TXNIP在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用。方法将HK-2细胞随机分为三组(n=6):高糖组(HG组),高糖缺氧复氧组(HHR组),高糖缺氧复氧+TXNIP干扰组(HHR-siRNA组)。采用高糖刺激72 h,缺氧4 h复氧2 h的方法建立高糖缺氧复氧模型。CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,活性氧(ROS)检测细胞氧化应激水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和Caspase-1,Western blot法检测TXNIP和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白-3(NLRP3)的表达。结果与HG组相比较,HHR组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3升高,而CCK-8降低,差异有统计学意义(P0.05);与HHR组相比较,HHR-si RNA组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3降低,而CCK-8升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TXNIP在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中发挥了重要作用,抑制TXNIP可以降低高糖缺氧复氧损伤。     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

大鼠原代神经元中依达拉奉对糖氧剥夺损伤的保护及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的 探讨依达拉奉后处理对神经元糖氧剥夺损伤的保护作用及对活性氧(ROS)/硫氧还蛋内结合蛋白（TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3( NOD-like receptor associated protein 3, NLRP3)信号通路的影响。方法 培养新生SD大鼠皮质神经元,经免疫荧光染色鉴定后随机分为神经元组、依达拉奉组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+依达拉奉组4组。各组神经元在完成处理后以CCK-8试剂盒检测神经元活力;以细胞凋亡试剂盒检测神经元凋亡情况;以ELISA试剂盒检测神经元ROS产生情况;以蛋白免疫印迹法检测ROS/TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白的表达水平。结果 神经元缺糖缺氧后细胞活力显著降低,依达拉奉处理后又显著上升,差异有统计学意义（P＜0.01）;糖氧剥夺后,神经元凋亡水平、ROS含量、ROS/TXNIP/NLRP3通路相关IL-1β、TXNIP、IL-18、Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水平升高,依达拉奉处理后又显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 依达拉奉对神经元糖氧剥夺损伤具有保护作用,可能与其对R0S/TXN1P/NLKP3信号通路的抑制有关。     

硫氧环蛋白相互作用蛋白与糖尿病关系的研究

目的 研究高糖环境下INS-1细胞中硫氧环蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的表达对胰岛素分泌的影响以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、艾塞那肽(Exenatide,Ex-4)的保护作用.方法 以含11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI 1640培养液培养INS-1细胞,当细胞生长至80%融合时,分别转入含有4.0 mmol/L葡萄糖(NG组)、16.7 mmol/L葡萄糖(HG组)及16.7 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L NAC(HG+N组)、16.7 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L Ex-4(HG+E组)的RPMI 1640培养液中继续培养48 h;采用real-time PCR法检测TXNIP、胰岛素基因及胰岛素转录因子MafA的mRNA水平.结果 HG组与NG组比较,TXNIP mRNA的表达明显上升,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01).HG+N组、HG+E组与HG组比较,TXNIP mRNA的表达均明显下降,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显提高,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可通过介导TXNIP的过度表达而导致胰岛素基因及MafA表达下降;特异性地抑制高糖下TXNIP的过度表达可以恢复胰岛素基因及MafA的表达.     

