橙皮苷对人翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用

目的　评价橙皮苷对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts,HPF）增生的抑制作用,对照观察丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）对HPF的影响,寻找治疗及预防翼状胬肉复发的中医中药方法。方法　将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养及传代,并采用波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学染色及DAPI染色对HPF进行鉴定。用24 μmol·L^-1、48 μmol·L^-1、64 μmol·L^-1、72 μmol·L^-1、96 μmol·L^-1、120 μmol·L^-1橙皮苷及1.5 μmol·L^-1、7.5 μmol·L^-1、30.0 μmol·L^-1 MMC作用于第3代HPF,24 h、48 h、72 h后采用MTT法检测细胞的增生抑制率,并筛选合适的浓度梯度及时间进行细胞凋亡检测,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　根据MTT法检测细胞增生抑制率的结果,选用72 μmol·L^-1及48 μmol·L^-1 的橙皮苷作为实验组,将7.5 μmol·L^-1 MMC作为MMC标准对照组,无处理细胞作为空白对照组,培养48 h后流式细胞仪检测HPF的凋亡率。结果显示,72 μmol·L^-1橙皮苷组、48 μmol·L^-1橙皮苷组、7.5 μmol·L^-1 MMC标准对照组及空白对照组的细胞凋亡率分别为（41.10±1.04）%、（24.97±3.70）%、（48.60±6.94）%及（9.20±4.67）%,各组间HPF凋亡率整体存在差异（F=43.581,P<0.001）,两两比较结果显示,除72 μmol·L^-1橙皮苷组与MMC标准对照组间差异无统计学意义（P>0.05）外,其余组间两两相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　72 μmol·L^-1橙皮苷在抑制HPF生长方面有着与MMC等同的效果,主要是通过促进HPF凋亡进而抑制HPF的增生。     

木犀草素对人脉络膜黑色素瘤细胞株C918血管生成拟态形成的影响

目的　探讨木犀草素对人脉络膜黑色素瘤细胞株C918血管生成拟态形成的影响及其可能的分子机制。方法　体外培养C918细胞,木犀草素0 μmol·L^-1、0.10 μmol·L^-1、6.25 μmol·L^-1、12.50 μmol·L^-1、25.00 μmol·L^-1、50.00 μmol·L^-1、100.00 μmol·L^-1、200.00 μmol·L^-1、400.00 μmol·L^-1作用细胞12 h、24 h后,CCK-8法测定光密度值,通过GraphPad Prism软件拟合量效曲线。根据IC₅₀值及实验目的,确定分组为对照组（木犀草素0 μmol·L^-1组）、木犀草素12.50 μmol·L^-1组、木犀草素25.00 μmol·L^-1组、木犀草素50.00 μmol·L^-1组。应用划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移、侵袭能力。在Matrigel基质胶上三维培养C918细胞并行PAS染色,显微镜下观察各组细胞血管生成拟态形成情况。Western blot检测p-PI3K P85、AKT、p-AKT蛋白表达。结果　CCK-8实验结果显示,木犀草素呈浓度依赖性和时间依赖性抑制C918细胞活力,GraphPad Prism软件拟合量效曲线,确定木犀草素作用C918细胞12 h及24 h的IC₅₀值分别为163.70 μmol·L^-1和51.46 μmol·L^-1。划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果显示,各浓度木犀草素组细胞迁移速率、侵袭能力均明显低于对照组,差异有统计学意义（均为P<0.001）;木犀草素12.50 μmol·L^-1组和木犀草素25.00 μmol·L^-1组相比,细胞迁移速率差异无统计学意义（P＞0.05）;木犀草素25.00 μmol·L^-1组和木犀草素50.00 μmol·L^-1组相比,细胞侵袭能力差异无统计学意义（P＞0.05）;其余实验组间两两相比细胞迁移速率、侵袭能力差异均有统计学意义（均为P>0.05)。显微镜下观察发现,对照组和木犀草素12.50 μmol·L^-1组C918细胞形成环状结构,且糖原PAS染色阳性,两组之间环状结构数差异无统计学意义（P＞0.05）;木犀草素25.00 μmol·L^-1组和木犀草素50.00 μmol·L^-1组仅有部分细胞形成树枝样结构,无明显环状结构形成。Western blot检测结果显示,各浓度木犀草素组p-PI3K P85、p-AKT蛋白水平均较对照组明显下调,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　木犀草素可能是通过PI3K/AKT信号通路抑制C918细胞血管生成拟态形成的。     

氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1（HINT1）表达的影响

目的　探讨过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）诱导人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1,HINT1）表达的影响。方法　将人ARPE-19细胞系分别用0 μmol·L^-1 H₂O₂（对照组）、50 μmol·L^-1 H₂O₂、100 μmol·L^-1 H₂O₂、200 μmol·L^-1 H₂O₂、400 μmol·L^-1 H₂O₂、600 μmol·L^-1 H₂O₂ 6个浓度梯度处理。采用Live/Dead荧光双染法和MTT法分别检测细胞活力和增殖能力;采用Western blot检测RPE细胞内BAX、BCL-2以及HINT1的表达水平。结果　H₂O₂处理6 h后,对照组及50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1及600 μmol·L^-1 H₂O₂组RPE细胞死亡率分别为（0.35±0.11）%、（2.03±0.87）%、（3.76±1.41）%、（12.17±1.26）%、（17.69±2.24）%、（25.22±0.59）%,RPE细胞死亡率呈剂量依赖性升高（P<0.05）。H₂O₂作用后对照组及50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、600 μmol·L^-1 H₂O₂组RPE细胞生存率分别为（40.72±2.71）%、（37.75±0.62）%、（35.30±0.68）%、（34.10±0.74）%、（33.61±0.71）%、（31.05±1.41）%,RPE细胞增殖明显减少（P<0.05）,具有剂量-效应关系。随着H₂O₂浓度的增加,BAX蛋白表达逐渐上升（P<0.01）,而抗凋亡BCL-2蛋白表达则逐渐下降（P<0.01）,BAX/BCL-2比值相比对照组分别升高1.85倍（50 μmol·L^-1 H₂O₂组）、2.35倍（100 μmol·L^-1 H₂O₂组）、2.86倍（200 μmol·L^-1 H₂O₂组）、3.97倍（400 μmol·L^-1 H₂O₂组）、8.50倍（600 μmol·L^-1 H₂O₂组）;HINT1在H₂O₂处理的RPE细胞中以剂量依赖性方式逐渐下降（P<0.01）,分别下降0.78倍（50 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.59倍（100 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.45倍（200 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.42倍（400 μmol·L^-1 H₂O₂组）、0.38倍（600 μmol·L^-1 H₂O₂组）。结论　H₂O₂氧化损伤诱导RPE细胞活力显著减弱,细胞凋亡相关蛋白BAX表达升高;同时,细胞中HINT1表达下调,表明HINT1可能通过影响细胞凋亡参与年龄相关性黄斑变性的发生,为其药物作用的潜在靶点。     

高糖对人晶状体上皮细胞沉默信号调节蛋白6（SIRT6）表达的影响

目的　观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞(SRA01/04)活性及沉默信号调节蛋白6（SIRT6）表达的影响。方法　将SRA01/04细胞在不同葡萄糖浓度（5.5 mmol·L^-1、15.5 mmol·L^-1、25.5 mmol·L^-1、35.5 mmol·L^-1、45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1）培养基中培养48 h后,用光镜观察SRA01/04细胞形态;CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性;Western blot检测各组细胞SIRT6蛋白的表达水平。然后将SRA01/04细胞用55.5 mmol·L^-1葡萄糖干预,培养不同时间（0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h）后,Western blot检测不同时间SRA01/04细胞SIRT6蛋白表达水平。免疫荧光技术检测对照组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖）和高糖组（55.5 mmol·L^-1葡萄糖）细胞的SIRT6蛋白表达情况。结果　随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的数量逐渐降低。CCK-8检测结果显示,与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组相比,随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的活性逐渐降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,SRA01/04细胞的SIRT6蛋白表达与葡萄糖呈浓度和时间依赖性,45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1葡萄糖组与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组比较,以及24 h组、48 h组和72 h组与0 h组比较,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。细胞免疫荧光结果显示,SRA01/04细胞中的SIRT6蛋白主要在细胞核表达,高糖组SRA01/04细胞中SIRT6蛋白表达较对照组显著降低（P<0.05),且高糖组细胞核出现明显的核固缩和核碎裂现象。结论　高浓度葡萄糖可以降低SRA01/04细胞的增殖活性,降低SIRT6蛋白的表达水平。     

全反式视黄酸诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

目的　探讨梯度浓度全反式视黄酸（all-trans retinoic acid,ATRA）诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的作用。方法　采用流式细胞术检测视网膜色素上皮细胞凋亡、活性氧（ROS）活性。采用实时定量聚合酶链反应和Western blot，从蛋白水平检测梯度浓度ATRA对ARPE-19细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）标记蛋白表达的影响。观察抗氧化剂NAC及ERS抑制剂Salubrinal抑制ARPE-19细胞诱导ROS和ERS的作用。结果　CCK-8检测结果显示:ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后的半抑制浓度（IC₅₀）分别为13.88 μmol?L^-1和11.99 μmol?L^-1。流式细胞术检测结果显示，10.0 μmol?L^-1、15.0 μmol?L^-1、20.0 μmol?L^-1ATRA处理后细胞凋亡水平均较对照组显著上升，差异均有统计学意义（均为P<0.001）；2.5 μmol?L^-1、5.0 μmol?L^-1、10.0 μmol?L^-1、20.0 μmol?L^-1ATRA处理后细胞的ROS水平均较对照组显著增加，差异均有统计学意义（均为P<0.001）。Western blot检测结果显示，ERS标记蛋白C/EBP同源蛋白（C/EBPhomologous protein,CHOP）、结合免疫球蛋白（binding immunoglobulin protein，BIP）的蛋白表达水平与对照组差异均有统计学意义（均为P<0.05）；经ATRA处理的模型组较对照组的血管内皮生长因子A(VEGF-A)、CHOP蛋白表达水平均显著上升，NAC-ARTA处理组、Salubrinal-ARTA处理组及NAC-Salubrinal-ARTA联合处理组较模型组的VEGF-A、CHOP蛋白表达水平均显著下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　ATRA通过激活ROS和ERS信号通路诱导ARPE-19细胞凋亡。     

甘草查尔酮A对过氧化氢致视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　研究甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对过氧化氢（H₂O₂）致视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）损伤的保护作用,为LCA在青光眼治疗方面的应用提供初步的实验依据。方法　体外培养RGC-5细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）、H₂O₂组（培养基中加入200 μmol·L^-1 H₂O₂）、LCA组（培养基中除加入200 μmol·L^-1 H₂O₂外,还分别加入10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1、40 μmol·L^-1的LCA溶液）,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果　CCK-8法检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组的细胞存活率分别为（63.7±5.4）%、（78.8±6.3）%和（72.3±6.9）%,与H₂O₂组的（54.3±3.9）%相比,20 μmol·L^-1 LCA组增殖最显著（P＜0.05）。流式细胞术检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组细胞凋亡率分别为（21.1±1.9）%、（12.3±1.3）%和（14.8±2.0）%,与H₂O₂组的（29.3±2.0）%比较,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组Bcl-2蛋白的表达均增加,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。ELISA法检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组RGC-5的丙二醛含量均降低,但超氧化物歧化酶活性均显著增加（均为P＜0.05）。结论　LCA能缓解H₂O₂诱导的RGC损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和氧化应激有关。     

PPAR-γ受体激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术后角膜上皮下雾状混浊的影响

目的　探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ）激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术（photorefractive keratectomy，PRK）术后角膜上皮下雾状混浊（haze）的影响。方法　选取普通级新西兰大白兔64只（64眼），随机分为28 μmol·L^-1罗格列酮组、14 μmol·L^-1罗格列酮组、1 g·L^-1二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）+生理盐水组、单纯PRK组，每组16只（16眼）。均行右眼PRK手术，术后分别给予28 μmol·L^-1罗格列酮、14 μmol·L^-1罗格列酮、1 g·L^-1DMSO+生理盐水滴眼，单纯PRK组未作任何特殊处理。术后各组用裂隙灯观察并比较角膜上皮愈合情况；分别于PRK术后7 d、28 d比较各组haze情况并行眼前节照相；每组分别于PRK术后7 d、28 d分批处死8只兔，取角膜行免疫组织化学法比较各组转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinases-2，MMP-2）的表达。结果　PRK术后角膜上皮愈合时间组间差异无统计学意义（P＞0.05）；PRK术后7 d、28 d，各组haze分级及TGF-β1、α-SMA、MMP-2的表达情况，组间差异均有统计学意义（均为P＜0.05），其中28 μmol·L^-1罗格列酮组haze最轻，14 μmol·L^-1罗格列酮组其次，明显轻于1 g·L^-1 DMSO+生理盐水组及单纯PRK组，除1 g·L^-1DMSO+生理盐水组及单纯PRK组组间差异均无统计学意义（均为P＞0.05）外，其余组间两两比较差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　PPAR-γ受体激动剂罗格列酮对兔PRK术后haze有抑制作用，呈浓度依赖性，可能由TGF-β1/Smad通路介导。     

石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用及其可能机制

目的 探讨石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用,并分析其可能机制。方法 取B16F10葡萄膜黑色素瘤细胞株,按石蒜碱浓度为0μmol·L^-1(对照组)、1.560μmol·L^-1、3.125μmol·L^-1、6.250μmol·L^-1、12.500μmol·L^-1、25.000μmol·L^-1进行分组培养,24 h后,CCK-8法检测各组B16F10细胞的存活率;RT-PCR分析各组B16F10细胞VEGF-A mRNA的表达,ELISA检测各组B16F10细胞VEGF-A蛋白表达;流式细胞仪检测各组B16F10细胞的细胞周期及凋亡情况。结果 与对照组相比,1.560μmol·L^-1、3.125μmol·L^-1、6.250μmol·L^-1、12.500μmol·L^-1、25.000μmol·L^-1石蒜碱作用于B16F10细胞24 h后,能够呈浓度依赖性...     

ALK5抑制剂对转化生长因子-β1（TGF-β1）致视网膜色素上皮细胞纤维化的干预作用

目的　探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）对人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞向成纤维细胞转化的影响，及活化素受体样激酶5（activated receptor kinase 5，ALK5）抑制剂（SB-431542）对这一影响的干预作用。方法　体外培养人RPE细胞，随机分为对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+SB-431542处理组、SB-431542处理组。对照组不做任何处理，其余三组分别用10 μg·L^-1 TGF-β1、10 μg·L^-1 TGF-β1+30 μmol·L^-1 SB-431542、30 μmol·L^-1 SB-431542处理细胞24 h。MTT法检测各组RPE细胞增殖率；划痕实验观察各组处理后0 h、12 h、24 h RPE细胞迁移情况；免疫荧光法检测各组细胞ALK5蛋白的分布和表达；Western blot法检测各组ALK5、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ，ColⅠ）以及纤维粘连素（fibronectin，FN）蛋白的表达。结果　与对照组相比，TGF-β1作用于RPE细胞24 h后，可改变RPE细胞表型，使其呈成纤维细胞样外观，并明显促进RPE细胞增殖和迁移。10.0 g·L^-1 TGF-β1作用24 h后RPE细胞增殖率为对照组的（1.33±0.08）倍，30 μmol·L^-1 SB-431542作用24 h后RPE细胞增殖率为10.0 g·L^-1 TGF-β1处理组的（67.77±6.78）%。经TGF-β1作用24 h后RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达显著上调，分别是对照组的（3.69±0.37）倍、（1.76±0.05）倍、（2.58±0.18）倍、（1.86±0.11）倍、（1.74±0.08）倍；SB-431542可逆转TGF-β1诱导的ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白表达上调，分别是TGF-β1处理组的（67.73±5.15）%、（71.71±3.50）%、（79.87±0.05）%、（63.59±3.16）%、（83.07±2.31）%，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　TGF-β1可促进RPE细胞增殖、迁移，向成纤维细胞转化，并能显著上调RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达；SB-431542可通过抑制TGF-β1的作用而抑制RPE细胞的纤维化。     

