转染食管鳞癌细胞株Eca109和Yes-2,应用qPCR和Wb法检测PTPN6 mRNA和蛋白的表达水平,并应用MTS、克隆形成实验、划痕实验和Transwell 法检测过表达PTPN6 基因对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。结果：PTPN6 基因在5 种食管鳞癌细胞侏中表达均明显下调（均P<0.05）。与转染空载体的对照组相比,经pcDNA3.1-PTPN6 转染后,Eca109 和Yes-2 细胞均高水平表达PTPN6（P<0.05 或P<0.01）;过表达PTPN6 基因后,Eca109 和Yes-2 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显被抑制（均P<0.05）。结论：PTPN6 基因高表达能抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其可能是影响食管鳞癌细胞生物学特性的一个重要因素。     

HPV16E6 siRNA联合5-Aza-CdR对宫颈癌SiHa细胞中E-钙黏蛋白表达和基因甲基化的影响

目的:探讨HPV16E6 siRNA联合5-Aza-CdR(5-aza-2'-deoxycytidine,5-氮-2'-脱氧胞苷,又称地西他滨)对宫颈癌SiHa细胞中E-钙黏蛋白表达和基因甲基化的影响。方法:采用SiHa细胞构建的HPV16E6 沉默细胞株及5-Aza-CdR细胞株,检测细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达,以及E-cadherin甲基化状态。采用细胞黏附、Transwell体外侵袭、迁移实验检测5-Aza-CdR和siRNA E6对SiHa细胞黏附、侵袭迁移的影响。结果:5-Aza-CdR+siRNA E6组较5-Aza-CdR组、siRNA E6组中E-cadherin mRNA 及蛋白表达均上升,细胞的黏附率、侵袭抑制率和迁移抑制率均升高;5-Aza-CdR+siRNA E6组较5-Aza-CdR组、siRNA E6组中E-cadherin基因启动子区甲基化指数明显下降。结论:HPV16E6 siRNA联合5-Aza-CdR可显著引起宫颈癌细胞中E-cadherin 基因低甲基化,并可导致E-cadherin mRNA 及蛋白的表达水平明显上调,肿瘤细胞黏附能力升高,侵袭迁移能力下降,两者在一定程度起到协同作用。     

siRNA阻断NF-κB信号通路联合5-Fu对食管鳞癌细胞周期的影响

目的利用RNAi技术特异性的抑制NF-κB亚单位p65的表达,探讨在食管鳞癌细胞中将NF-κB作为基因治疗靶点的价值。方法将荧光素标记的对照siRNA转染到食管鳞癌细胞中观察转染效率,p65siRNA转染到EC9706和Eca109细胞中,使用Western blot的方法检测p65和Cyclin D1蛋白的表达,使用EMSA法检测转染前后p65与DNA结合活性的变化;流式细胞仪检测p65siRNA与5-Fu(327μg/ml)单独或联合应用,对食管鳞癌细胞周期的影响。结果荧光素标记的siRNA转染食管鳞癌细胞的效率可达90%以上。在转染后的EC9706和Eca109细胞中,p65和Cyclin D1蛋白的表达水平下调;NF-κB与DNA的结合活性明显下降;G0/G1期的细胞开始增加,同时S期的细胞逐渐减少;当转染p65siRNA细胞联合使用5-Fu时,G0/G1期的细胞明显增加,同时S期的细胞明显减少。结论p65siRNA可以特异性的阻断NF-κB信号通路,下调NF-κB下游基因中细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,表明活化的NF-κB信号通路可以成为食管鳞癌基因治疗中一个重要的分子靶点。     

下调Skp2表达抑制骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验

 目的 通过使用小干扰RNA（siRNA）降低骨肉瘤中S期激酶相关蛋白2（Skp2）的表达，探讨Skp2对骨肉瘤恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法 转染Skp2 siRNA敲低骨肉瘤U2OS细胞中Skp2的表达。通过RT-qPCR和Western blot法检测细胞内Skp2的mRNA和蛋白表达水平，确定Skp2 siRNA的沉默效率。MTT法检测细胞增殖情况，PI单染及Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测对骨肉瘤细胞周期及凋亡的影响。Transwell实验和钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein-AM）染色检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测细胞内Skp2的下游基因p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表达变化。结果 转染Skp2 siRNA在U2OS细胞中获得较高的敲除效率。Skp2表达下调抑制了骨肉瘤细胞的增殖，并且使细胞生长阻滞在G0/G1期，细胞的凋亡率明显增加。抑制Skp2后U2OS细胞的侵袭和迁移能力明显降低。U2OS细胞Skp2敲低后其下游调控分子p21、p27及E-cadherin的表达显著升高，而p-Akt的表达则明显减弱。结论 Skp2在骨肉瘤细胞中发挥癌基因的作用，通过调控其信号通路中p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表达影响细胞生长、周期、凋亡、侵袭和迁移能力等恶性生物学行为。     

