噪声对豚鼠耳蜗基底膜乙酰化组蛋白H2B表达的影响

目的 观察噪声性聋豚鼠耳蜗基底膜毛细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平的变化,探讨组蛋白乙酰化与噪声性听力损失的相关性.方法 成年雄性白色红目豚鼠60只随机分为噪声组和对照组,两组豚鼠分别进行听性脑干反应(ABR)检测后,噪声组给予高强度窄带噪声(122 dB SPL,3小时)暴露,对照组不予任何处理;噪声组于噪声暴露后1小时、3天、7天、14天和21天分别行ABR检测;并以免疫荧光染色和Western blot方法检测两组豚鼠耳蜗基底膜听觉细胞中乙酰化组蛋白H2B的表达水平.结果 噪声暴露后1小时、 3天、7天、14天、21天噪声组豚鼠ABR各频率反应阈均较噪声暴露前及对照组显著增高,且随时间的延长听力逐渐恢复,14天时趋于稳定,达到永久性阈移.免疫荧光染色显示在噪声组豚鼠耳蜗内外毛细胞及Hensen's细胞中乙酰化组蛋白H2B荧光强度较正常对照组减弱,Western blot结果显示噪声组豚鼠耳蜗基底膜中乙酰化组蛋白H2B的表达(H2B-AcK5/β-actin比值为0.310 2±0.083 9)较对照组(0.617 9±0.126)明显下调,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 噪声可导致豚鼠内耳感觉细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平下降,乙酰化组蛋白失衡有可能参与了噪声性聋的发生.     

丁酸钠对噪声性聋的保护及基底膜乙酰化组蛋白H2B的影响

目的　观察丁酸钠对噪声性聋豚鼠内耳基底膜毛细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平的影响及对听力的保护效果。方法　成年雄性白色红目豚鼠90只随机分为对照 组、噪声组和噪声+丁酸钠组,通过听性脑干反应（ABR）检测3个组豚鼠噪声前听力,噪声组及噪声+丁酸钠组给予高强度窄带噪声（122 dB SPL,3小时）暴露,于暴露后14天行ABR检测。并通过免疫荧光染色和Western blot方法检测噪声损伤后基底膜听觉细胞中乙酰化组蛋白H2B的表达水平。结果　ABR结果提示噪声+丁酸钠组在4、8、16与32 kHz ABR阈移较噪声组显著减少（P＜0.01）。免疫荧光染色提示在噪声性聋豚鼠动物基底膜内外毛细胞、Hensen's细胞中乙酰化组蛋白H2B明显下调,使用丁酸钠后,乙酰化组蛋白H2B荧光强度较噪声组显著增加。Western blot结果显示噪声组基底膜中乙酰化组蛋白H2B的表达较对照组明显下调,给予丁酸钠干预后,乙酰化组蛋白H2B的表达明显增加,条带灰度H2BAcK5/β-actin比值在对照组（0.6257±0.0280）,噪声组（0.3067±0.1172）,噪声+丁酸钠组（0.5010±0.1706）,组间差异均具有统计学意义（P＜0.01）。结论　噪声可导致内耳毛细胞及支持细胞组蛋白乙酰化水平降低,丁酸钠通过促进内耳毛细胞及支持细胞组蛋白乙酰化,进而对噪声性聋起一定保护作用。     

顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞毒性作用及机制

目的通过透射电镜及免疫组化法观察顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞的毒性作用。方法16只豚鼠随机均分为2组。顺铂组连续5天腹腔注射顺铂2mg/kg/d;对照组连续5天腹腔注射生理盐水2mg/kg/d;用药前后测试听力,处死动物后制作耳蜗标本,透射电镜观察及免疫组化法测定诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达。结果ABR:顺铂组听力下降明显,阈值显著升高(P<0.01)。透射电镜观察:顺铂组螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重,核变形,线粒体肿胀,大量空泡样变,粗面内质网增多,有髓神经纤维的髓鞘增厚;对照组螺旋神经节细胞核无变形,核仁基本居中,线粒体结构正常。免疫组织化学显示:顺铂组螺旋神经节有iNOS阳性反应显色,灰度值降低,iNOS活性升高,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论顺铂可致耳蜗螺旋神经节细胞损伤并呈iNOS阳性表达,导致听力下降。     

强噪声暴露下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3的表达

目的探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞（sprial ganglion cell,SGC）的凋亡及SGC的凋亡是否与凋亡蛋白酶Caspase-3信号转导有关。方法选用健康雄性白色豚鼠20只,随机分为4组,每组5只,其中3组为实验组,1组为对照组。将实验组动物暴露于4kHz、120dB SPL窄带噪声中4h,分别测试噪声刺激停止后1、4、14d及对照组豚鼠听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）。通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（ternial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeing,TUNEL）,检测SGC凋亡细胞,免疫组织化学方法检查Caspase-3蛋白的表达。结果透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变。实验组SGC的TUNEL染色明显增强,Caspase-3的表达增高,与对照组比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）。结论强噪声可以诱导SGC凋亡;SGC凋亡与caspase-3的激活有关。     

噪声性聋小鼠耳蜗螺旋神经节生长相关蛋白-43变化

目的通过噪声引起4周龄昆明小鼠出现暂时性阈移（tmporary threshold shift,TTS）和永久性阈移（permanent threshold shift,PTS）,观察听觉通路耳蜗螺旋神经节神经元（spiral ganglion of cochlea,CG）中生长相关蛋白（growth associated protein 43,GAP-43）变化,探讨听觉损伤后内耳突触修复的可能机制。方法采用32只昆明小鼠制作噪声性聋动物模型,进行听觉脑干诱发反应听力检测,用免疫组化法对耳蜗听觉通路中GAP-43在神经损伤刺激的表达进行检测。结果噪声性聋引起PTS后CG的GAP-43表达在损伤后第7天出现增加,第14天仍增加明显,而TTS组无明显变化。结论噪声性聋听觉通路神经性损伤作用后7天,GAP-43出现增高说明内耳开始出现突触修复。     

快速老化痴呆小鼠听功能及耳蜗螺旋神经节细胞MeCP2增龄性变化

目的探讨快速老化痴呆小鼠听觉功能、耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cell,SGC）甲基化CpG结合蛋白2（methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2）表达的增龄性变化。方法检测5、7月龄快速老化小鼠亚系8（senescence accelerated dementia mouse/prone,SAMP8）和同龄抗快速老化小鼠亚系1（senescenceaccelerated mouse/resistance 1,SAMR 1）8 kHz短纯音听觉脑干反应阈值以及SGC的MeCP2免疫组化染色等方面的增龄性变化。结果①第5、7月龄SAMP8小鼠双耳听觉脑干反应阈值较同龄SAMR1小鼠明显提高（5月龄左侧t=5.84,P〈0.05,右侧t=3.31,P〈0.05;7月龄左侧t=5.11,P〈0.05,右侧t=5.11,P〈0.05）;②MeCP2蛋白在不同月龄快速老化小鼠耳蜗组织中均有表达,第5、7月龄SAMP8小鼠SGC中的MeCP2蛋白较同龄SAMR1小鼠明显降低（5月龄t=2.80,P〈0.05;7月龄t=4.64,P〈0.05）。结论 SGC中MeCP2蛋白的表达水平随着快速老化小鼠听觉功能增龄性减退而降低,说明MeCP2蛋白可能与听觉形成有关。     

硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

为观察硫酸庆大霉素对培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）的细胞生存数和细胞突起长度的影响，在单离培养的出生1～5d的NIH小鼠SGC培养液中，加入不同浓度的硫酸庆大霉素（25，50，100mg／L）。培养14d后，标本用4％多聚甲醛固定，甲苯胺蓝染色，在光镜下计数SGC生存数，目镜测微尺下测量细胞突起长度。结果显示，实验组与对照组间、不同浓度实验组间的细胞生存数及细胞突起长度无明显差异（P＞0．05）。提示硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗SGC的生存和生长无明显影响，氨基糖甙类抗生素对SGC的影响可能是继发性的。     

缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞及神经纤维的影响

目的:建立耳蜗器官体外培养模型,详细观察缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)及神经纤维的影响。方法:分离生后3 d Wistar大鼠耳蜗基底膜,平铺在含有DMEM培养液的培养基内(每盘6条基底膜),2盘为1组,随机分为5组。4组作为实验组,按不同时间段(6 h、12 h、24 h、48 h)进行缺氧(37℃,90%N2,5%CO2,5%O2)培养。1组作为对照组放置在37℃、5%CO2培养箱。用抗神经丝蛋白作为一抗,对耳蜗SGC及神经纤维进行免疫荧光染色。激光共聚焦显微镜下观察缺氧时耳蜗SGC及神经纤维形态变化并计数单位面积(24 mm×36 mm)SGC数即细胞密度。结果:缺氧早期(6 h)神经纤维局灶性水肿,SGC变化不明显。12 h神经纤维局灶性断裂及崩解,SGC减少,细胞密度与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。随缺氧时间延长,神经纤维崩解和SGC缺失逐渐加重,48 h神经纤维完全崩解破坏,SGC严重缺失,细胞密度与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:缺氧造成体外培养耳蜗SGC及神经纤维损伤,神经纤维对缺氧更敏感。     

耳蜗螺旋神经节细胞的电生理实验研究现状

耳蜗螺旋神经节细胞(spiral gaaglion cell，SGC)，可将毛细胞的信号传向听觉中枢，在听觉信息的传导中起着极其重要的作用。目前，应用全细胞记录膜片钳技术，证实了SGC细胞膜上可表达多种离子通道，如电压门控离子通道，ATP控制的离子通道，神经递质受体介导的离子通道等，而各种病理状态下的SGC均伴有某些特定离子通道的电变化。对这些电变化的研究，将为我们在细胞和分子水平上诊断和治疗许多由内耳疾病所导致的耳聋和听力障碍提供可能。     

噪声性聋耳蜗螺旋神经节磷酸化c-Jun活性变化

目的:通过神经损伤性噪声引起4周昆明小鼠出现暂时性阈移(TTS)和永久性阈移(PTS),探讨听觉通路N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)活性调节耳蜗螺旋神经节(CG)磷酸化c-Jun变化.方法:采用30只昆明小鼠制作噪声性聋动物模型,进行听觉脑干诱发反应听力检测,并采用免疫组织化学对耳蜗听觉通路中NMDAR关键成分(磷酸化c-Jun)的表达进行检测.结果:噪声性聋诱导PTS后8 h、48 h、7 d、14 d CG磷酸化c-Jun的相对吸收度值明显增加,而阳性细胞数依次减少.噪声性聋诱导PTS前后立即腹膜腔注射MK-801引起相似改变.而诱导TTS后48 h则降至正常水平.结论:磷酸化c-Jun在噪声性聋后表达的增加具有时间相关性;MK-801通过阻断噪声暴露后传入神经递质谷氨酸,减少突触后钙内流所致的兴奋性毒性,从而保护听觉神经.因此,NMDAR可能参与了内耳损伤.     

大鼠耳蜗螺旋神经节细胞的定量观察

目的 为定量观察SASCO Sprague Dawley(SD)大鼠耳蜗蜗轴螺旋管(Rosenthal's canal)切片中螺旋神经节细胞的数量提供实验依据.方法 11只SD大鼠用于本实验研究,其中5只正常SD大鼠用于对照,另966只SD大鼠用于制备乌苯苷引起的螺旋神经节细胞损害模型.耳蜗样品制作耳蜗中轴半薄切片,常规甲苯胺蓝染色,对耳蜗各回蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞进行计数,计数结果采用方差分析检验.结果 一个完整蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞数量在底回末段多于耳蜗底回起始段和中回中段.与正常大鼠耳蜗螺旋神经带数量相比,1mM乌苯苷仅造成耳蜗底回的部分螺旋神经节细胞破坏,而10mM乌笨苷可破坏绝大部分螺旋神经节,乌苯苷引起的螺旋神经节破坏模式是从耳蜗底回逐渐向顶回发展.结论 计数耳蜗各回不同部位切片中的蜗轴螺旋管内螺旋神经节细胞数量是一种简便可靠的耳蜗螺旋神经节细胞定量分析方法.     

噪声性耳聋与耳蜗血管纹萎缩关系的研究

耳蜗血管纹萎缩可能对噪声有易感性，为探索耳蜗血管纹萎缩与噪声性耳聋之间的关系，利用耳蜗血管纹萎缩的豚鼠模型，进行噪声暴露后观察：①用ＡＢＲ检测耳蜗听觉功能的损害；②利用耳蜗铺片观察Ｃｏｒｔｉ器毛细胞的缺失。结果发现：①耳蜗血管纹萎缩较长组听阈升高；②耳蜗血管纹萎缩较长组噪声对耳蜗听功能损害加重，毛细胞的缺失也明显加重。提示：耳蜗血管纹萎缩较长者对噪声的损害有易感性，正是噪声对耳蜗损害个体差异的原因。通过听阈检测，有可能筛选出对噪声易感的个体。     

哇巴因对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞的损伤

目的 观察哇巴因(ouabain)对SD大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)的损伤.方法 75只雄性SD大鼠随机数字表法分为5组,除健康对照组外,其余4组经耳蜗鼓阶钻孔分别给予0.01、0.02、0.05 mmol/L哇巴因以及生理盐水.术后7d行畸变产物耳声发射(DPOAE)及听性脑干反应(ABR)测试;大鼠处死后取耳蜗组织,通过免疫组化和透射电镜观察耳蜗SGC形态学变化.体外分离培养孕14d胎鼠SGC,加入1×10-8mmol/L哇巴因,通过光镜和扫描电镜观察哇巴因对离体培养SGC的损伤.结果 鼓阶注入哇巴因后,大鼠DPOAE无明显改变,各组之间不同频率DPOAE幅值差异均无统计学意义(P值均＞0.05).耳蜗鼓阶注入哇巴因后,大鼠ABR 反应阈升高,且升高幅度随着哇巴因浓度的增加而加大;哇巴因组大鼠ABR阈值与生理盐水组及健康对照组相比,差异具有统计学意义(P值均＜0.05).电镜下哇巴因组大鼠SGC发生退行性改变,细胞器结构破坏,核膜溶解,神经髓鞘崩解、空泡化.哇巴因同样可导致离体培养SGC的损伤,胞体皱缩、变小,突起缩短、断裂,细胞结构破坏.结论 无论是在体还是体外细胞培养,哇巴因均可确切造成SGC损伤.     

耳蜗螺旋神经节细胞的损伤和再生

耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)为双极神经节细胞,是听觉传导通路的第一级神经元,其周围突与毛细胞相连,中枢突则参与组成听神经。螺旋神经节细胞在声音信号的传递与编码方面具有重要作用,容易在接触耳毒性药物、强噪声、神经营养因子(NTFs)缺乏、衰老、缺血-再灌注等因素而导致不可逆的损伤,并且引起听力损失。由于螺旋神经节细胞是高度分化的终末细胞,损伤后难以修复,使得神经性耳聋的治疗更加困难。研究发现神经营养因子和干细胞可以诱导死亡的螺旋神经节细胞再生(Regeneration)。本文将从螺旋神经节细胞的损伤机制和螺旋神经节细胞再生方面进行综述。     

碱性成纤维细胞生长因子对耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠 …

OBJECTIVE: To understand the effects of basic fibroblast growth factor (bFGF) on survival and neurogenesis of the cultured spiral ganglion cell (SGC) of mouse after exposed to glutamate, and the effects of hFGF and glutamate on free intracellular calcium ion concentration. METHODS: After exposed to 2 x 10(-2) mol/L glutamate for 2 hours, the medium of SGC was replaced with the media containing 25, 50, 100 micrograms/L bFGF. Medium without bFGF was used as control. RESULTS: Twenty-four hours later, more cells in the control group showed signs of cell death than in bFGF groups. After 14 days, specimens were fixed in 4% paraformaldehyde and stained with toluidine blue. It was shown that the SGC in medium with bFGF exhibited more survival and longer neurites, and the effect was dose dependent (P < 0.01). Application of glutamate to the medium induced an increase to the the free intracellular calcium ion concentration in SGC, but bFGF had no such effect. CONCLUSION: Glutamate excitotoxicity was associated with free intracellular calcium ion concentration elevation in SGC, and bFGF could protect SGC against glutamate neurotoxicity.     

NT3重组腺病毒对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察含有神经营养素 - 3(neurotrophin - 3,NT3)的重组腺病毒在豚鼠耳蜗中的表达及其在噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于 135dBSPL、4kHz的窄带噪声中 4h。 7天后 ,12只经圆窗注入ad -NT3,12只经圆窗注入腺病毒携带的Lac2基因 (adenviruslacopron ,ad -LacZ) ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测NT3的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中NT3均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物染色弱。注入ad -NT3组较ad -LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经t检验有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　含有NT3的重组腺病毒在耳蜗中能高效表达 ,且在噪声损伤情况下对螺旋神经节有保护作用     

碱性成纤维细胞生长因子对耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠毒性作用的影响

目的了解谷氨酸钠致单离培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤后，碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对其生存及生长的影响，以及二者对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法在培养液中加入２×１０２ｍｏｌ／Ｌ的谷氨酸钠２小时后，实验组分别换成含ｂＦＧＦ２５、５０、１００μｇ／Ｌ的培养液，对照组加空白培养液。结果２４小时后可见部分细胞裂解、死亡，对照组明显多于实验组。培养１４天后甲苯胺蓝染色证实，实验组的细胞生存数及细胞突起长度明显高于对照组，差异有显著性（Ｆ检验，Ｐ＜０．０１），且随着ｂＦＧＦ浓度增加，细胞生存数及细胞突起长度均增加，不同浓度实验组间差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。用Ｆｌｕｏ３染色，激光扫描共聚焦显微镜观察１０个螺旋神经节细胞，培养液中加入谷氨酸钠后细胞内钙离子浓度迅速上升，在１０～１５秒内达峰值，１００秒左右恢复到正常水平；加入ｂＦＧＦ后细胞内钙离子浓度无明显变化（ｔ检验，Ｐ＝０．２０４）。结论谷氨酸钠可致螺旋神经节细胞内钙离子浓度升高，ｂＦＧＦ可以降低谷氨酸钠对螺旋神经节细胞的细胞毒性。     

硫酸链霉素对豚鼠螺旋神经节细胞膜钙内流的影响

目的 观察硫酸链霉素是否影响耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGC)胞膜去极化时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2 ]i）升高的能力，并观察这种影响在不同药物浓度下以及相同药物浓度对蜗轴不同部位的螺旋神经节细胞的作用的异同，旨在深入探讨硫酸链霉素急性耳毒性的分子生物学机制。方法 豚鼠全身麻醉后断头活杀，酶－机械法分离获得单离的SGC。10umol/L的钙敏荧光探针Fluo-3/AM负载30min后用ACAS Utima型激光扫描共聚焦显微镜观察各种条件下SGC[Ca^2 ]i的动态变化。结果 ①SGC[Ca^2 ]i在标准细胞外液灌流过程中保持稳定。②150mmol/L的高钾细胞上液灌流导致12／14个细胞的[Ca^2 ]i明显升高，而高钾无钙细胞外液灌流仅有1／10个细胞[Ca^2 ]i明显的升高。③经1mmol/L、 0.1mmol/L、0.01mmol/L硫酸链霉素作用 后，再灌流高钾细胞外液则分别有0／9、6／14、7／13个细胞[Ca^2 ]i升高。④经0.02mmol/L硫酸链霉素作用后，对来源于顶回和底回的 S GC灌流高钾细胞外液分别有5／10和0／15个细胞[Ca^2 ]i升高.结论 高钾细胞外液灌流SGC[Ca^2 ]i明显升高，钙升高的来源为细胞外钙离子的内流。硫酸链霉互可以阻断这种钙离子的内流，其阻断作用具有浓度和部位依赖性。