上调NRG1对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的:探讨神经调节蛋白1（neuregulin 1,NRG1）对甲状腺癌细胞系MDA-T32和B-CPAP增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:构建pCDNA3.1-NRG1过表达载体,脂质体法转染甲状腺癌细胞系MDA-T32和B-CPAP,qRT-PCR检查转染组与对照组NRG1基因表达,Western blotting法检测各组细胞NRG1蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin V／PI双染各组MDA-T32细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果: pCDNA3.1-NRG1成功转染MDA-T32和B-CPAP细胞,转染后qRT-PCR和Western blotting结果显示NRG1基因和蛋白表达水平上调。高表达NRG1能抑制MDA-T32和B-CPAP细胞的增殖。流式细胞术结果显示,NRG1诱导MDA-T32和B-CPAP细胞凋亡。Western blotting结果显示NRG1高表达可以促进MDA-T32和B-CPAP细胞Caspase-3、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论: NRG1能够抑制甲状腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导凋亡。     

集缩素NCAPG表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的:探讨集缩素NCAPG表达与甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和凋亡的关系及可能的调控机制。方法:利用siRNA-NCAPG下调B-CPAP细胞NCAPG的表达，分别采用qRT-PCR、Western blot法检测转染组与对照组的NCAPG基因及蛋白表达量。CCK-8法检测各组细胞的增殖能力，观察NCAPG对细胞增殖的影响。为探讨NCAPG对B-CPAP细胞凋亡的影响，利用流式细胞术检测各组细胞Annexin V／PI双染情况，利用Western blot法检测各组细胞的凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达。结果:转染siRNA-NCAPG的B-CPAP细胞成功下调NCAPG的基因及蛋白表达。NCAPG表达下降抑制B-CPAP细胞的增殖。流式细胞术结果显示，下调NCAPG表达可诱导B-CPAP细胞凋亡。Western blot结果表明，下调NCAPG表达促进B-CPAP细胞Caspase-3和Bax的表达，抑制Bcl-2的表达。结论:甲状腺癌细胞B-CPAP中NCAPG促进细胞增殖，抑制其表达后可通过调节线粒体通路诱导细胞凋亡。     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

FGFR1抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究FGFR1(成纤维生长因子受体1)抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响以及机制.方法:依据前期Western Blot结果筛选出实验组和对照组,用不同浓度Ponatinib处理人乳腺癌细胞株实验组和对照组.CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖抑制率;流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡的影响;WesternBlot法检测Poantinib对FGFR1及其下游通路及凋亡相关蛋白的影响.结果:依据前期Western Blot结果,选取不表达FGFR1的MCF-7为对照组细胞,高表达FGFR1的MDA-MB-231、BT-549为实验组细胞.CCK-8结果及Annexin V-APC/7-AAD法结合流式细胞仪检测结果显示:Ponatinib呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖抑制和凋亡,对MCF-7细胞也有一定的增殖抑制和诱导凋亡作用,实验组细胞的增殖抑制率及凋亡率较对照组细胞高.Western Blot结果显示:MDA-MB-231、BT-549细胞中,p-FGFR1、p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量均明显下调;Bcl-2、Mcl-1表达量下调,Bak表达量上调(BT-549中Bak、Bax表达量均上调).MCF-7细胞中,p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量下调.结论:Ponatinib抑制MDA-MB-231、BT-549细胞增殖可能与下调p-FGFR1,进而下调p-Stat5、p-PLCy1有关,促进细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2、Mcl-1,上调Bak有关.     

曲古霉素A对肺腺癌细胞株NCI-H1299增殖的抑制作用及其机制

背景与目的：曲古霉素A（trichostatin A,TSA）是具有组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDAC@强效非竞争性抑制剂,对血液系统肿瘤和实质性肿瘤均有较强的生长抑制作用。本文观察HDACs抑制剂TSA对体外培养的肺腺癌NCI-H1299细胞株的增殖、凋亡和周期以及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测不同浓度（0.1、0.2、0.4、2.0μmol/L@的TSA对人肺腺癌NCI-H1299细胞株体外增殖的影响,流式细胞术检测药物处理后细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化;Real-time PCR检测NCI-H1299细胞内p21、CyclinB1、Bcl-2和Bax的基因表达。结果：TSA能明显抑制NCI-H1299细胞的体外生长,其抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性。TSA诱导后,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加。TSA可明显提高NCI-H1299细胞内组蛋白H4的乙酰化水平,诱导p21和Bax的mRNA表达增加,同时抑制Bcl-2和CyclinB1表达。结论：TSA可通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期而发挥体外抗肺腺癌细胞生长的作用,其机制可能与组蛋白乙酰化水平的提高以及调控相关基因p21、Bax、Bcl-2和CyclinB1的表达变化有关。     

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。      

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

汉防己甲素对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨汉防己甲素对人胃癌BGC-823细胞株的增殖抑制与诱导凋亡的作用。方法:通过MTT实验检测汉防己甲素对于细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡比,Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。结果:汉防己甲素显著抑制BGC-823细胞生长,呈时间-剂量依赖性。流式细胞术检测显示不同浓度汉防己甲素干预后,凋亡细胞比例明显增高,且呈浓度-时间依赖性。Western blotting检测显示Bax,Bad和Bak蛋白表达增加,Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达降低,Caspase-3和Caspase-9表达增加,用Caspase抑制剂z-VAD-fmk预处理4h后,z-VAD-fmk能抑制汉防己甲素引起的Caspase-3表达增加。结论:在一定条件下,汉防己甲素能够抑制胃癌BGC-823细胞增殖并且诱导其发生凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体联合洛铂对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,bFGF mAb)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响.Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率.激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态.Western blotting检测细胞内凋亡相关蛋白表达.结果:CCK-8法检测结果显示,细胞培养48 h后,bFGF mAb组和LBP组的细胞增殖受到抑制,但两药联用后的增殖抑制作用明显高于单用LBP及bFGF mAb(P＜0.05).Annexin V-FITC/PI结果显示,联合组早期、晚期凋亡率分别为(27.83±1.23)％和(39.32±1.01)％,与bFGF mAb的(6.25±0.19)％、(14.54±0.25)％和LBP的(16.54±0.39)％、(21.02±0.98)％相比,明显高于单药组的抑制率(P＜0.01).激光共聚焦显微镜显示联合用药诱导的细胞核裂解率较单用bFGF mAb及LBP的细胞核裂解率明显增多.Western blotting检测结果显示联合组BAX、Caspase-3、Caspase-9、PARP表达量较药物单用组明显增加,而Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达量明显降低.结论:bFGF mAb联合LBP通过抑制Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达,上调BAX、Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白表达,对肺腺癌A549细胞起到抑制增殖和诱导凋亡的作用.     

西咪替丁对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的研究西咪替丁对其增殖及凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法分别以不同浓度的西咪替丁处理A549细胞48 h后,采用MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot测Bcl-2和Bax蛋白表达水平情况,观察西咪替丁对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果经西咪替丁干预48 h后,A549细胞的增殖受到明显抑制,凋亡增加,且该抑制呈药物浓度依赖性增加。Western blot检测显示随着西咪替丁浓度增加,Bcl-2蛋白的表达减少,而Bax蛋白的表达增加。结论西咪替丁预处理能抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与其下调细胞Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

PAGE5对非小细胞肺癌细胞生长、凋亡和侵袭能力的影响

目的：探讨前列腺相关基因5（PAGE5）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。方法：采用实时定量PCR和Western blot方法检测37例NSCLC及其癌旁组织中PAGE5的表达;采用MTT法、流式细胞术、Transwell以及Western blot法检测转染PAGE5 siRNA对A549和H1299细胞生长、凋亡、侵袭以及Bax、Bcl－2和MMP－2表达的影响。结果：在37．84％（14／37）的肺癌组织样本中PAGE5基因表达上调。转染PAGE5 siRNA的A549和H1299细胞生长无明显变化、细胞凋亡显著增加、侵袭能力显著下降（P＜0．05）,Bax蛋白表达显著上调,Bcl－2和MMP－2蛋白表达显著下调（P＜0．05）。结论：PAGE5可能通过调控Bax、Bcl－2及MMP－2蛋白的表达影响NSCLC细胞的生长、凋亡与侵袭,有望成为肺癌诊断标志物及潜在的治疗靶点。     

Testin在非小细胞肺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨Testin基因(TES)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞株中的表达及其对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法:收集2015年1月至2015年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院手术切除的27例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,用Western blotting法检测癌组织和癌旁组织,以及正常人胚肺成纤维细胞株MRC5和肺癌细胞株A427、A549、H1299、LK2、PC9和SW900中TES蛋白的表达水平.应用短发卡RNA(shRNA)瞬时转染肺癌细胞株A549干扰TES基因的表达,并进一步检测TES低表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cas-pase-3的表达.结果:在NSCLC组织和细胞株中TES蛋白的表达明显下降(均P＜0.05).shTES干扰A549细胞后,TES mRNA和蛋白表达水平均显著下降(均P＜0.05).抑制TES表达显著增强A549细胞的增殖[(2.75±0.04) vs (1.79±0.06),P＜0.05]、迁移[(52.3±2.6)％s(19.7±1.4)%,P＜0.05]和侵袭能力[(31.2±3.9)％vs(14.5±4.1)％,P＜0.05],同时降低了细胞凋亡率[(8.2±1.1)％s(23.1±1.7)％,P＜0.05].TES低表达使A549细胞Bax和Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05)、Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:TES在NSCLC组织中呈低表达,TES表达下调具有促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并抑制凋亡等生物学效应,其有可能成为肺癌治疗一个新靶点.     

HA14-1联合顺铂诱导人小细胞肺癌细胞凋亡的研究

目的:观察HA14-1及其联合顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡诱导作用并探讨其可能的作用机制,探讨其对Bcl-2、Bax表达的的影响。方法:选用人小细胞肺癌NCI-H446细胞株为研究对象,分为空白组、DDP组、HA14-1组及DDP+HA14-1组,分别作用24、48 h后,采用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Real time PCR法比较细胞内Bcl-2、Bax表达变化。结果:随着HA14-1及DDP浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,细胞凋亡率增高,联合用药组较单独用药组细胞的抑制率,凋亡率均增高,HA14-1作用细胞后,Bcl-2表达水平下降,Bax表达水平增高。结论:HA14-1可以诱导人小细胞肺癌凋亡,并增加肺癌细胞对DDP的化疗作用。     

GATA4基因甲基化及GATA4对非小细胞肺癌生长的影响及其作用机制

目的 探讨GATA4在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的甲基化状态和GATA4对NSCLC细胞生长的作用及其可能机制。方法 收集2017年7月—2018年6月于新疆医科大学第一附属医院接受肺癌根治术的78例NSCLC患者癌组织及其癌旁组织标本,以及人肺癌细胞株A549、HCC827、NCI-H1299和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用MSP和qMSP检测GATA4基因甲基化状态,RT-PCR和Western blot检测GATA4表达。将sh-GATA4-1（sh-GATA4组）、sh-NC、GATA4过表达载体（pLV-GATA4组）及其空载体对照慢病毒液（pLV-NC组）分别转染至肺癌A549细胞中,同时设置空白对照组（Blank组）,用Western blot检测GATA4、p-ERK、ERK、p-p38和p38蛋白表达,CCK-8试剂盒检测细胞活力,细胞克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 NSCLC组织中GATA4基因甲基化率以及p-ERK、p-p38和Bcl-2蛋白表达水平均高于癌旁组织（P＜0.001）,GATA4 mRNA表达、GATA4和Bax蛋白表达均低于癌旁组织（P＜0.001）。GATA4基因甲基化程度与p-ERK、p-p38和Bcl-2蛋白表达水平呈正相关（P＜0.05）;与GATA4 mRNA表达水平,GATA4、Bax蛋白表达水平呈负相关（P＜0.05）。NSCLC细胞中GATA4呈甲基化状态,人正常肺上皮细胞BEAS-2B表现为去甲基化状态,GATA4 mRNA和蛋白表达低于BEAS-2B细胞（P＜0.01）。与pLV-NC组比较,pLV-GATA4组细胞中GATA4 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率升高（P＜0.001）,细胞活力、细胞克隆数、p-ERK/ERK和p-p38/p38蛋白表达水平降低（P＜0.05）;sh-GATA4组细胞中GATA4 mRNA、蛋白表达和细胞凋亡率低于sh-NC组（P＜0.001）,细胞活力、细胞克隆数、p-ERK/ERK和p-p38/p38蛋白表达高于sh-NC组（P＜0.05）。结论 GATA4基因在非小细胞肺癌中呈高甲基化状态并诱导GATA4基因表达降低,GATA4过表达可抑制肺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,可能通过调控MAPK通路实现。     

DCLK1 对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及机制

目的:探讨双肾上腺皮质激素样激酶1（DCLK1）对结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:采用实时定量PCR和Western blot方法检测人结直肠癌细胞系HT29、SW480及其奥沙利铂（OXA）耐药株HT29/OXA和SW480/OXA中DCLK1的表达。采用siRNA干扰HT29/OXA和SW480/OXA细胞中DCLK1的表达,并用不同浓度OXA干预细胞,CCK-8法检测细胞增殖及其对OXA的敏感性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞的Caspase-3活性,Western blot检测细胞中DCLK1、Bax、Bcl-2、多药耐药蛋白1（MDR1）、P-糖蛋白（P-gp）等蛋白的表达。结果:与亲本细胞系比较,DCLK1在HT29/OXA和SW480/OXA细胞中的mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P<0.05）。转染DCLK1 siRNA（si-DCLK1）后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的增殖活性均显著降低（P<0.05）,且它们对OXA的敏感性显著增加（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的凋亡显著增加（P<0.05）,伴随Caspase-3活性上调（P<0.05）,Bax蛋白表达上调（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.05）;转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞中MDR1和P-gp的蛋白表达均显著下调（P<0.05）。结论:DCLK1可能通过调控Bax/Bcl-2以及MDR1和P-gp的表达影响结直肠癌细胞的化疗敏感性。     

下调RAB3C减低上皮间质转化抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨RAB3C表达对非小细胞肺癌细胞A549及NCI-H1299细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:构建siR-RAB3C慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,使用qRT-PCR及Western blotting法验证每种细胞中RAB3C的mRNA及蛋白表达情况。应用Transwell实验及细胞划痕试验检测下调RAB3C后细胞侵袭情况的变化。Western blotting法比较对照组及siR-RAB3C组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达水平。结果:siR-RAB3C转染组细胞RAB3C的mRNA及蛋白表达量均下调。划痕试验结果显示,与对照组细胞相比,siR-RAB3C组细胞迁移率显著减少。Western blotting实验结果显示,下调RAB3C表达促进E-cadherin,抑制N-cadherin及Vimentin蛋白的表达。结论:调控RAB3C表达通过抑制上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549及H1299细胞侵袭转移。     

RG108 调控 TFPI-2 甲基化/TMPRSS4 表达对 NSCLC 细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨RG108对人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）A549和H1299细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养A549和H1299细胞,经不同浓度RG108处理后,采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖率、细胞周期和凋亡水平;qPCR和Western blotting（WB）法检测细胞内TFPI-2 mRNA和蛋白的表达及TMPRSS4的表达量,以甲基化特异性PCR和比色法检测细胞中TFPI-2启动子区域甲基化的状态和程度;分别采用siRNA-TFPI-2和pcDNA3.0-TMPRSS4质粒敲减TFPI-2或过表达TMPRSS4,然后检测细胞增殖率及凋亡率的变化。结果：RG108处理后,A549和H1299细胞的增殖率显著降低（均P<0.05）、细胞周期阻滞于G1/S期（均P<0.05）而凋亡率显著增加（均P<0.01）,细胞中TFPI-2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01和P<0.05）,同时细胞中TFPI-2启动子区域甲基化程度显著降低（均P<0.05）、TMPRSS4的表达也明显减少（P<0.05）。沉默TFPI-2表达后,A549和H1299细胞的增殖水平显著增加（均P<0.05）,而转染pcDNA3.0-TMPRSS4质粒则显著降低细胞的凋亡率（均P<0.05）。结论：RG108能够通过抑制TFPI-2甲基化负向调控TMPRSS4表达进而抑制A549和H1299细胞的增殖,并促进其凋亡。