RNA干扰HDAC1对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨干扰组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法将HDAC1 siRNA和siRNA control分别转染至子宫内膜癌细胞Ishikawa作为HDAC1 siRNA组和siRNA control组,以不作处理的细胞作为对照组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HDAC1 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测HDAC1蛋白的表达水平,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室检测细胞的侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)的表达水平。结果 HDAC1 siRNA组中HDAC1 mRNA和HDAC1蛋白的表达水平均低于对照组和siRNA control组,HDAC1 siRNA组的细胞迁移率低于对照组和siRNA control组,HDAC1 siRNA组的侵袭细胞数目少于对照组和siRNA control组,HDAC1 siRNA组中MMP2、MMP9、p-STAT3蛋白的表达水平均低于对照组和siRNA control组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论干扰HDAC1表达能够降低子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与MMP2、MMP9和STAT3的表达有关。     

HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的： 采用siRNA技术干扰人食管鳞癌细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达，观察经X射线照射后细胞增殖活性、存活能力及细胞凋亡率的变化。方法： 针对HMGB1 mRNA序列，设计合成有效的干扰序列HMGB1 siRNA，并转染食管鳞癌KYSE30细胞，同时设置转染阴性对照序列的阴性对照组以及未进行转染的空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot法检测各组细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达；分别用MTS比色、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot法检测HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞KYSE30细胞的增殖活力、存活能力、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响。结果： HMGB1 siRNA干扰后，KYSE30细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P均 < 0.01）；MTS数据显示HMGB1 siRNA干扰后经X射线照射显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.05）；克隆形成实验结果显示空白对照组、阴性对照组、HMGB1 siRNA组的D₀值分别为2.57、2.54、1.55 Gy；D_q值分别为1.69、1.65、1.30 Gy；SF₂值分别为0.27、0.27、0.13；外推数N值分别为1.93、1.91、2.31；X射线照射后HMGB1 siRNA组肿瘤细胞的凋亡率明显增加，同时bcl-2蛋白表达显著降低，而bax、caspase-3蛋白的表达明显增加（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.01）。结论： siRNA干扰技术可用来抑制食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达，联合X射线照射降低了肿瘤细胞的增殖水平和存活能力，诱导了细胞凋亡，增加了放射敏感性，该作用可能与调控bcl-2、bax和caspase-3基因表达有关。     

Effects of Down-regulation of HDAC6 Expression on Proliferation,Cell Cycling and Migration of Esophageal Squamous CellCarcinoma Cells and Related Molecular Mechanisms

Objective: To study the effects of down-regulation of HDAC6 expression on proliferation, cell cycling andmigration of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) cells and related molecular mechanisms. Methods:ESCC cell line EC9706 cells were randomly divided into untreated (with no transfection), control siRNA(transfected with control siRNA) and HDAC6 siRNA (transfected with HDAC6 small interfering RNA) groups.Effects of HDAC6 siRNA interference on expression of HDAC6 mRNA and protein in EC9706 cells wereinvestigated by semi-quantitative RT-PCR, Western blotting and immunocytochemistry methods. Effects ofdown-regulation of HDAC6 expression on cell proliferation, cell cycle, and cell migration were studied usinga CCK-8 kit, flow cytometry and Boyden chambers, respectively. Changes of mRNA and protein expressionlevels of cell cycle related factor (p21) and cell migration related factor (E-cadherin) were investigated by semiquantitativeRT-PCR and Western blotting methods. Results: After transfection of HDAC6 siRNA, the expressionof HDAC6 mRNA and protein in EC9706 cells was significantly downregulated. In the HDAC6 siRNA group,cell proliferation was markedly inhibited, the percentage of cells in G0/G1 phase evidently increased and thepercentage of cells in S phase decreased, and the number of migrating cells significantly and obviously decreased.The mRNA and protein expression levels of p21 and E-cadherin in the HDAC6 siRNA group were significantlyhigher than those in the untreated group and the control siRNA group, respectively. Conclusions: HDAC6 siRNAcan effectively downregulate the expression of HDAC6 mRNA and protein in EC9706 cells. Down-regulation ofHDAC6 expression can obviously inhibit cell proliferation, arrest cell cycling in the G0/G1 phase and reduce cellmigration. The latter two functions may be closely related with the elevation of mRNA and protein expressionof p21 and E-cadherin.     

