PRL-3表达载体构建及其对结直肠癌细胞生长的影响

目的:构建PRL-3过表达载体,研究其对结直肠癌细胞系SW620生长的影响。方法:提取Hela细胞总RNA并反转为cDNA,以cDNA为模板通过PCR反应扩增PRL-3基因,将扩增产物克隆至表达载体pcDNA3.1,通过转染让SW620细胞过表达PRL-3,空载体组和空白组作为阴性对照。qPCR、Western blot实验用来检测PRL-3在SW620细胞的表达水平,CCK-8实验、平板克隆形成实验用来检测SW620细胞的增殖状况,流式细胞术用来检测SW620细胞的周期分布。结果:成功构建了PRL-3过表达载体。与空载体组和空白组相比,PRL-3过表达载体转染结直肠癌细胞系SW620后,qPCR检测PRL-3表达水平上调数倍。CCK-8实验表明过表达PRL-3能够促进SW620细胞增殖。平板克隆形成实验表明上调PRL-3能够增强SW620细胞增殖能力。流式细胞术结果表明过表达PRL-3能够加快SW620细胞周期进程。结论:PRL-3能够促进结直肠癌细胞系SW620生长,为结直肠癌早期诊断和靶向治疗提供实验依据。     

Cdc42EP3对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的：探讨Cdc42EP3在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）转移中的作用及相关作用机制。方法：回顾性收集2010年12月至2011年12月于南京医科大学附属淮安第一医院诊治的97例CRC患者的术后病理蜡块,同时收集相关临床病理资料。采用免疫组织化学法检测Cdc42EP3在癌组织与相应正常组织中的表达,随后通过统计学方法分析差异表达,并评估表达水平与临床病理学参数及生存预后之间的相关性。干扰CRC细胞Cdc42EP3的表达后,应用Transwell技术检测Cdc42EP3对CRC细胞的迁移及侵袭能力的影响,并使用Western blot技术检测EMT相关蛋白的表达。通过基因芯片技术及生物信息学分析预测Cdc42EP3的下游靶点STAT1,并通过回复实验验证。结果：Cdc42EP3在癌组织中的表达水平显著高于相应正常组织（P<0.001）,并与肿瘤的淋巴结转移（P=0.011）、TNM分期（P=0.008）及患者生存预后（P<0.001）之间呈显著相关性。干扰Cdc42EP3表达后,CRC细胞的迁移及侵袭能力均明显减弱（P<0.01）。预测出Cdc4...     

PRL-3基因在结直肠癌原发灶中的表达及其临床意义

背景与目的：据报道，PRL-3基因表达在结直肠癌中具有显著的转移相关性。本研究探讨PRL-3基因在结直肠癌原发灶中的表达强度及其与主要临床病理学指标的相关性，以及在结直肠癌预后判断中的临床意义。方法：提取1998--2000年接受手术治疗并且具有完整随访信息的结直肠癌患者196例，采用免疫组织化学技术检测PRL-3表达情况，同时收集相关临床病理资料和随访信息进行相关性分析和预后研究。结果：在196例标本中，PRL-3高表达阳性率为49．5％（97／196），与肿瘤的组织分化程度、脉管侵犯、Dukes分期、手术性质以及术后转移的发生相关；单因素和多因素分析提示PRL-3表达是结直肠癌患者的重要预后因素。结论：PRL-3的表达是结直肠癌患者的一个新的预后指标，此基因的高水平表达提示术后脏器转移发生的可能性升高，并且和术后生存时间的缩短关系密切。     

结直肠癌PRL-3蛋白表达与临床关系的Meta分析

目的:研究促肝再生磷酸酶蛋白（PRL-3）在结直肠癌患者癌组织中的表达与临床病理特征的相关性。方法:检索知网、万方、和pubmed、Web of science、EMBASE等数据库以“PRL-3,结直肠癌”为主要检索词收集从2000年至2017年1月1日,国内外公开发表的关于PRL-3和结直肠癌临床病理特征关系的相关文献,对文献筛选和评价,符合标准的文献用RevMan5.3分析软件进行Meta分析。结果:最终纳入16篇文献,共包括1 489例病例,835例正常对照。PRL-3蛋白在结直肠癌组的表达与年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。PRL-3蛋白在正常大肠黏膜组织的表达低于结直肠癌组（I2=12%,P＜0.000 01,OR=4.01）;PRL-3蛋白在高分化的结直肠癌组的表达低于中、低分化组（OR=1.45,P=0.03,I2=39%）;PRL-3蛋白在未超过浆膜层组的表达低于侵及或超过浆膜层组（OR=2.36,P=0.01,I2=61%）;PRL-3蛋白在无淋巴结转移组的表达低于有转移组（OR=3.74,P＜0.000 01,I2=54%）,采用随机效应模型进行Meta分析;PRL-3蛋白在不伴有肝转移组的表达低于有肝转移组（OR=2.88,P＜0.000 1,I2=36%）;PRL-3蛋白在Ⅰ+Ⅱ期组的表达低于Ⅲ+Ⅳ期组（OR=7.97,P＜0.000 01,I2=28%）。结论:PRL-3参与了结直肠癌发生、发展、转移过程,是预后不良的指征。     

