ABCB1（1199G/A）基因多态性对甲磺酸伊马替尼转运的分子机制

摘 要 目的：探讨P 糖蛋白（P-gp）活性和所介导的甲磺酸伊马替尼胞内累积量及药物跨膜渗透性的影响。 方法: 将构建的ABCB1 1199G/wt和1199A/mut重组质粒分别转染HEK293细胞,利用RT-PCR法考察细胞中P-gp的mRNA表达水平。CCK-8法检测药物对细胞的毒性,高效液相色谱法（HPLC）检测细胞中药物浓度和胞内累积量,跨膜电阻实验考察药物跨膜渗透率,评价P-gp活性对药物转运的作用。结果: 细胞毒性实验表明,转染细胞内的药物浓度均低于对照组,证明P-gp具有介导药物转出胞外的作用。HPLC和跨膜电阻实验表明,与野生型ABCB1(1199G)细胞相比,突变型ABCB1(1199A)细胞抗甲磺酸伊马替尼的作用更强,P-gp对介导甲磺酸伊马替尼外排转运的作用较强且药物的跨膜渗透性也相应较强。结论:实验表明ABCB1（1199G/A）位点突变导致其编码蛋白P-gp活性改变,该位点多态性会导致甲磺酸伊马替尼清除率增加,抑制了药物在靶细胞中有效药物浓度,因此临床上应对ABCB1基因进行分型,指导甲磺酸伊马替尼的个体化用药。     

ABCB1(1199G>A)基因多态性对多西他赛转运影响的分子机制

目的：在体外研究ABCB1（1199G>A）基因多态性对多西他赛转运影响的分子机制。方法：将ABCB1（1199G>A）野生型和突变型基因分别导入HEK293细胞,研究2种重组细胞株对多西他赛的摄取以及跨膜转运的差异。结果：在细胞毒性分析中,ABCB1_1199A/mut细胞对多西他赛表现出更强的耐药性。多西他赛在2种重组细胞中的含量均显著性的低于对照组细胞,证实了多西他赛是由P-糖蛋白介导转运的,并且在ABCB1_1199A/mut细胞中跨膜转运更高。ABCB1_1199A/mut细胞介导转运多西他赛的P-糖蛋白的活性较ABCB1_1199G/wt细胞的更强。结论：ABCB1（1199G>A）基因多态性能够显著性影响P-糖蛋白转运多西他赛的能力,由ABCB1突变型基因编码的P-糖蛋白能够更有效的转运多西他赛。因此ABCB1（1199G>A）基因多态性可能会影响P-糖蛋白的活性,并对药物的分布和消除产生影响,从而影响药物的治疗作用。     

甲磺酸伊马替尼联合塞来昔布对胃肠间质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲磺酸伊马替尼和塞来昔布联合对胃肠间质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法甲磺酸伊马替尼及塞来昔布单独或联合处理胃肠间质瘤细胞株GIST-T1,MTT法检测药物对胃肠间质瘤细胞株的生长抑制,Western blot检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果甲磺酸伊马替尼与塞来昔布联合应用显著增强甲磺酸伊马替尼对胃肠间质瘤细胞增殖;和甲磺酸伊马替尼及塞来昔布单用相比,二者联用后胃肠间质瘤细胞Bax表达增高及Bcl-2表达降低。结论甲磺酸伊马替尼和塞来昔布联合应用显著抑制胃肠间质瘤细胞增殖,可能和促肿瘤细胞凋亡有关,其机制可能与Bax表达上调及Bcl-2表达下调有关。     

甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP-2基因表达的影响及意义

目的研究甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP2的表达影响及意义。方法采用定量PCR方法检测甲磺酸伊马替尼干预K562细胞后bcr/abl、SHIP2基因表达变化。采用MTT及Western blot方法分别检测细胞增殖与AKT磷酸化水平的变化。结果随着甲磺酸伊马替尼浓度增加及作用时间的延长bcr/abl基因的表达下降（P〈0.01）,SHIP2的表达增加（P〈0.01）。Akt磷酸化水平降低,细胞增殖能力降低。结论甲磺酸伊马替尼能下调bcr/abl基因的表达;SHIP2表达可能受bcr/abl基因的调节,并可能通过调节PI3K/AKT途径影响细胞的增殖。     

伊马替尼对慢性髓系白血病骨髓细胞VEGF表达的影响

目的 研究伊马替尼对慢性髓系白血病(CML)患者骨髓细胞及白血病细胞系K562血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用ELISA检测伊马替尼作用前后CML骨髓细胞和K562细胞VEGF蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测伊马替尼对K562细胞VEGF mRNA表达的影响.结果 CML患者骨髓单个核细胞在伊马替尼作用后VEGF蛋白表达量为(130.66±100.58)pg/ml,明显低于未加药组(269.11±176.79)pg/ml(P＜0.01).K562细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平于伊马替尼作用后亦呈剂量依赖性下降.结论 伊马替尼对CML患者VEGF的表达有明显抑制作用,提示该药对CML可能具有抗血管新生作用.     

甲磺酸伊马替尼增加顺铂对耐药卵巢癌细胞作用的研究

目的探讨靶向治疗药物甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate)对耐顺铂人卵巢腺癌细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制和诱导凋亡作用以及与顺铂合用的效果。方法 MTT法检测不同浓度甲磺酸伊马替尼、DDP以及联合用药对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制情况,采用双染色流式细胞术检测甲磺酸伊马替尼对SKOV3/DDP的诱导凋亡作用。结果 MTT法检测出不同药物浓度的甲磺酸伊马替尼作用于SKOV3/DDP细胞呈现细胞生长抑制作用,甲磺酸伊马替尼与不同浓度顺铂联合用药对细胞生长抑制率分别为38.63%、51.55%、66.54%,明显高于DDP单用药组的8.30%、16.68%、30.83%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两药合用后的IC50为9.57,是单用顺铂组的4.13倍。甲磺酸伊马替尼与顺铂合用后,早期凋亡率由1.25%增加到12.31%(P<0.05)。结论甲磺酸伊马替尼可以抑制卵巢癌耐DDP细胞株SKOV3/DDP的增殖和诱导细胞凋亡,并显著增强其对DDP的敏感性。     

甲磺酸伊马替尼不良反应的文献分析

目的 根据国内临床应用甲磺酸伊马替尼的资料,探讨甲磺酸伊马替尼不良反应的一般规律和特点,为临床合理用药提供参考.方法 检索2003～2009年国内关于甲磺酸伊马替尼致不良反应(ADR)报告29篇,进行回顾性分析.结果 共计1 893例患者使用甲磺酸伊马替尼,其中663例产生不良反应,发生率为35.0%.发生率较高为：水肿203例(30.6%),白细胞减少146例(22.0%),恶心呕吐115例(17.3%),血小板减少107例(16.1%),关节肌肉疼痛72例(10.9%). 结论 临床应重视甲磺酸伊马替尼引起的不良反应,用药时应加强对患者的临床观察,以减少严重不良反应的发生.     

奥美拉唑对伊马替尼在大鼠体内药动学参数的影响

目的 探讨奥美拉唑对伊马替尼在大鼠体内药动学参数的影响。方法 将大鼠按体质量分为伊马替尼+低、中、高剂量奥美拉唑组和伊马替尼组，每组6只。各组分别按1.8、3.6、7.2 g/kg的剂量灌胃奥美拉唑混悬液或0.5%羧甲基纤维素钠溶液；1 h后，再按10 mg/kg的剂量灌胃伊马替尼混悬液。分别于灌胃前及灌胃后0.5、1、2、2.5、3、4、5、6、8、12、24、36 h时于眼眶取血100μL，以伊马替尼-d₃为内标，采用高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中伊马替尼及其代谢产物N-去甲基伊马替尼的浓度；使用DAS 2.0软件计算两种成分的药动学参数并进行比较。结果 与伊马替尼组比较，伊马替尼+中剂量奥美拉唑组大鼠血浆中伊马替尼的AUC_0-∞、AUMC_0-∞和伊马替尼+高剂量奥美拉唑组大鼠血浆中伊马替尼的c_max、t_1/2、AUC_0-∞，AUMC_0-∞均显著升高或延长(P<0.05)。与伊马替尼组比较，伊马替尼+中剂量奥美拉唑组...     