lncRNA NORAD促进食管鳞状细胞癌EC9706 细胞的增殖和迁移

目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）DNA损伤激活的非编码RNA（non-coding RNA-activated by DNA damage,NORAD）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞株EC9706 增殖和迁移能力的影响及其机制。方法：采用RT-PCR 法检测不同ESCC细胞（EC9706、TE1、YES-2、KYSE150）中NORAD mRNA表达水平,通过RNA干扰技术将NORAD的小干扰RNA（siRNA）转染到EC9706 细胞（si-NORAD组）以建立NORAD低表达细胞,另设置空白对照组（Ctrl 组,不转染任何序列）及阴性对照组（NC组,转染siRNA 阴性对照序列）,qPCR验证其转染效果。用MTT、平板克隆形成和划痕愈合实验检测敲低NORAD前后EC9706 细胞增殖和迁移能力的变化,Western blotting 检测敲低NORAD前后EC9706 细胞中上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）和锌指转录因子Snail 的表达变化。结果：在4 种ESCC 细胞中NORAD mRNA 均呈高表达状态,同时与TE1、YES-2、KYSE150 细胞相比,EC9706 细胞中NORAD mRNA 呈显著高表达（P<0.01）。与Ctrl 组和NC 组比较,转染NORAD-siRNA 后,si-NORAD 组EC9706 细胞中NORAD 表达水平显著降低（均P<0.01）,EC9706 细胞的增殖和迁移能力显著降低（均P<0.05）;敲低NORAD 表达后,EC9706 细胞中E-cadherin 表达升高而N-cadherin 和Snail 表达降低（均P<0.05）。结论：NORAD 在EC9706 细胞中呈高表达状态,敲低NORAD 表达可通过上调E-cadherin、下调N-cadherin 和Snail表达而抑制EC9706 细胞的增殖和迁移能力。     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞,将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组,siRNA转染48 h,通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达;通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力;MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后,EC9706细胞XIAP表达明显降低,与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较,si-XIAP组细胞增殖明显降低,黏附率明显升高,侵袭和迁移能力明显降低,p-AKT和MMP-2表达明显降低,E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率,抑制侵袭和迁移能力,机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

siRNA靶向沉默MALAT-1基因对人食管癌EC9706细胞体外侵袭迁移的影响

目的:研究长链非编码RNA MALAT-1对食管癌EC9706细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MALAT-1的siRNA,脂质体法转染EC9706细胞,转染48h后RT-PCR和Western blot检测各细胞MALAT-1在mRNA和蛋白质水平的表达。Transwell实验检测迁移、侵袭能力改变。结果:小干扰RNA下调MALAT-1表达后,RT-PCR和Western blot证实食管癌EC9706细胞中MALAT-1的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显下调,Transwell实验证实食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力下降。结论:抑制MALAT-1表达能够使食管鳞癌细胞的侵袭转移能力明显降低。     

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用.本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响.方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD 载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡.结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达.与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P＜0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比.转染pcNICD的EC9706细胞转染后24 h、48 h和72 h时细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706 细胞的凋亡.提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点.     

HDAC6 siRNA Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis of HeLa Cells and its Related Molecular Mechanism

