葛花总黄酮对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜Müller细胞的保护作用

目的　探讨葛花总黄酮（total flavonoids of pueraria，TFP）对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞的保护作用。方法　取SPF级雄性SD大鼠60只，采用单次腹腔注射链脲佐菌素（55 mg·kg^-1）制作大鼠糖尿病模型。将造模成功的糖尿病大鼠随机分成糖尿病组、TFP组及TFP+Brusatol组（Brusatol为核因子NF-E2相关因子信号通路抑制剂），每组15只。另取15只正常大鼠作为对照组。造模12周后，检测各组大鼠血糖浓度、体质量、视网膜谷氨酸含量、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）含量；采用免疫组织化学法检测视网膜神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，免疫荧光染色检测大鼠视网膜Nrf2表达，Western blot检测大鼠视网膜Nrf2、血红素氧合酶-1（HO-1）及谷氨酰胺合成酶（GS）蛋白表达。结果　造模12周后， 糖尿病组大鼠血糖浓度高于对照组，且均大于16.7 mmol·L^-1；TFP组及TFP+Brusatol组血糖浓度均低于糖尿病组（均为P<0.05）；糖尿病组、TFP组及TFP+Brusatol组大鼠体质量均低于对照组（均为P<0.05）。糖尿病组和TFP+Brusatol组大鼠视网膜谷氨酸含量高于对照组（均为P<0.05）；TFP组谷氨酸含量低于糖尿病组（P<0.05）。糖尿病组和TFP+Brusatol组MDA含量均高于对照组，SOD活性均低于对照组（均为P<0.05）。TFP组MDA含量低于糖尿病组，SOD活性高于糖尿病组（P<0.05）。糖尿病组和TFP+Brusatol组大鼠视网膜GFAP蛋白表达阳性率均高于对照组（均为P<0.05）；TFP组GFAP蛋白表达阳性率低于糖尿病组（P<0.05）。将对照组Nrf2蛋白免疫荧光强度设定为100.00%，糖尿病组Nrf2蛋白免疫荧光强度高于对照组（P<0.05）。TFP组Nrf2蛋白免疫荧光强度高于糖尿病组（P<0.05），而TFP+Brusatol组与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。糖尿病组大鼠视网膜Nrf2蛋白表达高于对照组，糖尿病组和TFP+Brusatol组大鼠视网膜HO-1和GS蛋白表达均低于对照组（均为P<0.05）。TFP组大鼠视网膜Nrf2、HO-1及GS蛋白表达均高于糖尿病组（均为P<0.05），而TFP+Brusatol组与对照组大鼠视网膜Nrf2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论　TFP可通过降低血糖浓度，增强大鼠视网膜的抗氧化能力，进而保护糖尿病状态下受损的Müller细胞，其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用

目的　探讨桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法　选取12周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组10只、糖尿病组10只、IOP组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1）10只和抑制剂组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1+锌原卟啉20 mg·kg^-1）10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用一次性腹腔注射10 g·L^-1链脲佐菌素（60 mg·kg^-1）制作糖尿病大鼠模型,桦褐孔菌多糖采用灌胃法给药;抑制剂组在桦褐孔菌多糖灌胃前24 h将锌原卟啉经腹腔注射给大鼠。正常对照组和糖尿病组灌胃相同体积的生理盐水,并于12周后禁食不禁水12 h后进行实验。将分离到的新鲜视网膜,石蜡包埋,切片,用于HE染色和免疫组织化学染色。检测视网膜样品组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）含量;采用HE染色观察视网膜形态并检测视网膜神经节细胞密度;免疫组织化学染色观察细胞HO-1阳性染色情况;采用Western blot法检测视网膜HO-1、Nrf2和COX-2蛋白的表达。结果　造模后12周,糖尿病组、IOP组、抑制剂组大鼠体质量均低于正常对照组,血糖浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。造模后,糖尿病组大鼠视网膜组织中SOD、GSH的含量均明显低于正常对照组(均为P<0.01);MDA含量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。IOP组视网膜组织中SOD、GSH含量高于糖尿病组及抑制剂组,MDA含量显著低于糖尿病组及抑制剂组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组、糖尿病组、抑制剂组和IOP组视网膜神经节细胞密度分别为（2300±100）个·mm^-2、（1400±100）个·mm^-2 、（1505±95）个·mm^-2、（2250±95）个·mm^-2。Western blot结果显示:糖尿病组HO-1、Nrf2及COX-2蛋白的表达均高于正常对照组（均为P<0.01）。IOP组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达高于糖尿病组,COX-2蛋白的表达低于糖尿病组（均为P<0.01）;抑制剂组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达低于IOP组,COX-2蛋白的表达高于IOP组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。结论　桦褐孔菌多糖能够通过激活Nrf2通路降低糖尿病大鼠视网膜氧化应激及炎症反应。     

