五味子乙素对HK-2细胞缺氧损伤的保护作用

卢爱龙 1, 谭小月 2, 张勉之 3△, 吴银娜摘要： 目的 探讨五味子乙素 （Sch B） 对氯化钴 （CoCl2） 诱导的人类近端肾小管上皮 （HK-2） 细胞缺氧损伤的保护作用及其可能机制。方法 取离体培养 HK-2 细胞, 随机分为 4 组。对照 （C） 组： 细胞未经任何处理。CoCl2组 （化学乏氧组）： 加入 600 μmol/L 的 CoCl2 处理 24 h。Sch B 预保护（CoCl2+ Sch B）组： 分别加入终浓度为 1 μmol/L 和 10 μmol/L Sch B 预处理 2 h 后, 其余操作同 CoCl2 组。Sch B 组： 分别加入终浓度 1 μmol/L 和 10 μmol/L Sch B 处理 2 h。CCK-8 试剂盒检测各组细胞活性; AnnexinV-FITC/PI 双标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率; Western Blot 检测各组缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达; RT-PCR 检测各组 HIF-1α和诱导型一氧化氮合酶（iNOS） mRNA 表达。结果 与对照组相比, CoCl2组细胞活性明显降低, 细胞凋亡率、 HIF-1α蛋白表达量和 iNOS mRNA 表达量显著增加, HIF-1α mRNA 表达量差异无统计学意义; Sch B 预保护组较 CoCl2组细胞活性显著增加, 细胞凋亡率、 HIF-1α蛋白表达量、 HIF-1α及 iNOS mRNA 表达量均显著减少; Sch B 组与对照组细胞活性、 细胞凋亡率差异无统计学意义, Sch B 组几乎不表达 HIF-1α蛋白。结论 Sch B 可能通过抑制 HIF-1α蛋白和 iNOS mRNA 的表达减少 HK-2 细胞的凋亡, 从而对 HK-2 细胞缺氧损伤起保护作用。     

PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨 #br#

目的 探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法 体外培养人绒毛膜滋 养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组（阴性对照组）、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同 源物基因（PTEN）-siRNA 组（抑制 PTEN 表达组）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路抑制剂（GDC-0349）组。 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋 亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制 率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PTEN蛋白表 达水平均显著升高（P＜0.05）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）/PI3K、磷酸化蛋白激酶B （p-AKT）/AKT、磷酸化 mTOR（p-mTOR）/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与高糖组、NC 组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与 PTEN-siRNA 组比较,GDC-0349 组 HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/ SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。     

鱼腥草总黄酮调控PI3K/Akt信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的：探讨鱼腥草总黄酮调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的诱导作用。方法：取对数期MCF-7细胞,随机分为4组（5个复孔）,低、中、高剂量组分别用3,6,9 g·L^-1鱼腥草总黄酮处理,对照组用磷酸盐缓冲液（PBS）处理。干预48 h后进行细胞形态学观察;对比干预12,24,48 h时的细胞凋亡率;对比干预48 h时PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA和PI3K、Akt、磷酸化Akt（pAkt）、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量。结果：Hoechst 33258染色结果显示,干预后3剂量组部分细胞体积缩小、染色质浓缩,出现凋亡小体,且中剂量组凋亡现象最为明显;细胞凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组其稍低、对照组最低,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;细胞凋亡率组内比较,对照组随时间的延长变化不显著（P>0.05）,3剂量组均随时间的延长显著增加（P<0.05）;PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最低、高剂量组其次、低剂量组稍高、对照组最高,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;Akt mRNA和蛋白相对表达量组间比较差异均不显著（P>0.05）。结论：鱼腥草总黄酮可促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡,其中浓度为6 g·L^-1时促凋亡作用最强,推测是通过下调PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,上调Bax mRNA和蛋白的表达,与PI3K/Akt信号通路有关。     

