肿瘤坏死因子-β1通过诱导上皮-间质转化促进人膀胱癌T24细胞株的侵袭

目的:体外实验研究TGF-β1诱导人膀胱癌细胞T24发生上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制。方法:以人膀胱癌细胞T24作为研究对象,使用不同浓度TGF-β1干预24 h,光镜下观察T24细胞形态学变化;分别采用Real time-PCR（RT-PCR）和Western blot 法检测细胞中上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin mRNA 和总蛋白的表达。Transwell小室实验检测细胞的侵袭与迁移潜能。结果:TGF-β1可激活T24细胞的EMT程序,并上调Vimentin mRNA 和蛋白的表达水平和下调E-cadherin mRNA 和蛋白的表达水平。此外,TGF-β1可促进T24细胞体外侵袭潜能,而TGF-β1拮抗剂LY2109761可阻断这一过程。结论:EMT过程的激活参与了TGF-β1介导的人膀胱癌T24细胞的侵袭。     

TGF-β1诱导上皮间质转化过程中线粒体合成与功能的改变

目的：研究在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导上皮间质转化过程中线粒体合成与功能的改变。方法：体外培养人肺癌A549细胞,经不同浓度（0、2.5、5、10、20、40 ng/mL） TGF-β1处理24和48 h后观察其形态变化;采用CCK-8法检测经TGF-β1处理48 h后A549细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧（ROS）、线粒体活性氧及线粒体膜电位的变化;酶标仪检测ATP含量;Western blot分别检测细胞中上皮间质转化（EMT）相关标记物（E-cadherin和α-SMA）及线粒体合成相关蛋白（NRF-1及mt-TFA）的表达水平。结果：与对照组相比,随着TGF-β1浓度增加,A549细胞活力逐步上升,呈剂量-效应关系（r=0.941,P < 0.05）;5~20 ng/mL TGF-β1处理组凋亡率明显升高（P均 < 0.05）;不同浓度TGF-β1处理A549细胞48 h后大部分细胞呈现明显的间质细胞形态,出现上皮间质转化;Western blot结果显示,与对照组比较,经TGF-β1处理48 h后上皮标记物E-cadherin蛋白表达水平逐渐降低（P < 0.05）,间质标记物α-SMA表达水平逐渐升高（P < 0.05）;流式细胞术检测结果显示,5~20 ng/mL TGF-β1处理后细胞内ROS含量上升（P < 0.05）,线粒体活性氧上升（P < 0.05）,线粒体膜电位荧光强度下降（P < 0.05）,ATP含量降低（P < 0.05）,线粒体合成相关蛋白NRF-1和mt-TFA表达水平均下调（P均 < 0.05）。结论：TGF-β1诱导细胞发生上皮间质转化过程中线粒体的合成与功能受到影响,并由此促进了EMT的发生。     

TGF-β/Smad信号通路与食管癌上皮间质转化的研究进展

国内外的多项研究显示,在消化系统肿瘤中普遍存在上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)现象,并与浸润转移及预后差密切相关。已有研究发现转化生长因子-β(TGF-β)在诱发EMT过程中起重要作用,而Smads蛋白是TGF-β下游关键的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子。本文就食管癌上皮-间质转化与TGF-β/Smad信号通路关系的研究进展作一综述。     

miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响

目的 探讨 miR-711对胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）的影响。方法 通过脂质体瞬时转染法将 miR-711 过表达（miR-711 mimics）、miR-711抑制表达（miR-711 inhibitors）、miRNA 空质粒转染人胃癌细胞株MGC-803。以 miRNA 空质粒转染组作为阴性对照组（NC 组）,以空白转染组作为空白对照组（K组）。转染48 h后在荧光显微镜下观察转染效率,然后采用Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot实验检测上皮蛋白和间质蛋白表达量的变化。结果 Transwell侵袭实验结果显示：与阴性对照组穿膜细胞数（120.00±4.58）及空白对照组穿膜细胞数（119.67±5.13）分别比较,miR-711 mimics组穿膜细胞数（70.67±5.51）明显下降（P均<0.05）;划痕实验显示：划痕48 h,与阴性对照组细胞愈合率（32.52±1.73）%及空白对照组细胞愈合率（32.15±1.55）%分别比较,miR-711mimics组细胞愈合率（7.08±0.73）%明显下降（P均<0.05）;Western blot实验显示：miR-711 mimics组与阴性对照及空白对照组分别比较,上皮标志物（E-cadherin蛋白）相对蛋白表达量增多,差异有统计学意义（P均<0.05）;间质标志物（vimentin蛋白）相对蛋白表达量水平减少,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 过表达miR-711可抑制胃癌MGC-803细胞侵袭迁移及上皮间质转化的发生。     