黄芪甲苷抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症反应的作用及机制。方法:①采用不同浓度的葡萄糖(5.5、10、15、25 mmol/L)刺激VSMCs细胞24 h,或高浓度葡萄糖(25 mmol/L)处理VSMCs不同时间(0、6、12、24 h)。Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)含量。②采用不同浓度(0、10、20、40μg/ml)AS-Ⅳ干预VSMCs细胞24 h后,CCK8法检测并计算细胞活力。③将VSMCs细胞分为对照组、高糖组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组。先给予AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组20μg/ml AS-Ⅳ预孵育2 h后,再向高糖组和AS-Ⅳ+高糖组加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。Western blot检测NLRP3蛋白表达;ELISA检测IL-1β含量。④构建si-NLRP3 RNA转染的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、高糖组、si-NLRP3组和si-NLRP3+高糖组。细胞转染6 h后,高糖组和si-NLRP3+高糖组细胞加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。⑤应用转染技术构建NLRP3过表达的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、AS-Ⅳ组、NLRP3过表达组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组。细胞转染6 h后,AS-Ⅳ组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组加入20μg/ml AS-Ⅳ干预24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。结果:①高糖刺激能够上调VSMCs细胞NLRP3和IL-1β蛋白表达(P0.01),且呈一定的浓度/时间依赖性,故选取25 mmol/L葡萄糖作用24 h进行后续研究。②10、20μg/ml AS-Ⅳ作用VSMCs细胞24 h后,细胞活力无显著变化(P0.05),选择20μg/ml浓度进行后续实验。③与对照组相比,AS-Ⅳ组细胞NLRP3蛋白表达量显著下调(P0.05),IL-1β含量显著降低(P0.05);与高糖组相比,AS-Ⅳ+高糖组NLRP3蛋白表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。④与对照组相比,si-NLRP3组细胞NLRP3 mRNA表达量显著降低(P0.01),IL-1β含量没有明显变化;与高糖组相比,si-NLRP3+高糖组NLRP3 mRNA表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。⑤与AS-Ⅳ组相比,NLRP3过表达+AS-Ⅳ组NLRP3 mRNA表达量显著增多(P0.01),IL-1β含量显著升高(P0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的VSMCs炎症反应。     

异搏定通过抑制TXNIP介导的细胞凋亡和炎症减轻高脂喂养小鼠的糖尿病前期神经病变

目的 探究异搏定对糖尿病小鼠前期神经病变的影响及机制。方法 30只C57BL/6小鼠分为对照组、模型组和异搏定组,模型组和异搏定组高脂喂养构建糖尿病前期神经病变模型,给药治疗30天,给药期间监测血糖变化;给药结束后检测各组小鼠坐骨神经传导速度;HE染色观察坐骨神经组织病理变化;Elisa和RT-qPCR分别检测小鼠血清和坐骨神经组织中TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平;原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)检测各组小鼠坐骨神经细胞凋亡;Western blot法检测各组小鼠坐骨神经组织TXNIP和 NLRP3表达水平。结果 相比于模型组,异搏定组小鼠给药期间血糖水平显著下降(P＜0.05),坐骨神经组织病变显著改善,血清和坐骨神经组织中TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平显著下降(P＜0.05),细胞凋亡率显著下降(P＜0.05);TXNIP和 NLRP3表达显著下调(P＜0.05)。结论 异搏定能够缓解高脂喂养小鼠的糖尿病前期神经病变,其机制为抑制TXNIP的表达而调控炎性反应及细胞凋亡。     

波动性高糖下血红素加氧酶-1对INS-1细胞凋亡相关蛋白的影响

目的 探讨波动性高糖下血红素加氧酶-1(HO-1)对INS-1细胞凋亡相关蛋白的影响.方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象,分为正常对照组、持续性高糖组、波动性高糖组、钴原卟啉(CoPP)+波动性高糖组、锌原卟啉(ZnPP)+波动性高糖组.各组均干预72 h,Western blot检测HO-1蛋白表达,免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,波动性高糖组、持续性高糖组HO-1表达显著增高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P均<0.05).与波动性高糖组相比,CoPP+波动性高糖组HO-1蛋白表达显著升高,Bcl-2/Bax比值亦明显升高(P均<0.05),而ZnPP+波动性高糖组则出现相反的变化趋势.结论 波动性高糖可降低INS-1细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值,而HO-1可能通过上调Bcl-2/Bax比值对INS-1细胞发挥抗凋亡的保护效应.     

多氯联苯(PCB1254)诱导胰岛细胞凋亡的机制研究

目的 :本研究探讨多氯联苯(PCB1254)诱导体外培养胰岛β细胞株INS-1凋亡的可能机制。方法 :用不同浓度的PCB1254刺激INS-1细胞后,使用CCK-8法检测细胞活性,选择适当浓度的PCB1254进行INS-1细胞凋亡机制的研究;PCB1254(5μg/ml)刺激INS-1细胞后,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,并以流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Bim、Bcl-2、c-Fos、p-JNK、p-P38、p-ERK蛋白的表达;二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;PCB1254诱导INS-1细胞凋亡后,使用ERK抑制剂PD98059进行干预,倒置显微镜下观察细胞凋亡情况。结果:随着浓度的增加,PCB1254对细胞活性的抑制逐渐增强,当浓度≥5μg/ml时,与对照组差异有统计学意义(P<0.01);倒置显微镜下观察PCB1254(5μg/ml)能引起INS-1细胞凋亡,凋亡细胞脱落,漂浮于培养基中;流式细胞术检测结果显示PCB1254能诱导INS-1细胞凋亡;Western blot检测凋亡细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bim表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,氧化应激相关蛋白c-Fos表达上调,ROS荧光增强;MAPK信号通路中p-ERK蛋白表达上调;ERK抑制剂PD98059干预后细胞凋亡无明显变化。结论:PCB1254可能通过氧化应激信号通路引起INS-1细胞的凋亡,此过程中伴有ERK信号通路的激活。     

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡对哮喘大鼠炎症水平的调控作用

目的:探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在哮喘中炎症水平的调控作用机制。方法:从GSE40732和GSE69683数据集中分析哮喘组和对照组之间的差异表达基因(DEGs),并鉴定程序性细胞死亡在哮喘中的水平。在NLRP3敲降大鼠中建立哮喘大鼠模型,通过HE染色和Tunel染色分析肺组织的病理变化和凋亡水平,通过免疫组化检测肺组织中NLRP3的表达,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测NLRP3介导细胞焦亡相关mRNA和蛋白表达的改变。结果:哮喘组和对照组之间鉴定了926个差异表达基因(DEGs),细胞焦亡在哮喘中的水平显著高于对照组。哮喘模型中的炎症、凋亡和NLRP3水平明显高于对照组,而在NLRP3敲降后,哮喘大鼠中的炎症和凋亡水平降低。与对照组比较,NLRP3、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、胱天蛋白酶-1 (Caspase-1)和Caspase-8在哮喘大鼠模型中的表达升高,高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达降低(均P<0.05),这些异常表达在NLRP3敲降后得到了显著的改善(P<0.05)。结论...     

促炎性细胞因子对大鼠胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白表达水平的影响

目的:探讨促炎性细胞因子对胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白水平的影响?方法:将大鼠胰岛细胞系INS-1细胞在加或不加促炎性细胞因子混合物(IL-1β 10 ng/mL?TNF-α 50 ng/mL?IFN-γ 50 ng/mL)的培养液中培养24 h,设立对照组?促炎性细胞因子干预组?流式细胞仪测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测INS-1细胞miR-29a/b/c表达以及抗凋亡基因骨髓细胞白血病蛋白1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)mRNA?B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2) mRNA的表达水平,Western blot技术检测Mcl-1?Bcl-2蛋白的表达情况?结果:①促炎性细胞因子干预的INS-1细胞miR-29a/b表达水平较正常对照组增加,差异有统计学意义(P < 0.05),miR-29c表达水平较正常对照组有上升趋势,但无统计学差异(P > 0.05);②促炎性细胞因子干预组INS-1细胞Mcl-1 mRNA?Bcl-2 mRNA表达水平较对照组减少,但差异无统计学意义(P > 0.05);③促炎性细胞因子干预组INS-1细胞抗凋亡蛋白Mcl-1?Bcl-2表达水平较正常对照组明显下降,差异有统计学意义(P < 0.01);④促炎性细胞因子干预组细胞凋亡率增高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:促炎性细胞因子刺激处理的INS-1细胞miR-29a/b表达均上调,抗凋亡蛋白Mcl-1?Bcl-2下调,凋亡率上升,推测促炎性细胞因子可能通过调节miR-29家族及抗凋亡蛋白的表达水平诱导胰岛β细胞凋亡,从而促进1型糖尿病的发生?     