转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞增殖中NLRP3炎症小体的表达及意义

目的　探讨转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）刺激下Nod样受体蛋白3（nod-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体在视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）增殖中的表达变化及意义。方法　利用TGF-β刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型，随机分为空白对照组（Sham组）和TGF-β诱导RPE细胞增殖组（TGF-β组），TGF-β组再根据浓度（0.5 μg·L^-1、2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1、12.5 μg·L^-1）分组。利用MTT 微量酶比色法检测RPE细胞增殖情况；Western blot观察NLRP3蛋白的表达变化；利用标准ELISA试剂盒检测白细胞介素（interleukin，IL)-1β和 IL-18表达情况。结果　与Sham组比较，0.5 μg·L^-1 TGF-β组RPE细胞增殖不明显，差异无统计学意义（P>0.05），但NLRP3、IL-1β和 IL-18表达明显提高（均为P<0.01）；2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖明显，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均提高（均为P<0.05）；与0.5 μg·L^-1 TGF-β组相比，2.5 μg·L^-1、10.0 μg·L^-1和12.5 μg·L^-1TGF-β组RPE细胞增殖显著增加，NLRP3、IL-1β和 IL-18表达均下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　不同浓度TGF-β诱导RPE细胞增殖中NLRP3炎症小体表达变化不同，两者可能相互调控影响RPE细胞增殖，在增生性玻璃体视网膜疾病发生发展中具有重要的作用。     

纳豆激酶对高糖缺氧诱导的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨纳豆激酶(NK)对高糖缺氧导致的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)损伤的保护作用。方法 不同浓度的葡萄糖和氯化钴(CoCl₂)诱导培养ARPE-19细胞24 h后,观察细胞形态变化,采用CCK-8法检测ARPE-19细胞活性。Western blot和RT-qPCR检测紧密连接蛋白-1(ZO-1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的表达情况,筛选最佳葡萄糖和CoCl₂浓度构建体外高糖缺氧的细胞模型。CCK-8法筛选合适的NK浓度,将ARPE-19细胞分为正常糖组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖,NC组)、高糖+CoCl₂组(25.0 mmol·L^-1葡萄糖+200μmol·L^-1 CoCl₂,HG+CoCl₂组)和NK处理组(1.0μmol·L^-1 NK+25.0 mmol·L^-1葡...     

不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的　探讨不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达的影响及其调节作用。方法　SD大鼠右眼制备成角膜碱烧伤模型，随机分为对照组、0.5 g·L^-1多西环素组和1.0 g·L^-1多西环素组，每组15只。3组分别于造模后每天给予20 μL眼液溶媒、0.5 g·L^-1多西环素、1.0 g·L^-1多西环素滴眼至观察期末。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天对角膜混浊程度进行评分，并行RT-PCR和ELISA检测角膜组织中TGF-β1、MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果　与对照组相比，碱烧伤后第7天、第14天，0.5 g·L^-1多西环素组［（2.80±0.45）分、（2.20±0.45）分］和1.0 g·L^-1多西环素组［（2.00±0.00）分、（0.60±0.55）分］角膜混浊程度评分降低，且1.0 g·L^-1多西环素组更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天、第14 天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组MMP-9 mRNA及蛋白表达均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　多西环素可下调碱烧伤大鼠角膜中TGF-β1和MMP-9的表达，促进角膜愈合，并呈一定程度的剂量依赖性。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

不同浓度聚维酮碘致GFP转基因大鼠角膜毒性损伤的研究

目的　评估不同浓度的聚维酮碘（polyvinylpyrrolidone-iodine，PVP-I）对角膜的毒性损害。方法　30只GFP转基因大鼠随机分为对照组、1 g·L^-1 PVP-I组和5 g·L^-1 PVP-I组，后2组局部滴PVP-I眼液建立损伤模型，对照组采用生理盐水滴眼，以体视荧光显微镜观察各组不同时间点角膜荧光强度改变，并取各组角膜组织进行固定、包埋和切片，以HE染色或荧光显微镜观察角膜组织病理改变，采用TUNEL染色分析有无细胞凋亡。结果　体视显微镜观察发现，与对照组相比，PVP-I组角膜片随时间推移其荧光强度明显减弱。HE染色及荧光显微镜检测进一步证实PVP-I组出现角膜上皮细胞剥脱、基质细胞数量减少等病理变化，TUNEL染色提示，5 g·L^-1 PVP-I组角膜出现上皮细胞凋亡。结论　PVP-I局部滴眼可造成明确的角膜损伤，PVP-I临床应用的安全性尚有待进一步探讨。     

ROCK抑制剂Y-27632在体外培养的兔角膜内皮细胞紫外线损伤修复中的作用

目的　探讨ROCK抑制剂Y-27632在兔角膜内皮细胞（rabbit corneal endothelial cells,RCECs）紫外线损伤修复中的作用。方法　收集30只健康成年新西兰大白兔的角膜,显微镜下撕除角膜后弹力层和内皮层,用胰蛋白酶消化法获得原代RCECs。选取第2代处于对数生长期的RCECs分为三组:A组为正常对照组,RCECs为常规培养液培养;B组为紫外线照射组,RCECs经紫外线照射20 s制备细胞损伤模型,常规内皮细胞培养液培养;C组为紫外线照射+Y-27632组,在细胞损伤模型中加入终浓度10 μmol·L^-1的Y-27632细胞培养液培养。采用MTT比色法检测各组细胞活性。采用Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力。利用BrdU细胞增殖实验检测各组细胞的增殖能力。运用细胞黏附实验检测各组细胞黏附性。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞周期蛋白（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子（CDKN1B）mRNA的相对表达量。Western blot法检测各组CyclinD1和细胞周期蛋白依赖激酶（Cdk2）的表达情况。结果　MTT比色法检测结果显示,B组细胞的活性（80.61±3.40）%低于A组（100%）和C组（92.55±4.56）%,差异均有统计学意义（P=0.000、0.025）。Transwell迁移实验结果显示,B组迁移细胞数目［（39.3±4.4）个/高倍视野］较A组［（77.0±6.7）个/高倍视野］和C组［（54.3±3.4）个/高倍视野］减少,差异均有统计学意义(P=0.023、0.015）。BrdU细胞增殖实验检测结果显示,B组细胞光密度值（0.24±0.05）较A组（0.35±0.08）和C组（0.30±0.07）降低,差异均有统计学意义（P=0.001、0.015）。细胞黏附实验结果显示,B组细胞黏附性（0.183±0.010）较A组（0.541±0.010）和C组（0.353±0.030）下降,差异均有统计学意义（P=0.001、0.000）。实时荧光定量PCR检测结果显示,与A组相比,B组的CyclinD1 mRNA相对表达量（0.49±0.10）下降,CDKN1B mRNA相对表达量（1.25±0.20）上调,差异均有统计学意义（P=0.003、0.002）;C组CyclinD1 mRNA的相对表达量（0.80±0.12）比B组（0.49±0.10）增加,C组CDKN1B mRNA的相对表达量（0.90±0.16）比B组（1.25±0.20）减少,差异均有统计学意义（P=0.013、0.022）。Western blot检测结果显示,B组CyclinD1、Cdk2蛋白表达量分别为（0.21±0.09）和（0.38±0.10）,均低于A组（0.43±0.12）、（0.62±0.19）,差异均有统计学意义（P=0.014、0.005）;C组CyclinD1、Cdk2蛋白表达量分别为（0.34±0.11）和（0.51±0.14）,均高于B组,差异均有统计学意义（P=0.027、0.002）。结论　ROCK抑制剂Y-27632能增强紫外线损伤的RCECs活性,促进细胞迁移、黏附和增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对视网膜色素上皮细胞增殖及相关因子表达的影响

目的　研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）对人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞增殖及相关因子表达的影响。方法　体外培养人RPE细胞,设阴性对照组,40 mg·L^-1、 80 mg·L^-1、 160 mg·L^-1 EGCG 3个浓度药物处理组。利用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21和P27 mRNA的表达,Western blot检测色素上皮衍生因子受体（pigment epithelium derived factor receptor,PDGFR-α)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB）和IκB蛋白的表达情况。结果　MTT实验结果显示,40 mg·L^-1、80 mg·L^-1、160 mg·L^-1 EGCG药物处理组随着作用时间的延长,对人RPE细胞的增殖抑制作用也逐渐增强;随着药物浓度的增加,EGCG的增殖抑制作用也增强（均为P<0.05）。160 mg·L^-1 的EGCG 在72 h的细胞增殖抑制率达到81.11%。随着EGCG浓度的增加,培养的人RPE细胞中G1期和G2期细胞比例减少,S期细胞比例增加,80 mg·L^-1、160 mg·L^-1EGCG药物处理组S期细胞比例与阴性对照组相比增加极显著（均为P<0.05）。EGCG对细胞周期的影响作用具有明显的剂量依赖性。与阴性对照组相比,80 mg·L^-1、160 mg·L^-1EGCG药物处理组细胞内的P21和P27 mRNA表达均有不同程度的升高（均为P<0.05）;40 mg·L^-1 EGCG药物处理组与阴性对照组相比,P27 mRNA表达也增高（P=0.015）,而P21 mRNA表达增高不明显（P=0.824）。P21和P27 mRNA表达量与EGCG浓度呈明显量效依赖关系（均为P<0.05）。Western blot结果显示,40 mg·L^-1、80 mg·L^-1、160 mg·L^-1 EGCG作用人RPE细胞后,NF-κB蛋白表达随着浓度的增加而减少,各药物处理组与阴性对照组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。80 mg·L^-1、160 mg·L^-1 EGCG亦能够抑制人RPE 细胞IκB蛋白和PDGFR-α蛋白表达,与相应阴性对照组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。EGCG对人RPE细胞内PDGFR-α、NF-κB和IκB的蛋白表达抑制作用呈明显的浓度依赖性（均为P<0.05）。结论　EGCG可以有效地抑制人RPE细胞的增殖,其机制可能与EGCG将人RPE细胞阻滞于S期,上调P21及P27 mRNA表达,下调PDGFR-α、NF-κB和IκB蛋白表达有关。     

无血清器官培养法保存大鼠角膜内皮细胞的活性

目的:研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)和无动物成分培养基(animal compoundfree medium,ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的应用效果。方法:将大鼠角膜密闭保存于ECM和ACF培养基中4wk,再经葡聚糖T500脱水2d。以含低浓度牛血清的MEM基础培养基作为对照。计数保存前后角膜内皮细胞密度,检测保存结束大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达水平,评估内皮细胞层的屏障功能。结果:保存结束后,MEM+20mL/L FBS对照组大鼠的角膜内皮细胞密度值最低,ECM+20mL/L FBS组则高达2250±202个/mm2,ECM和ACF组结果与ECM+20mL/LFBS组接近,细胞死亡率也较低,组间差异有统计学意义(F=28.965,P=0.000)。冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠角膜内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在各组的表达趋势与内皮细胞密度结果一致(F=592.751,P=0.000)。结论:无血清ECM和ACF培养基可以很好地保持器官培养法保存角膜内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能。     

高糖抑制角膜缘干细胞间质性及其迁移能力的研究

目的　探讨高糖环境对角膜缘干细胞增殖、迁移能力及表面分子标志的影响。方法　通过细胞免疫荧光、细胞增殖检测（CCK-8）、划痕和Transwell实验观察角膜缘干细胞在高糖环境下的迁移及增殖能力的改变。选取16只SPF级大鼠用链脲霉素进行糖尿病造模，14只正常SPF级大鼠作为对照组，刮除两组大鼠角膜上皮观察上皮创伤愈合情况，采用HE染色和免疫组织化学染色探讨糖尿病对角膜缘干细胞表面分子标志及细胞状态的影响。结果　高糖可导致体外培养的角膜缘干细胞增殖减慢，24 h、48 h及72 h增殖率为0.728、0.345及0.395，较对照组明显降低（P<0.05），迁移功能障碍（48 h时正常对照组迁移率为100%，高糖组为17.6%）；高糖组细胞表面分子β-catenin和vimentin的mRNA和蛋白表达水平降低、细胞内定位异常。糖尿病大鼠角膜上皮创伤后愈合延迟，角膜组织HE染色发现糖尿病大鼠角膜上皮层变薄，基底细胞结构紊乱、形态异常。角膜免疫组织化学染色发现与对照组相比，角膜基底细胞的vimentin和β-catenin蛋白表达明显降低。结论　高糖可导致角膜缘干细胞迁移障碍和增殖抑制，其损伤机制与高糖导致角膜缘干细胞表面分子标志的丢失有关。