As_2O_3对ACC-M细胞增殖及VEGF和bFGF表达的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人类腺样囊性癌ACC-M细胞体外增殖及表达VEGF和bFGF的影响。探讨As2O3对ACC-M细胞表达VEGF和bFGF的影响。方法:倒置相差显微镜下观察ACC-M细胞生长情况,采用MTT法检测不同浓度As2O3作用不同时间对ACC-M的抑制效应;以RT-PCR、Western blot方法检测As2O3作用后ACC-M细胞的两种血管生成相关因子VEGF和bFGF表达的变化。结果:As2O3抑制ACC-M细胞呈时间-剂量依赖关系。RT-PCR检测显示,As2O3作用后ACC-M细胞VEGF和bFGF基因表达无明显变化。Western blot检测显示,As2O3明显抑制ACC-M细胞VEGF和bFGF蛋白表达,呈时间-剂量依赖关系。结论:As2O3在体外明显抑制ACC-M细胞;As2O3明显抑制ACC-M细胞VEGF和bFGF基因的蛋白产物,其作用机制可能为抗腺样囊性癌的血管形成。     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症损伤的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)是否对脂多糖(LPS)刺激的血管内皮细胞具有保护作用,为NAC用于治疗种植体周围炎、牙周炎等提供理论基础。方法:通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度的LPS或NAC对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,以获得刺激HUVECs的最适药物浓度。添加最佳药物浓度的LPS和(或)NAC处理HUVECs 24 h,实时半定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测炎症因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞粘附分子-1(ICAM-1)的mRNA表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α和IL-8的蛋白表达;Western blot法检测ICAM-1和NF-κB信号通路的表达情况。结果:LPS刺激HUVECs过量表达炎症因子TNF-α、IL-8和ICAM-1。此外,LPS增加NF-κB通路的磷酸化P65(pP65)表达。然而,NAC预处理HUVECs后,显著抑制了LPS引起的TNF-α、IL-8和ICAM-1表达的增加及降低了pP65的分泌水平。结论:本结果表明NAC保护血管内皮细胞免受LPS介导的炎症损伤,从而减轻炎症反应,其潜在的机制可能与NF-κB信号通路有关。     

七氟烷对血管内皮细胞迁移能力的影响

目的:探讨七氟烷对血管内皮细胞迁移功能的影响及其分子生物学机制.方法:将人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs)随机分为4组(每组包含4个直径为10 cm的培养皿),对照组、七氟烷暴露组0.5 h组、lh组和2h组.对照组为正常环境培养的细胞,七氟烷暴露组培养环境包括5％ CO2、21％ 02和2％七氟烷(相当于1.6个MAC);对4组细胞分别进行划痕实验,观察HUVECs的迁移能力,并对各组HUVECs采用RT-PCR检测血管内皮细胞钙黏蛋白mRNA (VE-cadherin mRNA)的表达情况.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:划痕实验12h后,与对照组相比,在2％七氟烷中暴露2h的HUVECs迁移距离显著缩短(P＜0.01),细胞迁移功能受到显著抑制,而在2％七氟烷中暴露0.5 h和lh的HUVECs迁移距离与对照组相比均无显著差异.RT-PCR实验结果显示,在2％七氟烷中暴露2h的HUVECs与对照组相比,VE-cadherin mRNA表达显著上调(P＜0.05).结论:2％七氟烷暴露2h对HUVECs迁移功能具有显著抑制作用,其机制可能与七氟烷上调VE-cadherin的表达有关.     

DZIP1通过影响Wnt/β-catenin信号通路促进口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭

目的 探究DZIP1通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR和Western blot检测DZIP1和Wnt/β-catenin信号通路相关基因mRNA表达和蛋白表达,CCK-8检测细胞活力,克隆形成实验检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cel...     

干细胞因子促进共培养DPSCs与HUVECs的成血管能力

目的 探讨干细胞因子（stem cell factor,SCF）对共培养的牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）和人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）成血管能力的影响。方法 本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准。实验分为HUVECs组、SCF+HUVECs组、DPSCs+HUVECs组、SCF+DPSCs+HUVECs组。将SCF与培养液混合,制备成SCF浓度为100 ng/mL的混合培养液,按1∶5的比例将DPSCs和HUVECs在体外进行共培养。通过CCK-8增殖实验观察每组细胞在第1、3、5、7天的增殖能力,细胞划痕实验和Transwell迁移实验分别检测SCF对直接或间接共培养条件下细胞迁移的影响,采用基质胶管形成实验检测各组细胞血管生成能力,通过ELISA检测每组细胞培养上清液中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的浓度,Western blot检测CD31、CD34和VEGFA的蛋白表达水平。结果 ...     