热休克蛋白72（HSP72）对大鼠青光眼模型视网膜神经节细胞和视神经的保护作用

目的　探讨热休克蛋白72（heat shock protein 72,HSP72）对大鼠青光眼模型视网膜神经节细胞（retinal ganglial cells,RGCs）和视神经的保护作用。方法　选取Wistar大鼠46只，采用随机数字表法将所有大鼠分为正常对照组（6只）和实验组（40只），实验组40只大鼠中8只不作处理（实验对照组），在制作青光眼模型后2 d，给予16只大鼠热休克反应处理（热休克反应组），16只大鼠硫酸锌腹腔注射（硫酸锌注射组）。观察及比较治疗前后各组大鼠眼压、RGCs中HSP72抗体含量、RGCs平均密度。结果　激光后3 d、7 d、14 d、28 d，各组大鼠右眼眼压均较激光前有所上升，且各组间差异均无统计学意义（均为P>0.05）。正常对照组大鼠不同时间点HSP72抗体在RGCs中无表达，激光后3 d实验组各组大鼠RGCs中HSP72抗体含量缓慢上升，7 d、14 d达高峰，此后逐渐下降至接近正常水平。激光后，实验组各组大鼠RGCs中HSP72抗体含量显著高于正常对照组，且热休克反应组RGCs中HSP72抗体含量均高于实验对照组，低于硫酸锌注射组，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。激光后3 d、7 d、14 d、28 d实验组各组大鼠RGCs平均密度均明显低于正常对照组，且热休克反应组RGCs平均密度显著高于实验对照组和硫酸锌注射组，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　热休克蛋白反应可在青光眼模型大鼠RGCs中诱导HSP72的生成，且对青光眼性RGCs和视神经具有保护作用。     

MEK/ERK信号转导通路在大鼠糖尿病白内障中的作用

目的　分析丝裂原细胞外信号调节激酶（mitogen extracellular signal-regulated kinase，MEK）/细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）信号转导通路在大鼠糖尿病白内障中的发病机制，为相关药物研发及临床治疗提供参考。方法　60只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和PD98059处理组，后两组大鼠腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）诱导糖尿病模型，PD98059处理组于造模前1 d前房内注射2.5 μg（5 μL）的PD98059，正常对照组与模型组大鼠前房内仅注射PBS。注射STZ后每日观察大鼠晶状体透明度，并于注射STZ后8周时取大鼠尾血检测血糖、总胆固醇，Western blot检测晶状体内MEK/ERK信号转导通路相关蛋白Ras、Raf、MEK和ERK1/2的表达。结果　模型组大鼠注射STZ后4周晶状体开始出现周边空泡增多、絮状混浊，8周后整个晶状体明显混浊，而PD98059处理组大鼠晶状体的混浊程度较模型组有所减轻。与正常对照组相比，模型组大鼠的血糖［（28.70±3.33）mmol·L^-1］、总胆固醇［（2.53±0.74）mmol·L^-1］及Ras（0.67±0.12）、Raf（0.50±0.13）、MEK（0.48±0.10）和ERK1/2（0.59±0.15）蛋白相对表达量均明显升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）；PD98059处理组大鼠的血糖［（20.60±4.18）mmol·L^-1］、总胆固醇［（2.30±0.64）mmol·L^-1］及Ras（0.49±0.11）、Raf（0.44±0.09）、MEK（0.35±0.08）和ERK1/2（0.48±0.14）蛋白相对表达量均较模型组显著降低，但仍高于正常对照组，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　MEK/ERK信号转导通路的激活参与了糖尿病大鼠白内障的发病过程。     

色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子（pigment epithelial-derived factor,PEDF）基因修饰的人脐带间充质干细胞（pigment epithelial-derived factor gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells,PEDF-MSCs）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）模型中PEDF、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用。方法　绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的慢病毒（lentivirus,LV）为载体,将PEDF基因以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况。选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组（N组）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）治疗组（PBS组）、hUCMSCs治疗组（M组）及 PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组（P组）;N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予 PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗。5 d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RT-PCR检测大鼠视网膜 PEDF和VEGF的mRNA表达情况。结果　荧光显微镜下观察到转染率高达75.8％。RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量（4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,转染后 PEDF-MSCs上清液中PEDF蛋白表达量［（83.09±7.58）μg·L^-1］明显高于hUCMSCs［（12.30±1.24）μg·L^-1］,差异有统计学意义（P<0.05）。尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5 d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组高于M组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗5 d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组厚于M组。RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA 表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF 表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用。     

硫氧还蛋白（Trx）对糖尿病视网膜病变模型鼠血清补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9（CTRP9）表达的影响