S-雌马酚改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能的研究

目的 研究大豆甙元活性代谢产物S-雌马酚(S-equol,S-Eq)对高糖培养条件下大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞胰岛素分泌功能的影响.方法 采用26.2 mmol/L葡萄糖(高糖组,H)及葡萄糖分别与不同浓度S-Eq(0.1、1、10、100 μmol/L S-Eq+H组)干预INS-1细胞24 h,另设未干预的INS-1细胞为对照组(C).采用CCK-8检测细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,TUNEL法联合Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR和Western blot分别检测前胰岛素原(preproinsulin,PPI)、葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,Glut2)、线粒体阴离子载体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2) mRNA及蛋白表达.结果 S-Eq能显著增加高糖培养条件下INS-1细胞活力(P＜0.05),其中1μmol/L S-Eq效果最为明显.GSIS检测发现,与对照组比较,高糖处理后INS-1细胞胰岛素分泌显著降低,而S-Eq能显著增加高糖处理的INS-1细胞的胰岛素分泌(P＜0.05).同时,0.1、1、10 μmol/L S-Eq均能明显减少高糖培养条件下INS-1细胞凋亡,上调PPI mRNA、Glut2 mRNA和Glut2蛋白表达,而显著抑制UCP2 mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论 S-Eq可有效改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能,可能与抑制细胞凋亡,调节Glut2和UCP2表达有关.     

miR-223靶向NLRP3影响高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT发生的机制

目的:探讨miR-223对高糖诱导的肾小管上皮(renal tubule epithelia,NRK-52E)细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为对照组(5 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖+模拟物对照组(转染miR-223模拟物对照后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理)和高糖+模拟物组(转染miR-223模拟物后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-223、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA的表达,Western blot检测NLRP3蛋白和EMT相关蛋白α-SMA、E-cadherin的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-223和NLRP3的靶向关系。另外,构建NLRP3过表达的NRK-52E细胞株,观察NLRP3过表达对miR-223过表达的NRK-52E细胞EMT进展的影响。结果:与对照组比较,高糖刺激后可引起miR-223和E-cadherin蛋白的表达降低,而NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白表达升高(P<0.05)。与高糖组比较,转染miR-223模拟物后高糖环境下NRK-52E细胞中miR-223和E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);但转染miR-223模拟物阴性对照后对高糖环境下的NRK-52E细胞无显著影响(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实NLRP3是miR-223的靶基因。转染pcDNA3.1-NLRP3过表达质粒成功上调NLRP3表达后,miR-223过表达对EMT进程抑制作用得以部分逆转。结论:miR-223可通过靶向NLRP3抑制高糖诱导的NRK-52E细胞EMT的发生。     

糖毒性下UCP2介导的胰岛功能紊乱的研究

目的 研究不同浓度高糖对胰岛INS-1细胞解偶联蛋白2(UCP2)基因表达的影响,探讨UCP2基因与高糖刺激下氧化应激和胰岛素分泌之间的关系,进一步了解糖尿病糖毒性的发病机制.方法 将不同浓度的葡萄糖作用于INS-1细胞,镜下观察INS-1细胞的形态改变,应用可见分光光度计测定丙二醛(MDA)含量,运用ELISA方法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS),同时应用RT-PCR方法检测UCP2基因的表达.结果 ①随着糖浓度的增加,INS-1细胞的凋亡增多,MDA含量逐渐增加,GSIS值逐渐下降,不同糖浓度组比较,差异具有显著性意义(P<0.01).②随着葡萄糖浓度增加,INS-1细胞UCP2 mRNA的表达总体逐渐增强.结论 高糖可促进INS-1细胞凋亡,在高糖作用下活性氧物质(ROS)代谢产物MDA增多,通过激活UCP2的途径引起胰岛细胞胰岛素分泌功能受损.这可能也是糖毒性对胰岛β细胞损害的一个重要环节.     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的干预作用

目的 探讨大黄素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织细胞凋亡的干预作用及机制。 方法 采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸法进行造模,模型大鼠随机分入对照组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组和大黄素高剂量组;各组再随机编入3 h、6 h、12 h和24 h等4个时相点进行标本留置。检测血清淀粉酶、血清总钙和胰腺组织病理评分;应用DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫印迹法检测胰腺组织Notch-1、Hes-1和Hes-5蛋白表达情况。 结果 大黄素治疗组的血清淀粉酶均较模型对照组显著降低(P<0.01),血清总钙水平则均较模型对照组显著增高(P<0.05)。大黄素中剂量组和高剂量组胰腺病理评分均较模型对照组明显改善(P<0.01),高剂量组改善最显著。治疗各组的胰腺细胞凋亡指数在不同时间点均较模型对照组有不同程度升高,高剂量组效果最显著,低剂量组与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗各组的Notch-1蛋白表达量均较模型对照组增加,中剂量组和高剂量组效果相对显著(P<0.05)。大黄素高剂量组Hes-1蛋白表达量显著高于模型对照组(P<0.05)、低剂量组(P<0.05)和中剂量组(P<0.05)。大黄素中剂量组和高剂量组Hes-5蛋白表达量均显著高于模型对照组(P<0.05),且高剂量组蛋白表达量较低剂量组显著增加(P<0.05)。 结论 SAP时大黄素可以通过促进胰腺局部细胞凋亡而减轻胰腺炎反应,Notch-1/Hes信号通路是大黄素调控胰腺局部细胞凋亡的重要途径。      

清肠汤改变aGVHD小鼠肠道菌群及肠组织NLRP3-ASC-IL-18功能轴表达的研究

[目的]观察清肠汤对肠道急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,a GVHD)小鼠粪便中肠道菌群结构、回肠组织中人隐热蛋白(nucleotide-binding oligomerization domain-leucinerichrepeats containing pyrin domain 3,NLRP3)和凋亡相关点样蛋白(apoptosis associated specklike protein containing a CARD,ASC)及血清中白介素18(interleukin-18,IL-18)表达水平的影响,探索清肠汤的防治机制。[方法]40只C57BL/6小鼠随机分为4组,包括空白组(不造模,生理盐水灌胃),模型组(a GVHD模型,造模前生理盐水灌胃),清肠汤组(造模前清肠汤灌胃)及阳性对照组(造模前青霉素灌胃)。除空白组,其它小鼠通过尾静脉注射脾细胞和骨髓细胞建立a GVHD模型。造模14d后观察各组临床症状并评分,分别利用16S r RNA技术比较肠道菌群结构,半定量RT-PCR和Western-blot方法检测各组回肠组织中NLRP3、ASC m RNA和蛋白表达,ELISA法检测造模前后血清中IL-18表达情况。[结果]清肠汤组及阳性对照组小鼠临床症状均较模型组小鼠得到改善;a GVHD小鼠造模后肠道菌群发生改变,大肠埃希菌数量显著增加,而乳酸杆菌减少,清肠汤组可逆转此改变(P0.01);清肠汤组和阳性对照组小鼠回肠中NLRP3、ASC m RNA及蛋白表达低于模型组,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);造模后,空白组血清IL-18表达水平无明显改变,其余3组均高于造模前及空白组,差异有统计学意义(P0.05,P0.01),其中清肠汤组和阳性对照组表达低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]清肠汤可改善小鼠肠道a GVHD症状,并可逆转肠道菌群结构及下调肠道中NLRP3、ASC及血清IL-18的表达。     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

POLD3在胃腺癌中的表达及临床意义分析

目的探讨DNA聚合酶δ3(eukaryote DNA polymeraseδ3,POLD3)在胃腺癌(gastric adenocarcinoma,GA)中的表达情况及临床意义。方法收集进行了根治性切除的GA患者82例,并收集相应手术切除标本。通过免疫组织化学、蛋白印迹、体外细胞学、实时定量PCR等技术检测GA组织与细胞株中POLD3的表达,分析POLD3表达对GA增殖、分化及预后等的影响。结果 1与肿瘤旁组织相比,POLD3在GA肿瘤组织中的核酸及蛋白表达水平均明显下调(P<0.01),体外细胞学实验有类似结果;2低POLD3表达水平促进肿瘤去分化及增殖;3POLD3表达水平影响GA患者的预后,高表达和低表达对应的中位总体生存期分别为34个月和16个月(P<0.01),低POLD3表达者其总体死亡风险为高表达者的2.43倍(95%可信区间为1.25~4.71)。结论 POLD3在GA肿瘤中表达下调,这种下调与肿瘤的增殖、分化及预后相关。     