马来酸噻吗洛尔对人脐静脉内皮细胞VEGF传导通路表达的影响

目的:研究马来酸噻吗洛尔在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中血管生成信号传导通路的表达,以探讨这些药物作为治疗婴幼儿血管瘤的作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、局部黏着斑激酶(FAK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。应用SPSS17.0统计包进行数据分析。结果:RT-PCR检测发现,马来酸噻吗洛尔以剂量依赖的方式明显抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的ERK、Akt、mTOR及FAK的mRNA表达;Western blot结果显示:马来酸噻吗洛尔以剂量依赖的方式明显抑制VEGF对磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的调控。结论:马来酸噻吗洛尔可以通过抑制ERK、Akt、mTOR、FAK信号通路的表达,抑制血管瘤内皮细胞增殖和促进细胞凋亡,从而达到治疗婴幼儿血管瘤的目的。     

VEGF及受体在颌面部血管瘤和血管畸形中表达及意义

目的 检测细胞因子血管内皮生长因子(VEGF),血管内皮生长因子受体(VEGFR/KDR)及VEGF mRNA在颌面部血管瘤和血管畸形中的表达,探讨VEGF及其受体与血管瘤发病机制的关系。方法 采用二步EnVision免疫组织化学方法,分别检测27例血管瘤和15例血管畸形组织中VEGF和VEGF/KDR表达;同时采用原位杂交Gene Point法检测VEGF mRNA的表达。结果 VEGF和VEGFR/KDR在血管瘤中高表达,而在血管畸形组中低表达,两者有显著差异(P<0.01);VEGF和VEGF mRNA在血管瘤细胞及周围间质细胞明显表达,VEGFR/KDR主要表达于血管瘤中内皮细胞膜上。结论 VEGF可通过自分泌和旁分泌的形式影响血管瘤内皮细胞的增殖,可能与血管瘤发生、发展和退化有密切相关。     

As2O3对ACC-2细胞增殖及其表达VEGF和bFGF的影响

目的：本实验研究三氧化二砷（As2O3）对人类腺样囊性癌ACC-2细胞体外增殖及其表达VEGF和bFGF的影响。探讨As2O3对人类腺样囊性癌VEGF和bFGF基因的作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度和作用时间下As2O3对ACC-2的增殖／抑制效应，倒置显微镜下观察腺样囊性癌ACC-2细胞生长情况；以RT-PCR、Western blotting方法检测As2O3作用后腺样囊性癌ACC-2细胞的血管生成相关因子VEGF和bFGF表达的变化。结果：As2O3作用48h内对ACC-2细胞有促进生长作用，48、72h对细胞有明显抑制，并呈时间．剂量依赖关系。RT-PCR检测显示．As2O3作用后腺样囊性癌ACC-2细胞VEGF和bFGF基因表达无明显变化。Western blotting检测显示，腺样囊性癌ACC-2细胞VEGF和bFGF蛋白表达与As2O3药物浓度和作用时间呈负相关。结论：（1）As2O3体外作用人类腺样囊性癌ACC-2细胞后48h内有促生长作用，48h后有明显抑制作用；（2）As2O3可明显抑制腺样囊性癌ACC-2细胞血管生成相关因子VEGF和bFGF基因蛋白表达，可能具有抗腺样囊性癌血管形成的作用。     

浓缩生长因子促人脐静脉血管内皮细胞成血管化作用研究

目的 研究浓缩生长因子（CGF）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的增殖、迁移和分化的作用。方法 取健康志愿者静脉血制成CGF,再用CGF制备浓缩生长因子提取液（CGFe）。体外培养细胞分为2%CGFe组、5%CGFe组、10%CGFe组和对照组。CCK-8和细胞周期实验检测各组细胞增殖活性;划痕实验检测内皮细胞迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞血管内皮生长因子（VEGF）、趋化因子受体4（CXCR4）、血小板衍生因子（PDGF）mRNA表达量。结果 CCK-8法和细胞周期结果显示CGFe明显促进细胞增殖（P<0.05）,且增殖效应呈CGFe浓度依赖性,各组间均有统计学差异（P<0.05）;划痕实验中12 h时实验组划痕愈合效率明显高于对照组,且愈合效率与CGFe浓度呈正比（P<0.05）;CGFe明显促进VEGF、CXCR4、PDGF的mRNA表达量,促进效应与浓度呈正比（P<0.05）。结论 CGFe能有效促进HUVECs的增殖、迁移和成血管分化。     

糖基化终末产物对牙周膜干细胞增殖及其Wnt经典信号通路相关基因表达的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)增殖及其Wnt经典信号通路相关基因DKK-1、β-catenin表达的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养HPDLSC,并与100μg/mL AGEs共同培养,通过细胞克隆形成率、细胞生长曲线观察AGEs对HPDLSC增殖能力的影响;RT-PCR和Western Blot检测实验组和对照组DKK-1、β-catenin mRNA以及核蛋白β-catenin的表达量。结果:经100μg/mL AGEs刺激的HPDLSC,其克隆形成率、增殖速度以及β-catenin mRNA和核蛋白β-catenin的表达量均明显低于对照组(P<0.05);而DKK-1 mRNA则明显高于对照组(P<0.05)。结论:AGEs能抑制HPDLSC的增殖及其Wnt经典信号通路。     

乳酸菌E6-1对人口腔癌细胞Cal-27体外增殖的抑制作用及机制探讨

目的 探讨乳杆菌E6-1在体外对人口腔癌细胞Cal-27增殖抑制及凋亡的影响。方法 选择不同浓度（0、10、20、40 mg/mL）的乳杆菌E6-1,作用于人口腔癌细胞Cal-27后,采用MTT实验检测E6-1对Cal-27肿瘤细胞增殖的抑制作用;利用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测对凋亡细胞核DNA的影响;利用免疫印迹法检测各组细胞色素c、caspase-9及caspase-3蛋白表达水平。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 MTT实验结果表明,E6-1对Cal-27有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;不同浓度的E6-1（10、20、40 mg/mL）及原液可诱导细胞核DNA形成 “梯状”条带（梯带）;免疫印迹结果显示,与空白对照组相比,细胞色素c、caspase-9及caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 在体外实验条件下,一定浓度的E6-1可抑制Cal-27细胞增殖,有效诱导细胞凋亡。     

同期神经化增强髂骨瓣术后骨髓间充质干细胞的活性

目的： 比较神经化髂骨瓣和传统髂骨瓣重建下颌骨缺损术后,移植骨块骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）的干细胞活性。方法： 游离血管化髂骨瓣移植修复下颌骨缺损术后半年,从移植骨骨髓体外分离、培养BMMSCs,通过集落形成观察、Brdu摄入实验、群体倍增时间、体外成骨茜素红染色法、裸鼠皮下成骨法检测BMMSCs增殖、自我更新及成骨分化能力。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 神经化髂骨移植术后分离、培养的BMMSCs的集落形成、增殖、群体倍增时间、体外及体内成骨分化能力均显著高于非神经化组（P<0.05）。结论： 神经化髂骨瓣重建下颌骨缺损可以增强BMMSCs的自我更新、增殖、成骨分化等潜能,有助于维持移植骨的术后内环境稳定,减少术后移植骨吸收。     

可利霉素对口腔鳞癌细胞生物学活性的影响

目的: 体外评价可利霉素对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤活性。方法: 梯度浓度可利霉素分别处理口腔鳞状细胞癌细胞（HN6/HB96细胞系）,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制生长曲线;采用划痕实验分析细胞迁移能力;采用平板克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用 SPSS 18.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 可利霉素浓度依赖性抑制HN6/HB96的体外增殖,随着药物浓度增加,细胞迁移和克隆形成能力显著下降（P<0.05）;可利霉素使处理过的口腔鳞状细胞癌细胞G1期比例显著升高,S期和G2/M期比例显著下降,细胞周期阻滞于G1期（P<0.001）。可利霉素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,随着药物浓度增加,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。结论: 可利霉素体外抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生物学活性,为可利霉素用于口腔鳞状细胞癌的治疗提供了实验依据。     

姜黄素对环孢素A诱导激活的大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的抑制作用

目的：体外实验研究姜黄素（curcumin,Cur）对环孢素A（cyclosporine A,CsA）作用大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的影响,为进一步探讨Cur抑制CsA所致药物性牙龈增生的发生机制提供理论依据。方法：使用CCK-8法观察0、5、10、20、30 μmol/L Cur对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响, 20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,牙龈成纤维细胞中转化生长因子TGF-β1、Smad3、平滑肌肌动蛋白α-SMA和I型胶原蛋白COL-I的mRNA表达变化;蛋白免疫印迹实验检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA和COL-I的蛋白表达变化。细胞划痕实验观察20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA 对牙龈成纤维细胞迁移能力的影响。采用SPSS 23.0 软件包对数据进行统计学分析。结果：大鼠牙龈成纤维细胞在20 μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,细胞增殖和迁移能力明显降低;20 μmol/L Cur显著下调了牙龈成纤维细胞中TGF-β1、α-SMA 和COL-I的mRNA 表达,蛋白免疫印迹实验提示,TGF-β1、p-Smad3、α-SMA 和COL-I的表达同样显著下调。结论：Cur可能通过抑制CsA激活的牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3 信号通路,从而降低牙龈成纤维细胞增殖、迁移、平滑肌肌动蛋白和胶原分泌,改善牙龈增生。     

环肌酸抑制大鼠牙周炎周围牙槽骨吸收的实验研究

目的:通过体外和体内实验探讨环肌酸对牙周炎造成的牙槽骨吸收的抑制作用.方法:体外实验通过细胞活力测定、碱性磷酸酶染色和茜素红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色和实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等检测,评价环肌酸对成骨细胞和破骨细胞增殖和分化的影响.动物实验将20只大鼠分为4组,A组为对照组,B组采用牙周结扎+生理盐水注...     

