青蒿素通过线粒体途径诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制研究

目的探讨青蒿素能否通过激活人肝癌细胞HepG2的线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡。方法不同浓度青蒿素与人肝癌细胞HepG2共培养24 h,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测HepG2细胞周期与凋亡,Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态,Western blot检测HepG2细胞内线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9和细胞色素C(Cytochrame,Cyto-C)表达水平。结果与对照组相比,青蒿素作用HepG2细胞24 h后,细胞增殖明显受到抑制,差异有统计学意义(P0.05)。0.2、0.4和0.8 mmol/L青蒿素给药组,细胞G_2/M期比例明显升高(P0.05),细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂凋亡形态,细胞凋亡比例升高,上述差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,青蒿素作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Caspase-3、Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高,上述差异均有统计学意义(P0.05)。结论青蒿素对HepG2细胞增殖具有抑制作用并能诱发细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径相关,使细胞周期阻滞于G_2/M期。     

牡荆素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制的影响

目的: 研究牡荆素(vitexin)对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用, 并初步探讨其作用机制。方法: 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721, 分别采用MTT法和Hoechst33258核染色法检测牡荆素对人肝癌细胞SMMC-7721活力的影响以及观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm) 变化;蛋白免疫印迹法检测p53、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白水平的表达情况。结果: 牡荆素培养人肝癌细胞SMMC-7721 48, 72, 96 h后能明显抑制细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性(P<0.05), 其IC₅₀分别是150.37, 116.24, 90.19 μmol·L^-1。牡荆素作用于人肝癌细胞SMMC-7721 72 h后, 以浓度依赖性方式增加细胞凋亡率、降低线粒体膜电位(ΔΨm) 以及上调p53、Bax、Caspase-3等相关促凋亡蛋白的表达, 下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论: 牡荆素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖诱导凋亡, 呈时间-剂量依赖性, 其作用机制可能通过依赖P53途径下调Bcl-2, 上调Casepase-3、Bax、P53、PARP等基因表达, 进而诱导凋亡有关。     

美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402作用机制的研究

目的探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402的作用机制。方法 MTT比色法观察美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染色法研究美洲大蠊提取物对人肝癌细胞Bel-7402凋亡的影响,流式细胞术检测线粒体膜电位,DNA Ladder实验检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达。结果美洲大蠊提取物可抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖,IC50为28.2μg.mL 1,并可诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡,降低线粒体膜电位。DNA Ladder实验可见明显的梯形电泳图谱,蛋白印迹法显示Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,Caspase-8蛋白表达无明显变化。结论美洲大蠊提取物可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡。     

高脂通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞损伤

目的探讨高脂通过线粒体凋亡通路对H9c2心肌细胞的损伤作用。方法棕榈酸(0～0.4 mmol·L~(-1))刺激H9c2心肌细胞24 h和0.2 mmol·L~(-1)棕榈酸刺激H9c2心肌细胞(0～48 h);MTT法评估细胞生长状态;活性氧试剂盒检测细胞内活性氧水平;凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;线粒体膜电位试剂盒检测线粒体膜电位变化;免疫印迹法检测细胞内线粒体凋亡相关蛋白Cyt-C、Cleaved casepase-3、Bax、Bcl-2表达水平。结果棕榈酸刺激H9c2心肌细胞24 h,棕榈酸0.2、0.4 mmol·L~(-1)组细胞增殖率均出现明显下降;细胞内活性氧水平逐渐升高,线粒体膜电位下降,细胞凋亡增加。棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))刺激H9c2心肌细胞24、36、48 h均引起细胞增殖率明显下降。棕榈酸(0.4 mmol·L~(-1))刺激H9c2心肌24 h,线粒体相关蛋白Cyt-C、Cleaved casepase-3、Bax表达均明显增高(P <0. 05),而Bcl-2明显降低(P <0. 05)。结论线粒体凋亡信号通路可能对高脂所致H9c2心肌细胞损伤起重要作用。     

吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物诱导食管癌细胞凋亡与Bax和Bcl-2的关系

目的 研究吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物(Ls-17)对人食管癌细胞(Eca-109)的凋亡诱导作用及对细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 MTT法检测Ls-17对Eca-109细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期分布变化及线粒体膜电位的改变,caspase活性法检测caspase-3和9的变化,Western blot法分析Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 Ls-17对Eca-109细胞增殖抑制的IC50值为25.12 mg·L-1,使细胞周期阻滞在G2/M期而导致细胞凋亡;能降低线粒体膜电位水平并激活caspase-3和9,使Bax/Bcl-2的比值增大.结论 Ls-17能够抑制Eca-109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2的表达,使Bax/Bcl-2的比值升高有关.     

