miR-340与远端胃癌淋巴结转移的相关性及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响北大核心

目的:分析miR-340与远端胃癌患者淋巴结转移的相关性及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测远端胃癌组织及胃癌细胞系中miR-340的水平,分析miR-340与胃癌患者临床病理特征的相关性,应用受试者工作特征(ROC)曲线及Logistic回归分析探讨miR-340诊断淋巴结转移的性能;通过转染miR-340模拟物(mimic)上调胃癌细胞HGC-27和MGC-803中miR-340的表达,划痕实验和Transwell实验检测miR-340对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。结果:miR-340在远端胃癌组织中低表达,且与淋巴结转移、浸润深度、分化程度及TNM分期相关(P<0.05)。miR-340诊断胃癌淋巴结转移的曲线下面积(AUC)为0.737,敏感性为76.32%,特异性为79.41%。低水平miR-340是胃癌淋巴结转移的独立危险因素。与正常胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞中miR-340的表达水平下调。上调miR-340的表达能够抑制胃癌细胞的迁移、侵袭。结论:miR-340在胃癌组织和细胞中表达下调,能够调控胃癌细胞的迁移、侵袭,与淋巴结转移密切相关。     

miR-205对胃癌细胞侵袭迁移的调控作用及其潜在机制

目的 探讨miR-205对胃癌HGC27细胞侵袭、迁移的作用及其机制。方法 实时荧光定量PCR法测定4种不同胃癌细胞（AGS、MKN74、HGC27、SGC7901）中miR-205的表达情况。体外培养的HGC27细胞通过转染miR-205 mimic上调细胞中miR-205的表达,划痕实验和Transwell实验观察其侵袭和迁移能力;Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）进程及相关信号通路的活性。结果 miR-205在4种胃癌细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-205后,HGC27细胞的迁移率由（54.7±4.1）%降低至（34.1±4.5）% （P=0.005）;细胞的侵袭率由（52.8±6.3）%降低至（32.2±4.9）%（P=0.001）。此外,过表达miR-205之后,胃癌细胞中上皮细胞标志物E-cadherin、β-catenin蛋白表达显著上升（P=0.002, P=0.003）,而间质细胞标志物N-cadherin、vimentin的蛋白表达显著下降（P=0.005, P=0.004）,Notch和snail的蛋白表达水平也显著降低（P=0.002, P=0.003）。结论 miR-205在胃癌细胞中低表达,且与胃癌细胞的侵袭和迁移密切相关;其分子机制可能与抑制EMT及Notch/snail信号通路有关。     

LINC00659在胃癌组织中的表达及其对人胃癌细胞侵袭、迁移和自噬的影响

目的:在胃癌组织中检测LINC00659的表达水平,并探讨LINC00659对人胃癌AGS、HGC-27细胞侵袭、迁移和自噬的影响。方法:收集宁夏回族自治区人民医院自2020年01月至11月的17例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,qRT-PCR法检测人胃癌组织与癌旁组织中LINC00659的表达,Western blot法和免疫组化检测人胃癌与癌旁组织中自噬相关蛋白LC3、p62的表达;在AGS和HGC-27细胞株中分别构建敲减和过表达LINC00659胃癌稳转株细胞,分为Vector组、sh-LINC00659组、pEX-3组和LINC00659组。慢病毒转染48 h后通过倒置荧光显微镜和qRT-PCR检测转染效率;Transwell、细胞划痕实验法检测各组细胞的侵袭和迁移能力;Western blot、免疫荧光检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3、p62的相对表达水平。结果:LINC00659及自噬相关蛋白LC3在胃癌组织中的表达均显著高于癌旁组织,而自噬相关蛋白p62在胃癌组织中的表达要低于癌旁组织（均P＜0.05）。AGS、HGC-27细胞经慢病毒转染后,与空载组相比,敲减组中LINC00659相对表达水平明显降低,过表达组LINC00659相对表达水平明显升高（均P<0.01）;Transwell、细胞划痕实验结果显示,与对照组相比,AGS敲减组细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,而HGC-27过表达组细胞的侵袭和迁移能力显著增强（均P＜0.05）;Western blot、免疫荧光结果显示,AGS敲减组细胞中自噬相关蛋白LC3的表达有所下调,而p62的表达则明显升高,且在HGC-27过表达组中自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平与敲减组完全相反（均P<0.05）。结论:LINC00659在胃癌组织中高表达,且能够促进人胃癌细胞的侵袭、迁移和自噬。     

