新城疫病毒对小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)7793株在体内对肿瘤生长的抑制作用及机制.方法:体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,通过皮下接种NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型.NDV组裸鼠瘤内注射新城疫病毒,阳性对照组注射顺铂(cisplatin,DDP),阴性对照组注射PBS.观察移植瘤生长情况和裸鼠体质量变化,绘制肿瘤生长曲线.6周后处死裸鼠剥取肿瘤组织,HE染色观察细胞学变化,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果:NDV注射对肿瘤生长有显著抑制作用,抑瘤率达34.1%;NDV对荷瘤鼠无不良反应;光学显微镜下观察发现,NDV治疗组肿瘤组织有许多散在分布的凋亡/坏死区域.NDV能明显上调Bax蛋白的表达量(P＜0.01),对Bcl-2蛋白表达则无影响.结论:新城疫病毒7793株在体内能够有效抑制移植瘤生长,其抗肿瘤机制可能与上调Bax蛋白的表达有关.     

沉默HMGB1 基因对裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤生长的抑制作用

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）基因对裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤生长的影响。方法：选取对数生长期的人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3 细胞建立裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤模型,将造模成功的裸鼠随机分成对照组和HMGB1-siRNA 组,分别在接种细胞后第7、9、11、14、16 天于荷瘤鼠腋下注射等量的生理盐水和HMGB1-siRNA。3 周后颈椎脱臼法处死裸鼠、分离肿瘤组织,测量肿瘤的体积并绘制肿瘤生长曲线,以Tunel 染色法检测移植瘤细胞的凋亡情况,Western blotting 检测移植瘤组织中HMGB1、STAT3、p-STAT3 的表达水平,免疫组化染色技术检测移植瘤组织中VEGF-A的表达和微血管形成情况。结果：与对照组相比,HMGB1-siRNA组的肿瘤体积增长速度减缓,第21 天起HMGB1-siRNA组的肿瘤体积显著小于对照组（P<0.05）;HMGB1-siRNA 成功敲降了移植瘤组织细胞中HMGB1 mRNA的表达,移植瘤组织中HMGB1-siRNA组的细胞凋亡率较对照组显著升高[ （34±8）% vs（6±2）%,P=0.04],HMGB1 和p-STAT3 表达显著降低（P<0.05）,VEGF-A表达和微血管数均显著低于对照组（均P<0.05）。结论：敲降HMGB1 基因可能通过抑制HMGB1/STAT3 信号通路降低VEGF-A的表达和微血管形成,从而促进肿瘤组织细胞凋亡和减缓移植瘤生长。     

雄黄对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤细胞凋亡的基础研究

目的:观察中药雄黄诱导卵巢癌细胞凋亡及血管生成的作用。方法:应用流式细胞术、荧光显微镜、透射电子显微镜和免疫组织化学等技术,以细胞凋亡和VEGF为主要观测指标,观察中药雄黄对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤抗肿瘤作用。结果:雄黄可诱导荷人卵巢癌裸鼠移植瘤细胞凋亡,抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,阻止血管生成抑制细胞DNA的合成,并可延长小鼠存活时间。结论:雄黄可通过诱导卵巢癌细胞凋亡,阻止血管生成,抑制细胞DNA的合成等多种途径发挥抗肿瘤作用,具有广阔的应用前景。     

染料木素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用及其机制的探讨

目的:探讨染料木素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其机制。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射的给药方式探讨染料木素对卵巢癌的抑制作用,并用蛋白质印迹法检测染料木素作用后移植瘤组织Cyclin B1和Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:染料木素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有抑制作用且呈剂量效应正相关,与对照组比较,染料木素低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率差异均有统计学意义,t值分别为9.103、51.226和91.735,P均<0.001。染料木素可下调Cyclin B1蛋白的表达并上调Cyclin D1蛋白的表达。结论:染料木素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用可能通过下调Cyclin B1蛋白表达并上调CyclinD1蛋白表达而实现。     