基于微流控芯片技术橙皮苷抗肺肿瘤作用机制研究

目的探究橙皮苷诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法基于微流控芯片技术采用Hoechst 33342/PI染色法检测橙皮苷对肺癌细胞A549凋亡坏死的影响;流式细胞术检测橙皮苷对肺癌细胞周期及凋亡的影响;实时荧光定量PCR技术检测相关基因VEGF、PI3K及PTEN的表达;Western blot技术检测橙皮苷诱导肺癌细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、PTEN及凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白Cyclin B1的表达。结果橙皮苷作用于细胞G_0/G_1期及S期,阻滞细胞分裂,并呈现浓度依赖性诱导肺癌细胞凋亡,其细胞凋亡坏死率由正常对照组的(6.7±0.6)%增至(27.9±1.1)%;经橙皮苷诱导后的肺癌细胞中VEGF和PI3K基因表达相对降低,抑癌基因PTEN表达相对增加。Western blot结果显示,经橙皮苷诱导的肺癌细胞中凋亡蛋白Bcl-2及周期蛋白Cyclin B1相对表达降低,PI3K-Akt信号通路蛋白Akt表达量与对照组比较明显减少,PI3K蛋白表达量相对增加,PTEN表达量无明显变化。结论橙皮苷可能是通过干扰PI3K-Akt信号通路,阻碍肿瘤细胞的分裂并促进凋亡蛋白的产生,从而诱导肺癌细胞A549凋亡。     

Z-没药甾酮通过激活PI3K/AKT/eNOS通路发挥脑微血管内皮细胞保护作用

摘要：目的:探讨Z-没药甾酮（Z-GS）对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用及药理机制。方法:脑微血管内皮细胞制作氧糖剥夺模型体外模拟缺血性脑卒中,培养的脑微血管内皮细胞分为对照组、模型组、 Z-GS低、中、高(12.5,25,50μmol·L-1)剂量组。给药组细胞在OGD造模前分别给予不同剂量的Z-GS处理。在机制研究中,50μmol·L-1?Z-GS+抑制剂组在造模给药前加入PI3K抑制剂LY294002。试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）释放和血管活性物质水平;免疫印迹分析磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达及磷酸化水平;LY294002用于特异性抑制PI3K表达。结果:Z-GS给药可提高细胞活力、降低LDH释放。同时Z-GS可通过降低内皮素-1和血栓素B2水平、升高血栓调节蛋白和6-酮-前列环素1α水平缓解血瘀。机制研究表明,Z-GS给药可激活PI3K/AKT/eNOS通路,增加一氧化氮（NO）的生成。而在LY294002特异性抑制PI3K后,Z-GS对该通路的调控作用消失。结论:Z-GS可通过调控血管活性物质发挥血管内皮保护作用,其机制与激活PI3K/AKT/eNOS通路,进而促进NO的生成有关。     

人参皂苷Rg3对低氧条件诱导的Hep-2细胞作用机制的初步研究

目的:研究人参皂苷Rg3对低氧条件下人喉鳞癌细胞Hep-2中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:通过体外低氧培养Hep-2人喉鳞癌细胞株,同时设立阴性对照组和阳性对照组(顺铂).人参皂苷Rg3作用24 h后,应用免疫细胞化学技术和流式细胞技术检测Hep-2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化;应用RT-PCR技术检测HIF-1α和VEGF mRNA表达的变化.结果:在低氧条件下,Rg3组和顺铂对照组的Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白表达低于阴性对照组(P<0.05);Rg3组的HIF-1α和VEGF mRNA水平明显低于阴性对照组(P<0.05),顺铂组的HIF-1α和VEGFmRNA水平无明显变化.结论:低氧条件下,人参皂苷Rg3抑制Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA的表达,这可能是Rg3抗肿瘤作用的机制之一.     