沉默PD-L1基因表达抑制胃癌细胞黏附、迁移、侵袭及上皮间质转化

目的:初步探讨程序性死亡受体配体（programmed death-ligand 1,PD-L1）对胃癌细胞SGC7901侵袭、迁移的影响及PD-L1表达对上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调SGC7901细胞株中PD-L1的表达,采用RT-PCR法及Western blot法验证PD-L1的沉默,并将后续实验分为空白对照组、空载体组（siRNA-NC组）及PD-L1沉默组（siRNA-PD-L1组）。采用RT-PCR法及Western blot法分别对各组细胞EMT相关指标（E-cadherin、Vimentin、Snail）的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用MTT实验比较各组细胞的黏附能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力及侵袭能力。结果:下调PD-L1表达后,siRNA-PD-L1组Vimentin及Snail 两项指标的mRNA和蛋白表达量,细胞的黏附能力、迁移能力及侵袭能力均低于空白对照组和siRNA-NC组,E-cadherin mRNA和蛋白表达量高于其他两组,差异均具有统计学意义（P＜0.001）,而空白对照组和siRNA-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:PD-L1的表达影响胃癌细胞黏附、迁移、侵袭等生物学行为,促进胃癌细胞的上皮间质转化,与胃癌的预后可能存在相关性。     

miR-325-3p靶向CLDN1基因调控胃癌上皮间质转化和侵袭转移

目的 探讨miR-325-3p靶向CLDN1基因对胃癌上皮间质转化和侵袭转移的影响.方法 选取人胃黏膜上皮细胞株GES-1以及人胃癌细胞株HGC27、SGC-7901、MKN-45和MGC-803,并检测细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达.双荧光素酶报告实验验证miR-325-3p和CLDN1的靶向关系,干预...     

SPON1促进胆管癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨SPON1对胆管癌细胞迁移、侵袭能力和上皮间质转化的影响。方法:通过生物信息学和免疫组织化学分析SPON1的表达。将SPON1过表达质粒、SPON1敲低质粒和阴性对照质粒转入胆管癌细胞系(QBC939、HCCC-9810),通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;免疫印迹检测SPON1对胆管癌细胞中上皮间质转化相关蛋白表达的影响。结果:生信分析结果和免疫组化结果均提示SPON1在胆管癌组织中高表达(P<0.05);过表达SPON1能够有效增强胆管癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05);相反,沉默SPON1则抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05);SPON1通过上调Vimentin、下调E-cadherin促进胆管癌细胞上皮间质转化(P<0.05)。结论:SPON1在胆管癌中被上调,并促进胆管癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

上皮—间质转化与肿瘤侵袭转移关系的研究进展

上皮-间质转化（EMT）是指上皮细胞在特定的生理和病理情况下转化成有迁移能力的间质细胞的现象。近年来研究发现EMT与肿瘤的侵袭转移密切相关。生长因子、转录因子、microRNA等都可以参与各种信号通路来诱导或调控细胞发生EMT。本文就EMT现象及其与肿瘤侵袭转移的关系进行综述。     