miR-133在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞恶性行为的影响

目的 探讨microRNA-133（miR-133）在胃癌组织及细胞系中的表达情况,并探讨其对胃癌细胞凋亡和侵袭的影响。方法 采用实时定量PCR（qPCR）检测64例胃癌组织及对应癌旁组织中的miR-133水平,分析miR-133表达与临床病理参数（性别、年龄、肿瘤位置、临床分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移）的关系,并检测其在胃癌细胞株AGS、SGC-7901、MKN-1、MKN-45、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1细胞的表达情况,同时选取miR-133水平最低的胃癌细胞并转染过表达miR-133的真核重组质粒pCDNA3.1+miR-133,转染后分别采用流式细胞仪PI/Annexin V双染法及Transwell法检测miR-133对细胞凋亡和侵袭能力的影响。结果 胃癌组织的miR-133相对表达量为0.347±0.024,低于癌旁组织（P＜0.05）,且其表达与临床分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关均有关（P＜0.05）;与GES-1细胞相比（其miR-133表达水平设为1.00）,胃癌细胞的miR-133水平均较低（P＜0.05）,且MKN-45的表达水平最低;与对照组和空转染组相比,过表达组转染48、96 h后的细胞凋亡水平均升高,且穿膜细胞数均降低（P＜0.05）。结论miR-133在胃癌组织和细胞中均为低表达,上调miR-133水平可抑制胃癌细胞的侵袭并诱导凋亡。     

WBP5在胃癌组织中的表达与临床病理特征的相关性及其对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的:探讨WBP5在胃癌组织中的表达与临床病理特征的相关性及其对胃癌细胞迁移、侵袭等的影响。方法:通过免疫组化检测WBP5在胃癌癌组织及癌旁组织中的表达,分析WBP5与胃癌临床病理特征的关系。通过细胞转染技术,建立WBP5稳定高表达和低表达的细胞,分析WBP5对癌细胞划痕愈合、迁移及侵袭能力的影响,及其对EMT相关指标的影响。结果:WBP5在癌组织中呈低表达,在癌旁组织中高表达,WBP5的表达和胃癌患者的T分期及TNM分期显著相关。上调WBP5后癌细胞划痕愈合比例显著降低,迁移、侵袭能力显著降低;下调WBP5后癌细胞划痕愈合比例显著上升,迁移、侵袭能力显著升高。上调WBP5后E-cadherin表达上调,N-cadherin及Vimentin表达下调;下调WBP5后E-cadherin表达下调,N-cadherin及Vimentin表达上调。结论:WBP5表达与患者的临床分期显著相关,WBP5表达与胃癌细胞的迁移、侵袭能力有重要关系,其机制可能是通过影响EMT过程实现的,具体机制需要进一步研究。     

miR-302c在胃癌中表达及对胃癌细胞侵袭和迁移影响的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-302c对人胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。［方法］ 实时荧光定量PCR法检测miR-302c在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达情况。在SGC7901和AGS细胞中分别转染miR-302c mimic和inhibitor后,Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)的变化情况。［结果］与永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-302c在胃癌细胞系SGC7901、MKN28、N87、MKN45和AGS中表达降低。转染 mimic和inhibitor后,miR-302c在SGC7901和AGS中表达分别明显上调和下调(P＜0.001)。Transwell实验发现,上调miR-302c后,SGC7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低,而下调miR-302c后,AGS细胞的侵袭和迁移能力明显增强。进一步研究发现,miR-302c可抑制CREB1的表达。功能挽救实验证明CREB1可部分恢复miR-302c上调对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用。［结论］ miR-302c抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能是通过直接靶向CREB1。     

缺氧对胃癌细胞 BMPR -1A 表达及其侵袭和迁移能力的影响

目的：检测胃癌细胞中BMPR-1A在常氧和缺氧条件下的表达;探讨两种不同条件下BMPR-1A的不同表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响.方法：常氧条件下（氧气浓度20%）常规培养胃癌细胞SGC7901和MKN28;缺氧条件下（氧气浓度1%）用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901和MKN28 24小时.分别用蛋白质免疫印迹（Western blot）和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）的方法在蛋白水平和mRNA水平测定BMPR-1A的表达,以明确BMPR-1A在常氧与缺氧两种不同条件下的差异性表达;同时以Transwell实验检测在常氧和缺氧条件下由于BMPR-1A的差异性表达对胃癌细胞SGC7901和MKN28侵袭和迁移的影响.结果：缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,无论是在蛋白水平还是mRNA水平,BMPR-1A表达明显下降;Transwell实验结果也显示胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭和迁移能力显著增强.结论：缺氧有增加胃癌细胞侵袭和迁移的能力,该作用机制可能与缺氧导致BMPR-1A的表达下降有关.     

