沉默EMMPRIN对肾透明细胞癌增殖的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在肾透明细胞癌增殖中的作用。方法:利用免疫组化、实时定量PCR(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)等方法检测肾癌组织与肾透明细胞癌细胞株中EMMPRIN的表达情况。通过小分子干扰核糖核酸（siRNA）EMMPRIN在786-O细胞中的表达,研究EMMPRIN下调后对786-O肾癌细胞株生物学功能的影响。结果:EMMPRIN在肾癌组织中高表达,肾癌细胞系中EMMPRIN的表达高于正常的肾小管上皮细胞。通过小干扰RNA来敲除EMMPRIN的表达,并影响肾透明细胞癌的增殖。结论:EMMPRIN在肾肿瘤组织和肾癌细胞株中皆呈现出过表达的状态。下调其表达可以降低肾细胞癌的增殖水平,表明EMMPRIN的高表达可能是肾细胞癌患者预后较差的指标,可被视为肾癌治疗的潜在靶点。     

EIF4E基因下调对胃癌细胞的侵袭转移能力的影响及机制研究

目的:探讨特异性下调真核起始因子EIF4E对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及可能的作用机制。方法:采用siRNA技术下调EIF4E的表达,Western blot检测转染前后EIF4E和MMP9蛋白质表达,通过Traswell小室实验检测转染前后侵袭迁移能力的差异。结果:Western blot证实,与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞EIF4E表达明显下调,同时与阴性对照相比,转染EIF4E siRNA组细胞MMP9蛋白表达同样明显下调,Traswell小室实验证实,下调EIF4E后,MKN28细胞的体外侵袭迁移能力显著降低。结论:在胃癌MKN28细胞中存在EIF4E基因对MMP9的调控作用,EIF4E基因可能通过调控MMP9的表达参与胃癌的侵袭迁移行为,EIF4E有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

MLK4低表达调控ROS/MAPKs信号通路诱导肾细胞癌细胞凋亡的机制研究

目的:观察MLK4低表达是否通过调控ROS/MAPKs信号通路诱导肾细胞癌细胞凋亡。方法:利用qRT-PCR和Western blot方法检测MLK4在人正常近端肾小管上皮细胞HK-2和肾细胞癌细胞系786-0中的表达情况；脂质体Lipofectamine 3000转染MLK4 siRNA（si-MLK4）至786-0细胞系后用qRT-PCR和Western blot两种方法检测肾细胞癌细胞系中MLK4的沉默效率；CCK-8和Ki-67方法检测si-MLK4对786-0细胞系增殖的影响，Transwell 方法检测si-MLK4对786-0细胞系迁移的影响，流式细胞术检测si-MLK4对786-0细胞系凋亡的影响，DCF-DA分析法检测si-MLK4对786-0细胞系ROS水平的影响，同时利用Western blot方法检测MAPKs信号通路的改变情况。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示MLK4在人肾细胞癌细胞系786-0中表达量明显高于人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2；qRT-PCR和Western blot结果显示:相对于si-NC组，si-MLK4转染人肾细胞癌细胞系后MLK4在mRNA和蛋白水平表达量均降低；CCK-8和Ki-67结果显示si-MLK4抑制人肾细胞癌细胞系786-0增殖，Tranwell结果显示si-MLK4抑制人肾细胞癌细胞系786-0迁移，而流式细胞术结果显示si-MLK4促进人肾细胞癌细胞系786-0凋亡；DCF-DA分析结果发现si-MLK4促进人肾细胞癌细胞系786-0 ROS的产生，Western blot结果显示:p38、p-ERK1/2、p-JNK磷酸化水平明显增加，提示si-MLK4通过ROS/MAPKs信号通路诱导人肾细胞癌细胞系786-0的凋亡。结论:si-MLK4通过ROS/MAPKs信号通路诱导人肾细胞癌细胞系786-0的凋亡，提示MLK4可作为预防肾细胞癌发生发展的靶点，为治疗肾细胞癌提供了新的理论基础和思路。     

lncRNA NONHSAT113026在肾透明细胞癌中的表达及功能

目的:本研究旨在探讨lncRNA NONHSAT113026（lncRNA 026）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）组织中的表达及对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分别在83例肾透明细胞癌和对应癌旁组织、肾癌细胞株786-O及ACHN中检测lncRNA 026的表达水平,并分析其表达水平与患者临床病理参数的相关性。通过慢病毒载体技术构建稳定过表达lncRNA 026的肾癌细胞786-O及ACHN,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白印迹法（Western blot）分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:与癌旁组织相比,lncRNA 026在ccRCC组织中的表达水平显著下调（P＜0.000 1）;在肾癌细胞786-O和ACHN中过表达lncRNA 026能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.01）;Western blot结果显示,过表达lncRNA 026可下调PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt、GSK-3β的表达（P＜0.01）。结论:lncRNA 026在肾透明细胞癌组织中低表达,并且过表达lncRNA 026能显著降低肾癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。提示lncRNA 026在肾癌中发挥了重要作用,有望成为治疗肾癌的潜在药物作用靶点。     

