miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

TRIM21 通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖及耐药

目的：探讨TRIM21 通过激活Wnt/β-catenin 信号通路调控卵巢癌细胞增殖以及PARP抑制剂耐药的相关机制。方法：收集2018 年1 月至2019 年1 月于延安市人民医院手术切除的8 例卵巢癌组织及宫颈上皮组织标本,并根据患者是否对PARP抑制剂尼拉帕尼耐药分为耐药组和非耐药组（4 例/组）;卵巢癌细胞系CAOV3、SKOV3、OVCAR3、ES-2、HO8910、A2780 和OV2008。用qPCR 法和Western blotting（WB）分别检测卵巢癌组织和细胞系中TRIM21 和β-catenin 表达水平。构建TRIM21 过表达及敲减细胞系,用CCK-8 法检测各组细胞的增殖活力,用TOP/FOP 双荧光素酶实验检测TRIM21 对Wnt信号通路激活的影响,qPCR法和WB检测TRIM21 对β-catenin mRNA和蛋白水平的影响,并通过Wnt通路抑制剂XAV-939 作进一步验证。结果：TRIM21 在卵巢癌组织中的表达水平显著高于宫颈上皮组织（P<0.01）,且在耐药组织中表达水平较高（P<0.01）;TRIM21 在卵巢癌ES-2 细胞中表达水平相对最高,而在CAOV3 和A2780 中表达水平相对较低（均P<0.01）。敲减TRIM21 后,ES-2 细胞中TRIM21 的表达水平显著降低（P<0.01）,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）;过表达TRIM21 后,CAOV3 细胞的增殖能力显著增强（P<0.01）,并可抑制尼拉帕尼的抗肿瘤增殖活性,其可调控Wnt/catenin 通路的激活,而敲减β-catenin 或使用Wnt/β-catenin 抑制剂XAV-939 后,TRIM21 在卵巢癌中的作用被显著逆转。结论：TRIM21 可通过调控Wnt/β-catenin 信号通路增强卵巢癌细胞的增殖能力并在PARP抑制剂尼拉帕尼耐药过程中发挥一定的作用。     

Wnt/β-catenin信号通路在食管癌变中的作用

Wnt家族基因编码一组糖蛋白信号分子,这些分子激活的信号通路在人类不同肿瘤细胞中的作用相互交织,β-catenin是Wnt信号通路正向调节的重要效应分子,该分子在细胞质内降解的失调可于细胞核内累积激活一系列靶基因的转录,导致肿瘤发生.近来,Wnt信号通路及其关键组分β-catenin在食管癌形成过程中的作用越来越受到重视,阻断Wnt途径,在食管癌治疗中可能是一个新的靶点.     

Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌细胞VEGF表达的调控作用

背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.7倍(P<0.01);同时,激活Wnt/β-catenin信号通路能够上调人肠癌HCT-116细胞VEGF表达水平,并在24 h时差异最显著,是对照组的1.85倍(P<0.01);而抑制Wnt/β-catenin信号通路能够显著下调VEGF表达,是对照组的0.68倍(P<0.01)。结论:Wnt/β-catenin信号通路能够调控人肠癌细胞VEGF表达。     

黄腐酚类似物通过cAMP/Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖降低对顺铂的耐药性

目的:探究黄腐酚（xanthohumol,XN）类似物通过cAMP/Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖的作用及对顺铂耐药性的影响。方法:以人卵巢癌细胞株HO-8910为研究材料,分为不同浓度(0、5、7.5、15、20 μmol/L)黄腐酚类似物组、对照组、顺铂组、黄腐酚类似物+顺铂组。采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、实时荧光定量酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测黄腐酚类似物对HO-8910细胞增殖及对顺铂耐药性的影响。结果:与对照组比,黄腐酚类似物能够明显抑制HO-8910细胞增殖,差异具有统计学意义（P<0.05）;黄腐酚类似物a13+顺铂组HO-8910细胞对顺铂的半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）显著低于顺铂组,细胞活性抑制率（inhibition rate,IR）显著高于顺铂组,差异具有统计学意义（P<0.05）;PKIβ（cAMP抑制剂）、IWP-2（Wnt/β-catenin抑制剂）可降低黄腐酚类似物a13对HO-8910细胞增殖的抑制作用,逆转黄腐酚类似物a13抑制HO-8910细胞对顺铂的耐药作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:黄腐酚类似物可提高顺铂对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,降低细胞对顺铂的耐药性,作用机制与激活cAMP/Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路影响胶质瘤U251细胞增殖的实验研究

目的 探讨桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞U87,采用不同浓度桑根皮素(1、5、25、50、100μmol/L)作用于U87细胞,分别采用MTT法、细胞集落形成法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性.采用Western blotting法和细胞免...     

Wnt/β-catenin信号通路激活诱导食管癌Eca-109细胞miRNA表达谱的研究

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞癌Eca-109细胞系miRNA表达的影响,为靶向该通路相关miRNA治疗提供实验依据。方法:食管癌Eca-109细胞分别以培养基终浓度10ng/ml、20ng/mlWNT3a处理48小时,细胞免疫荧光、Western-blot、RT-PCR检测β-catenin表达水平;芯片检测WNT3a处理组和对照组miRNA表达谱;qRT-PCR验证miRNAs表达水平。结果:WNT3a可上调食管癌细胞β-cate-nin mRNA和蛋白水平,增加其细胞核内分布;芯片检测经qRT-PCR验证,WNT3a处理后食管癌Eca-109细胞相对于未处理组miR表达改变,其中miR-21(3.87倍,P=0.002)、miR-638(2.90倍,P=0.016)显著升高;miR-107(0.18倍,P=0.003)、miR-99b(0.33倍,P=0.019)明显降低,差异均具有统计学意义。结论:Wnt/β-catenin信号通路激活影响食管癌Eca-109细胞miRNAs表达,提示Wnt/β-catenin信号通路的功能也可能通过调控相关miRNA表达参与实现。     

shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT和细胞周期的实验研究

目的:探讨过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞上皮-间质转化和细胞周期的作用机制。方法:将课题组前期已成功转染过表达KLF4的BGC-823细胞分为KLF4过表达载体组(BGC823-OE组)、空病毒载体组(BGC823-NC组)和未经处理的BGC-823细胞组（BGC823-Ctrl组）。Western blot和qRT-PCR检测KLF4、EMT和Wnt信号通路相关蛋白和mRNA在三组细胞中的表达水平。CCK-8实验、划痕实验、Transwell迁移实验、平板克隆实验和流式细胞术观察各组细胞的增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和细胞周期变化情况。结果:Western blot和qRT-PCR实验结果显示BGC823-OE组KLF4蛋白和mRNA表达水平明显升高。上皮-间质转化的上皮标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白和mRNA表达水平降低。Wnt信号通路下游靶基因β-catenin和Cyclin D1的蛋白和mRNA表达水平降低。CCK-8增殖实验结果显示BGC823-OE组的增殖能力下降。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示BGC823-OE组的迁移能力下降。平板克隆结果显示BGC823-OE组的克隆能力下降。流式细胞术结果显示BGC823-OE组G0/G1期比例增高,S期比例降低。结论:过表达KLF4可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT及阻滞胃癌细胞的细胞周期。     

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤耐药中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,并且诱导肿瘤的耐药,是介导组织癌变的关键通路.体外实验表明,靶向抑制Wnt/β-catenin能够增强化疗药物的敏感性.因此对Wnt/β-catenin介导肿瘤耐药的深入研究将为肿瘤的治疗提供可能途径和潜在靶点.     

FGF3和FGF10对人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的 探讨FGF3和FGF10对人卵巢癌SKOV3细胞株迁移和侵袭的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用人工合成siRNA干扰细胞的FGF3和FGF10基因,运用Real-time PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测干扰效果。Transwell检测FGF3和FGF10蛋白表达下调后细胞迁移和侵袭能力的变化。采用LiCl激活Wnt/β-catenin信号通路,运用Real-time PCR检测FGF3和FGF10基因的变化。结果 FGF3和FGF10基因沉默组细胞迁移和侵袭能力与阴性对照（NC）组细胞、未处理组SKOV3细胞相比明显减弱（P<0.05）,NC组与未处理组SKOV3细胞迁移和侵袭能力差异无统计学意义（P>0.05）。 激活Wnt/β-catenin信号通路后,FGF3和FGF10基因水平增高。结论 FGF3和FGF10基因受Wnt/β-catenin信号通路的调控,促进人卵巢癌SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

miR-139-5p通过调节Wnt/β-catenin信号通路在卵巢癌中发挥抑癌作用

目的:探讨miR-139-5p表达的改变对卵巢癌的影响,并进一步探索其中的信号通路。方法:通过RT-PCR（real time-polymerase chain reaction）测量卵巢癌组织样品中miR-139-5p的表达水平。通过细胞实验,包括CCK-8（cell counting kit-8）、集落形成和Transwell测定,探索miR-139-5p对卵巢癌细胞功能的影响。通过荧光素酶基因测定确认miR-139-5p的靶基因,并通过质粒转染检验miR-139-5p对Wnt/β-catenin信号通路的作用。结果:miR-139-5p在卵巢癌组织及卵巢癌细胞中表达明显降低。miR-139-5p过表达可明显抑制卵巢癌细胞的活性、增殖和迁移能力,并且在裸鼠体内可明显抑制卵巢癌的体积和质量。miR-139-5p过表达可抑制β-catenin蛋白的表达,从而抑制卵巢癌的增长。结论:miR-139-5p的过表达可通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展,其可能是一种抑制卵巢癌进展的肿瘤抑制因子。     

那可丁通过下调钙黏素17 及Wnt3a/β -catenin 信号通路抑制结肠癌SW480 细胞迁移

[摘要] 目的: 探讨那可丁（Nos）对结肠癌SW480 细胞钙黏素17（CDH17）表达的影响及其对细胞迁移的作用机制。方法:选用SW480 细胞,分为对照组、空载组（si-EV）、CDH17 干扰组（si-CDH17）、Nos 处理组和CDH17 干扰+Nos 处理组（si-CDH17+Nos）,其中CDH17 干扰采用小干扰RNA（siRNA）敲低CDH17 水平,Nos 处理使用半数抑制质量浓度（55.30±2.21）μg/ml。用qPCR检测SW480 细胞CDH17 mRNA表达水平,用Hoechst33258 染色法和Transwell 实验检测细胞的凋亡和迁移能力,用ELISA检测细胞中VEGF、MMP2 和MMP9 含量,用WB检测细胞CDH17、Wnt3a 和β-catenin 蛋白表达水平。结果: 与对照组相比,Nos组、si-CDH17 组和si-CDH17+Nos 组的CDH17 mRNA及蛋白表达水平明显降低（均P<0.01）,细胞凋亡增加、迁移能力减弱,细胞中VEGF、MPP2 和MPP9 含量及Wnt3a 和β-catenin 蛋白表达水平显著降低（均P<0.01）,且si-CDH17+Nos 组比si-CDH17 组效果更显著（P<0.01）。结论: Nos 可诱导人结肠癌SW480 细胞凋亡、抑制其迁移能力,其机制可能与下调CDH17 表达抑制Wnt3a/β-catenin信号通路有关。