pS2在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的：研究pS2在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化Envision二步法，检测91例上皮性卵巢癌组织中pS2的表达。结果：pS2在上皮性卵巢癌中阳性表达率为61．5％（56／91）。pS2阳性表达与ER，PR之间及临床分期，病理学类型及腹水细胞学之间差异有显著性（P＜0．05）；而与组织学分级无相关性（P＞0．1）。化疗不影响pS2在卵巢癌中的表达；pS2的表达与晚期卵巢癌化疗效应之间也无明显相关性（P＞0．1）。结论：pS2在上皮性卵巢癌中的表达仍为激素依赖性；在ER，PR高表达及黏液性囊腺癌，临床分期早或腹水细胞学阴性患者，其表达率高（P＜0．05）。但pS2尚不能作为一个独立指标来预测晚期卵巢癌对化疗的反应。     

精子蛋白17在上皮性卵巢癌中的异常表达

目的:探讨精子蛋白17(sperm pro-tein17,Sp17)在各类卵巢恶性肿瘤中的表达谱,并分析其意义。方法:用免疫组化技术检测65例卵巢恶性肿瘤组织标本Sp17的表达。结果:41例原发上皮性卵巢癌组织切片,18例不同程度地显示Sp17的异常表达,阳性率为43·9%;免疫细胞化学染色还在卵巢癌患者腹水中发现Sp17阳性癌细胞。7例卵巢原发的非上皮性恶性肿瘤和17例卵巢转移癌组织切片(原发癌来源于胃、结肠、输卵管、胆囊和肺等器官),免疫组化染色均未检出Sp17。结论:Sp17在原发上皮性卵巢癌中常见蛋白质水平的异常表达,在其他卵巢恶性肿瘤中未见表达,有可能作为上皮性卵巢癌新的诊断标志和免疫治疗靶标。     

pS2在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:研究pS2在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化Envision二步法,检测91例上皮性卵巢癌组织中pS2的表达。结果:pS2在上皮性卵巢癌中阳性表达率为61.5％(56/91)。pS2阳性表达与ER、PR之间及临床分期、病理学类型及腹水细胞学之间差异有显著性(P<0.05);而与组织学分级无相关性(P>0.1)。化疗不影响pS2在卵巢癌中的表达;pS2的表达与晚期卵巢癌化疗效应之间也无明显相关性(P>0.1)。结论:pS2在上皮性卵巢癌中的表达仍为激素依赖性;在ER、PR高表达及黏液性囊腺癌、临床分期早或腹水细胞学阴性患者,其表达率高(P<0.05);但pS2尚不能作为一个独立指标来预测晚期卵巢癌对化疗的反应。     

转染TRAIL的内皮祖细胞对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)有广谱的抗瘤作用,且对正常组织细胞无毒性,因此有望应用于肿瘤基因治疗。内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)在体内能定向归巢于肿瘤,参与肿瘤新生血管的建立。本研究以EPC为载体,观察TRAIL转染EPCs对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法:用磁珠分离法从脐血中分离EPCs,并进行体外培养扩增。用脂质体将带有GFP-TRAIL基因的质粒转入EPCs(TRAIL-EPCs)。将转染后的EPC经尾静脉注入3AO卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。流式细胞仪检测各组中绿色荧光蛋白(Green-Fluoroprotein,GFP)表达情况,观察各组移植瘤体积的变化,计算抑瘤率。结果:静脉注射转染TRAIL后的EPC,对卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长具有明显抑制作用,对照组裸鼠的瘤重(0.226±0.209)g,而TRAIL细胞因子治疗组、GFP-TRAIL转染组裸小鼠的瘤重分别为(0.118±0.164)g、(0.075±0.084)g;TRAIL细胞因子组的抑瘤率为48.1%,TRAIL转染组抑瘤率为66.9%。肿瘤组织石蜡切片HE染色检查显示TRAIL细胞因子组,TRAIL转染组转对照组有更多的出血坏死区。TRAIL细胞因子组,TRAIL转染组均无明显毒副作用的表现。结论:TRAIL细胞因子和TRAIL-EPCs对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤均有明显的抑制作用,EPC在裸鼠皮下移植瘤模型体内有一定的导向作用,有希望成为基因治疗的载体。     