喉鳞癌eIF4E及其ser-209磷酸化蛋白表达

[目的]分析喉鳞癌原发灶中eIF4E、p-eIF4E(ser-209)蛋白的表达特点及其作用.[方法]回顾性分析67例喉鳞癌的临床资料,用免疫组化方法检测原发灶中eIF4E、p-eIF4E(ser-209)蛋白表达.[结果]原发灶中eIF4E、p-eIF4E(ser-209)蛋白阳性率分别是100%(67/67)和86.6%(58/67).92.5%(62例)喉鳞癌患者近乎每个癌细胞(角化珠除外)都呈eIF4E蛋白阳性染色,在58例p-eIF4E(ser-209)阳性患者中54例(93.1%)也呈现相同染色规律,但染色明显较eIF4E为淡;两种蛋白往往呈现外围癌细胞着色深,而角化珠处无染色的特征.[结论]喉鳞癌中,eIF4E蛋白表达率高,特异性强,在喉癌中可能起重要作用,并且eIF4E蛋白可能在每个癌细胞中都起作用.     

TRIM22靶向调控eIF4E在NB4细胞粒系定向分化过程中的作用与机制

目的 探讨在人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞粒系分化过程中三基序蛋白22(TRIM22)的功能及其与真核细胞起始因子4E(eIF4E)的相互作用,从而进一步阐明TRIM22靶向调控eIF4E的机制.方法 体外实验建立NB4细胞诱导分化模型,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blotting技术检测TRIM22、eIF4E基因和蛋白表达的变化,并通过电穿孔转染技术敲低或过表达TRIM22后利用CCK-8和流式细胞术检测其对细胞功能的影响,及对eIF4E蛋白表达水平的影响,最后利用免疫共沉淀(CO-IP)实验验证TRIM22与eIF4E的相互作用.结果 全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞后,TRIM22的mRNA相对表达量由1.01±0.15逐渐升高到30.98±2.79(F=280.700,P=0.000),蛋白相对表达水平由0.22±0.03逐渐升高至0.51±0.05(F=51.430,P=0.000).反之,eIF4E的mRNA相对表达量由1.01±0.09逐渐降低至0.47±0.06(F=20.520,P=0.000),蛋白相对表达水平由0.97±0.02逐渐降低至0.64±0.09(F=14.700,P=0.001).流式细胞术检测TRIM22过表达后ATRA干预组PE-CD11b表达水平[(78.80±2.00)%]比空载体ATRA干预组[(58.70±2.70)%]和共转染后ATRA干预组[(61.60±3.80)%]均升高(t=9.535,P=0.000;t=8.187,P=0.000).同时,过表达TRIM22基因水平后,eIF4E蛋白水平会反向变化(t=4.985,P=0.007).CO-IP实验验证TRIM22通过结合eIF4E而起作用.结论 TRIM22在NB4细胞粒系定向分化过程中促进细胞分化,并且可通过靶向结合eIF4E抑制其表达而发挥重要作用.     

eIF4E反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中eIF4E HPA表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中elF4E及肝素酶(HPA)蛋白、mRNA表达的影响,并观察其对EC9706细胞侵袭力的抑制效果.方法:针对eIF4E mRNA翻译起始区设计经硫代磷酸化修饰的反义寡核苷酸(ASODNS),经脂质体转染食管癌EC9706细胞,采用原位杂交、Western Blot和Boy-den chamber侵袭实验等方法检测抑制前后EC9706细胞中eIF4E及HPA表达情况及细胞侵袭力改变.结果:elF4E ASODNS转染食管癌EC9706细胞24、48、72h后,eIF4E及HPA的mRNA与蛋白表达量均较对照组有所降低(P＜0.05).且均以转染72h的抑制效应最为明显,在每个时间段内随剂量增加elF4EASODNS抑制效应明显增强(P＜0.05);eIF4EASODNS对HPA蛋白、mRNA表达的抑制效应和对eIF4E蛋白、mRNA表达的抑制效应,呈正相关关系(蛋白r=10.02, mRNA r=10.17,P均<0.01);eIF4EASODNS体外转染食管癌EC9706细胞后,其穿越Matrigel的细胞数明显少于细胞对照组、空白对照组和无关对照组(P均<0.05).结论:elF4E ASODNS可抑制食管癌EC9706细胞中eIF4E、HPA蛋白及mRNA表达,且可抑制食管癌EC9706细胞的浸润转移.该研究结果为临床治疗食管癌等恶性肿瘤浸润转移奠定一定的理论基础.     