目的　探讨硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）对糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）模型鼠血清补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9（complement Clq tumor necrosis factor-related protein 9，CTRP9）表达的影响。方法　24只SPF级雄性SD大鼠分为正常对照组（NC组）12只和高脂饮食组12只，NC组以标准大鼠饲料喂养，高脂饮食组以高脂高糖饲料喂养后以一次性腹腔注射链脲佐菌素（60 mg·kg^-1）制造DR模型，造模成功的高脂饮食组大鼠随机分为DR组（6只）和治疗组（6只）。治疗组大鼠每天腹腔注射Trx（50 mg·kg^-1）持续1周，NC组和DR组大鼠每天给予腹腔注射同等体积的PBS。酶联免疫吸附实验检测血清CTRP9水平，免疫组织化学检测CTRP9蛋白表达水平，同时进行视网膜细胞凋亡指数与活性氧（reactive oxygen species，ROS）荧光强度分析。结果　所有高脂饮食组大鼠都造模成功，高脂饮食组大鼠血清中CTRP9含量和免疫组织化学检测CTRP9表达量均低于NC组，治疗组高于DR组（均为P<0.05）。高脂饮食组大鼠的视网膜荧光强度（67.29±1.94）显著高于NC组（5.39±1.29），治疗组（34.20±5.11）低于DR组（78.11±6.33），差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot结果显示，高脂饮食组大鼠的CTRP9相对表达量低于NC组，治疗组高于DR组；高脂饮食组大鼠的PI3K相对表达量高于NC组，治疗组低于DR组（均为 P<0.05）。结论　Trx可保护DR大鼠的视网膜细胞免受ROS的损伤，抑制细胞凋亡，促进CTRP9的表达，其机制可能与CTRP9改善PI3K信号通路有关。     

木犀草素对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠TLR4/Syk/NF-κB信号通路及视网膜的影响

目的　探讨木犀草素对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠Toll样受体4（TLR4）/脾脏酪氨酸激酶（Syk）/核因子-κB（NF-κB）信号通路及视网膜的影响。方法　40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素低剂量组（5 mg·kg^-1）、木犀草素高剂量组（10 mg·kg^-1）,每组10只,除对照组外,其余各组大鼠制备RIRI模型,造模成功后分别进行腹腔注射不同试剂处理,每天1次,持续 7 d。各组大鼠给药结束后24 h行光学相干断层扫描（OCT）检查,测量视盘周围视网膜厚度;取各组大鼠视网膜行HE染色观察视网膜组织病理形态、行TUNEL染色观察视网膜组织细胞凋亡情况;行酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组大鼠视网膜中超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）水平,并检测大鼠视网膜中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;利用Western blot检测各组大鼠视网膜TLR4/Syk/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果　与对照组相比,模型组大鼠视网膜出现水肿、空泡变性及凋亡等损伤,视网膜厚度［（156.31±18.76）μm］、视网膜神经节细胞数［（66.25±15.18）个·mm^-1］、SOD活性［（50.33±1.98）U·mg^-1］均显著降低（均为P<0.05）,视网膜细胞凋亡率［（21.36±2.04）%］、视网膜中MDA［（1.82±0.14）μmol·g^-1］、TNF-α［（98.42±11.25）g·L^-1］、IL-6［（87.34±7.62）g·L^-1］含量及TLR4、p-Syk/Syk、p-NF-κB/NF-κB蛋白相对表达水平均显著升高（均为P<0.05）。与模型组相比,木犀草素低剂量组、木犀草素高剂量组大鼠视网膜水肿等损伤程度逐渐减轻,视网膜厚度［（170.62±12.46）μm、（183.54±13.75）μm］、视网膜神经节细胞数［（86.74±16.21）个·mm^-1、（105.44±14.23）个·mm^-1］、SOD活性［（65.26±2.64）U·mg^-1、（73.48±3.13）U·mg^-1］均依次增加（均为P<0.05）,视网膜细胞凋亡率［（16.75±1.55）%、（9.65±1.23）%］、视网膜中MDA［（1.23±0.12）μmol·g^-1、（0.86±0.09）μmol·g^-1］、TNF-α［（61.48±8.37）g·L^-1、（36.83±8.49）g·L^-1］、IL-6［（55.47±6.12）g·L^-1、（38.71±3.85）g·L^-1］含量及TLR4、p-Syk/Syk、p-NF-κB/NF-κB蛋白相对表达水平均依次降低（均为P<0.05）。结论　木犀草素可抑制RIRI大鼠TLR4/Syk/NF-κB信号激活,减轻视网膜组织氧化应激及炎症损伤,进一步减轻视网膜损伤。     

