不同浓度SDF1、bFGF、IL-8对骨髓间充质干细胞的趋化作用

目的:研究比较不同趋化因子[骨髓基质细胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1,SDF-1）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）和白介素8（interleukin-8,IL-8）]在多个浓度下对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的趋化作用。方法:实验分为3组,即SDF1组、bFGF组、IL-8组,每组因子浓度为0 （对照浓度）、10、50、100、200、400 ng/mL（实验浓度）。抽取SD大鼠骨髓,分离培养BMSCs,利用Transwell小室研究不同浓度SDF1、bFGF、IL-8对BMSCs的趋化作用,获得3种因子趋化BMSCs的最佳浓度。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与0 ng/mL（对照浓度）组相比,3种因子均可趋化BMSCs（P<0.05）; 50、100、400 ng/mL浓度下,SDF1对BMSCs的趋化作用显著高于bFGF（P<0.05）;200 ng/mL浓度下,SDF1对BMSCs的趋化作用强于IL-8;SDF1及IL-8对BMSCc趋化作用的最佳浓度均为100 ng/mL,bFGF的最佳浓度为200 ng/mL。结论:SDF-1、bFGF、IL-8均可趋化BMSCs,SDF-1与IL-8的趋化效果更佳。     

基质细胞衍生因子1α及其受体CXCR4在人牙髓细胞中的表达

目的 研究体外培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)上CXCR4的表达情况,检测大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激后HDPC培养上清液中基质细胞衍生因子1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)的表达水平,探讨人工重组SDF-1α(recombinant human SDF-1α,rhSDF-1α)对HDPC增殖及迁移的影响.方法 采用免疫细胞化学及间接免疫荧光技术检测HDPC上CXCR4的表达.用不同浓度LPS(0.1、1、10、100 mg/L)和TNF-α(1、10、100μg/L)刺激HDPC 48 h后,ELISA法检测HDPC培养上清液中SDF-1α含量的变化.同时甲基噻唑基四唑(MTT)法及体外趋化实验观察不同浓度rhSDF-1α对HDPC增殖及迁移的影响.结果 正常HDPC胞膜表达CXCR4且其培养上清液分泌SDF-1α,浓度约为(4513.55±962.92)ng/L.在用LPS和TNF-α刺激HDPC后,SDF-1α的表达水平均显著降低(P＜0.05).50、100和200μg/L的rhSDF-1α可促进HDPC的增殖(P＜0.05),50和100μg/L rhSDF-1α作用9 h可显著趋化HDPC的迁移(P＜0.01).结论 CXCR4在HDPC上表达且SDF-1α能促进HDPC的增殖及迁移;SDF-1-CXCR4轴可能在牙髓组织损伤修复中发挥重要作用.     

人牙龈干细胞的分离鉴定及基质细胞衍生因子-1对其趋化效应的研究

目的 研究基质细胞衍生因子-1（SDF-1）受体CXCR4在人牙龈干细胞（GMSCs）上的表达及SDF-1对人GMSCs的趋化效应。方法 通过有限稀释法分离并培养人GMSCs,检测其表面干细胞标志物的表达情况,测试其克隆形成率及多向分化能力,利用免疫荧光染色法检测人GMSCs上SDF-1受体CXCR4的表达,用Transwell细胞培养室检测不同质量浓度SDF-1对人GMSCs的趋化反应,光镜下计数迁移至滤膜下侧面的不同视野的细胞数。结果 人GMSCs具有较高的自我更新能力,在体外呈克隆状生长,表达间充质干细胞表面标志物CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,而造血干细胞表面标志物CD14、CD34和CD45的表达为阴性。体外诱导培养的人GMSCs能够向成骨细胞及成脂细胞分化,其克隆形成率为21.4%±2.8%。免疫荧光染色显示,人GMSCs表达SDF-1受体CXCR4。SDF-1的质量浓度为100、200 ng·mL^-1时,Transwell细胞培养室中迁移的细胞数目（每高倍视野分别为189.3±4.4和164.6±4.9）显著多于空白对照组（每高倍视野47.8±2.5）（P<0.01）;使用CXCR4中和抗体处理后,人GMSCs的迁移效应明显受到抑制（每高倍视野降低为29.0±2.4,P<0.01）。结论 人GMSCs表达趋化因子SDF-1受体CXCR4,SDF-1对人GMSCs有趋化效应,这种趋化效应可能是通过其特异性受体CXCR4介导的。     

趋化因子SDF-1及其受体CXCR4对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨SDF-1/CXCR4生物轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 采用MTT法检测细胞的增殖能力.通过趋化实验观察细胞的侵袭迁移能力.结果 口腔鳞状细胞癌细胞在SDF-1作用下增殖反应明显增强,CXCR4抗体可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P＜0.05).趋化实验显示SDF-1可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移,经50μg/ml CXCR4抗体孵育后,SDF-1介导Tca8113细胞的这种侵袭能力明显减弱(P＜0.05).结论 CXCR 4/SDF-1受体配体系统可介导口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移,在癌细胞向颈部淋巴结转移中发挥着重要作用.干扰SDF-1/CXCR4的相互作用有可能成为治疗口腔鳞状细胞癌的新方法.     

SDF-1α/CXCR4信号轴介导柚皮素对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的: 探讨柚皮素对骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨分化的影响,SDF-1α/CXCR4信号轴是否参与介导柚皮素促进BMSCs成骨分化。方法: 分离、培养及鉴定大鼠BMSCs,CCK8法检测不同浓度柚皮素对BMSCs增殖的影响,检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性;RT-qPCR法检测各组ALP、骨钙素（osteocalcin,OCN）、趋化因子受体4（CXCL receptor 4,CXCR4）和基质细胞衍生因子1α（stromal cell derived factor-1,SDF-1α）的表达,ELISA法检测各组CXCR4和SDF-1α蛋白的表达。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 细胞鉴定结果表明,培养细胞为高纯度的BMSCs。第1、3天,柚皮素对BMSCs增殖无显著影响（P>0.05）;第5天时,50 μg/mL柚皮素可促进BMSCs增殖;第7天时,不同浓度柚皮素均促进BMSCs增殖（P<0.05）;同时,ALP活性随时间推移逐渐增强。RT-qPCR结果表明,柚皮素组和成骨诱导液组中相关基因表达均较培养基组明显增加,而AMD3100组中各基因表达均受到显著抑制（P<0.05）。ELISA检测结果显示,各组CXCR4和SDF-1α蛋白表达随诱导时间增加均逐渐上调,且两者均在100 μg/mL柚皮素组表达最高。结论: 柚皮素可促进BMSCs增殖和成骨向分化,SDF-1α/CXCR4信号轴参与柚皮素对BMSCs的成骨分化,主要在BMSCs成骨分化早期阶段。     

AMD3100对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的探讨CXCR4拮抗剂AMD3100对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响。方法采用MTT法检测细胞的增殖能力。通过趋化实验观察CXCR4特异性拮抗剂AMD3100在口腔鳞状细胞癌细胞的侵袭迁移中的作用。结果 1)口腔鳞状细胞癌细胞在SDF-1作用下增殖反应明显增强,AMD3100可有效抑制肿瘤细胞的增殖。2)趋化实验显示SDF-1可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移,AMD3100能阻断CXCR4受体,从而抑制这种趋化和侵袭转移作用。结论 AMD3100能阻断CXCR 4/SDF-1的相互作用,其可能成为治疗口腔鳞状细胞癌的新方法。     

高糖环境通过抑制CXCR-4影响大鼠下颌骨骨髓基质细胞迁移

目的： 探讨高糖环境通过抑制CXCR-4对大鼠下颌骨骨髓基质细胞迁移的影响。方法： 从Wistar大鼠下颌骨中分离、培养骨髓基质细胞,利用Transwell实验筛选在生理糖浓度（5.5 mmol/L）下的SDF-1最适迁移浓度,检测不同糖浓度（5.5、16.5 mmol/L ）条件下SDF-1、AMD3100对细胞迁移能力的影响。利用Western 免疫印迹检测不同糖浓度（5.5、16.5 mmol/L ）条件下CXCR-4的表达,实时定量PCR检测CXCR-4、MMP-2的mRNA表达。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果： Transwell检测显示,生理糖浓度下,骨髓基质细胞的迁移能力对趋化因子SDF-1呈浓度依赖性;在生理糖浓度下,趋化因子SDF-1的最适浓度为100 ng/mL。高糖环境可抑制骨髓基质细胞的迁移能力。在不同糖浓度下,SDF-1均可明显增强细胞的迁移能力。加入AMD3100后,这种增强趋势受到明显抑制。高糖环境抑制CXCR-4蛋白以及CXCR-4和MMP-2 mRNA表达。结论： 高糖环境可以通过抑制CXCR-4的表达来影响大鼠下颌骨骨髓基质细胞在 SDF-1/CXCR-4生物轴调控下的定向迁移能力。     

基质细胞衍生因子和甲状旁腺激素在组织再生中的作用

趋化因子是原位组织工程中最具有应用前景的趋化剂,基质细胞衍生因子(stromal cell derived factor-1,SDF-1)是重要的趋化因子之一,能通过趋化募集机体自身表达基质细胞衍生因子-1(CXCL12)的特异受体(C-X-C chemokine receptor type4,CXCR4)CXCR4的干细胞到达创伤区域,促进组织再生。甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)作为唯一得到美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的用于治疗骨质疏松的骨合成代谢药物,能够动员骨髓基质细胞进入血液,并抑制蛋白二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)对SDF-1的降解。二者联合应用可以发挥对干细胞的推和拉的双向效应以促进干细胞的募集、归巢,从而达到协同促进组织再生的作用。本文就SDF-1和PTH在组织再生中的作用做出综述。     

CXCR4受体在口腔鳞癌细胞系中的表达及对细胞增殖和迁徙的影响

目的:观察口腔鳞癌细胞系(OSCC)中趋化因子受体CXCR4的表达,检测SDF-1/CXCR4反应轴对OSCC增殖的作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4受体在OSCC中的功能及活性。方法:细胞涂片免疫荧光法检测CXCR4蛋白在OSCC细胞系的表达,流式细胞仪直接免疫荧光法检测OSCC细胞系中CXCR4蛋白的表达量,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迁徙实验检测SDF-1/CXCR4反应轴对OSCC细胞的趋化作用。采用SPSS10.0软件包进行ANOVA方差分析和t检验。结果:CXCR4蛋白在OSCC细胞系呈阳性表达,表达率为68.62%。OSCC细胞在SDF-l作用下,其增殖反应显著增强,CXCR4抗体可显著抑制肿瘤细胞的增殖,SDF-1可显著诱导OSCC细胞的移动。结论:CXCR4受体与OSCC细胞增殖、迁徙功能有一定关系。     

糖尿病大鼠骨髓基质细胞的体外生长特性研究

目的建立实验性1型糖尿病大鼠模型,培养不同病程糖尿病来源的骨髓基质细胞（bone marrow mensenchymal stem cells,BMSCs）,观察其体外的生长特性。方法采用空腹腹腔一次性注射65mg／kg链脲佐菌素（streptozocin,STZ）建立1型糖尿病大鼠模型,分别在第2周（A组）、第4周（B组）取其四肢长骨BMSCs,进行体外培养和观察,细胞计数并绘制细胞生长曲线图。对照组按照体重注射柠檬酸缓冲液。结果一次性空腹腹腔注射STZ1周后,实验组75％的大鼠随机血糖均〉16．7mmol／L,出现糖尿病症状,对照组血糖正常,体重无减轻。A组BMSCs与正常组相比,克隆无明显减少,形态类似,各阶段细胞量差别不具有显著性（P〉0．05）;B组BMSCs与正常组相比,克隆少,胞体略大,生长缓慢,倍增时间延长,抗衰亡能力减弱。与正常组相比,A、B组贴壁功能在24h内差别均不显著（P〉0．05）。细胞计数结果显示,第2d至第8d,B组BMSCs比A组和正常组BMSCs均明显减少（P〈0．01）。结论STZ能够成功复制出1型糖尿病大鼠模型。建模4周后糖尿病大鼠BMSCs的增殖能力已受影响,抗衰亡能力减弱。     