HIF-1α通过调控脂代谢关键基因促进肾癌细胞的侵袭

目的:脂肪代谢在肾癌的发生、发展过程中至关重要.缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)被认为是肾癌发生发展过程中关键的基因之一,其参与调控肾癌的侵袭转移过程.本研究探讨肾癌细胞侵袭过程中HIF-1α与脂肪代谢相关基因的关系.方法:采用免疫组织化学法检测人肾癌组织内HIF-1α、SCD1及FASN的表达,分析各基因之间的相关性.采用HIF-1 α过表达质粒或敲除shRNA沉默正常肾脏细胞HK-2及肾癌细胞ACHN内HIF-1α后,运用real-time PCR及Western blot技术检测脂肪代谢相关基因SCD1及FASN的表达改变情况.采用Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,并运用SCD1及FASN的siRNA行基因沉默后,检测此两种基因对细胞侵袭能力的影响.结果:免疫组织化学结果显示SCD1及FASN在肾癌组织中的表达与HIF-1α呈显著正相关.HIF-1α过表达质粒能明显上调SCD1和FASN mRNA及蛋白的表达水平,反之,HIF-1α shRNA则明显抑制两种基因的表达.HIF-1α促进肾癌细胞ACHN的体外侵袭能力,而同时转染SCD1及FASN siRNA沉默基因表达后,细胞的侵袭能力减弱.结论:调控肾癌脂肪代谢的基因SCD1及FASN在HIF-1α所调控的肾癌细胞的侵袭过程中发挥重要作用.     

AMD3100抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力及其机制研究

目的:探讨CXCR4特异性非肽类受体拮抗剂AMD3100对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能的分子机制。方法:Western blot方法检测不同转移潜能胃癌细胞系中CXCR4蛋白的表达水平。以不同浓度的AMD3100处理MKN28-M和MKN28-NM细胞后,采用CCK-8检测胃癌细胞的增殖情况,Transwell实验观察胃癌细胞侵袭能力的变化。Western blot检测AMD3100处理后MKN28-M细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:Western blot实验结果显示,高转移胃癌细胞MKN28-M中CXCR4的蛋白表达水平明显高于低转移胃癌细胞MKN28-NM,亲本细胞MKN28的CXCR4蛋白表达量很低。CCK-8和Transwell实验检测结果表明,AMD3100通过特异性阻断CXCR4的作用,显著抑制MKN28-M和MKN28-NM细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01),且其抑制均呈剂量依赖性。经AMD3100处理后,MKN28-M细胞中MMP-9和VEGF的蛋白表达水平降低。结论:AMD3100可能通过下调MMP-9、VEGF等分子的表达抑制胃癌细胞的增殖,减弱胃癌细胞的侵袭及转移能力。     

联合靶向mTOR和Gli1/2信号通路的药物对肾癌细胞生长的抑制效应

目的:探讨联合靶向mTOR和Gli1/2信号通路的药物对肾癌细胞生长的抑制效应。方法:采用Real time-PCR的方法检测SHH/Gli信号通路的核心效应成分Gli1和Gli2在20对正常肾脏和肾癌组织中的表达情况;采用Western blot技术验证4对正常肾脏和配对的肿瘤中Gli1和Gli2蛋白的表达水平。单独或联合使用不同浓度的mTOR抑制剂与Gli1/2抑制剂于肾癌细胞后,采用MTT的方法检测细胞的体外增殖能力,然后采用Western blot技术检测联合应用低剂量mTOR抑制剂与Gli1/2抑制剂的肾癌细胞内细胞周期、凋亡相关蛋白的变化情况。结果:Gli1与Gli2在肾癌组织中的表达高于对照的正常肾脏组织。低剂量（5 μmol/L）Gli1/2抑制剂Gant61并不能显著抑制肾癌细胞的生长,高剂量（10 μmol/L）的Gant61能达到有效的抑制效应;但5 μmol/L Gant61与低剂量mTOR抑制剂Rapamycin联用时,肾癌细胞的生长显著被抑制,且诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。结论:联合靶向mTOR和Gli1/2信号通路显著抑制肾癌细胞生长,为潜在的治疗策略。     