洛铂在膀胱癌细胞中的抗肿瘤作用及通过PI3K/AKT信号通路促进凋亡的机制研究

目的研究洛铂在人类膀胱癌细胞中的抗肿瘤作用及促进其凋亡的相关分子机制。方法体外实验:Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测洛铂对T24细胞增殖的影响;划痕实验检测洛铂对迁移的影响;Annexin V-FITC/PI双染色,通过流式细胞仪检测细胞的凋亡程度;蛋白免疫印迹法(WB)检测洛铂对凋亡相关蛋白表达的影响。体内实验:选取BALB/c裸鼠建立膀胱癌细胞皮下异种转移瘤模型,观察洛铂对肿瘤生长的影响;免疫组织化学检测观察相关凋亡蛋白的表达。结果体外实验:洛铂能够抑制膀胱癌细胞T24的增殖,抑制其迁移,同时促进其凋亡,凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Cleaved-Caspase-3/Caspase-3升高,PI3K/AKT信号通路中PI3K表达减少,P-Akt/Akt降低。体内实验:洛铂给药组裸鼠转移瘤体积小于对照组且差异有统计学意义,免疫组织化学结果显示洛铂给药组凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Cleaved-Caspase-3表达增加。结论洛铂在膀胱癌细胞中具有抗肿瘤作用,可能是通过PI3K/AKT信号通路发挥促凋亡作用。     

N-4-(二氯乙基)丁胺-1,8-萘酰亚胺对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制研究北大核心CSCD

目的体外评价N-4-(二氯乙基)丁胺-1,8-萘酰亚胺(XHH)对Hep G2细胞的抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,高内涵筛选分析仪结合Annexin V-FITC/Hoechst33342,PI/Hoechst33342和Rh123/Hoechst33342双染色法检测细胞形态及膜电位;免疫荧光法检测caspase-3,caspase-9,Bcl-2,Bax的表达水平。结果 XHH能抑制Hep G2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,提高Bax/Bcl-2,使caspase-3,caspase-9表达增加。结论 XHH具有较好的抗Hep G2肿瘤细胞作用,可通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

葫芦素B抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖机制的初步研究

目的研究葫芦素B对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响及其作用的分子机制。方法通过MTT法检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞增殖的影响,流式细胞仪检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞凋亡和生理水平上活性氧含量、线粒体膜电位的影响。Hoechst 33258染色检测药物处理前后细胞形态的变化。Westernblot检测葫芦素B处理SH-SY5Y细胞24 h前后Bcl-2、Bax、p21、p53等蛋白合成的变化。结果实验浓度范围内,葫芦素B可时间与浓度依赖性地抑制SH-SY5Y细胞增殖;浓度依赖性地诱导SH-SY5Y细胞凋亡、活性氧水平升高和线粒体膜去极化;在蛋白水平上,葫芦素B能诱导凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax、p21、p53上调。结论葫芦素B在体外能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,这一影响可能通过诱导细胞凋亡、ROS积累、线粒体膜去极化及其相关蛋白表达变化来实现。     

二氢杨梅素诱导凋亡增敏顺铂抗肺癌A549细胞的研究

目的：探讨二氢杨梅素（dihydromyricetin,DMY）增强肺癌A549细胞对顺铂化疗敏感性的作用及机制,为肺癌减毒增敏治疗提供新思路。方法：体外培养A549细胞,分组（对照组、顺铂组、DMY组、顺铂+DMY组）干预细胞;倒置显微镜观察细胞生长状态;CCK-8检测各组细胞增殖情况;流式细胞术AV/PI双染检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白Parp、cleaved Parp、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2表达水平。结果：DMY联合顺铂对细胞的抑制作用显著高于单独应用DMY或顺铂组;流式细胞术AV/PI双染显示联合组的凋亡率显著高于单独用药组;蛋白印记结果显示联合组与单独用药组或与对照组比较总Parp及caspase-3蛋白表达显著降低,cleaved Parp及cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,Bax蛋白水平升高的同时Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值显著升高。结论：DMY可以增强顺铂对A549细胞的治疗作用,其机制可能与抑制Parp表达介导的线粒体凋亡有关。     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。     

石榴皮多酚对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨石榴皮多酚对前列腺癌PC-3细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法测定不同质量浓度组石榴皮多酚作用不同时间对PC-3细胞生长的影响,应用流式细胞仪检测石榴皮多酚作用72h后PC-3细胞的周期时相变化及凋亡情况。结果石榴皮多酚明显抑制PC-3细胞的生长,抑制效应呈时间依赖型和浓度依赖型。流式细胞仪检测结果显示,石榴皮多酚可将PC-3细胞阻滞于G1期,并诱导PC-3细胞凋亡。结论石榴皮多酚在体外对前列腺癌PC-3细胞株有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用。     

积雪草酸联合奥沙利铂对结肠癌HCT116细胞凋亡、自噬和焦亡的调控作用研究

目的:探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)联合奥沙利铂(oxaliplatin,OXP)对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、自噬和焦亡的调控作用.方法:采用CCK8法检测AA、OXP、AA与OXP联用对HCT116细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;JC-1染...     