Expression and significance of stromal cell-derived factor-1alpha and its receptor CXCR4 in human dental pulp cells

OBJECTIVE: To investigate the expression of CXCR4 in cultured human dental pulp cells (HDPC) in vitro and the corresponding ligand SDF-1alpha level of HDPC supenatants stimulated by lipopolysaccharide (LPS) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), and to explore the role of SDF-1alpha on the proliferation and the migration of HDPC. METHODS: The expression of CXCR4 in HDPC was detected by immunocytochemistry technique and indirect immunofluorescence technique. The culture supernatants of HDPC were collected after HDPC had been simulated by LPS and TNF-alpha of different concentrations for 48h and then the SDF-1alpha level was assayed by quantitative sandwich ELISA. Meanwhile, the effects of recombinant human SDF-1alpha (rhSDF-1alpha) on the proliferation and the migration of HDPC at different concentrations were observed by MTT and Boyden Chamber Assay. RESULTS: CXCR4 was expressed in cytomembrane of HDPC and SDF-1alpha was secreted into their normal cell supernatants with a concentration of (4513.55 +/- 962.92) ng/L. The secretion of SDF-1alpha was both significantly decreased by stimulation with LPS and TNF-alpha (P < 0.05). In addition, rhSDF-1alpha stimulated the HDPC proliferation at the concentrations of 50, 100, 200 microg/L (P < 0.01) and increased the chemotactic migration of HDPC significantly after 9h's incubation with the concentrations of 50, 100 microg/L (P < 0.05). CONCLUSIONS: SDF-1alpha accelerated the proliferation and the migration of HDPC which expressed CXCR4. SDF-1-CXCR4 axis may play a role in repair of pulp injury.     

CXC受体4阳性表达骨髓间充质干细胞的分选及其骨向分化的能力

目的研究磁珠分选法分选表面CXC受体4（CXCR4）阳性表达的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分选效率,以及分选后BMSC的增殖、迁移和成骨能力是否受到影响。 方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSC,通过生长曲线、成骨成脂诱导分化和流式检测BMSC表面标记蛋白表达,鉴定大鼠BMSC。流式检测细胞表面CXCR4的阳性率,通过生长曲线及克隆形成实验检测细胞的增殖活性及克隆形成能力,Transwell体外趋化实验检测细胞迁移能力,通过检测成骨诱导早期细胞ALP活性和成骨相关基因的表达,分析细胞成骨能力,数据采用单因素方差分析处理。 结果通过全骨髓贴壁法获得具有自我更新和多向分化能力的大鼠BMSC。磁珠分选阳性细胞表面CXCR4表达[（55.13 ± 0.67）%]较未分选组[（6.49 ± 0.59）%]显著增加（LSD-t = 63.66,P<0.001）。分选阳性细胞的克隆形成能力[（16.22 ± 1.68）%]以及培养后期细胞增殖活性（A_{450（5 d）}= 1.40 ± 0.04;A_{450（7 d）}= 1.60 ± 0.01）较未分选细胞[CFU =（17.00 ± 1.76）%;A_{450（5 d）}= 1.49 ± 0.07;A_{450（7 d）}= 1.60 ± 0.12]均无明显变化;而培养早期（第1、3天）分选阳性细胞的增殖活性[A_{450（1 d）}= 0.50 ± 0.01;A_{450（3 d）}= 0.81 ± 0.05]较未分选细胞[A_{450（1 d）}= 0.57 ± 0.01;A_{450（3 d）}= 0.96 ± 0.06]稍低[LSD-t_{1 d} = 5.208,P_{1 d} = 0.002;LSD-t_{3 d} = 3.563,P_{3 d} =0.012]。分选阳性细胞的基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）定向迁移能力（71.33 ± 5.69）较未分选细胞（23.33 ± 1.53）显著增强（LSD-t = 17.211,P<0.001）。在成骨诱导早期,分选阳性细胞的Runx2 mRNA（0.93 ± 0.12）较未分选组（0.51 ± 0.14）表达上调（LSD-t = 4.703,P = 0.003）,而ALP活性及ALP mRNA、OCN mRNA的表达均无明显变化（P>0.05）。 结论磁珠分选法可有效分选CXCR4⁺ BMSC,显著提高BMSC向SDF-1α的迁移效率,对细胞的增殖活性影响不大。     