结直肠癌组织中NEK2的表达及其对HCT116细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨中心体相关激酶2(NEK2)在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞HCT116增殖、侵袭及迁移的影响.方法 构建针对NEK2的小干扰RNA(si-NEK2),脂质体法转染HCT116细胞.CCK8实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室实验检测敲低NEK2表达后细胞增殖、周期分布、侵袭和迁移能力的改...     

载脂蛋白E对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 观察载脂蛋白E（apolipoprotein E, ApoE）对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 在结直肠癌细胞系SW48中转染ApoE过表达质粒及其特异性siRNA,实时荧光定量PCR（Real timeqPCR）检测转染ApoE的表达,利用Transwell小室观察ApoE对细胞侵袭迁移能力的影响,通过免疫印迹检测ApoE对基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）家族蛋白表达的影响。结果 RTPCR检测结果显示：过表达ApoE组细胞中ApoE mRNA水平显著高于空白对照白组和阴性对照组,差异有统计学意义（P=0.008）,ApoE沉默组中ApoE mRNA水平与阴性对照组比,差异有统计学意义（P=0.013）;Transwell侵袭实验结果显示,穿膜细胞数：空白对照组、阴性对照组、过表达ApoE组、si-ApoE组依次为：（209±17）、（228±11）、（67±9）、（428±15）个/视野,过表达ApoE组和si-ApoE组与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;Transwell迁移实验结果显示,空白对照组（326±18）个/视野,阴性对照组（338±21）个/视野,过表达ApoE组（133±11）个/视野,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,si-ApoE组（518±13）个/视野与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。同时免疫印迹实验显示,过表达ApoE组细胞中MMP-2及MMP-9的表达下降,组织基质金属蛋白酶抑制剂2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2, TIMP-2）的表达升高,而si-ApoE组MMP-2及MMP-9表达升高,TIMP-2的表达降低。结论 ApoE可影响结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力,并且可能通过影响TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达发挥上述功能。     

lncRNA LINC00460在结直肠癌组织中的表达及其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00460在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:GEPIA在线数据库和实时荧光定量PCR(qPCR)分析检测lncRNA LINC00460在结直肠癌组织、结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、SW620)及结直肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达,进一步分析LINC00460表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。将LINC00460过表达质粒及阴性对照(pcDNA3.1-LINC00460和pcDNA3.1-NC)转染HCT-8细胞,将LINC00460小干扰RNA及阴性对照(si-LINC00460和si-NC)转染SW620细胞,分别采用CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖能力和侵袭迁移能力,采用Western blot实验检测cyclin D1、p21、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与癌旁组织和NCM460细胞相比较,LINC00460在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、S...     

lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p促进结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移

目的： 探讨lncRNA SNHG10在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响与可能的机制。 方法： 收集2018年1月至2019年12月在河南省人民医院行根治性结直肠癌切除术的78例患者的癌组织及对应癌旁组织标本,采用qPCR法检测结直肠癌组织、结直肠癌细胞（SW480、SW620、HT-29和LoVo）及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA SNHG10和miR-532-3p的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系及在组织中表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SNHG10和miR-532-3p间的靶向关系。向SW620细胞中转染si-SNHG10或miR-532-3p mimic或共转染si-SNHG10+miR-532-3p inhibitor,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用WB法检测E-cadherin,N-cadherin和vimentin蛋白表达水平变化。 结果： SNHG10 在结直肠癌组织和细胞中呈高表达（P<0.05 或 P<0.01）,其表达水平与TNM分期和远处转移有关（均P<0.05）;miR-532-3p在结直肠癌组织和细胞中呈低表达,其表达水平与TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关（P<0.05或P<0.01）,SNHG10和miR-532-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.225, P=0.048）。双荧光素酶报告基因实验证实SNHG10靶向调节miR-532-3p的表达。下调 SNHG10 或上调 miR-532-3p 的表达后,SW620 细胞的侵袭和迁移能力显著降低（P<0.01）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平降低（均P<0.05）。抑制miR-532-3p表达后,敲低lncRNA SNHG10表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转（均P<0.05）。 结论： lncRNA SNHG10在结直肠癌中高表达并与TNM分期和远处转移相关,lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p表达并通过EMT途径影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。     