Elevated expression of eukaryotic translation initiation factor 4E is associated with proliferation, invasion and acquired resistance to erlotinib in lung cancer

Eukaryotic translation initiation factor 4E (eIF4E) is the rate-limiting factor for cap-dependent translation initiation, which is known to regulate oncogenesis. Elevated eIF4E and its negative impact on prognosis in human non-small cell lung cancer (NSCLC) have been reported previously. However, its potential as a therapeutic target and role in regulation of sensitivity to EGFR inhibitors is an area of ongoing investigations. In this study, we detected increased levels of eIF4E in 16 human NSCLC cell lines compared with their normal bronchial epithelial cells. Consistently, human tissue array analysis showed that eIF4E expression was significantly higher in human NSCLC tissues than normal tissues. Inhibition of eIF4E using eIF4E siRNA inhibited the growth and invasion of NSCLC cells. These data suggest that eIF4E overexpression plays a crucial role in positive regulation of the growth and invasion of NSCLC cells. By proteomics, we found that eIF4E levels were elevated in erlotinib-resistant cell lines compared with the sensitive parental cell line. In agreement, assembly of the eIF4F cap complex and several oncogenic proteins regulated by the cap-dependent translation mechanism, were also increased in erlotinib-resistant cells. Thus, erlotinib-resistant cells exhibit elevated eIF4E expression and cap-dependent translation. Inhibition of eIF4F with different means (e.g., gene knockdown) downregulated c-Met expression and partially restored cell sensitivity to erlotinib, suggesting that elevated eIF4E contributes to development of erlotinib resistance, likely through positive regulation of c-Met expression. Taken together, we suggest that elevated eIF4E in NSCLC cells is associated with proliferation, invasion and acquired erlotinib resistance.     

Inhibition of eIF4E cooperates with chemotherapy and immunotherapy in renal cell carcinoma

Purpose

Although overexpression of the eukaryotic translation initiation factor 4E (eIF4E) is detected in patients with renal cell carcinoma (RCC) and associated with poor prognosis, the possible roles of eIF4E in RCC have not been revealed.

Methods

The effects of eIF4E inhibition on cell growth, migration, survival, chemo-/immunotherapy and eIF4E pathways via pharmacological inhibitor and genetic siRNA knockdown were analyzed in RCC cells.

Results

In this work, we demonstrate that eIF4E is critically involved in multiple biological functions of RCC. We firstly inhibited eIF4E activity by ribavirin in two cell lines (Caki-1 and ACHN) representing RCC metastasis models. We demonstrated that ribavirin inhibited proliferation and migration and induced apoptosis in RCC in a dose-dependent manner. We further confirmed that the inhibitory effects of ribavirin were attributed to its ability in inhibiting eIF4E-regulated protein translation and activity. eIF4E inhibition using siRNA knockdown mimicked ribavirin’s effector in RCC cells. Importantly, eIF4E inhibition by both ribavirin and siRNA knockdown significantly sensitized RCC response to chemo- and immunotherapeutic agents in vitro as well as in vivo.

Conclusions

Our findings clearly demonstrate the roles of eIF4E in RCC growth, survival, metastasis and resistance. Ribavirin is an antiviral drug, and its clinical efficacy is currently being investigated in the treatment of various cancers. Our findings support and provide a preclinical evidence for clinical trial for the combination of ribavirin with chemo-/immunotherapy in RCC.

     

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性（P<0.05）,但两转染组之间相比,差异无统计学意义（P>0.05）;无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应（P>0.05）;两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G₀/G₁期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。     