葛根素对大鼠糖尿病视网膜病变的抑制作用

目的　探讨葛根素对大鼠糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的抑制作用。方法　取SPF级健康Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组20只、模型组20只和葛根素组20只,模型组和葛根素组大鼠均接受链脲佐菌素左下腹腔注射建立糖尿病模型,正常对照组大鼠注射同样体积的枸橼酸盐溶液。造模后1周,葛根素组大鼠每天给予100 mg·kg^-1葛根素单侧腹腔注射治疗,连续治疗6周。正常对照组和模型组大鼠每天给予等量生理盐水腹腔注射。观察并比较各组大鼠体质量、血糖及血-视网膜屏障的损伤情况。应用TUNEL法检测大鼠的视网膜组织神经节细胞凋亡情况;采用ELISA检测各组大鼠白细胞介素1（interleukin-1,IL-1)β、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛 （malonaldehyde,MDA）水平;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平;Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phospho-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、E2核因子相关因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf2）、细胞外调节p-ERK的总蛋白（t-ERK）及P53的表达情况。结果　模型组大鼠的体质量低于正常对照组,血糖高于正常对照组（P＜0.05）;而葛根素组大鼠体质量高于模型组,血糖低于模型组（P＜0.05）。模型组大鼠视网膜组织伊凡斯兰渗透量为（10.63±3.21）μg·g^-1,高于正常对照组［（2.87±1.09）μg·g^-1］,差异有统计学意义（P＜0.05）;而葛根素组伊凡斯兰渗透量为（5.56±2.71）μg·g^-1,低于模型组,但高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。模型组大鼠神经节细胞凋亡指数高于正常对照组,而葛根素组低于模型组,但高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。模型组大鼠视网膜组织中IL-1β、TNF-α及MDA水平高于正常对照组,SOD水平低于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。而葛根素组大鼠视网膜组织中IL-1β、TNF-α及MDA水平低于模型组,SOD水平高于模型组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。模型组大鼠Nrf2、p-ERK蛋白的表达水平高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。而葛根素组大鼠Nrf2、p-ERK的表达水平低于模型组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。各组大鼠t-ERK 的蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠的Bcl-2表达水平低于正常对照组,P53高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;葛根素组大鼠Bcl-2表达水平高于模型组,P53低于模型组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　葛根素可有效减缓2型糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的凋亡,改善2型DR的进程,其机制可能与抑制Nrf2/ERK通路的激活,减轻视网膜组织的炎性反应及氧化应激损伤有关。     

视网膜色素变性患者血清脂肪代谢的异常变化

目的　对比原发性视网膜色素变性（primary retinitis pigmentosa，PRP）、结晶样视网膜色素变性（bietti crystalline dystrophy，BCD）患者血清中游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）及心型脂肪酸结合蛋白（heart fatty acid binding proteins，HFABP）含量的变化，为探索其发病机理和防治提供参考。方法　采用回顾性研究方法，纳入临床诊断标准的首都医科大学附属北京同仁医院眼科中心门诊PRP患者80例，BCD患者50例，与正常对照组60例进行比较，按盲法由专业技术人员完成血清中FFA及HFABP浓度检查。分析PRP、BCD患者体内FFA和HFABP含量与正常对照组的差别。结果　PRP患者血清FFA、HFABP浓度分别为（0.547±0.214）mmol·L^-1、（3.594±0.791）mmol·L^-1；BCD患者血清FFA、HFABP浓度分别为（0.529±0.108）mmol·L^-1、（4.237±1.258）mmol·L^-1；正常对照组的FFA、HFABP浓度分别为（0.386±0.251）mmol·L^-1、（5.261±1.471）mmol·L^-1。与正常对照组比较，两种退行性视网膜疾病的FFA浓度显著升高（均为P<0.05），而HFABP浓度显著降低（均为P<0.05）。结论　PRP及BCD患者血清FFA及HFABP浓度存在异常变化，提示了其可能与退行性视网膜疾病的发生发展有关，对疾病的治疗具有一定的指导意义。     

miRNA-15b和成纤维细胞生长因子2(FGF2)在增生型糖尿病视网膜病变患者玻璃体及视网膜增生膜组织中的表达

目的　探讨增生型糖尿病视网膜病变（PDR）患者玻璃体、视网膜增生膜组织中miRNA-15b（miR-15b）和成纤维细胞生长因子2（FGF2）的表达情况,并进行相关性研究,初步探讨PDR发生原因。方法　选取2016年9月至2019年10月期间在重庆市开州区人民医院眼科住院的PDR患者80例（80眼）作为PDR组,收集其玻璃体及视网膜增生膜组织;选取同期因眼外伤在本院眼科行眼球摘除术的2型糖尿病患者21例（21眼）作为对照组,收集其玻璃体及视网膜组织;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测玻璃体及视网膜组织/视网膜增生膜组织中miR-15b水平,分别通过酶联免疫吸附法（ELISA）、Western blot法检测玻璃体、视网膜组织/视网膜增生膜组织中FGF2蛋白水平表达;通过Pearson相关性分析法分析对照组玻璃体及视网膜组织以及PDR组患者玻璃体及视网膜增生膜组织中miR-15b与FGF2水平相关性;通过二元Logistic回归分析影响糖尿病患者发生PDR的危险因素。结果　PDR组糖尿病病程显著长于对照组（P<0.001）。PDR组玻璃体及视网膜增生膜组织中miR-15b相对表达量分别为0.52±0.07和0.76±0.12,均显著低于对照组（1.03±0.19和1.14±0.19）,差异均有统计学意义（均为P<0.001）;PDR组玻璃体及视网膜增生膜组织中FGF2蛋白表达水平分别为（17.65±4.23）ng·L^-1和0.92±0.23,均显著高于对照组［（12.13±3.05）ng·L^-1和0.61±0.15,均为P<0.001）］。对照组玻璃体、视网膜组织中miR-15b与FGF2蛋白表达水平均无相关性（均为P>0.05）;PDR组玻璃体、视网膜增生膜组织中miR-15b与FGF2蛋白表达水平均呈显著负相关（r=-0.708、-0.705,均为P<0.05）;二元Logistic回归分析结果显示,糖尿病病程长及玻璃体、视网膜增生膜组织中miR-15b水平低、FGF2蛋白表达水平高是影响糖尿病患者发生PDR的危险因素（均为P<0.01）。结论　玻璃体及视网膜增生膜组织中miR-15b与FGF2蛋白表达水平与PDR的发生密切相关。     

SIRT1、PGC-1α在原发性开角型青光眼患者小梁网组织中的表达及意义

目的　检测原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma，POAG）患者小梁网组织中沉默信息调节因子2相关酶1（silent information regulator factor 2 related enzyme 1，SIRT1）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α，PGC-1α）表达水平，探讨其与POAG小梁网组织功能损伤的关系。方法　收集2017年1月至2018年4月在海南医学院第一附属医院手术切除确诊为POAG 40例（40眼）患者的小梁网组织为POAG组样本，另取30例眼球供体的小梁网组织为对照组样本，采用RT-PCR法检测2组小梁网组织中SIRT1、PGC-1α mRNA表达，免疫组织化学染色法检测SIRT1、PGC-1α蛋白表达，同时检测过氧化物酶（peroxidase dismutase，POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平。结果　POAG组小梁网组织中SIRT1、PGC-1α mRNA表达水平（0.11±0.03、0.32±0.10）均低于对照组（0.24±0.07、0.67±0.21）（均为P＜0.05）；POAG组小梁组织中SIRT1表达与PGC-1α表达呈正相关关系（r=0.759，P＜0.05）；POAG组小梁网组织中POD水平［（102.59±22.37）×10³ U·L^-1］高于对照组［（73.46±15.81）×10³U·L^-1］（P＜0.05），SOD水平［（347.62±50.73）U·L^-1］低于对照组［（412.57±61.25）U·L^-1］（P＜0.05）；POAG组小梁网组织中SIRT1、PGC-1α表达与POD水平均呈负相关关系（r=-0.636、-0.737，均为P＜0.05），与SOD水平均呈正相关关系（r=0.662、0.614，均为P＜0.05）。结论　POAG患者小梁网组织中SIRT1和PGC-1α表达水平降低，可能在线粒体功能失调和氧化应激对小梁网的损伤中发挥重要调控作用。     

青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激损伤的抑制作用

目的　探讨青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化应激损伤的抑制作用。方法　将ARPE-19细胞接种于96孔板，每孔7×10³个细胞，细胞贴壁后分别加入不同浓度青蒿素，筛选对细胞增殖有效的最佳药物浓度。将APRE-19细胞分成4组。对照组:不做特殊处理；过氧化氢组:加入100 μmol·L^-1过氧化氢作用细胞24 h；青蒿素组:加入青蒿素30 μmol·L^-1，作用细胞24 h；青蒿素预保护组:加入30 μmol·L^-1青蒿素预保护细胞24 h后加入100 μmol·L^-1 过氧化氢作用24 h。利用MTT法筛选青蒿素对ARPE-19细胞作用的最佳药物浓度；通过Hoechst33342染色及线粒体膜电位观测细胞凋亡情况；检测细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量和活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）阳性细胞数；Western blot法检测相关蛋白表达水平。结果　MTT法检测发现，30 μmol·L^-1的青蒿素对细胞增殖作用最强 （均为P<0.01）。青蒿素预保护组与过氧化氢组相比，细胞增殖率升高，凋亡细胞数显著减少，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。线粒体膜电位染色显示，青蒿素预保护组与过氧化氢组相比绿色染色减少，红色染色增多，说明青蒿素预保护组凋亡细胞数减少。与对照组相比，青蒿素组ARPE-19细胞中SOD含量显著增加（P<0.05）；与过氧化氢组相比，青蒿素预保护组细胞内SOD含量明显增高（P<0.05），说明青蒿素能增加细胞内抗氧化物质，减少细胞凋亡。与对照组相比，青蒿素组ROS阳性细胞减少（P<0.05）；与过氧化氢组相比，青蒿素预保护组ROS阳性细胞亦明显减少（P<0.05），说明青蒿素可减少过氧化氢诱导的活性氧物质积聚。通过Western blot检测发现，青蒿素能促进ARPE-19细胞内AKT的磷酸化，过氧化氢组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、 Keap1相对表达升高，Bcl-2、Nrf2、HO-1降低；青蒿素预保护组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、 Keap1相对表达降低，Bcl-2、Nrf2、HO-1升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　青蒿素通过调节Nrf2/keap1信号通路来减小过氧化氢诱导的ARPE-19细胞的氧化应激损伤。     