石蒜碱诱导H22荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的活性及机制研究

目的:探讨石蒜碱诱导H₂₂荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的活性及其机制。方法:以昆明种小鼠为对象,通过前肢腋部皮下接种H₂₂肝癌小鼠腹水构建小鼠实体瘤模型,将造模后的小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组(羟基喜树碱6 mg/kg)和石蒜碱低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg),每组10只。阴性对照组小鼠灌胃等体积生理盐水,各给药组小鼠灌胃相应药物,每天1次,连续给药7天。末次给药后,检测小鼠的瘤体质量并计算抑瘤率。另通过腹腔注射H₂₂肝癌小鼠腹水构建小鼠腹水瘤模型,同法分组、给药。末次给药后,记录小鼠的生存时间并计算生存延长率,采用流式细胞术检测小鼠肿瘤细胞的早期凋亡率;在设立正常对照组(未荷瘤正常小鼠)的基础上,采用荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯染色法考察各组小鼠肿瘤细胞的线粒体膜通透性,采用Rhodamine 123染色法考察其线粒体电位变化,采用比色法和Western blot法分别检测其胱天蛋白酶3(Caspase-3)活性和凋亡相关蛋白[Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)、Caspase-9]的表达情况。结果:与阴性对照组比较,阳性对照组和石蒜碱各剂量组小鼠瘤体质量均显著降低,生存时间均显著延长,肿瘤细胞的早期凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01);其抑瘤率分别为39.41%、23.36%、36.50%、56.93%,生命延长率分别为49.23%、29.09%、50.19%、69.08%。与正常对照组比较,阴性对照组小鼠肿瘤细胞线粒体膜通透性、Caspase-3蛋白活性以及Cyt-C、Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高,线粒体膜电位、Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组比较,各药物组小鼠肿瘤细胞线粒体膜通透性和Bcl-2/Bax比值均显著降低,线粒体通透性、Caspase-3蛋白活性和Cyt-C、Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:石蒜碱可诱导H₂₂荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡,这种作用可能与其开放线粒体膜通透性转换孔以增加线粒体通透性、降低线粒体膜电位、诱导凋亡相关蛋白表达上调有关。     

PD-1免疫检查点与膀胱癌灌注药物疗效的研究

目的:探讨PD-1免疫检查点在膀胱癌灌注药物疗效中的作用。方法:常规传代培养人膀胱癌T24细胞,取处于生长对数期的细胞,将其分为对照组、吉西他滨组、吉西他滨+Durvalumab组。采用定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Caspase-3基因的表达。采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测Caspase-3蛋白的表达。采用膜联蛋白V调往检测试剂(AnnexinV-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡。采用细胞代谢活性比色法(MTT)检测细胞增殖能力。结果:吉西他滨+Durvalumab组Caspase-3基因的表达水平明显高于吉西他滨组和对照组,且对照组最低;吉西他滨+Durvalumab组Caspase-3蛋白的表达水平明显高于吉西他滨组和对照组,且吉西他滨组与对照组相近;吉西他滨组和吉西他滨+Durvalumab组与对照组相比细胞增殖水平明显降低,且吉西他滨+Durvalumab组为最低;吉西他滨+Durvalumab组凋亡表达水平明显高于吉西他滨组和对照组,而对照组与吉西他滨组比较差异无统计学意义。结论:PD-1主要在各种水平的活化T细胞表面表达,对提升膀胱癌治疗效果具有重要意义。     