STC1诱导上皮-间质转化促进肺癌细胞的侵袭和迁移

背景与目的：斯钙素1（stanniocalcin 1,STC1）与癌症的发展和不良预后相关,但STC1对肺癌细胞转移的影响及其作用机制目前还未完全阐明。探讨STC1对肺癌细胞侵袭和迁移的影响及其可能的内在分子机制。方法：构建STC1过表达的细胞系HLEC-STC1及对照细胞系HLEC-EV,STC1沉默的细胞系A549-STC1 siRNA及对照细胞系A549-EV;采用Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）标志物的mRNA和蛋白质水平变化;并使用细胞免疫荧光技术进一步验证细胞EMT标志物的表达和定位;采用Western blot检测EMT相关信号通路蛋白和转录因子的水平。结果：与对照细胞相比,过表达STC1的HLEC-STC1细胞的侵袭和迁移能力增强,STC1沉默的A549-STC1 siRNA细胞的侵袭和迁移能力减弱（P＜0.05）;过表达STC1的HLEC-STC1细胞中上皮标志物上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达下调,间质标志物神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及肿瘤干细胞标志物上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）表达上调（P＜0.05）;低表达STC1的A549-STC1 siRNA细胞中E-cadherin的表达上调,N-cadherin、vimentin及EpCAM的表达下调（P＜0.05）;同时,HLEC-STC1细胞中细胞外调节蛋白激酶信号通路（extracellular signal-regulated protein kinase,ERK）及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路激活相关的磷酸化（p）-ERK和β-catenin的水平升高,转录因子E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEB1）和锌指转录因子1（Snail1）的表达水平上调,A549-STC1 siRNA细胞中的结果则相反（P＜0.05）。结论：STC1可能通过激活ERK和Wnt/β-catenin信号通路上调转录因子ZEB1和Snail1的表达水平,从而诱导EMT促进肺癌细胞的侵袭和迁移。     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

TGF-β1通过诱导自噬促进胃癌SGC7901细胞侵袭

目的:探讨转化生长因子(TGF-β1)诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬的作用及其对细胞侵袭能力的影响.方法:将体外培养的人胃癌SGC7901细胞用不同浓度TGF-β1处理24 h,采用Western blot 法检测细胞中自噬标记蛋白LC3和Beclin1的表达水平.Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化.结果:TGF-β1可显著诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬,且随着浓度增加自噬表达水平逐渐升高.自噬抑制剂3-MA能够阻断TGF-β1诱导的自噬.此外,TGF-β1可显著增强人胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,而自噬抑制剂3-MA能够逆转这一过程.结论:TGF-β1通过诱导自噬发生从而促进人胃癌SGC7901细胞的侵袭.     

缺氧微环境下HIF-1α对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的:探讨缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对胰腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭迁移的影响。方法:首先比较缺氧和常氧培养的胰腺癌细胞形态和体外侵袭迁移能力,以及HIF-1α和EMT相关因子的表达水平。然后通过HIF-1α抑制剂YC-1和siRNA基因沉默分别从蛋白和mRNA水平抑制HIF-1α的表达,检测缺氧培养的胰腺癌细胞体外侵袭迁移能力,以及EMT相关基因的表达水平。结果:形态学和分子水平证实缺氧诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1的EMT改变,增强其体外侵袭和迁移能力。缺氧上调HIF-1α、Snail、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。抑制HIF-1α的表达后,Snail和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调,并且体外侵袭迁移能力降低。结论:HIF-1α介导EMT在缺氧促进胰腺癌细胞侵袭迁移中发挥重要作用。     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究

目的将雌激素受体ERβ1真核表达质粒转染到人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对E-cadherin、Vimentin等基因表达和细胞上皮间质转化的影响,探讨ERβ1在乳腺癌发生发展中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用实时荧光定量PCR、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达的变化;并用细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。所有数据以±s表示,多个样本均数间的比较用单因素方差分析,组间比较采用SNK法。细胞生长曲线变化采用重复测量方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、E-cadherin mRNA和蛋白水平明显增强（P〈0.010）,Vimentin mRNA水平明显减少（P〈0.010）,细胞增殖能力明显减弱。结论 ERβ1可能参与抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的上皮间质转化过程。     