miR-4465调控EZH2的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨miR-4465通过调控EZH2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测胃癌组织和细胞系中miR-4465的表达水平;在MKN45细胞中过表达miR-4465或沉默EZH2,采用CCK-8和Transwell检测MKN45细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;Western blotting检测EZH2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-4465与EZH2的相互作用。结果:与癌旁组织相比,miR-4465在胃癌组织中的表达降低,在胃癌细胞系(MCC-803、SGC7901、MKN45)中的表达水平显著低于人永生化胃细胞RGM-1,且在MKN45细胞系中的表达低于其他细胞。过表达miR-4465明显抑制MKN45细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT);双荧光素酶报告基因结果证实,miR-4465直接靶向作用于EZH2的3’-UTR;进一步实验证明,同时沉默miR-4465和EZH2能够恢复沉默EZH2对MKN45细胞增殖...     

ZNF436在胃癌中的表达及调控WNT/β-catenin对胃癌细胞迁移及侵袭的影响

目的 探讨锌指蛋白ZNF436在人胃癌细胞系和组织中的相对表达,及ZNF436对胃癌细胞MKN-28迁移和侵袭的影响和机制。方法 以人胃癌细胞系,胃癌、配对癌旁组织和正常人胃组织为研究对象;实时定量PCR和免疫组织化学法分析ZNF436在胃癌细胞系,胃癌、配对癌旁组织和正常人胃组织中的相对表达;在线数据分析ZNF436的表达与预后关系;ZNF436-siRNA(实验组)、NC-siRNA(对照组)质粒转染人胃癌MKN028细胞,转染后48 h实时定量PCR验证ZNF436的敲降效率,Transwell实验分析敲降ZNF436后对实验组细胞迁移和侵袭影响;裸鼠转移瘤实验验证ZNF436体内对细胞转移的影响;免疫蛋白印迹实验验证ZNF436对WNT/β-catenin信号通路的影响。结果 与正常胃上皮细胞系相比,ZNF436在人胃癌细胞系中高表达(P＜0.001);同时与癌旁组织和正常人胃组织相比,ZNF436在胃癌组织中高表达(P＜0.001);在线数据发现ZNF436的表达与胃癌的预后有关(P=0.0028);ZNF436基因表达越高,患者预后越差(P＜0.001);与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.001);实验组中裸鼠转移瘤的瘤大小和体积明显低于实验组(P＜0.001);低表达ZNF436后,WNT/β-catenin信号通路及其下游细胞因子明显受到抑制。结论 ZNF436作为潜在癌基因在人胃癌组织中表达上调,通过促进WNT/β-catenin信号通路参与胃癌的进程。     

miR-543在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

目的:研究微小RNA-543（microRNA-543,miR-543）在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响。方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响。结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制。结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭。     

miR-9-5p靶向FGF9抑制胃癌细胞迁移侵袭的作用机制

目的:探讨miR-9-5p在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞株SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭影响的作用机制。方法:real-time PCR和Western blot检测癌旁组织、胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p和FGF9的表达；Transwell小室检测过表达miR-9-5p或敲除FGF9对SGC7901和AGS细胞迁移和侵袭能力的影响；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-9-5p和FGF9的靶向关系；将转染后的SGC7901细胞分为对照（NC）组和实验（miR-9-5p）组接种于裸鼠右侧腋窝皮下，观察记录裸鼠成瘤情况并绘制生长曲线。结果:与癌旁组织相比，胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p表达下调、FGF9表达上调（P＜0.05）；过表达miR-9-5p或敲除FGF9能抑制SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验表明miR-9-5p能调控FGF9表达；miR-9-5p组细胞成瘤速度较NC组慢（P＜0.05），肿瘤体积及重量小（P＜0.05）。结论:miR-9-5p在胃癌组织中表达下调，过表达miR-9-5p可抑制FGF9表达，从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，减缓肿瘤生长。     