基质细胞衍生因子-1/壳聚糖/β-甘油磷酸钠复合生物膜体外生物学特性的实验研究

目的 利用温敏凝胶制备基质细胞衍生因子-1(stromall cell derived factor-1, SDF-1)/壳聚糖(chitosan, CS)/β-甘油磷酸钠(β-sodium glycerphosphate, β-GP)复合生物膜并观察其体外生物学特性。方法 制备CS/β-GP溶液并添加SDF-1混匀,观察其37℃时凝胶时间的变化。将凝胶铺膜、干燥形成SDF-1/CS/β-GP复合生物膜,扫描电镜观察其形貌特征。将复合生物膜置于含细胞培养液的六孔板,静置6、12、24、36、48、60 h后提取上清液(n=3),测定溶液SDF-1浓度变化。将Transwell小室上室中加入骨髓间充质干细胞(BMSCs),下室置入复合生物膜,分为4组(n=3):M0组即对照组(CS/β-GP膜);M1、M2、M3组均为SDF-1/CS/β-GP膜组,分别含100、200、400 ng/mL SDF-1。分别于6、12、24 h对膜下细胞Giemsa染色观察和MTT法测定光密度(OD)值计算细胞增殖率。采用SPSS 19.0进行多因素方差分析。结果 CS/β-GP溶液加入一定量的SDF-1...     

骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合及细胞因子在愈合过程表达研究

目的    探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）促进皮肤创伤愈合作用及细胞因子在愈合过程中的表达变化。方法    本研究于2013年7月至2014年10月在沈阳万类生物技术实验室完成。体外分离、培养大鼠BMSCs,镜下观察细胞生长形态,取第3代BMSCs进行实验。流式细胞仪检测细胞表面标记物鉴定BMSCs。选择健康雄性SD大鼠48只,随机分成2组。于大鼠尾静脉注射PKH-26标记的BMSCs,1周后进行皮肤创伤模型制备,实验组于大鼠背部正中线划长3 cm的纵行切口,对照组不做创伤处理。荧光染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织BMSCs数量、分布情况,HE染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织病理变化情况。ELISA检测大鼠尾静脉血中不同时间点基质细胞衍生因子（SDF-1）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）的含量变化。结果    镜下观察培养第三代的BMSCs细胞形态为均一梭形,贴壁生长。BMSCs移植能够加速创面愈合,ELISA结果显示,BMSCs移植后血清中SDF-1α、TNF-α、IL-1β、bFGF和PDGF的含量随着创伤愈合进程呈先上升后下降的趋势。结论    BMSCs能促进大鼠皮肤创伤愈合。     

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目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)促进皮肤创伤愈合作用及细胞因子在愈合过程中的表达变化。方法本研究于2013年7月至2014年10月在沈阳万类生物技术实验室完成。体外分离、培养大鼠BMSCs,镜下观察细胞生长形态,取第3代BMSCs进行实验。流式细胞仪检测细胞表面标记物鉴定BMSCs。选择健康雄性SD大鼠48只,随机分成2组。于大鼠尾静脉注射PKH-26标记的BMSCs,1周后进行皮肤创伤模型制备,实验组于大鼠背部正中线划长3 cm的纵行切口,对照组不做创伤处理。荧光染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织BMSCs数量、分布情况,HE染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织病理变化情况。ELISA检测大鼠尾静脉血中不同时间点基质细胞衍生因子(SDF-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)的含量变化。结果镜下观察培养第三代的BMSCs细胞形态为均一梭形,贴壁生长。BMSCs移植能够加速创面愈合,ELISA结果显示,BMSCs移植后血清中SDF-1α、TNF-α、IL-1β、b FGF和PDGF的含量随着创伤愈合进程呈先上升后下降的趋势。结论BMSCs能促进大鼠皮肤创伤愈合。