洛铂在膀胱癌细胞中的抗肿瘤作用及通过PI3K/AKT信号通路促进凋亡的机制研究

目的研究洛铂在人类膀胱癌细胞中的抗肿瘤作用及促进其凋亡的相关分子机制。方法体外实验:Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测洛铂对T24细胞增殖的影响;划痕实验检测洛铂对迁移的影响;Annexin V-FITC/PI双染色,通过流式细胞仪检测细胞的凋亡程度;蛋白免疫印迹法(WB)检测洛铂对凋亡相关蛋白表达的影响。体内实验:选取BALB/c裸鼠建立膀胱癌细胞皮下异种转移瘤模型,观察洛铂对肿瘤生长的影响;免疫组织化学检测观察相关凋亡蛋白的表达。结果体外实验:洛铂能够抑制膀胱癌细胞T24的增殖,抑制其迁移,同时促进其凋亡,凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Cleaved-Caspase-3/Caspase-3升高,PI3K/AKT信号通路中PI3K表达减少,P-Akt/Akt降低。体内实验:洛铂给药组裸鼠转移瘤体积小于对照组且差异有统计学意义,免疫组织化学结果显示洛铂给药组凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Cleaved-Caspase-3表达增加。结论洛铂在膀胱癌细胞中具有抗肿瘤作用,可能是通过PI3K/AKT信号通路发挥促凋亡作用。     

缺氧-复氧损伤大鼠心肌微血管内皮细胞PI3K、Akt、HIF-1α mRNA的表达

目的观察缺氧-复氧(H-R)损伤对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)PI3K、Akt和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的影响。方法培养SD大鼠MMECs,以1×106/ml的密度接种于96孔板(100μl/孔)或直径6 cm培养皿(2 ml/皿),随机分为H-R组(缺氧2 h,复氧2 h)和正常对照组(N组)。Hoechst染色荧光显微镜覌察凋亡细胞形态,Annexin V-FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测PI3K、Akt、和HIF-1αmRNA转录水平。结果与N组比较,H-R组可见大量细胞坏死、脱落,MMECs活力降低,细胞凋亡率升高,HIF-1α、PI3K、Akt mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论 H-R促使细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调Akt和HIF-1αmRNA的表达,是MMECs H-R损伤机制之一。     

白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞生物学行为的影响

摘要:目的　探讨白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法　将白花蛇舌草、半枝莲按质量1∶1进行3次煎煮,获得水提物,后取适量浸膏用石油醚回流脱脂,再以乙酸乙酯进行多次萃取,获得白花蛇舌草-半枝莲药对组分,并计算得率。实验分为对照组（正常培养Lovo细胞）、白花蛇舌草-半枝莲药对组分低剂量组（10 mg/L）、中剂量组（30 mg/L）及高剂量组（50 mg/L）。通过噻唑蓝比色法（MTT）检测各组细胞培养24、48、72 h后的增殖抑制率。各组细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Grb2相关结合蛋白1（Gab1）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（Akt）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达情况。结果　化学萃取后的白花蛇舌草-半枝莲药对中主要含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种化合物,组分得率为0.61%。与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖抑制率升高,G1期肿瘤细胞比例增加,细胞凋亡指数增高,侵袭细胞数和划痕闭合率明显减小（均P＜0.05）,细胞中Gab1、VEGFR-2、PI3K、Akt、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,Bax表达升高（均P＜0.05）,且存在剂量依赖性。结论　白花蛇舌草-半枝莲药对组分可抑制结肠腺癌Lovo细胞的增殖,降低其迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Gab1/VEGFR-2/PI3K/Akt信号通路活化有关。     

阿司匹林对人主动脉血管内皮细胞炎性损伤的保护作用

目的：研究阿司匹林（aspirin,Asp）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）损伤的保护作用,并进一步阐明其对一氧化氮合酶（NOS）及血管内皮生长因子（VEGF）及其相关受体信号的调控。方法：LPS建立HAECs损伤模型。苏木精-伊红（HE）染色观察细胞形态;MTT法、划痕实验分析HAECs损伤修复能力;ELISA测定一氧化氮（NO）含量;Western blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、VEGF和血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）蛋白表达。结果：给药12 h后Asp明显改善LPS（5 mg·L^-1）导致的细胞损伤、提高修复能力（P<0.05）,并上调NO分泌量及VEGF、VEGFR-2的蛋白表达（P<0.01）;升高eNOS蛋白的表达（P<0.01）。而给药24 h后阿司匹林显著下调LPS导致的NO分泌量及iNOS、VEGF、VEGFR-2的蛋白表达升高,同时升高eNOS蛋白的表达（P<0.01）。结论：阿司匹林对LPS诱导的血管内皮细胞炎性损伤的保护作用与调节NOS/NO和VEGF及其受体的动态平衡密切相关。     

丹皮酚与顺铂联用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究丹皮酚与顺铂联用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:取对数生长期MG-63细胞,分为空白对照组、顺铂组(4μmol/L)、丹皮酚组(50 mg/L)和低、中、高浓度联用组(50、100、200 mg/L丹皮酚+4μmol/L顺铂).采用CCK-8法检测经药物作用24、48、72 h...     