PHA-767491对结直肠癌Colo320细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨PHA-767491对结直肠癌细胞系Colo320侵袭和转移的作用.方法:配置不同浓度的PHA-767491作用于Colo320细胞.利用CCK-8法检测细胞的增殖能力确定IC50.Westem blot法检测PHA-767491对Colo320细胞Cdc-7表达的影响.利用划痕实验检测细胞的迁移能力.Transwell小室法检测细胞的侵袭能力.结果:CCK-8法结果显示PHA-767491能显著抑制Colo320细胞的增殖能力,24小时IC50为4.51 μmol./L.Western blot结果显示PHA-767491能显著抑制Colo320细胞Cdc-7的表达.划痕实验结果显示PHA-767491能显著抑制Colo320细胞的迁移能力.Transwell结果显示PHA-767491能抑制Colo320细胞的侵袭能力.结论:PHA-767491能够抑制Colo320细胞的迁移和侵袭.     

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒（pcDNA3.1-KLF3）或空载质粒（Vector）单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者TNM分期和远处转移有关（均P＜0.05）;miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.326,P=0.013）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达, KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。     

大肠癌组织和细胞中KDM3A的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,KDM3A)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中KDM3A在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT-PCR技术检验KDM3A在4种大肠癌细胞HT-29、SW480、SW620、DLD-1以及正常人结肠上皮细胞NCM460中的表达水平,筛选出KDM3A表达量低的大肠癌细胞系进行过表达并进行CCK-8增殖实验、Transwell实验及Western blot检测KDM3A过表达对细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果:KDM3A在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织,且KDM3A高表达患者生存率更低。过表达KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:高表达的KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-489抑制结直肠癌细胞的侵袭转移

目的:探究miR-489在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达情况及其临床意义,并进一步探究miR-489对CRC细胞的侵袭迁移的作用.方法:应用Real-time PCR检测miR-489在CRC组织和细胞系中的表达情况;分析miR-489与CRC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-489对CRC细胞的侵袭与迁移能力的影响;Western blot探究miR-489对CRC细胞上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的作用.结果:Real-time PCR结果显示miR-489在CRC组织和细胞系中均为显著性低表达(P＜0.05);统计学分析显示miR-489的表达量与CRC的静脉浸润、浸润深度以及淋巴结转移呈显著相关(P＜0.05);Transwell实验结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的侵袭与迁移;Western blot结果显示miR-489能够抑制CRC细胞的EMT.结论:miR-489在CRC中为低表达,其能够通过抑制CRC细胞的侵袭、迁移与EMT发挥其抗CRC作用.     

PI3K抑制剂ZSTK-474对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨PI3K抑制剂ZSTK-474对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用不同浓度（0、1、2、4、6、8和10 μmol/L）ZSTK-474处理结直肠癌HT-29和HCT-116细胞24 h和48 h,CCK8法检测细胞增殖活性并计算出ZSTK-474在两株结直肠癌细胞中的半数抑制浓度（IC50）。根据IC50的值选用浓度为4 μmol/L的ZSTK-474作用HT-29和HCT-116细胞24 h,同时设置加入等量的0.1%DMSO为对照。采用平板克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测细胞PI3K、Akt的mRNA水平,Western blot 检测细胞PI3K、Akt的蛋白水平。结果:ZSTK-474可明显抑制HT-29和HCT-116细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性。ZSTK-474可抑制HT-29和HCT-116细胞的侵袭能力,但不影响其凋亡。ZSTK-474处理HT-29和HCT-116细胞24 h后,PI3K和Akt的mRNA和蛋白表达水平均显著下降。结论:ZSTK-474能够抑制结直肠癌细胞增殖,并且能抑制其侵袭。     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

miR-543在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

目的:研究微小RNA-543（microRNA-543,miR-543）在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响。方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响。结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制。结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭。