低氧对大鼠颏舌肌成肌细胞分化的影响

目的:通过观测低氧环境对体外培养大鼠颏舌肌成肌细胞分化及低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响,探讨低氧引起颏舌肌损伤的机制以及HIF-1α在其中的作用。方法:根据环境氧浓度不同,将体外培养的原代大鼠颏舌肌成肌细胞分为正常氧浓度组(NC)(21%)和低氧组(HG)(1%),分别诱导分化0 d、1 d、3 d、6 d。采用RT-PCR及Western blotting检测生肌调节因子(MyoD)、肌源性决定因子(myogenin)、肌球蛋白重链(MHC)以及HIF-1α的mRNA及蛋白表达;倒置显微镜下观察成肌细胞分化的形态变化。结果:在颏舌肌成肌细胞分化过程中,两种氧状态下HIF-1αmRNA表达均没有显著变化(P>0.05),但蛋白表达逐渐上调;低氧对MyoD、myogenin、MHC的mRNA(P<0.05)和蛋白表达有显著的抑制作用,致肌管形成延迟;低氧使HIF-1αmRNA(P<0.05)和蛋白显著上调。结论:低氧环境可能是通过上调HIF-1α表达抑制大鼠颏舌肌成肌细胞的分化,从而抑制颏舌肌损伤的修复。     

低氧激活HIF-1α诱导舌鳞癌细胞上皮-间质转化

目的：探讨低氧微环境诱导人舌鳞癌细胞上皮-间质转化以及HIF-1α在该过程中的作用。方法 体外常氧（20% O₂）或低氧（1% O₂）状态下培养舌鳞癌SCC9、CAL27细胞48 h,Western免疫印迹和实时定量PCR检测上皮间质标记蛋白vimentin、fibronectin和E-cadherin的表达变化和HIF-1α的表达水平,Transwell小室检测细胞的迁移能力。通过小干扰RNA（HIF-1α-Si）转染舌鳞癌细胞,检测HIF-1α、vimentin、fibronectin与E-cadherin蛋白表达以及细胞迁移能力的变化。应用SPSS13.0软件包对数据进行独立样本t检验。结果 人舌鳞癌细胞SCC9、CAL27在低氧环境中培养48 h后,间质标志蛋白vimentin和fibronectin在蛋白和mRNA水平均显著升高,上皮标志蛋白E-cadherin表达降低,HIF-1α表达上调,细胞迁移能力显著增强。小干扰RNA（siRNA）转染舌鳞癌细胞SCC9、CAL27并于低氧下培养后,HIF-1α表达显著降低,vimentin和fibronectin表达也显著降低,E-cadherin表达升高,细胞迁移能力显著下降。结论 低氧通过上调HIF-1α表达而促进人舌鳞癌细胞发生上皮-间质转化及转移。     

低氧诱导因子1α在小鼠下颌第一磨牙萌出过程中的表达及意义

目的:研究小鼠下颌第一磨牙萌出过程中低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α）的表达,并探讨其表达与牙萌出及破骨细胞活性之间的关系。方法:分离出生后1.5~14.5 d小鼠的下颌骨,连续切片,对每组切片进行苏木精-伊红（H-E）染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色以及免疫组织化学染色。采用SPSS 25.0软件包进行统计学分析。结果:小鼠下颌第一磨牙萌出过程中,其冠方牙槽骨厚度逐渐减小,破骨细胞数量逐渐减少,HIF-1α在萌出过程中的表达逐渐减少。结论:小鼠下颌第一磨牙萌出过程中,HIF-1α表达越少,破骨细胞数量也越少。HIF-1α可能通过影响破骨细胞活性而参与小鼠下颌第一磨牙的萌出。     

雌激素降低对大鼠髁突软骨ERα、ERβ、OPG和RANKL表达的影响

目的观察血清雌激素降低后大鼠髁突软骨ERα、ERβ、OPG和RANKL的表达情况,探讨髁突特发性吸收可能的发生机制。方法30只雌性SD大鼠随机分为对照组、避孕药组和雷公藤多苷片组。实验组通过灌胃避孕药（去氧孕烯炔雌醇片）和雷公藤多苷片2种方法建立大鼠血清雌激素降低模型。在实验前和实验第12周,分别检测血清雌二醇浓度,实验结束后,应用免疫组织化学法检测髁突软骨ERα、ERβ、OPG和RANKL的表达。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果避孕药组和雷公藤多苷片组血清雌激素水平均明显降低。各组髁突软骨中ERα、ERβ、OPG和RANKL均有表达,主要分布于肥大软骨层。避孕药组和雷公藤多苷片组ERα、ERβ和OPG表达均降低,RANKL表达均升高。结论血清雌激素浓度降低能够下调大鼠髁突软骨ERα、ERβ和OPG的表达,上调RANKL的表达,降低OPG/RANKL的比例。在血清雌激素降低状态下,雌激素可能通过ER途径调节OPG/RANKL的比例,介导髁突软骨退变及软骨下骨病理改建过程。     

人牙髓干细胞条件培养基通过AMPK/PGC-1α途径改善氯化钴诱导的颏舌肌成肌细胞低氧损伤

目的： 研究氯化钴 (CoCl₂) 模拟的低氧对颏舌肌成肌细胞活性和氧化应激的影响,探讨人牙髓干细胞 （human dental pulp stem cells,hDPSCs）条件培养基 (conditioned medium,CM)保护作用的机制与AMPK/PGC-1α通路的关系。方法： 分离、培养及鉴定hDPSCs,通过超滤浓缩法提取条件培养基;分离、培养小鼠颏舌肌成肌细胞,分为对照组、CM组、CoCl₂组、CoCl₂+CM组。采用CCK-8法检测颏舌肌成肌细胞的活性,分别使用DCFH-DA和MitoSOX Red评估细胞内和线粒体活性氧 (reactive oxygen species,ROS) 水平,实时定量PCR分析NRF-1、NRF-2线粒体相关基因的表达,Western 印迹法检测PGC-1α、p-AMPK、总AMPK蛋白表达。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 颏舌肌成肌细胞经过200 μmol/L CoCl₂处理24 h后增殖显著下降（P<0.05）,细胞内和线粒体内ROS含量显著上升（P<0.05）;与CoCl₂组相比,加入hDPSCs-CM后,细胞活性显著增加（P<0.05）,胞内和线粒体内ROS含量显著降低 (P<0.05);hDPSCs-CM显著上调颏舌肌成肌细胞中pAMPK和PGC-1α蛋白的表达水平以及PGC-1α下游的线粒体效应物NRF-1、NRF-2的mRNA表达水平 (P<0.05)。结论： 人牙髓干细胞条件培养基能减轻CoCl₂诱导的颏舌肌成肌细胞低氧损伤,其机制可能与AMPK/PGC-1α通路的调节有关。     

低氧对大鼠髁突软骨细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-lα,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)的表达变化在髁突软骨生长发育中的意义。方法:选用3周龄SD大鼠的髁突软骨进行原代细胞培养,建立二氯化钴(CoCl2)化学低氧的细胞培养模型,RT-PCR检测常氧状态下与低氧后12、24、48 h内大鼠髁突软骨细胞HIF-1α和VEGF的mRNA表达。结果:髁突软骨细胞低氧培养后12、24 h、48 h时间点HIF-1α和VEGF的mRNA表达均明显升高(P<0.05);并且VEGF、HIF-1α表达12 h与24 h、12 h与48 h、24 h与48 h比较差异均有统计学意义;HIF-1α表达逐次升高,而VEGF在12 h达到最高点后逐次下降,但是均高于常氧状态下。结论:低氧早期可上调髁突软骨细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达,可能在髁突软骨血管形成及生长发育发挥重要作用。     

IL-1β在大鼠颞下颌关节炎性痛中的作用机制探讨

目的：探讨ERK1/2、NF-κB信号通路是否参与白细胞介素1β（IL-1β）上调疼痛因子Nav1.7的表达,进而参与大鼠颞下颌关节炎性痛。方法：建立颞下颌关节炎症模型或通过大鼠三叉神经节脑立体定位实验,于活体大鼠三叉神经节内注射IL-1β,评估三叉神经节p-ERK1/2、p-p65、Nav1.7、COX-2、p-CREB等分子的表达及摆头阈值变化。体外培养大鼠三叉神经节,IL-1β单独或联合ERK、NF-κB抑制剂U0126、PDTC,利用实时定量 PCR及蛋白免疫印迹评估三叉神经节p-ERK1/2、p-p65、Nav1.7、COX-2、p-CREB的表达变化。采用SPSS 22.0软件包进行数据统计。结果：诱导颞下颌关节炎症24 h及活体大鼠三叉神经节内注射IL-1β 24 h后,三叉神经节内p-ERK1/2、p-p65、Nav1.7、COX-2、p-CREB 表达显著上调,同时摆头阈值降低。ERK及NF-κB抑制剂均可阻断IL-1β上调三叉神经节内Nav1.7、COX-2、p-CREB表达。结论：IL-1β通过ERK1/2、NF-κB信号通路上调三叉神经节内Nav1.7的表达,进而参与大鼠颞下颌关节炎性痛。     

基质细胞衍生因子1通过整合素αvβ3-CXC族趋化因子受体4和7诱导头颈部鳞状细胞癌转移的研究

目的 观察基质细胞衍生因子1（SDF-1）诱导、LM609/AMD3100/CCX754抑制头颈部鳞状细胞癌（SCCHN）细胞系PCI-13细胞迁移、细胞骨架以及对整合素（integrin）αvβ3表达的影响。方法 用Transwell迁移实验法、免疫荧光法和流式细胞仪分别观察SDF-1、LM609、AMD3100、CCX754对PCI-13细胞迁移、细胞骨架以及细胞内integrin αvβ3蛋白表达的影响。结果 SDF-1能增加细胞迁移、PCI-13细胞中integrin αvβ3蛋白的表达以及细胞伪足的产生,LM609、AMD3100、CCX754能明显降低SDF-1对细胞迁移和PCI-13的正向诱导作用。结论 SDF-1可以通过integrin αvβ3-CXC族趋化因子受体4和7生物轴诱导SCCHN的转移作用,LM609、AMD3100、CCX754能降低SDF-1对SCCHN细胞的活性调控作用。     

miR-31-5p对牙髓干细胞HIF-1α/BNIP3信号通路及成骨相关因子表达的影响

目的: 探讨微小RNA-31-5p（miR-31-5p）对牙髓干细胞（DPSCs）低氧诱导因子1α（HIF-1α）/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3（BNIP3）信号通路及成骨相关因子表达的影响。方法: 体外培养人DPSCs,分为对照组（不转染）、mimic NC组（转染negative control-miR-31-5p）、miR-31-5p mimic组（转染hsa-miR-31-5p mimic）、siRNA NC组（转染nonsense siRNA）和miR-31-5p siRNA组（转染miR-31-5p siRNA）。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组DPSCs细胞中miR-31-5p、HIF-1α、BNIP3、碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录子2（Runx2）mRNA的表达情况,MTT法检测各组DPSCs细胞增殖情况,ALP活性测定试剂盒检测各组DPSCs细胞ALP活性,蛋白印迹（WB）法检测各组DPSCs细胞中HIF-1α、BNIP3、Runx2蛋白的表达情况。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与对照组、mimic NC组相比,miR-31-5p mimic组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,ALP染色明显减弱,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与对照组、siRNA NC组相比,miR-31-5p siRNA组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.05）,ALP染色明显增强,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论: miR-31-5p可以激活HIF-1α/BNIP3信号通路,抑制DPSCs细胞的成骨相关因子表达。     

HIF-1α对口腔癌裸鼠移植瘤生长及其CEACAM1及VEGF-C表达的影响

目的:建立口腔癌裸鼠移植瘤模型,探究HIF-1α对CEACAM1及VEGF-C表达的影响机制.方法:分别将Tca8113细胞、siRNA阴性对照Tca8113细胞、HIF-1α干扰的Tca8113细胞接种到裸鼠的右腋部皮下,建立口腔癌裸鼠移植瘤模型.观察各组裸鼠肿瘤生存情况和HIF-1α沉默对肿瘤的重量、体积抑制率的影响;采用ELISA方法检测移植瘤组织中HIF-1α干扰后其蛋白表达量的变化;分别利用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测各组裸鼠移植瘤组织中HIF-1α、CEACAM1及VEGF-C mRNA和蛋白的表达水平.结果:发现HIF-1α干扰组中裸鼠移植瘤的体积及重量均显著小于空白对照组,表明HIF-1α表达沉默显著抑制移植瘤的生长,同时明显下调CEACAM1及VEGF-C的表达.结论:口腔癌中HIF-1α可能通过调节CEACAM1及VEGF-C的表达来影响肿瘤的生长.     

缺氧诱导因子1α在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的:检测缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）在成釉细胞瘤中的表达,并探讨其与成釉细胞瘤侵袭和复发的相关性。方法:对5对成釉细胞瘤及对应正常瘤旁组织进行转录组测序,并对60例原发及60例复发患者第1次手术标本行免疫组织化学染色,检测2组患者中HIF-1α蛋白的表达。采用SAS9.3软件包对数据进行统计学分析。结果:5对新鲜标本转录组测序发现,3对标本中HIF-1α及其相关分子转录水平呈明显一致性改变。免疫组织化学染色发现,复发组成釉细胞瘤中,40%的肿瘤HIF-1α染色高于未复发组;复发组中,48.33%的肿瘤slug染色高于未复发组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:成釉细胞瘤复发与HIF-1α相关,HIF-1α表达高的患者较表达低的患者更容易复发。HIF-1α可能通过调控slug的表达,影响成釉细胞瘤的局部复发。     

PI3K/Akt mediates expression of TNF‐α mRNA and activation of NF‐κB in calyculin A‐treated primary osteoblasts

Objective: The effect of calyculin A (CA), a serine/threonine protein phosphatase inhibitor, on tumor necrosis factor‐α (TNF‐α) in primary osteoblasts was investigated to determine whether protein phosphatases could affect primary osteoblasts and if so which signaling pathways would be involved. Materials and methods: Primary osteoblasts were prepared from newborn rat calvaria. Cells were treated with 1 nM CA for different time periods. The expressions of TNF‐α and GAPDH mRNA were determined by RT‐PCR. Cell extracts were subjected to SDS‐PAGE and the activation of Akt and NF‐κB were analyzed by western blotting. Results: Calyculin A‐treatment markedly increased the expression of TNF‐α mRNA and enhanced the phosphorylation level of Akt (Ser473) in these cells. Pretreatment with the PI3K inhibitor LY294002 suppressed the increase in TNF‐α mRNA expression and the phosphorylation of Akt in response to CA. Western blot analysis showed that CA stimulated the phosphorylation and nuclear translocation of NF‐κB in primary osteoblasts, and these responses were blocked by pretreatment with LY294002. Conclusion: Calyculin A elicits activation of PI3K/Akt pathway which leads to expression of TNF‐α mRNA and activation of NF‐κB. This NF‐κB activation involves both phosphorylation and nuclear translocation of NF‐κB.