高效液相色谱法测定甲磺酸伊马替尼脂质体含量及有关物质

目的：建立高效液相色谱（ HPLC）法,检测甲磺酸伊马替尼脂质体的含量及有关物质。方法 Kromasil C18柱,流动相 A 为辛烷磺酸钠溶液-甲醇（42：58）;流动相 B 为辛烷磺酸钠溶液-甲醇（4：96）;梯度洗脱,流速为1.2 mL·min-1,柱温室温,检测波长268 nm。结果在选定的色谱条件下,甲磺酸伊马替尼专属性良好,在线性范围1~100μg·mL-1内线性关系良好,r=0.9991（n=5）。结论该方法用于检测甲磺酸伊马替尼脂质体的含量及有关物质准确、灵敏、可靠。     

甲磺酸伊马替尼致三度房室传导阻滞

1例31岁男性患者因慢性粒细胞白血病口服甲磺酸伊马替尼400 mg,1次/d.患者既往无心脏病、高血压病史.治疗前心电图和超声波检查示心功能正常.治疗第1天,患者出现心前区不适.第6天出现心律失常,三度房室传导阻滞,HR 45次/min.停用甲磺酸伊马替尼,给予支持治疗,安装临时起博器,患者症状好转.     

ABCB1(G1199A)基因稳定转染HEK293细胞株的建立

目的:将ABCB1(G1199A)突变型和野生型基因分别转入HEK293细胞,建立P-糖蛋白稳定表达细胞株。方法:以野生型ABCB1基因的cDNA为模板质粒,采用PCR点突变的方法合成突变的ABCB1(1199A)基因;在慢病毒的介导下,将实验室构建的pLVX-ABCB1-PGK-Puro和pLVX-ABCB1-mut-PGK-Puro重组质粒转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞;通过流式细胞术检测P-糖蛋白的表达、RT-PCR检测ABCB1基因的转录水平、CCK-8方法测定外源基因对HEK293细胞增殖的影响。结果:流式细胞术证实P-糖蛋白在HEK193细胞中稳定过表达,RT-PCR确定转染细胞中存在ABCB1(G1199A)基因mRNA的过表达,成果获得ABCB1(G1199A)野生型和突变型基因的稳定表达细胞株。结论:成功建立两种ABCB1(G1199A)稳定表达的HEK293细胞株,为该酶的功能研究奠定了基础。     

ABCB1(2677T>G)、SLCO1B1(521T>C)基因多态性与阿托伐他汀个体化用药的研究

目的:探讨新乡地区人群ABCB1 (2677T>G)和SLCO1B1 (521T>C)单核苷酸多态性(SNPs)对心脑血管疾病患者服用阿托伐他汀的不良反应及降脂疗效的影响。方法:通过荧光原位杂交法、高效液相色谱法等,考察患者SLCO1B1 (521T>C)、ABCB1(2677T>G)SNPs与阿托伐他汀药动学、药效学及不良反应的相关性。结果:在新乡市中心医院的90例入选患者中,SLCO1B1 (521T>C)、ABCB1 (2677T>G)等位基因突变频率分别为18.1%和69.8%。用药前后,SLCO1B1 (521T>C)SNPs与阿托伐他汀的血药浓度有相关性,但对其疗效及肌痛风险影响较小,各基因型间差异无显著性。ABCB1 (2677T>G)各基因型患者阿托伐他汀血药浓度组内差异具有显著性(P<0.05),相比ABCB1 2677T等位基因,携带ABCB1 2677G基因的患者对LDL-C降低作用更强,且出现肝毒性的风险较高。结论:ABCB1 (2677T>G)SNPs与阿托伐他汀的降脂疗效及肝毒性具有相关性,G等位基因可能是阿托伐他汀致肝毒性的因素之一。SLCO1B1 (521T>C)SNPs对阿托伐他汀的降脂疗效及肌痛风险无显著影响。     

A novel MDR1 G1199T variant alters drug resistance and efflux transport activity of P-glycoprotein in recombinant Hek cells

The human multidrug resistance gene MDR1 encodes the protein product P-glycoprotein (P-gp). P-gp is an integral membrane protein which mediates ATP-dependent substrate efflux. We recently discovered a novel G --> T variant at 1199 nucleotide position of MDR1 which exhibits a 2.3% allelic frequency in leukemia patients. The functional effects of this MDR1-G1199T variant were evaluated with recombinant HEK cells that stably express the wild-type, G1199A, or G1199T variant of the MDR1 protein, P-gp, at comparable levels. A panel of cytotoxic P-gp substrates comprising doxorubicin, vinblastine, vincristine, paclitaxel, or topotecan (a poor P-gp substrate) was used to evaluate the functional impact of G1199 variations. Compared to MDR1(wt), MDR1(G1199A) exhibited an increased resistance to doxorubicin, paclitaxel, vinblastine, and vincristine. In contrast, MDR1(G1199T) reduced resistance to (1/4) that of MDR1(wt) for all drugs except topotecan. Expression of MDR1 exhibits some degree of resistance to topotecan, but 1199 variation has no impact. These data were consistent with the variation in intracellular doxorubicin concentrations measured in MDR1 recombinant cells. Our results suggest that patients with the novel MDR1-G1199T variant may exhibit a lower degree of MDR1 dependent chemoresistance, and those with the G1199A polymorphism may exhibit a higher degree of resistance, compared with MDR1 wild-type patients.     

服用他克莫司的肾移植患者ABCB1基因多态性与术后感染的相关性

目的:观察服用他克莫司(Tacrolimus)的肾移植受者ABCB1基因多态性对于术后感染发生的影响。方法:选取行肾移植手术并服用他克莫司的患者90例,根据术后是否存在感染分为感染组和对照组,检测所有患者的ABCB1基因型3435C>T,1236C>T和2677G>A/T。采用χ²检验,方差分析和独立样本T检验的方法对患者的基本临床资料进行检验。采用卡方检验比较感染组和未感染组的基因多态性频率分布差异。结果:患者C1236T,C3435T,G2677A/T等位基因频率,均符合Hardy-Weinberg平衡。感染组和非感染组患者的年龄,性别,体质量,临床诊断,吗替麦考酚酯(Mycophenolate Mofetil)的用量均没有显著性差异。2组患者的平均血药谷浓度在一年内均无统计学差异。C1236T单核苷酸多态性对肾移植术后感染发生的影响具有统计学意义(P=0.034)。G2677A/T突变的发生对肾移植术后感染发生的影响具有统计学意义(P=0.010)。结论:ABCB1基因多态性中,仅C1236T的SNP多态性与G2677A/T的突变对肾移植术后感染发生的影响具有统计学意义。     

ABCB1 C3435T基因多态性对阿片类药物术后镇痛效果的影响

目的：评价ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白（ABCB1）基因多态性（rs1045642）对阿片类药物术后镇痛效果及术后恶心呕吐发生情况的影响。方法：检索中英文数据库，纳入考察ABCB1 C3435T基因多态性和阿片类药物术后镇痛效果、不良反应相关性的研究。使用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果：共纳入15篇文献，共计2 560例研究对象。结果显示，西方人群ABCB1 C3435T CC型阿片类药物消耗量与CT+TT型相比较，差异有显著性[SMD=0.31，95% CI（0.04，0.58），P=0.02]，T等位基因携带者术后阿片类药物消耗量大。亚洲人ABCB1 C3435T CC型阿片类药物消耗量与CT+TT型相比较，差异无统计学意义[SMD=0.12，95% CI（-0.17，0.42），P=0.41]。结论：ABCB1 C3435T基因多态性与术后阿片类药物消耗量相关，携带T基因患者阿片类镇痛药物消耗量大，需要更多的镇痛药物，需要根据患者个体情况谨慎调整镇痛药物使用量。     

环孢素代谢相关酶基因多态性对其药动学及药效学的影响

环孢素（cyclosporine A,CsA）作为钙调磷酸酶的抑制剂发挥免疫抑制作用而广泛用于器官移植和自身免疫病的治疗。然而,该药在患者个体间的疗效差异大。细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）3A4和CYP3A5是CsA体内代谢的肝药酶,此外,肠道P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）对该药的外排作用也显著影响CsA的吸收。目前研究示CYP3A5*3、CYP3A4*1B、*18B、*22的多态性,以及编码P-gp的ABCB1基因中的3种多态性,即C1236T、G2677T/A和C3435T,与CsA代谢及疗效相关联,但结论仍然存在争议。本文主要对上述研究结果进行归纳和分析,还同时对参与调节CYP活性或CsA药理作用发挥路径中涉及的分子,包括过氧化物酶体增殖剂激活受体α（peroxisome proliferators-activated receptor alpha,PPAR-α）、CYP450氧化还原酶（cytochrome P450 oxidoreductase,POR）、孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）及甲酰肽受体1（formyl peptide receptor 1,FPR1）的基因多态性也进行小结,从较全面的角度归纳新近关于基因多态性对CsA在体内的代谢、疗效发挥所产生的影响的研究进展。     

CYP2C19、ABCB1和PON1基因多态性与氯吡格雷抑制血小板聚集作用的相关性研究

目的:探讨CYP2C19、ABCB1和PON1基因多态性与氯吡格雷抑制血小板聚集作用的相关性。方法:纳入诊断为急性缺血性脑卒中或接受经皮冠状动脉介入术(PCI)后服用氯吡格雷和阿司匹林治疗的患者59例,测定CYP2C19(rs4244285、rs4986893)、ABCB1(rs1045642)和PON1(rs662)基因型及血栓弹力图(TEG),并对患者进行1年的随访,记录临床终点事件。应用单因素和多因素回归,分析患者CYP2C19、ABCB1、PON1基因型、一般情况及临床因素对氯吡格雷抑制血小板聚集作用的影响,比较不同基因型患者的氯吡格雷疗效。结果:59例患者中氯吡格雷治疗相关的血小板高反应性(HTPR)的发生率为8.5%。CYP2C19快代谢型、中间代谢型和慢代谢型患者血小板抑制率分别为(86.0±10.1)%、(78.4±17.3)%和(66.4±23.0)%,快代谢型和慢代谢型之间血小板抑制率差异有显著性(P=0.047),ABCB1和PON1各基因型之间血小板抑制率的差异无显著性(P>0.05),全变量多因素logistic回归分析未发现CYP2C19、ABCB1、PON1基因型与HTPR相关(P=0.681)。随访1年中,CYP2C19快代谢型、中间代谢型、慢代谢型患者的临床事件分别有2、3和3例;ABCB1携带TT、TC、CC等位基因患者的临床事件分别有1,3和4例;PON1携带AA、AG、GG等位基因患者的临床事件分别有4,2和2例,各基因型之间患者临床终点事件差异无显著性(P>0.05)。结论:根据CYP2C19、ABCB1和PON1基因多态性尚不能预测服用氯吡格雷后的临床疗效。