LINC00511靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及机制研究

目的:探讨LINC00511对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将pcDNA、pcDNA-LINC00511、si-NC、si-LINC00511、miR-NC、miR-497-5p分别转染至MGC-803细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00511组、si-NC组、si-LINC00511组、miR-NC组、miR-497-5p组;将si-LINC00511质粒分别与anti-miR-NC、anti-miR-497-5p共转染至MGC-803细胞中,分别记为si-LINC00511+anti-miR-NC组、si-LINC00511+anti-miR-497-5p组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-497-5p和LINC00511表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测细胞周期素D1（cyclin D1,CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00511和miR-497-5p的靶向关系。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45、AGS中miR-497-5p表达水平显著降低,LINC00511表达水平显著升高。LINC00511靶向调控miR-497-5p的表达。抑制LINC00511表达和miR-497-5p过表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,降低CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平,提高p21蛋白表达水平。干扰miR-497-5p表达逆转了抑制LINC00511表达对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制LINC00511表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-497-5p表达有关,将为胃癌的治疗提供新思路和新靶点。     

miR-203抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭及其分子机制探讨

目的:探究miR-203对食管鳞癌细胞(TR146、EC109)迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:检测miR-203在食管鳞癌细胞系中的表达水平,并通过转染miR-203激动剂agomir使TR146、EC109细胞稳定高表达miR-203,miR-203 agomir阴性对照组(NC)和无处理组(Blank)作为对照。通过划痕实验、Transwell实验检测miR-203对TR146、EC109细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学分析miR-203潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR（qPCR）实验、Western blot实验验证miR-203靶基因。通过拯救实验探究miR-203是否通过抑制靶基因发挥作用。结果:与正常食管上皮细胞相比,miR-203在食管鳞癌细胞系中表达下调。在TR146、EC109细胞内将miR-203表达水平上调数倍,划痕实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞迁移能力,Transwell实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞侵袭能力。生物信息学、qPCR实验和Western blot实验表明LASP1(LIM and SH3 domain protein 1)是miR-203潜在的靶基因。拯救实验表明miR-203通过靶向抑制LASP1发挥抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭的作用。结论:miR-203能够抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭,并且该抑制作用可能通过miR-203靶向抑制LASP1介导,为食管鳞癌临床诊断和靶向治疗提供了理论依据。     

miR-21通过靶向SOX2增强胃癌细胞的迁移能力

目的:探讨miR-21在胃癌细胞系中对SOX2的调控作用及其对胃癌细胞迁移的影响。方法:在胃癌细胞系AZ-521、AGS中通过转染miR-21 mimic或者miR-21 antagomir构建miR-21过表达和低表达模型,RT-qPCR检测转染效果,并通过蛋白免疫印迹法检测SOX2在转染细胞中表达的变化。构建miR-21双荧光素酶报告基因,在工具细胞HEK293T中检验miR-21是否通过直接结合SOX2的3′-UTR区域来对其实现调控。应用Transwell迁移实验检测miR-21及SOX2对胃癌细胞迁移能力的影响。结果:miR-21直接结合于SOX2的3′-UTR区域来抑制SOX2在胃癌细胞系中的表达。迁移实验发现上调miR-21或者下调SOX2都能促进胃癌细胞的迁移。结论:miR-21可促进胃癌细胞的迁移能力,其机制可能通过抑制SOX2的表达而实现。     

miR-338-3p靶向PTP1B抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-338-3p和PTP1B对胃癌细胞迁移和侵袭的影响.方法:Western Blot法测定PTP1B在胃癌标本及癌旁组织中的表达.通过qRT-PCR检测miR-338-3p的表达.用PTP1B质粒和siRNA、miR-338-3p类似物转染SGC7901细胞,用Transwell法测定miR-338-3...     

miR-489抑制结直肠癌细胞的侵袭转移

目的:探究miR-489在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达情况及其临床意义,并进一步探究miR-489对CRC细胞的侵袭迁移的作用.方法:应用Real-time PCR检测miR-489在CRC组织和细胞系中的表达情况;分析miR-489与CRC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-489对CRC细胞的侵袭与迁移能力的影响;Western blot探究miR-489对CRC细胞上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的作用.结果:Real-time PCR结果显示miR-489在CRC组织和细胞系中均为显著性低表达(P＜0.05);统计学分析显示miR-489的表达量与CRC的静脉浸润、浸润深度以及淋巴结转移呈显著相关(P＜0.05);Transwell实验结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的侵袭与迁移;Western blot结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的EMT.结论:miR-489在CRC中为低表达,其能够通过抑制CRC细胞的侵袭、迁移与EMT发挥其抗CRC作用.