壁虎粗多肽对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的研究壁虎粗多肽(GCPs)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、凋亡能力的影响。方法用不同浓度GCPs(0,0.08,0.12,0.16,0.20,0.24,0.32 mg·mL^-1)分别处理SH-SY5Y细胞24,48,72 h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞增殖能力的变化,根据MTT结果分组。将SH-SY5Y细胞分为空白组和低、中、高剂量实验组(GCPs:0,0.12,0.16,0.20 mg·mL^-1)。用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡率,用Hoechst 33258荧光染色检测细胞核变化,用蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9蛋白的表达水平。结果GCPs作用SH-SY5Y细胞24,48,72 h的半数抑制浓度(IC₅₀)值分别为(0.23±0.01),(0.20±0.01)和(0.17±0.01)mg·mL^-1。空白组和低、中、高剂量实验组的细胞凋亡率分别为(10.21±0.73)%,(20.93±2.07)%,(32.90±1.07)%和(57.71±8.51)%,低、中、高剂量实验组的凋亡率与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在荧光显微镜下观察,低、中、高剂量实验组蓝色荧光分布不均,细胞核缩小,有较强荧光团出现。空白组和低、中、高剂量实验组的Caspase-3与GAPDH灰度值比值分别为0.25±0.05,0.43±0.06,0.52±0.07和0.59±0.06,低、中、高剂量实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);Caspase-9与GAPDH灰度值比值分别为0.17±0.01,0.19±0.02,0.23±0.02和0.26±0.02,高剂量实验组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论GCPs可抑制SH-SY5Y细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与激活Caspase凋亡途径相关。     

槲皮素对人胃癌MKN45细胞的抑制作用研究

目的探讨槲皮素对人胃癌MKN45细胞凋亡的影响及其作用机制。方法取对数生长期的MKN45细胞分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组。应用MTT比色法测定细胞活性,Hoechst染色、流式细胞技术检测细胞凋亡,比色法检测凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达。结果槲皮素能显著抑制MKN45细胞增殖,促进细胞凋亡,升高Caspase-3、Caspase-9基因表达水平。结论槲皮素可通过增强Caspase-3、Caspase-9基因表达诱导人胃癌MKN45细胞凋亡。     

降低Raf1表达促进膀胱癌T24细胞凋亡的研究

目的 下调T24膀胱癌细胞株中Raf1的表达,观察癌细胞株的细胞凋亡情况.方法 使用SiRNA干扰方法阻断Raf1在T24膀胱癌细胞株中的表达,随后用流式细胞仪观察细胞凋亡情况,使用westem-blot法确认细胞凋亡途径.结果 使用SiRNA干扰后Raf1表达显著降低,随之凋亡细胞数量明显增高,western-blot法确认Raf1表达降低后Caspase-3和PARP蛋白被激活.结论 Raf1表达抑制促使T24细胞凋亡,其凋亡通路是通过Caspase-3和PARP途径,此研究可能对膀胱癌的治疗提供新思路.     

玛卡多糖抗非小细胞肺癌作用及其机制

目的:探讨玛卡多糖抗非小细胞肺癌作用及其机制.方法:采用一定浓度的玛卡多糖处理非小细胞肺癌A549细胞,CCK-8法、划痕实验和Transwell小室检测玛卡多糖对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响;流式细胞术检测玛卡多糖对A549细胞周期和凋亡的影响;实时荧光定量PCR和Western Blot法检测细胞周期和凋亡相...     

半枝莲黄酮对复合Aβ所致大鼠皮层细胞凋亡抑制作用及线粒体凋亡通路的调节机制

目的:探讨半枝莲黄酮(SBF)对淀粉样蛋白25-35(Aβ_25-35)联合三氯化铝(AlCl₃)和人类重组转移因子-β1(RHTGF-β1)(复合Aβ)所致大鼠皮层细胞凋亡及线粒体凋亡通路中细胞色素-C及其下游凋亡因子Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的调节机制。方法:雄性SD大鼠,脑室注射复合Aβ建立记忆障碍模型,术后第45天进行记忆障碍模型筛选,模型成功大鼠随机分为模型对照组和SBF 35,70,140 mg·kg^-1剂量组。SBF药物组大鼠连续灌胃给药36 d,模型和假手术组连续灌胃生理盐水36 d。吉姆萨染色(Giemsa)法检测皮层细胞凋亡情况;RT-PCR法检测皮层细胞胞液中细胞色素-C(Cyt-C)、凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA水平;Western blotting检测皮层细胞胞液中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白水平。结果:大鼠脑室注射复合Aβ能够引起大鼠皮层细胞凋亡,伴随着胞液中Cyt-C、Apaf-1和Caspase-9 mRNA及Caspase-3蛋白表达的增加。而SBF可显著抑制复合Aβ所致大鼠皮层细胞凋亡、逆转胞液中Cyt-C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3表达的增加(P<0.01)。结论:SBF通过减少线粒体对Cyt-C的释放及逆转Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的表达抑制复合Aβ所致大鼠皮层细胞凋亡。