放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

目的:研究放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素(recombinant human endostatin, rh-Endostatin)对肺腺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法: 40 只裸鼠A549细胞移植瘤模型随机分成4组:空白对照组、rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤体积抑制率;肿瘤组织行常规HE病理学检查,免疫组织化学法检测肿瘤组织中微血管内皮CD31的表达及肿瘤微血管密度(microvessel density, MVD)的变化;采用免疫组织化学及Western印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡. 结果:治疗第8天起,放疗联合rh-Endostatin治疗组的肿瘤体积与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).15 d后,rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组小鼠的肿瘤体积的抑制率依次为68.35%、90.78%和106.56%; rh-Endostatin治疗组小鼠的MVD较放射治疗组下降明显(P＜0.05);但rh-Endostatin治疗组与对照组、放疗联合rh-Endostati治疗组及放射治疗组相比,VEGF的改变差异均无统计学意义;放疗联合rh-Endostatin治疗组细胞凋亡明显.结论:放疗联合周剂量rh-Endostatin能抑制肿瘤的生长,较早诱导肿瘤退缩,可能与减少放射治疗后肿瘤血管再生及增加肿瘤细胞和内皮细胞的凋亡相关;各治疗组小鼠均未出现急性不良反应,因此该方法具有短疗程的优势,可用于临床推广.     

IP6对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低剂量IP6组和高剂量IP6组,用药20 d后处死小鼠.比较各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,透射电镜观察移植瘤细胞形体变化,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,并运用RT-PCR、蛋白质印迹法检测移植瘤Bcl-2及Bax基因和蛋白的表达.结果:IP6组出现典型凋亡现象,PCR及蛋白检测也显示IP6可显著上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);在移植瘤质量和体积方面,用药组与对照组差异无统计意义,P＞0.05,但用药组移植瘤呈现下降趋势.结论:IP6可能通过促进细胞凋亡而起到抑制和延缓肿瘤生长的作用,其机制可能与上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

抗肝癌重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察二硫键稳定人源化抗肝癌单链抗体(humanized disulfide stabilization single chain antibody,hdsFv)融合牛蛙核糖核酸酶(rana catesbeiana ribonuclease,RC-RNase)重组免疫毒素(hdsFv-RC-RN-ase)对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌细胞系SMMC-7721细胞接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠移植瘤动物模型,随机分为3组,分别经尾静脉注射给予生理盐水、盐酸多柔比星和抗肝癌hdsFv-RC-RNase治疗,疗程为2周。通过测量各实验组裸鼠肿瘤体积及瘤质量变化,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。治疗结束后取各组裸鼠肿瘤组织及重要器官HE染色,光学显微镜下观察。结果:治疗后hdsFv-RC-RNase组与空白对照组相比较,荷人肝癌裸鼠移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小,P<0·01;同样,与盐酸多柔比星组相比较差异有统计学意义,P<0·01。hdsFv-RC-RNase组和盐酸多柔比星组抑瘤率分别为(78·9±4·1)%和(70·3±6·6)%,P<0·01。光学显微镜下观察hdsFv-RC-RNase组和盐酸多柔比星组肿瘤组织出现明显坏死,尤以前者更为显著。各实验组裸鼠重要器官未见明显异常。结论:抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长具有良好的抑制作用。     

环氧合酶-2抑制剂联合顺铂对卵巢癌抑制效果的研究

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂与顺铂联合应用产生协同的抗卵巢癌作用。方法利用移植卵巢癌细胞株小鼠模型,研究环氧合酶-2抑制剂美洛昔康联合顺铂对小鼠生存期限、肿瘤生长以及小鼠体内前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE：）水平、VEGF表达的影响。结果单独使用顺铂或美洛昔康均可延长DISS腹水小鼠的生存时间、抑制OVCAR-3肿瘤细胞的生长（P〈0．01）,并可降低恶性腹水小鼠的腹水及转移瘤小鼠血清中的PGE：水平（P〈0．01）,降低转移肿瘤组织中VEGF的表达（P〈0．01）。联合用药与单独使用顺铂或美洛昔康比较,明显增加对实验小鼠的抑制肿瘤效果。结论美洛昔康与顺铂联合使用对卵巢肿瘤的生长抑制有协同增效的作用。     