黄地安消胶囊调控磷脂酰基醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路减轻GK大鼠血管病变损伤程度的研究

目的 探讨黄地安消胶囊治疗2型糖尿病(T2DM)血管病变的作用机制.方法 选取符合T2DM模型的GK大鼠按随机数字表法随机分为模型组、参芪降糖颗粒组、二甲双胍组、黄地安消胶囊高、中、低剂量组,另取Wistar大鼠为健康组,每组10只.通过在GK大鼠饮用水中加入0.1 g·L-1 Nω-硝基L精氨酸甲酯(L-NAME)联合高脂饲料喂养的方法复制T2DM血管病变大鼠模型.造模同时给药,每天1次,连续给药6周.实验结束后,测定大鼠的空腹血糖(FBG),血清生化指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL);通过苏木精-伊红(HE)染色法、马松三色染色法、Verhoeff铁苏木精弹力纤维染色法观察腹主动脉血管纤维化程度;采用RT-qPCR技术检测GK大鼠腹主动脉中磷脂酰基醇3-激酶(PI3K)、抑癌基因(PTEN)、假性蛋白激酶3(TRIB3)、蛋白激酶B(PKB/Akt)缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达情况.结果 与健康组比较,模型组大鼠腹主动脉病理组织损伤程度明显增加,糖脂代谢水平、PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01),PTEN、TRIB3 mRNA表达降低(P<0.01).与模型组比较,黄地安消胶囊高剂量组(12.00 g·kg-1)、中剂量组(6.00 g·kg-1)不仅可改善GK大鼠腹主动脉病理组织学损伤程度,明显降低糖脂代谢、PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01),还可升高PTEN,TRIB3 mRNA表达水平(P<0.01),其中模型组、黄地安消胶囊高剂量组、中剂量组的PTEN mRNA表达水平分别为(0.42±0.22)、(0.70±0.12)、(0.55±0.08),TRIB3 mRNA表达水平分别为(0.43±0.07)、(0.75±0.16)、(0.55±0.04).结论 黄地安消胶囊对T2DM血管病变具有一定的治疗作用,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路、改善糖脂代谢有关.     

氮氧自由基对高原缺氧小鼠脑组织中缺氧和凋亡蛋白的影响

目的:研究氮氧自由基HPN对高原缺氧小鼠脑组织中缺氧和凋亡蛋白的影响。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺组和HPN组,单次腹腔注射给药后,在模拟海拔8000 m环境停留12 h,检测脑组织中乳酸脱氢酶(LD)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,HE染色观察脑组织病理学改变,蛋白印迹法检测HIF-1α、VEGF、Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果:与正常对照组相比,缺氧模型组中LD含量显著增加,LDH活性显著减低,HIF-1α、VEGF、Caspase-3和Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值降低。经HPN预处理后能够显著降低高原缺氧小鼠脑组织中LD含量,提高LDH活性,改善脑组织学变化,降低HIF-1α、VEGF、Caspase-3和Bax蛋白表达,提高Bcl-2的蛋白表达和Bc1-2/Bax比值。结论:HPN能够减轻高原缺氧脑组织损伤,作用机制可能与改善能量代谢,降低机体氧化应激,抑制某些凋亡相关蛋白表达有关。     

PI3K/Akt/HIF-1α信号通路在右美托咪定减轻大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用