Objective: To investigate the effects of histone deacetylase 6 (HDAC6) siRNA on cell proliferation and cellapoptosis of the HeLa cervical carcinoma cell line and the molecular mechanisms involved. Methods: Divisionwas into three groups: A, the untreated group; B, the control siRNA group; and C, the HDAC6 siRNA group.Lipofectamine 2000 was used for siRNA transfection, and Western blot analysis was used to determine the proteinlevels. Cell proliferation and apoptosis were characterized using a CCK-8 assay and flow cytometry, respectively.Results: HDAC6 protein expression in the HDAC6 siRNA-transfection group was significantly lower (P < 0.05)than in the untreated and control siRNA groups. The CCK-8 kit results demonstrated that the proliferation ofHeLa cells was clearly inhibited in the HDAC6 siRNA transfection group (P < 0.05). In addition, flow cytometryrevealed that the early apoptotic rate (26.0% ± 0.87%) was significantly elevated (P < 0.05) as compared withthe untreated group (10.6% ± 1.19%) and control siRNA group (8.61% ± 0.98%). Furthermore, Western blotanalysis indicated that bcl-2 protein expression in the HDAC6 siRNA–transfection group was down-regulated,whereas the expression of p21 and bax was up-regulated. Conclusion: HDAC6 plays an essential role in theoccurrence and development of cervical carcinoma, and the down-regulation of HDAC6 expression may beuseful molecular therapeutic method.     

耐阿霉素食管癌细胞株EC9706/ADM的EMT-MET现象及机制

目的:建立耐阿霉素食管癌细胞株EC9706/ADM，探讨耐药细胞的EMT-MET现象及机制。方法:采用中等浓度间歇法建立耐阿霉素食管癌细胞株EC9706/ADM，用MTT法测定细胞的耐药指数及多药耐药性，Transwell小室实验检测耐药细胞的体外侵袭能力，实时荧光定量PCR和Western blot 检测细胞在不同黏附时间EMT相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin和基质金属蛋白酶MMP2、MMP7、MMP9等的表达。结果:成功建立耐阿霉素食管癌细胞株EC9706/ADM，细胞的耐药指数为32.2，对顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺产生交叉耐药性。与EC9706亲本细胞相比，EC9706/ADM细胞体外侵袭能力明显增强。黏附实验中，在黏附早期，耐药细胞 E-cadherin表达降低而N-cadherin表达显著增高，黏附后期，E-cadherin表达升高而N-cadherin表达显著降低，基质金属酶在细胞黏附过程中表达均升高。结论:食管癌耐阿霉素细胞EC9706/ADM侵袭能力增强，可能与基质金属酶表达量增高和细胞发生EMT-MET转换相关。     

食管癌耐阿霉素EC9706中干细胞富集及上皮间质化

目的:建立耐阿霉素(ADM)食管癌细胞株,命名为EC9706/ADM,探讨该细胞株的上皮间质化(EMT)及肿瘤干细胞富集现象.方法:用中等浓度间歇法建立食管癌耐阿霉素细胞株,MTT法测定细胞株对ADM、5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数.流式细胞仪检测EC9706/ADM及EC9706中CD44+CD24-细胞比例,MTT法、Transwell、平板克隆形成和球囊培养实验分别检测耐药对细胞增殖、迁移与转移、体外成瘤和克隆形成能力的影响;荧光定量PCR检测EC9706/ADM干细胞标志ALDH1、CD133及Oct4及EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白及间质细胞分子标记N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白的表达.结果:EC9706/ADM的耐药指数为17.8,对5-FU、顺铂、环磷酰胺产生了交叉耐药性.与EC9706细胞相比,EC9706/ADM耐药细胞转移能力明显增强,表现出更高的微球体形成能力,E-cadherin表达降低而Fibronectin表达显著增高.结论:食管癌耐阿霉素细胞EC9706/ADM发生了EMT现象,转移迁移能力增强,细胞表现出更高的干细胞特性,化疗药物有助于肿瘤干细胞的富集.     

RNA干扰PLCE1基因表达对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响

目的：通过siRNA干扰PLCE1基因表达,检测PLCE1对食管鳞癌细胞增殖周期和凋亡的影响,以探讨PLCE1的致癌机制。方法：采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌组织和癌旁正常组织中PLCE1蛋白的表达水平;PLCE1特异性siRNA转染食管鳞癌细胞,荧光显微镜观察转染效率;半定量RT-PCR法检测转染后PLCE1沉默效果;流式细胞术检测干扰后细胞周期变化及凋亡情况。结果：PLCE1在食管鳞癌组织的表达高于正常组织（P=0.000）;siRNA转染后PLCE1表达明显减少（P=0.000）;与对照组相比,PLCE1干扰后可致G0/G1期细胞阻滞（P=0.001）,细胞凋亡增多（P=0.000）。结论：PLCE1在食管鳞癌组织中有较高表达;沉默PLCE1后可抑制癌细胞的增殖,促进其凋亡。