转化生长因子-β（TGF-β）空间动态分布的角膜基质创伤修复体外三维培养体系的构建

目的　研究构建模拟角膜基质创伤修复过程中转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）空间动态分布的体外三维培养系统。方法　从新鲜牛眼中分离角膜基质细胞，用含体积分数10％胎牛血清（fetal bovine serum,FBS)的DMEM/F12培养基进行培养，而后构建Pellet体外三维培养模型进行培养。将Pellet分为有透析袋组和无透析袋组，置入Transwell小室系统上下室中培养48 h后换液，上室为0.50 μg·L^-1TGF-β1+0.25 μg·L^-1TGF-β2+体积分数10％FBS，下室为体积分数10％FBS，分别于培养后72 h观察Pellet培养模型的形态变化并采用Real-time PCR法分别检测2组上下室Pellet中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ，Col Ⅰ）和Col Ⅲ mRNA相对表达量。结果　培养后72 h Pellet均呈团状生长。有透析袋组Transwell小室系统上、下室α-SMA mRNA表达量分别为1.595±0.025、1.148±0.009，FN mRNA表达量分别为1.090±0.011、0.844±0.015，Col Ⅰ mRNA表达量分别为1.445±0.035、1.165±0.008，Col Ⅲ mRNA表达量分别为1.726±0.031、1.314±0.020，Col Ⅲ/Col Ⅰ比值分别为1.126±0.019、0.957±0.013，上下室各项指标比较差异均有统计学意义（均为P=0.000）。无透析袋组Transwell小室系统上、下室α-SMA mRNA表达量分别为1.363±0.018、1.360±0.002，FN mRNA表达量分别为0.946±0.017、0.952±0.012，Col Ⅰ mRNA表达量分别为1.261±0.011、1.258±0.029，Col Ⅲ mRNA表达量分别为1.459±0.027、1.462±0.033，Col Ⅲ/Col Ⅰ比值分别为1.157±0.029、1.163±0.090，上下室各项指标比较，差异均无统计学意义（均为P>0.05）。无透析袋组上室细胞中α-SMA、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ mRNA的相对表达量与有透析袋组上室、有透析袋组下室比较，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。无透析袋组下室细胞中α-SMA、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ mRNA的相对表达量与有透析袋组上室、有透析袋组下室比较，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　Transwell小室系统与透析袋相结合可构建模拟TGF-β空间动态分布的体外三维培养系统。     

玻璃体积血对兔眼视网膜影响的研究

目的　观察兔眼玻璃体积血后不同时间视网膜电图（electroretinogram，ERG）及超微结构的变化，为玻璃体积血治疗及预后评估提供实验依据。方法　新西兰大白兔32只，右眼均为实验眼，自体全血0.2 mL玻璃体内注射构建玻璃体积血模型，左眼为空白对照眼。随机分为4组，分别于造模后3 d、7 d、14 d及30 d选取一组常规检查后记录ERG的变化，随后处死动物立即摘取眼球制备标本观察超微结构。结果　实验性玻璃体积血3 d后常规ERG波形消失，造模后7 d逐渐出现。强闪光源刺激下，造模后3 d实验眼ERG的b波振幅与a波振幅与对照眼相比均明显降低（均为P＜0.01）。a波振幅在造模后30 d明显恢复，与对照眼无明显差异（P＞0.05），较造模后14 d差异有统计学意义（P＜0.05）；b波振幅在造模后7 d时开始回升，与对照眼无明显差异（P＞0.05），较造模后3 d差异有统计学意义（P＜0.05），造模后14 d及30 d接近正常。扫描电镜显示实验眼造模后3 d无玻璃体后脱离（posterior vitreous detachment，PVD）发生，造模后7 d部分性PVD占1/8，完全性PVD占1/8，造模后14 d部分性PVD占2/8，完全性PVD占5/8，造模后30 d部分性PVD占1/8，完全性PVD占7/8；对照眼各阶段未见PVD发生。结论　玻璃体积血后约1周可轻度可逆地影响视网膜功能并加速导致PVD形成，为实验及临床判断玻璃体积血后视网膜功能变化和临床玻璃体手术治疗的时间窗的选择提供了参考。     

NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）对角膜移植大鼠角膜组织的影响

目的　探讨核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）对角膜移植大鼠角膜组织的影响。方法　取14只Wistar大鼠为供体鼠，提供双眼角膜；28只SD大鼠为受体鼠，均以左眼为术眼，右眼设为正常对照，在显微镜下进行同种异体角膜移植术。手术完成后将28只SD大鼠随机分为3组，对照组（10只）以生理盐水滴左眼，实验组（10只）以1 mg·mL^-1 PDTC滴左眼，均为每天3次，每次1滴，空白组（8只）不做任何处理。术后第1天起，每组分别在术后第5天、第15天、第25天在裂隙灯下观察角膜新生血管的情况并进行评分。对各组角膜植片进行病理学及免疫组织化学染色观察，分析各组大鼠NF-κB及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在角膜植片的表达情况。结果　对照组、实验组、空白组角膜移植排斥反应发生的时间分别为（10.80±1.40）d、（23.40±2.30）d、（11.20±2.06）d，实验组排斥反应发生的时间较对照组明显延长，差异有统计学意义（P<0.01）。对照组新生血管一般术后第3~5天出现，并很快进入植片周边，沿缝线处向角膜植片中央粗大生长。实验组新生血管一般术后第5~7天出现，生长速度较慢，血管稀疏。术后不同时间实验组新生血管数、新生血管面积及排斥反应指数均小于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。角膜移植术后，实验组大鼠角膜上皮基底细胞内出现较多空泡，角膜基质层内出现间质水肿；炎症细胞浸润，并见新生的毛细血管；缝线及切口周围见大量淋巴细胞浸润，部分植片中央发生散在的炎症细胞浸润、角膜上皮部分脱落。对照组角膜植片水肿及炎症细胞的浸润程度较实验组明显增加，且对照组角膜植片显著增厚，基质结构疏松、紊乱；实验组角膜植片相对基质板层结构排列有序，新生血管数在相同时间内明显减少。免疫组织化学染色显示，NF-κB阳性细胞数，实验组为每400倍视野（4.236±0.856）个，较对照组［（18.451±1.234）个］明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）；空白组大鼠角膜内鲜有阳性表达。VEGF阳性细胞数，实验组为每400倍视野（2.631±0.238）个，较对照组［（6.254±0.721）个］明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）；空白组大鼠角膜内鲜有阳性表达。结论　大鼠进行同种异体角膜移植术后，NF-κB抑制剂PDTC可在一定程度上减少角膜新生血管的生成，抑制角膜移植排斥反应的发生。     

不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的　探讨不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达的影响及其调节作用。方法　SD大鼠右眼制备成角膜碱烧伤模型，随机分为对照组、0.5 g·L^-1多西环素组和1.0 g·L^-1多西环素组，每组15只。3组分别于造模后每天给予20 μL眼液溶媒、0.5 g·L^-1多西环素、1.0 g·L^-1多西环素滴眼至观察期末。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天对角膜混浊程度进行评分，并行RT-PCR和ELISA检测角膜组织中TGF-β1、MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果　与对照组相比，碱烧伤后第7天、第14天，0.5 g·L^-1多西环素组［（2.80±0.45）分、（2.20±0.45）分］和1.0 g·L^-1多西环素组［（2.00±0.00）分、（0.60±0.55）分］角膜混浊程度评分降低，且1.0 g·L^-1多西环素组更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天、第14 天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组MMP-9 mRNA及蛋白表达均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　多西环素可下调碱烧伤大鼠角膜中TGF-β1和MMP-9的表达，促进角膜愈合，并呈一定程度的剂量依赖性。     

转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞增殖中NLRP3炎症小体的表达及意义

目的　探讨转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）刺激下Nod样受体蛋白3（nod-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体在视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）增殖中的表达变化及意义。方法　利用TGF-β刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型，随机分为空白对照组（Sham组）和TGF-β诱导RPE细胞增殖组（TGF-β组），TGF-β组再根据浓度（0.5 μg·L^-1、2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1、12.5 μg·L^-1）分组。利用MTT 微量酶比色法检测RPE细胞增殖情况；Western blot观察NLRP3蛋白的表达变化；利用标准ELISA试剂盒检测白细胞介素（interleukin，IL)-1β和 IL-18表达情况。结果　与Sham组比较，0.5 μg·L^-1 TGF-β组RPE细胞增殖不明显，差异无统计学意义（P>0.05），但NLRP3、IL-1β和 IL-18表达明显提高（均为P<0.01）；2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖明显，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均提高（均为P<0.05）；与0.5 μg·L^-1 TGF-β组相比，2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖显著增加，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　不同浓度TGF-β诱导RPE细胞增殖中NLRP3炎症小体表达变化不同，两者可能相互调控影响RPE细胞增殖，在增生性玻璃体视网膜疾病发生发展中具有重要的作用。     