YB-1调控上皮间质转化影响肿瘤的侵袭转移研究

上皮间质转化(EMT)是上皮细胞向间质细胞转化的现象,在肿瘤的发生发展尤其在肿瘤的侵袭转移方面发挥了重要作用。EMT的发生与多种因子相关,最近研究表明,YB-1通过作用于EMT相关转录因子,诱导细胞通路改变,以实现对EMT的调控。因此对YB-1调控EMT机制的研究,为发展新的治疗策略提供了重要信息。全文就YB-1在EMT发生中的作用及与肿瘤侵袭转移的关系等作一综述。     

隐丹参酮调节TGF-β1/Smad3介导的上皮间质转化对抑制前列腺癌小鼠肿瘤生长的影响

目的 探讨隐丹参酮调节转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路介导的上皮间质转化(EMT)对前列腺癌小鼠肿瘤生长的影响。方法 50只小鼠右侧腋皮下注射PC-3细胞悬液建立前列腺癌移植瘤小鼠模型,将造模成功的44只小鼠随机分为模型组(10只)、隐丹参酮低剂量组(12只)、隐丹参酮高剂量组(12只)和多西紫杉醇组(10只),另取10只作为正常组。隐丹参酮低和高剂量组小鼠分别腹腔注射隐丹参酮20和40 mg/kg, 1次/2 d,多西紫杉醇组小鼠腹腔注射多西紫杉醇0.25 mg/mL,1次/7 d,连续给药42 d。测定肿瘤体积和抑瘤率,ELISA检测血清中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和前列腺特异性抗原(PSA)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA),qRT-PCR法检测上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vimentin) mRNA水平,蛋白印迹法检测E-cad、N-cad、Vimentin、TGF-β1和p-Smad3蛋白相对表达量。结果 与模型组比较,隐丹参酮低、高剂量组和多西紫杉醇组肿瘤体积减小,IL-6、...     

Snail在TGF-β1诱导胃癌细胞MGC-803上皮间质转化中的作用

目的 探讨Snail在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803上皮细胞向间质细胞转化过程中的表达及其作用。方法 TGF-β1处理人胃癌细胞MGC-803不同时间(0 h,3 h,6 h,24 h,48 h,72 h),倒置显微镜观察细胞形态的变化,Western blot方法检测Snail蛋白及E-cadherin,Vimentin蛋白的表达情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 (1)随着TGF-β1作用时间的延长,MGC-803细胞形态发生变化,伪足不同程度的增多;(2)在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞MGC-803均不同程度地表达Snail和E-cadherin,Snail从0 h到6 h表达量增强,到6 h时达到最高。E-cadherin蛋白从0 h到6 h表达逐渐增高,6 h时最高,后续变化不明显。Vimentin蛋白6 h表达量最低,此后逐渐升高,72 h时表达量最高;(3)Transwell小室实验显示6 h时,细胞开始穿过ECM膜,随着时间的延长,穿过的细胞逐渐增多,72 h最多。结论 在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803细胞EMT的过程中,Snail蛋白起到重要作用,启动Vimentin转录表达。     

上皮间质转化与肝细胞生长因子受体在胃癌转移过程中的作用研究进展

胃癌的复发、转移及侵袭是影响患者病死率的重要原因。然而上皮间质转化（EMT）是胃癌细胞获得迁移、侵袭能力的重要途径。最近研究表明,肝细胞生长因子受体（c-met）对胃癌细胞 EMT 的调控在胃癌的复发转移过程中可能发挥重要的作用。本文就 c-met 调控 EMT 在胃癌复发转移机制中的研究进展作一综述。     

信号通路调控上皮间质转化参与肿瘤侵袭转移的分子机制

上皮间质转化（EMT）是上皮细胞向间充质细胞分化的过程,EMT在恶性肿瘤的侵袭转移中广泛存在。EMT的发生与多种细胞因子、信号转导通路及转录因子有关,受多种影响因素的共同调控。上皮细胞表型的不同程度转化是细胞内外信号传递共同作用的结果。细胞外信号通过与细胞表面特异性受体相结合将信号转入细胞内,再通过胞内的信号转导途径,活化不同的核内转导因子,最终调节转导基因的表达。