静电纺壳聚糖-聚己内酯纳米纤维膜引导骨再生的体外研究

目的 探讨静电纺壳聚糖（CHS）-聚己内酯(PCL)纳米纤维膜对骨缺损再生作用。方法通过静电纺丝技术制备壳聚糖-聚己内酯纳米纤维膜,以纤维膜作为载体,根据碱性磷酸酶活性和Western 免疫印迹实验结果,探讨纤维膜对细胞成骨分化能力的影响。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果静电纺壳聚糖-聚己内酯纳米纤维膜对细胞成骨分化能力的作用显著高于对照组（不含材料组）（P<0.05）。结论静电纺聚己内酯-壳聚糖纳米纤维膜在体外能够促进细胞的成骨分化,为骨缺损及再生修复提供了科学依据。     

NDRG2对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭的影响

目的:探讨NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其对SACC-LM细胞增殖、侵袭的影响。方法:采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析唾液腺腺样囊性癌组织及癌旁组织样本中NDRG2的表达,采用RNA干扰技术降低腺样囊性癌细胞SACC-LM中NDRG2基因的表达,利用CCK-8实验及集落形成实验检测细胞增殖能力的变化,利用划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的变化,利用Western 免疫印迹实验检测侵袭标志蛋白以及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。采用SPSS 17.0软件包进行数据处理。结果:NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达低于癌旁组织（P=0.017）。在降低NDRG2基因的表达后,SACC-LM细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著增强（P<0.05）,侵袭标志蛋白MMP2表达量显著升高（P=0.0004）,上皮标志物E-Caherin表达量显著降低（P=0.0229）,间充质标志物N-Cadherin表达量显著升高（P=0.0009）。结论:NDRG2基因在腺样囊性癌中低表达,降低NDRG2的表达可增强SACC-LM的增殖、迁移及侵袭能力。     

骨髓间充质干细胞分化能力及Notch通路活性的增龄性变化

目的： 在体外实验中初步探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨、成脂分化能力及细胞活性的增龄性变化,以及在增龄过程中Notch信号通路活性的改变。方法： BMSCs取自年轻、成年及老年C57BL/6小鼠全骨髓,以流式细胞术鉴定细胞表面抗原,成骨、成脂诱导评价各组细胞的分化能力,细胞增殖、迁移实验检测各组细胞活性,实时荧光定量PCR（qPCR）检测Notch相关基因的表达。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 茜素红和油红O染色结果表明,BMSCs的成骨分化能力随着年龄增长而下降（P<0.05）,成脂分化能力随着年龄增长而提高（P<0.05）。细胞活性实验表明,细胞增殖能力和迁移能力未随着年龄增长而下降（P>0.05）。qPCR结果表明,老龄组BMSCs的Notch信号通路表达水平显著高于年轻组（P<0.05）。结论： 随着个体年龄增长,BMSCs呈现出成骨分化能力下降而成脂分化能力提高的现象,Notch信号通路活性呈现出增龄性升高,为恢复老龄BMSCs受损成骨分化能力提供了新的思路。     

大鼠骨髓间充质细胞电离辐射敏感性的体外实验研究

目的 研究大鼠骨髓间充质细胞（BMSCs）对体外电离辐射的敏感性。方法 分离SD大鼠BMSCs并进行体外培养。第3代细胞给予体外电离辐照处理,剂量分别为0、4、8、10 Gy。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,实时定量荧光PCR检测辐照后24 h和7 d Casepase-3及Cyclin-D1基因的表达。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果 成功分离并体外培养大鼠BMSCs。电离辐照后,增殖曲线提示10 Gy剂量组较对照组生长速度快。凋亡检测提示10 Gy剂量组死亡细胞及晚期凋亡细胞比例较对照组显著升高。10 Gy剂量辐照后,Cyclin-D1基因在辐照后第24小时（P<0.01）和第7天（P<0.001）表达显著上调。Casepase-3基因在10 Gy辐照后24 h显著上调（P<0.01）。结论 BMSCs在体外对电离辐射具有一定的抵抗性。