非小细胞肺癌中PAX6表达及其对肿瘤细胞增殖与侵袭作用机制研究

背景与目的：转录因子PAX6主要表达于胚胎期,不同肿瘤中PAX6呈现高表达,通过不同的信号通路发挥肿瘤抑制或促进作用。检测PAX6在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,通过RNAi下调其表达,研究PAX6对肿瘤细胞侵袭和增殖力以及cyclin E、p38表达水平的影响。方法：应用蛋白印记检测86例NSCLC肿瘤组织及癌旁配对组织以及2例细胞系中PAX6的表达情况。应用PAX6特异性siRNA序列,转染NSCLC细胞系A549,MTT法、Transwell小室、划痕实验检测转染前后细胞增殖、侵袭和迁移能力的对比。蛋白质印记法(Western blot)检测转染前后cyclin E及p38表达情况。结果：对比癌旁组织及正常人支气管上皮细胞16HBE,PAX6在NSCLC组织及A549细胞系中显著高表达。选取高效siRNA序列转染细胞系后,PAX6表达的下调抑制了肿瘤细胞的增殖及集落形成,G1期细胞比例增加,细胞侵袭及迁移力均下降。PAX6基因敲低细胞cyclin E及p38活性受到抑制,表达下调。结论：PAX6通过调控MAPK通路及cyclin E的表达加速肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移,是潜在的NSCLC诊疗靶点。     

siRNA下调Ets2对肾癌786-0细胞增殖的影响

目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six2,Ets2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞786-0增殖的影响及机制.方法:Westem Blot检测各肾癌细胞内Ets2的表达,并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达,利用MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术检测其增殖能力的变化,通过Western Blot检测细胞周期相关分子表达水平变化.结果:Ets2在肾癌细胞内的表达比正常肾小管上皮细胞明显增高,siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.下调Ets2后786-0细胞增殖能力及克隆形成能力减弱(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期;Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞内CDK4与CyclinD1的表达,而上调了p21的表达.结论:Ets2可通过调节CDK4、CyclinD1及p21的表达影响肾癌细胞786-0的增殖能力.     

TRPC3在胰腺癌细胞系中的表达及功能

目的:研究TRPC3在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）细胞系中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot检测正常和PC细胞系中TRPC3表达;采用Western blot检测GdCl3和TRPC3 siRNA干预PC细胞系后TRPC3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和PTEN蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖;DAPI染色法检测细胞形态学;Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡;钙成像法检测细胞内［Ca2+］ i。结果:PC细胞系中TRPC3 mRNA和蛋白表达明显高于正常胰腺上皮细胞HDPE6-C7;与溶剂和转染阴性对照细胞比较,GdCl3和转染TRPC3 siRNA的Panc1、A8184和T3M4细胞核固缩数量明显增加,Annexin V/PI双阳性凋亡细胞比例明显增多,T3M4细胞的静息［Ca2+］i、达峰［Ca2+］i和恢复相［Ca2+］i浓度明显降低;A8184和T3M4细胞的p-PI3K、p-AKT和PTEN蛋白表达明显降低。结论:TRPC3在PC细胞系中表达上调,且TRPC3通过调节细胞Ca2+介导的PI3K/AKT信号通路从而影响PC细胞增殖和凋亡。     

甲基转移酶样因子3 通过调控GLUT4-mTORC1 轴影响食管鳞状细胞 癌细胞的糖酵解及增殖

目的：探讨甲基转移酶样因子3（METTL3）在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织和细胞中的表达水平及其对ESCC 细胞糖 酵解和增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法：基于TCGA 数据库分析METTL3 在ESCC 细胞中的表达及可能的富集通路。 收集2021 年1 月至2021 年6 月间在北川医学院附属医院外科手术切除的34 例ESCC 组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法验证 ESCC 组织中METTL3 的表达。采用CCK-8 法和平板克隆形成实验检测干扰METTL3 后ESCC 细胞增殖能力的变化,利用比色 法检测干扰METTL3 后ESCC 细胞总RNA 中m6A 的表达水平,采用甲基化RNA 免疫沉淀定量PCR（MeRIP-qPCR）检测METTL3 对葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）基因mRNA 的m6A 修饰水平的影响,采用WB 和qPCR 等技术探索METTL3 参与ESCC 细胞糖酵解 的生物学机制。结果：METTL3 在ESCC 组织以及细胞中均呈高表达（均P<0.001）。干扰METTL3 表达后,ESCC 细胞的增殖能 力明显减弱、细胞内总RNA 的m6A 修饰水平显著降低（均P<0.001）。此外,干扰METTL3 可显著抑制KYSE150 和TE-1 细胞中 GLUT4 基因mRNA 的m6A 修饰水平（均P<0.01）,并通过下调GLUT4 的表达抑制葡萄糖的摄取以及乳酸的释放（均P<0.01）,最 终下调mTORC1 通路活性并抑制ESCC 细胞的增殖;在干扰METTL3 的ESCC 细胞同时联合运用mTORC1 通路抑制剂显示有协 同的抗癌作用。结论：METTL3 介导的m6A 修饰通过调控GLUT4-mTORC1 信号轴影响ESCC 细胞的糖酵解及增殖。     

miR-26a通过调控E2F7、Myc抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力

目的:研究miR-26a对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-26a 调控增殖与迁移的可能机制。方法:应用实时荧光定量PCR法(QPCR)检测乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞中miR-26a的表达水平,并检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-26a与E2F7 mRNA的表达水平。应用脂质体介导的方法,以miR-26a mimics与E2F7 siRNA瞬时转染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-26a表达水平,Western blot法检测E2F7、Myc蛋白的表达水平。MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖能力,划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力。结果:乳腺癌细胞中miR-26a的表达水平均低于正常乳腺细胞MCF-10A,且三阴型乳腺癌细胞表达水平降低最明显。三阴型乳腺癌组织中miR-26a相对于正常乳腺组织表达减低,而E2F7 mRNA表达则显著升高。miR-26a mimics转染后miR-26a表达水平显著升高,miR-26a过表达可抑制E2F7、Myc蛋白的表达;E2F7 siRNA转染后E2F7表达水平减低,Myc蛋白表达亦减低。MTT实验结果示miR-26a过表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,划痕实验示miR-26a过表达可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力。结论:miR-26a可能通过抑制E2F7、Myc调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与迁移能力。     

lncRNA NORAD促进食管鳞状细胞癌EC9706 细胞的增殖和迁移

目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）DNA损伤激活的非编码RNA（non-coding RNA-activated by DNA damage,NORAD）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞株EC9706 增殖和迁移能力的影响及其机制。方法：采用RT-PCR 法检测不同ESCC细胞（EC9706、TE1、YES-2、KYSE150）中NORAD mRNA表达水平,通过RNA干扰技术将NORAD的小干扰RNA（siRNA）转染到EC9706 细胞（si-NORAD组）以建立NORAD低表达细胞,另设置空白对照组（Ctrl 组,不转染任何序列）及阴性对照组（NC组,转染siRNA 阴性对照序列）,qPCR验证其转染效果。用MTT、平板克隆形成和划痕愈合实验检测敲低NORAD前后EC9706 细胞增殖和迁移能力的变化,Western blotting 检测敲低NORAD前后EC9706 细胞中上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）和锌指转录因子Snail 的表达变化。结果：在4 种ESCC 细胞中NORAD mRNA 均呈高表达状态,同时与TE1、YES-2、KYSE150 细胞相比,EC9706 细胞中NORAD mRNA 呈显著高表达（P<0.01）。与Ctrl 组和NC 组比较,转染NORAD-siRNA 后,si-NORAD 组EC9706 细胞中NORAD 表达水平显著降低（均P<0.01）,EC9706 细胞的增殖和迁移能力显著降低（均P<0.05）;敲低NORAD 表达后,EC9706 细胞中E-cadherin 表达升高而N-cadherin 和Snail 表达降低（均P<0.05）。结论：NORAD 在EC9706 细胞中呈高表达状态,敲低NORAD 表达可通过上调E-cadherin、下调N-cadherin 和Snail表达而抑制EC9706 细胞的增殖和迁移能力。     

干扰B7-H4表达通过下调E2F家族相关转录因子抑制乳腺癌细胞的增殖

目的：探讨干扰B7-H4表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期以及相关下游分子表达的影响。方法：利用脂质体转染技术分别将特异性靶向B7-H4的siRNA(siB7-H4)及其阴性对照（siNC）转染至对数生长期的乳腺癌T47D和MCF-7细胞,分别命名为T47D-siB7-H4、T47D-siNC、MCF-7-siB7-H4和MCF-7-siNC组。用qPCR法和WB法验证siRNA干扰效果及其对细胞周期分子cyclin D1表达的影响,CCK-8法和FCM分别检测干扰B7-H4表达对T47D和MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响,qPCR法检测B7-H4干扰对E2F家族相关转录因子表达的影响。结果：成功构建干扰B7-H4表达的乳腺癌T47D和MCF-7细胞。与T47D-siNC和MCF-7-siNC组相比,T47D-siB7-H4和MCF-7-siB7-H4组细胞中B7-H4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低、细胞增殖能力显著降低（均P<0.01）,并伴有G1/S期细胞周期阻滞以及cyclin D1表达下调（均P<0.01）,但细胞凋亡率差异无统计学意义（均P>0.05）...