前房注射卡波姆建立大鼠高眼压模型的观察

目的　前房注射卡波姆建立大鼠高眼压模型，观察卡波姆升眼压效果及对大鼠眼前节和视网膜的影响。方法　随机选取30只SD大鼠，注射前3 d早晚测量基线眼压。右眼定为实验眼，左眼定为对照眼，右眼放出房水后将30 μL的5 g·L^-1卡波姆混悬液注入前房，每日早10时、晚22时在大鼠清醒状态下测量眼压。每周进行双眼眼前节照相并对比。4周末处死26只大鼠（另4只持续观察眼压变化至注射后9周）并取双眼眼球行HE染色，观察实验眼与对照眼视网膜形态，对比视网膜厚度及房角形态。结果　注射前，实验眼白天和夜间眼压分别为（11.10±0.90）mmHg（1 kPa=7.5 mmHg）和（11.92±1.07）mmHg，对照眼分别为（11.22±1.07）mmHg和（11.76±1.08）mmHg；实验眼与对照眼相比，白天、夜间眼压差异均无统计学意义（均为 P＞0.05）；白天与夜间眼压相比，实验眼、对照眼差异均有统计学意义（均为P<0.05）。卡波姆在前房中呈现出弥散型和沉积型两种存在方式，弥散型和沉积型大鼠1周内眼压分别为（17.83±3.54）mmHg和（13.00±1.55）mmHg，两者相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。注射后第1天至第19天，实验眼与对照眼白天眼压相比差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）；注射后第1天至第27天，实验眼与对照眼夜间眼压相比差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。实验眼视网膜形态发生改变，注射后4周视网膜厚度为（254.70±21.80）μm，与对照眼的（346.73±24.63）μm相比，差异有统计学意义（P=0.00）。实验眼前房充满卡波姆及虹膜的混合成分，紧贴角膜内皮并延伸至房角，堵塞小梁网结构，正常虹膜形态消失；对照眼房角形态正常。结论　前房注射卡波姆建立大鼠高眼压模型，可维持高眼压4周以上，昼夜眼压差异较为明显，夜间眼压较白天更高，4周后视网膜出现高眼压损伤后的表现。     

单核细胞趋化蛋白-1在原发性急性闭角型青光眼患者房水中的表达及其与小梁切除术预后的关系

目的　观察原发性急性闭角型青光眼（primary acute angle-closure glaucoma，APACG）患者房水中单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）的浓度，并探讨它与小梁切除术预后的关系。方法　回顾性病例对照研究。纳入小梁切除术失败的APACG患者19例作为病例组，57例年龄、性别匹配的小梁切除术成功的APACG患者作为对照组。APACG患者小梁切除术术前收集房水，用酶联免疫吸附试验检测两组患者房水中MCP-1浓度。采用单因素以及多因素logistic回归分析小梁切除术失败的危险因素。结果　病例组患者房水中MCP-1的浓度为（5688.04±2099.99）ng·L^-1，对照组为（2077.57±568.44）ng·L^-1，病例组房水中MCP-1的浓度明显高于对照组，两组相比差异有统计学意义（P<0.001）。logistic回归分析显示，术前房水中MCP-1浓度（OR=1.005；95%CI=1.001~1.008）以及患者小梁切除术后浅前房发生（OR=31.430；95%CI=1.577~57.350）是小梁切除术失败的独立危险因素。结论　术后1 a随访时小梁切除手术失败的APACG患者房水中MCP-1的浓度明显高于小梁切除手术成功的患者。APACG患者房水中MCP-1浓度是小梁切除手术失败的独立危险因素。     

白内障超声乳化术后重度非增生型糖尿病视网膜病变患者视网膜功能变化:基于多焦视网膜电图的观察

目的　利用多焦视网膜电图(mf-ERG)探讨白内障超声乳化术后重度非增生型糖尿病视网膜病变患者视网膜功能的变化。方法　选取2015年6月至2016年6月在苏州大学附属第二医院眼科中心接受常规白内障超声乳化联合人工晶状体植入术的重度非增生型糖尿病视网膜病变患者36例36眼。糖尿病病程（10.3±2.9）a；术前视力0.10±0.06。所有患者术眼术前1周及术后6个月采用mf-ERG进行检查。检测项目包括术前和术后视网膜后极部各环和四个象限P₁波和N₁波潜伏期和振幅密度。结果　术后6个月，患者在0、1、2环的P₁波潜伏期均较术前延长（均为P<0.05）；3、4环P₁波潜伏期均较术前变化不大（均为P>0.05）；0、1环N₁波潜伏期较术前延长（均为P<0.05）；2、3、4环N₁波潜伏期变化不大（均为P>0.05）。术后6个月，患者在0、1环的P₁波、N₁波振幅密度均较术前减小（均为P<0.05）；2、3、4环P₁波、N₁波振幅密度变化不大（均为P>0.05）。术后6个月，患者鼻上象限P₁波潜伏期较术前延长（P<0.05）；鼻下、颞上、颞下象限P₁波潜伏期变化不大（均为 P>0.05）；四个象限N₁波潜伏期均较术前变化不大（均为P>0.05）。术后6个月，患者四个象限P₁波和N₁波振幅密度较术前均变化不大（均为P>0.05）。结论　白内障超声乳化术后重度非增生型糖尿病视网膜病变患者病变会进一步加重，mf-ERG能客观定量地评定视网膜功能的变化。