没食子酸抑制人舌鳞癌SCC-9细胞增殖、凋亡及可能机制研究

目的 观察没食子酸(GA)对人舌鳞癌细胞SCC-9增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法 将SCC-9细胞分为对照组和低、中、高浓度没食子酸组(30、60、90μM GA组)。采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测SCC-9细胞周期及凋亡率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测SCC-9细胞中Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38蛋白表达。结果 与对照组比较,低、中、高浓度没食子酸组SCC-9细胞增殖率逐渐下降,而sub G1期DNA含量、细胞凋亡率以及阳性凋亡细胞数逐渐增加,呈剂量依赖性;与对照组比较,没食子酸组Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),呈剂量依赖性。结论 没食子酸具有抑制SCC-9细胞增殖、诱导凋亡作用,其机制可能与激活MAPK/ERK信号...     

TXNIP介导的氧化应激在雌激素延缓阿尔兹海默病中的作用

目的：研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病及雌激素延缓AD发生中的作用。方法：检测雌二醇(E2)处理的AD细胞模型中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和TXNIP水平、细胞凋亡情况;TXNIP过表达慢病毒后,观察E2处理对AD细胞ROS水平和凋亡的影 响。在AD大鼠模型中,观察E2处理后大鼠学习记忆能力和TXNIP的表达变化;过表达TXNIP后,观察E2处理对AD 大鼠模型学习记忆能力的影响。结果：AD细胞中ROS,TXNIP及细胞凋亡水平升高,而E2处理可降低AD细胞ROS, TXNIP及细胞凋亡水平;增强TXNIP表达后,E2处理可降低AD细胞ROS和凋亡水平。与细胞实验类似,E2处理可增 强AD大鼠的学习记忆能力,抑制脑内TXNIP表达;而TXNIP过表达可削弱E2对AD大鼠学习记忆能力的增强效果。 结论：雌激素可通过抑制神经组织中TXNIP的表达,降低神经损伤程度,延缓AD的发生发展。     

异氟醚全身麻醉对腰椎间盘突出症大鼠海马区小胶质细胞活化及炎症的影响

目的 探讨异氟醚全身麻醉对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠海马区小胶质细胞活化及炎症的影响.方法 将40只大鼠随机分为对照组10只、模型组30只.模型组大鼠在异氟醚全身麻醉下行自体髓核移植术以建立LDH模型,对照组不进行麻醉和手术操作.建模后1 d,采用旷场实验及条件恐惧实验观察大鼠的行为学表现;检测对照组(实验后2 d)和模型组(建模后2、4、8 d)海马CA1区小胶质细胞数量,小胶质细胞中含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)活化情况,海马组织中的白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)蛋白表达情况.结果 模型组环境诱发僵直时间占比较对照组降低(P<0.05),但两组大鼠中心区域活动时间、声音诱发僵直时间占比差异均无统计学意义(均P>0.05).模型组建模后2、4、8 d小胶质细胞数量均多于对照组,且建模后2、4、8 d小胶质细胞数量依次减少(均P<0.05).对照组海马组织细胞质内活化NLRP3较少,模型组建模后2 d海马组织细胞质内NLRP3大量激活,但随着时间的延长,细胞质内活化NLRP3逐渐减少.模型组建模后2 d海马组织IL-1β、TNF-α水平及建模后4 d TNF-α水平均高于对照组,且建模后4、8 d海马组织IL-1β、TNF-α水平均低于建模后2 d(均P<0.05).模型组建模后2、4、8 d海马组织NLRP3、ASC及Caspase1蛋白相对表达量均高于对照组,且建模后2、4、8 d大鼠海马组织NLRP3、ASC及Caspase1蛋白相对表达量依次降低(均P<0.05).结论 异氟醚全身麻醉可能通过促进LDH大鼠海马区小胶质细胞胞质中NLRP3的活化以上调IL-1β、TNF-α表达,从而导致中枢神经系统炎症反应的发生.