高乌头“毒性”部位及镇痛抗炎“药效”部位的筛选

目的：筛选高乌头的毒性及药效部位,探讨毒性与药效的关系,为高乌头"减毒存效"合理炮制提供科学依据。方法：采用小鼠急性毒性实验比较不同溶剂萃取部分的毒性,筛选高乌头的"毒性"部位,以热板法、扭体法及二甲苯致鼠耳肿胀实验考察不同剂量高乌头"毒性"部分对小鼠的镇痛抗炎作用。结果：高乌头不同溶剂萃取部分急性毒性强度差别较大,三氯甲烷部分的毒性最强,水提及正丁醇部分次之,LD₅₀分别为89.65,1 805.40,24 409.41 mg·kg^-1;石油醚、乙酸乙酯及乙醇部分毒性最小,最大给药量分别为2 686.01,3 108.13,28 376.21 mg·kg^-1。给药后120 min,1.5,4.5 mg·kg^-1的高乌头三氯甲烷部分均能提高小鼠热板痛阈值,且呈量效关系,镇痛作用优于1.6 mg·kg^-1氢溴酸高乌甲素组。注射乙酸15 min后,1.5,4.5 mg·kg^-1的高乌头三氯甲烷部分均能有效抑制乙酸所致小鼠的扭体次数,且呈量效关系,抑制率略低于1.6 mg·kg^-1氢溴酸高乌甲素组。在二甲苯致鼠耳肿胀实验中,1.5,4.5 mg·kg^-1的高乌头三氯甲烷部分均能有效缓解小鼠耳肿胀度,且呈量效关系,肿胀抑制率略低于1.6 mg·kg^-1消炎痛组。结论：高乌头三氯甲烷部分既是其毒性部位,又是其镇痛抗炎的主要药效部位,且呈量效关系,推测其镇痛抗炎活性与毒性存在一定的关联。     

橘红素自微乳给药系统的制备及体内吸收研究

目的：设计和优化橘红素自微乳给药系统,改善药物的溶解及吸收,提高橘红素的口服生物利用度。方法：通过考察自微乳的粒径与粒径分布、乳化速度、Zeta电位、外观等指标,筛选并优化橘红素自微乳给药系统的处方,利用MDCK模型测定自微乳给药系统的体外吸收转运行为,并评价该给药系统在大鼠体内的药动学特性。结果：MDCK实验证实橘红素自微乳给药系统能够提高橘红素的吸收和转运,在SD大鼠体内的药动学结果表明橘红素的AUC_（0-∞）由（3 491.77±404.06）μg·L^-1·h提高至（9 435.18±1 633.81）μg·L^-1·h（P<0.01）,C_max由（1 211.39±382.73）μg·L^-1·h提高至（2 371.73±481.87）μg·L^-1·h（P<0.05）。结论：制备出稳定的橘红素自乳化给药系统,体外溶出速度显著提高,从而有效提高橘红素的生物利用度。     

基于行为绝望模型柴当薄组抗抑郁有效部位筛选研究

目的：观察柴当薄组(CDB)各极性溶剂提取部位对行为绝望模型小鼠的影响,获得其抗抑郁效应良好的提取部位,并开展该部位小鼠急性毒性试验以初步确定其安全性。方法：采用极性梯度萃取法分别获得CDB水煎液与醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位,合计6个CDB提取部位,以21.9 g·kg^-1连续灌胃给药14 d,采用小鼠悬尾试验(TST)和小鼠强迫游泳试验(FST)观察6个CDB提取部位对小鼠不动时间的影响,筛选出CDB抗抑郁有效部位。其次,开展CDB醇提石油醚部位的小鼠半数致死量(LD₅₀)及醇提乙酸乙酯部位小鼠最大耐受量(MTD)测定。结果：21.9 g·kg^-1的CDB醇提石油醚部位及醇提乙酸乙酯部位均能显著缩短TST及FST中的不动时间,且不影响小鼠自主活动;而CDB水煎液的3个极性提取部位及醇提物的正丁醇部位作用不明显。CDB醇提石油醚部位小鼠灌胃给药的LD₅₀为851.4g·kg^-1,约临床日用剂量的1554倍;醇提乙酸乙酯部位小鼠灌胃的MTD为394.2 g·kg...     

不同来源甲硫氨酸维B1注射剂体外细胞毒性的比较与分析

目的：比较不同来源甲硫氨酸维B₁注射剂体外细胞毒性的差别并寻找差别形成的主要原因。方法：将不同来源甲硫氨酸维B₁注射剂不同浓度的稀释液与小鼠成纤维细胞L-929接触培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）量化细胞毒性,计算相对增殖率,并进行细胞毒性评价。建立甲硫氨酸维B₁注射剂中枸橼酸含量的高效液相色谱检测方法,考察枸橼酸含量与制剂细胞毒性的相关性。结果：7个生产厂家的甲硫氨酸维B₁注射液细胞毒性无明显差别。12个生产厂家的注射用甲硫氨酸维B₁中有11个厂家的样品不同浓度组对L-929的细胞毒性级别为1级或2级。但J厂家的注射用甲硫氨酸维B₁样品（20 mg·mL^-1和10 mg·mL^-1）对L-929的细胞毒性级别为4级,表现为重度毒性。枸橼酸质量浓度3,1.5,0.75 mg·mL^-1的相对增殖率分别为7%、45%、74%,而对应的含等量枸橼酸的制剂浓度（以甲硫氨酸计）20,10,5 mg·mL^-1的相对增殖率分别为6%、28%、53%,细胞毒性试验结果吻合。结论：不同厂家生产的甲硫氨酸维B₁注射剂由于处方工艺不同等,其细胞毒性存在差别。枸橼酸作为注射剂的常用辅料,在高于0.188 mg·mL^-1的浓度下存在细胞毒性,枸橼酸含量与细胞毒性呈正相关性,J厂家样品的重度细胞毒性可能主要源于过高浓度的辅料枸橼酸。建议生产厂家降低枸橼酸添加量,以减少制剂的细胞毒性,提高药品的安全性。     

金茵清热口服液对甲型H1N1流感病毒致细胞病变效应的影响

目的：研究金茵清热口服液（试药）抑制甲型H1N1流感病毒的作用及其对喉癌上皮细胞（Hep-2细胞）免疫机能的影响。方法：甲型H1N1流感病毒感染狗肾细胞（MDCK细胞）和Hep-2细胞后,给予不同浓度的试药。显微镜观察细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,MTT法检测细胞活性,荧光定量PCR（qRT-PCR）检测试药作用于Hep-2细胞后细胞因子（TNF-α,IFN-1α,IFN-1β,IL-1α和IL-6）mRNA的水平。结果：实验细胞感染病毒后用试药处理,当试药质量浓度为3 mg·mL^-1时,MDCK细胞存活率提高了61.6%;试药质量浓度为4 mg·mL^-1时,Hep-2细胞存活率提高了40.6%,显著高于药物空白组细胞的存活率（P<0.05）。同时,试药显著上调Hep-2细胞的TNF-α（2.39倍）和IFN-1α（1.98倍）水平,下调炎症因子IL-1α（90%）和IL-6（64%）水平（P<0.05）,而IFN-1β水平的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：金茵清热口服液可以显著提高染毒细胞的存活率,并能显著上调Hep-2细胞抗病毒免疫分子,同时抑制炎症反应,推测金茵清热口服液调节细胞免疫应答可能是其抗流感病毒作用机制之一。     

麻黄根抗高血压活性部位药理筛选研究

目的 筛选麻黄根抗高血压的活性部位. 方法 自发性高血压大鼠（SHR）56只随机分为空白对照组、阳性对照组（给予复方罗布麻片水溶液）、总提物组（给予麻黄根乙醇提取物）、石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水液组.灌胃给药后检测受试大鼠的收缩压和舒张压. 结果 乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组与空白对照组比较差异有显著性（P< 0.05）.与阳性对照组比较, 乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组的舒张压差异无显著性, 而三者之间收缩压差异有显著性（P< 0.05）, 乙酸乙酯部位、正丁醇部位对SHR舒张压的作用与阳性对照药的药效相当, 而对收缩压的作用不及阳性对照药.乙酸乙酯部位组与正丁醇部位组抗高血压活性相当, 差异无显著性.结论 乙酸乙酯部位、正丁醇部位均为麻黄根抗高血压作用活性部位.     

松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用研究

目的 观察松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用.方法 接种甲型流感病毒于狗肾传代细胞(MDCK),评价松针叶绿素-胡萝卜素软膏的细胞毒性及体外抗病毒作用.结果 松针叶绿素-胡萝卜素软膏对MDCK细胞的半数中毒浓度(TC50)为56 μg· mL-1,治疗和预防给药方式均有抗甲型流感病毒作用,半数抑制浓度(IC50)分别为30、29μg·mL-1,治疗指数(TI)均为1.9.结论 松针叶绿素-胡萝卜素软膏具有明显的抗流感病毒作用,且在安全浓度范围内呈现一定的量效关系,浓度越高抗病毒作用增强.     

不同剂量盐酸氨溴索对美罗培南在小鼠肺部浓度的影响

目的：探讨不同剂量盐酸氨溴索与美罗培南联合用药时,盐酸氨溴索对美罗培南在小鼠肺组织分布的药动学影响。方法：将198只小鼠随机分为3组,即对照组、低剂量组与高剂量组。实验用药均采用尾静脉给药方式,低、高剂量组分别给予不同剂量盐酸氨溴索（9 mg·kg^-1、45 mg·kg^-1）,对照组则给予等量生理盐水。随后3组实验动物均给予等量注射用美罗培南（75 mg·kg^-1）。于给药后不同时间点摘眼球放血,并取肺组织制备为组织匀浆样品。采用LC-MS/MS法测定肺组织匀浆样品中美罗培南的浓度,DAS 2.1.1软件拟合药动学参数,SPSS软件进行统计学差异分析。结果：3组间的药动学参数AUC_0-t、AUC_0-∞、t_1/2、t_max、CL、V、C_max均无显著性差异（P>0.05）。结论：不同剂量盐酸氨溴索与美罗培南合用后,对小鼠肺组织中美罗培南分布无影响。     

高效液相色谱串联质谱法分析穴位注射川芎嗪治疗缺血性脑中风的优势

目的：建立高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定大脑中动脉栓塞（MCAO）所致脑缺血模型大鼠血浆及脑组织中川芎嗪的含量,并与静脉注射以及肌内注射比较,分析穴位注射如何发挥治疗缺血性脑中风的显著优势。方法：以甲醇提取血浆及脑组织样品,咖啡因为内标,色谱柱Hedera ODS-2C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（80：20）;流速1.0 mL·min^-1;柱温30℃;采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测模式（MRM）,正离子扫描测定样品中川芎嗪的质量浓度,数据运用SPSS 22.0软件分析。结果：大鼠血浆及脑组织中川芎嗪的线性范围为0.04~25.00 μg·mL^-1（r=0.999 5）,定量下限是0.04 μg·mL^-1。日内与日间精密度RSD均小于10%,提取回收率高于90%,且稳定性良好,无基质效应。3种不同给药方式下,大鼠足三里穴位注射给药后脑组织中川芎嗪含量最高。结论：该方法可靠准确、灵敏度高、特异性强,可用于大鼠血浆及脑组织中川芎嗪的含量测定,穴位注射相比其他给药方式可以促进药物在脑组织中的分布同时适当提高药物的吸收,结合针灸治疗的特点,发挥放大药物效应的优势。     

香雪抗病毒口服液体外抗甲型流感病毒及炎症因子的作用机制研究

目的 探讨香雪抗病毒口服液对甲型流感病毒的活性及其在炎症免疫应答中的潜在作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）染色法检测香雪抗病毒口服液对MDCK细胞和A549细胞的细胞毒性作用。采用细胞病变抑制法（CPE）及空斑减少实验对香雪抗病毒口服液进行抗病毒活性检测。采用免疫荧光法检测NP蛋白。实时荧光定量PCR测定炎症细胞因子的表达情况。采用蛋白印迹实验检测香雪抗病毒口服液对炎症相关信号通路的蛋白表达的影响。结果 香雪抗病毒口服液对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)和A/Aichi/2/68(H3N2)均有一定的抗病毒抑制作用,半数细胞毒性浓度（TC50）分别为42.12、79.36 mg/mL,半数抑制浓度（IC50）分别为8.665、5.260 mg/mL,并可减少H1N1病毒空斑形成。香雪抗病毒口服液能呈剂量相关性地降低H1N1诱导的A549细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、视黄酸（维甲酸）诱导基因蛋白I(RIGI)、趋化因子（CC基序）配体5(CCL5)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、白细胞介素-10(IL-10)、λ干扰...     

蒲公英有机萃取物的抗甲型H1N1流感病毒作用

目的 通过检测蒲公英不同的萃取物体外抗甲型H1N1流感病毒作用,探讨其在甲型H1N1流感治疗上的应用。方法 首先用乙醇萃取而得到蒲公英的乙醇萃取物,然后依次采用乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、水萃取蒲公英的乙醇萃取物,得到不同溶剂的萃取物;选用狗肾传代MDCK细胞作为病毒的宿主对病毒进行培养和扩增;通过血凝效价和Real time RT-PCR实验,间接或直接检测蒲公英不同萃取物对病毒的中和作用和增殖抑制作用。结果 4种不同溶剂的蒲公英萃取物作用病毒后,只有石油醚、乙酸乙酯组的血凝效价数值出现了一定程度的下降,其中乙酸乙酯萃取物组的值下降了2~4倍;而石油醚萃取物在96 h时,中和实验组和增殖抑制组的血凝效价值分别下降了256倍和128倍。Real time RT-PCR检测表明,石油醚和乙酸乙酯萃取物明显抑制病毒的扩增量。作用96 h时,无论是中和实验还是增殖抑制实验,石油醚萃取物的作用都是最显著的,病毒扩增率较阳性对照分别减少了92.4%和95.6%。结论 蒲公英乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物在体外有明显的抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抗甲型流感病毒的作用研究

目的初步探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抗甲型流感病毒的活性及其作用机制。方法采用H5N1假病毒检测体系,观察EGCG对A/Thailand/Kan353/2004H5N1毒株假病毒的抑制作用;采用神经氨酸酶抑制实验进一步分析其作用机制;采用H1N1 FM_1病毒检测体系,根据药物与病毒、细胞的不同作用,通过两种给药方式,评估EGCG对甲型流感病毒FM_1的抑制作用。结果 EGCG能特异性的抑制H5N1假病毒的进入,IC50为145.10μmol.L-1;EGCG对神经氨酸酶具有抑制作用,IC50为417.20μmol.L-1,EGCG对预防和治疗给药方式均有一定的抑制作用,其IC50分别为6.88μmol.L-1和14.83μmol.L-1,治疗指数分别为58.02和26.92。结论 EGCG在体外具有明显的抗甲型流感病毒作用,其作用机制包括抑制病毒的进入和神经氨酸酶活性。     

三七皂苷R1的现代研究进展

为开发利用三七中指标性成分,对三七皂苷R₁的提取与检测方法以及药理作用进行了阐述,揭示了三七皂苷R₁对心血管系统、中枢神经系统、免疫系统均有影响,三七具有抗炎、抗癌、改善微循环、防治缺血再灌注损伤等作用。     

Patchouli alcohol: in vitro direct anti-influenza virus sesquiterpene in <Emphasis Type="Italic">Pogostemon cablin</Emphasis> Benth.