目的：评价磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶-缺氧诱导因子-1α（phosphatidylinositol 3-kinase-protein-serine-threonine kinases-hypoxia inducible factor-1α,PI3K-Akt-HIF-1α）信号通路在右美托咪定减轻大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用。方法：清洁级健康成年雄性SD大鼠32只,体质量250~350 g,采用随机数字表法分为4组（n=8）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）、IR+右美托咪定组（D组）、IR+右美托咪定+LY294002组（DL组）。Sham组维持双肺通气3 h,其余组均实施肺IR：左侧肺门夹闭1 h后松开无创血管夹恢复血流再通气2 h。D组泵入10μg·kg^-1右美托咪定负荷量后开始IR模型,DL组泵入0.3 mg·kg^-1 LY294002后泵入右美托咪定,待右美托咪定泵入完毕后开始IR模型。IR模型完毕后肺门离断处死大鼠,留取左肺组织,称重,计算肺湿干重比（W/D）;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况;4%甲醛固定后HE染色分析肺损伤评分;Western-blot法检测磷酸化Akt（p-Akt）和HIF-1α蛋白表达水平。结果：与Sham组比较,其他3组肺组织W/D升高,肺损伤评分和凋亡指数升高,p-Akt和HIF-1α表达下调（P<0.05）;与IR组比较,D组和DL组肺W/D降低,肺损伤评分和凋亡指数降低,p-Akt和HIF-1α表达上调（P<0.05）;与D组比较,DL组肺W/D升高,肺损伤评分和凋亡指数降低升高,p-Akt和HIF-1α表达下调（P<0.05）。结论：PI3K/Akt/HIF-1α信号通路参与了右美托咪定减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的过程。     

干扰PTEN基因表达影响人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1增殖和凋亡

目的：探讨PTEN对体外培养的人胃黏膜上皮细胞系GES-1增殖凋亡的影响及其磷酸化通路研究。方法：体外培养GES-1细胞,构建针对PTEN基因的shRNA慢病毒载体,感染GES-1细胞系,干扰PTEN的表达,实验分为空白对照组、慢病毒阴性对照组和干扰PTEN实验组;荧光显微镜、实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测其感染效率;CCK8测定GES-1细胞的增殖,流式细胞术测定细胞的周期和凋亡;实时荧光定量PCR检测GES-1的PTEN、Akt、ERK的mRNA表达水平;Western blot检测GES-1的Akt和磷酸化Akt（p-Akt）,ERK1/2及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）表达。结果：干扰PTEN的慢病毒成功感染GES-1,降低了PTEN基因的转录和翻译水平。与空白对照组相比,PTEN表达降低后使G₀/G₁期的细胞比率减低,而G₂/M和S期细胞比率增高,同时凋亡细胞减少,促进GES-1的增殖而抑制其凋亡。p-Akt和p-ERK1/2表达显著上调（P<0.05）,而对GES-1的Akt和ERK的mRNA及总蛋白表达没有影响（P>0.05）。结论：抑癌基因PTEN可以通过促进Akt和ERK的磷酸化,调节GES-1细胞下游的相关凋亡和信号通路,进而调节GES-1的增殖和凋亡。     

PTEN mediates serum deprivation-induced cytotoxicity in H9c2 cells via the PI3K/AKT signaling pathway

The pathogenesis of acute myocardial infarction (AMI) is associated with cardiomyocyte necrosis and apoptosis. Numerous studies have determined the regulatory effects of Phosphatase and tensin homolog (PTEN) cell proliferation and apoptosis in other cell types. However, the potential role of PTEN in cardiomyocyte is unclear. In this study, we used H9c2 cells cultured under serum deprivation to simulate the apoptosis process of myocardial infarction. Small interference RNA (siRNA) of PTEN was used to knock down the expression of PTEN. Cell viability was determined by CCK-8. Cell proliferation was examined by Edu staining, and the protein expression was analyzed by Western blot. We also evaluated the generation of ROS, the degree of DNA damage, and cell apoptosis using immunofluorescence assay. As a result, we observed that serum deprivation in H9c2 cells increased PTEN expression. Functionally, the PTEN knockdown experiment using siRNA inhibited serum deprivation-induced cell apoptosis, ROS production, and DNA damage, whereas increased cell proliferation. All these effects could be reversed by phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor, which indicated the PI3K/protein kinase B (AKT) might be the critical component of the PTEN effects during serum deficiency. In conclusion, our study indicated the role of the PTEN/PI3K/AKT pathway in serum deprivation-induced cytotoxicity in H9c2 cells.