During the screening of anti-influenza virus substances from traditional herbal medicines, the methanol extract from the leaves of Pogostemon cablin Benth. showed potent in vitro antiviral activity (99.8% inhibition at a concentration of 10 μg/mL) against influenza virus A/PR/8/34 (H1N1). The anti-influenza virus principle was isolated from the hexane-soluble fraction, through solvent fractionation, repeated silica gel column chromatography, and reversed-phase HPLC. The major active principle was a volatile substance that was identified as a sesquiterpene, patchouli alcohol (1), on the basis of its spectral analyses. When anti-influenza virus activity against A/PR/8/34 was evaluated by the plaque forming assay, patchouli alcohol reduced the number of plaques by 75% at 2 μg/mL and 89% at 10 μg/mL. Patchouli alcohol showed dose-dependent anti-influenza virus activity, and its IC₅₀ value was estimated to be 2.635 μM. Although 11 different sesquiterpenes were tested for antiviral activity against influenza virus A/PR/8/34, no or negligible activity was observed except for patchouli alcohol. Patchouli alcohol did not show anti-influenza virus activity against A/Guizhou/54/89 (H3N2), but showed weak activity against B/Ibaraki/2/85 (IC₅₀ = 40.82 μM). Patchouli alcohol did not show inhibitory activity against influenza virus neuraminidase.     

Anti-influenza virus activity of Ginkgo biloba leaf extracts

We examined the influence of Ginkgo biloba leaf extract (EGb) on the infectivity of influenza viruses in Madin–Darby canine kidney (MDCK) cells. Plaque assays demonstrated that multiplication of influenza viruses after adsorption to host cells was not affected in the agarose overlay containing EGb. However, when the viruses were treated with EGb before exposure to cells, their infectivity was markedly reduced. In contrast, the inhibitory effect was not observed when MDCK cells were treated with EGb before infection with influenza viruses. Hemagglutination inhibition assays revealed that EGb interferes with the interaction between influenza viruses and erythrocytes. The inhibitory effect of EGb was observed against influenza A (H1N1 and H3N2) and influenza B viruses. These results suggest that EGb contains an anti-influenza virus substance(s) that directly affects influenza virus particles and disrupts the function of hemagglutinin in adsorption to host cells. In addition to the finding of the anti-influenza virus activity of EGb, our results demonstrated interesting and important insights into the screening system for anti-influenza virus activity. In general, the plaque assay using drug-containing agarose overlays is one of the most reliable methods for detection of antiviral activity. However, our results showed that EGb had no effects either on the number of plaques or on their sizes in the plaque assay. These findings suggest the existence of inhibitory activities against the influenza virus that were overlooked in past studies.     

The targeting effect of H7K(R2)2-modified pH-sensitive liposomes on U87-MG cells

The present study aimed to investigate the targeting effect of H₇K(R₂)₂-modified pH-sensitive liposomes on U87-MG cells. Using coumarin-6 as a fluorescence probe, we prepared H₇K(R₂)₂-modified pH-sensitive liposomes (designated as coumarin-6-PSL-H₇K(R₂)₂). The flow cytometry assay was used to evaluate the effect of H₇K(R₂)₂ proportions on the cellular uptake and endocytosis pathways of coumarin-6-PSL-H₇K(R₂)₂ on U87-MG cells_. The circular dichroism (CD) spectroscopy assay was used to investigate the secondary structures of H₇K(R₂)₂ peptide at pH 7.4 and pH 6.8, respectively. Our results indicated that the 2.5% proportion of H₇K(R₂)₂ in the coumarin-6-PSL-H₇K(R₂)₂ was superior to those of 1% and 3.5% of H₇K(R₂)₂. The uptake of coumarin-6-PSL-H₇K(R₂)₂ on U87-MG cells was not inhibited by filipin, M-β-CD or chlorpromazine. The secondary structure of H₇K(R₂)₂at pH 6.8 was mostly presented as β-turn. In conclusion, we suggested that the appropriate proportion of H₇K(R₂)₂ in the H₇K(R₂)₂-modified pH-sensitive liposomes could be set at 2.5%. The cellular uptake pathway for H₇K(R₂)₂-modified pH-sensitive liposomes was via the cell penetrating capacity of H₇K(R₂)₂ which responded to acidic condition. The secondary structure of H₇K(R₂)₂ at pH 6.8, which was presented as the shape of hairpin, might be mainly responsible for its targeting and cell penetrating effect.     

CYP1A2、CYP2D6和CYP2C19基因多态性与氯氮平及其代谢物血药浓度的相关性研究

目的：研究CYP1A2、CYP2D6和CYP2C19基因多态性与精神分裂症患者氯氮平（clozapine,CLZ）及其活性代谢物去甲氯氮平（N-desmethy clozapine,N-CLZ）血药浓度的相关性。方法：纳入156例经CLZ单药治疗1个月以上的精神分裂症患者,采集清晨服药前空腹血,采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定CLZ及N-CLZ稳态谷浓度。通过Axiom基因芯片分析技术检测CYP1A2（*1C、*1F）、CYP2D6（*2、*10）、CYP2C19（*2、*3）等6个SNP位点的基因型,比较不同基因型患者CLZ及其代谢物的浓度剂量比（C/D）及代谢物与CLZ血药浓度比值（C_N-CLZ/C_CLZ）的差异。结果：CYP2D6*10基因多态性与N-CLZ C/D具有相关性（P<0.01）。CYP1A2*1C、CYP2D6（*2、*10）基因多态性与C_N-CLZ/C_CLZ具有相关性（P<0.05,P<0.01,P<0.01）。CYP1A2*1F、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因多态性与C/D及C_N-CLZ/C_CLZ无相关性（P>0.05）。结论：CYP1A2*1C和CYP2D6（*2、*10）基因多态性对CLZ代谢存在影响,建议临床在使用CLZ治疗前检测患者CYP1A2*1C和CYP2D6（*2、*10）基因型,为CLZ个体化治疗提供参考。     

Inhibition of influenza virus infection by pine cone antitumor substances

The anti-influenza virus activity of polysaccharides and other high molecular weight fractions from pine cone extract (PCE) of Pinus parviflora Sieb. et Zucc. was investigated. None of the fractions affected the growth of MDCK cells. The acidic PCE substances markedly suppressed the growth of the influenza virus in MDCK cells. Significant inhibition of both the viral protein synthesis in infected cells and virion-associated RNA-dependent RNA polymerase activity was observed with these acidic fractions. Although amantadine inhibited virus plaque formation as effectively as PCE fractions, it was less effective in inhibiting the RNA polymerase activity. These results suggest that PCE, which has been shown to contain antitumor substance(s), also contains anti-influenza virus substance(s).     

炮制前处理对三七中三七皂苷含量的影响

目的:研究前处理对三七主根中皂苷含量的影响,为研究三七炮制工艺及探讨生熟三七功效异同提供物质基础。方法:采用蒸制法将三七主根炮制成熟三七,高效液相色谱法测定10种单体皂苷含量。Vision HT C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈和水梯度洗脱,流速1.0 ml·min^-1,柱温24℃,检测波长203 nm。结果:三七经蒸制后皂苷成分三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rd含量均有不同程度的降低,而人参皂苷Rh₁、Rh₄、Rk₃、20(S)-Rg₃、20(R)-Rg₃含量均有不同程度的增加;炮制品中5种皂苷成分含量下降程度和新产生成分含量增加程度与蒸制时间、温度相关;皂苷成分在120℃条件下降解和形成的速度比105℃快,总体上降解和形成的快慢:蒸制鲜三七主根切片>蒸制干三七主根整体>蒸制鲜三七主根整体,其中,Rg₁降解最快,Rh₄形成最快。结论:前处理方法影响皂苷成分降解和形成的快慢,高温高压对皂苷成分有一定的破坏作用,该方法可用于三七炮制品中皂苷类成分的含量测定和质量控制,为三七"生打熟补"与物质变化之间的相关性研究提供依据。