重组人IL-24蛋白诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡

目的研究重组人IL-24蛋白（rhIL-24）选择性诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡的作用。方法重组由Igk前导肽、IL-24cDNA（不含自身信号肽）和myc—tag组成的融合基因（Igk7m），构建表达载体pcDNA3．1-Igk7m，稳定转染293细胞，表达并粗提分泌性rhIL-24蛋白。以人肝癌细胞株PLC／PRF／5（p53突变型）、SMMC-7721（p53野生型）和正常人肝细胞株WRL-68为靶细胞，用活细胞计数法和TUNEL法分析rhIL-24处理对培养的靶细胞生长和凋亡的影响。结果经测序鉴定，融合基因各片段的核苷酸序列和总阅读框架完全正确。应用Westernblot在筛选的转基因293细胞克隆和其培养上清中均检测到rhIL-24蛋白，分子量分别约为25kDa和35kDa。与WRL-68对照组相比，分泌性rhIL-24蛋白粗提液处理可显著抑制PLC／PRF／5和SMMC-7721肝癌细胞的生长增殖（P〈0．01）。rhIL-24蛋白处理还可显著增加PLC／PRF／5和SMMC-7721的凋亡细胞百分率（P〈0．01），而对正常肝细胞WRL-68无明显影响（P〉0．05）。结论rhIL-24蛋白能选择性诱导培养的肝癌细胞株PLC／PRF／5和SMMC-7721生长抑制和凋亡。     

卵巢癌相关细胞凋亡通路及治疗性诱导剂的研究进展

卵巢癌（ovarian cancer,OC）是死亡率最高的女性生殖系统恶性肿瘤,严重威胁女性健康。目前以铂类为基础的联合化疗是女性生殖系统恶性肿瘤最常用的化疗方案。然而,很多卵巢癌临床上对以铂类为基础的化疗存在抗药性,严重影响临床疗效。因此,对卵巢癌细胞抗药性研究对卵巢癌的治疗意义重大。前期研究发现卵巢癌细胞的抗凋亡能力是导致患者在化疗过程中产生抗药性的重要原因。本文就卵巢癌相关细胞凋亡通路（JAK2/STAT3、Wnt/β-catenin、MET/HGF、MAPK/ERK、PI3K/AKT/mTOR）及其相关的治疗性诱导剂进行相应综述,以期为后续相关研究提供理论依据。     

pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的抑制

目的:研究靶向hTERT基因的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对人结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。方法:于裸鼠右侧腋下皮下注射人结直肠癌SW480细胞建立结直肠癌移植瘤动物模型,随机分为生理盐水组(NS组)、pGPU6/GFP/Neo-NC-shRNA组(NC-shRNA组)和pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA组(hTERT-shRNA组),各组连续进行相应治疗6次后,观察肿瘤的生长状况,测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,H-E染色观察肿瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测移植瘤组织中hTERT蛋白的表达,TUNEL法检肿瘤组织中细胞凋亡情况,RT-PCR法检测瘤组织中hTERT mR-NA的表达。结果:与NC-shRNA组和NS组比较,hTERT-shRNA组移植瘤体积增长速度减慢;hTERT-shRNA组移植瘤组织中见肿瘤细胞形态明显改变,凋亡细胞数明显增多[(36.30±5.05)%vs(5.25±1.06)%、(6.95±1.07)%,P<0.01];hTERT-shRNA组hTERT的mRNA和蛋白表达均明显受到抑制(171.42±30.94 vs 146.89±21.43、137.35±25.49,P<0.01;0.39±0.09 vs 0.81±0.335、0.750±0.206,P<0.05)。结论:重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA通过下调hTERT mRNA和蛋白水平的表达促进肿瘤细胞的凋亡,抑制结直肠癌移植瘤的生长。     

白桦酯醇对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察白桦酯醇对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用及对Bcl-2和Caspase-3表达的影响.方法：建立卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型,将30只荷瘤鼠随机分为5组：空白对照组、白桦酯醇高、中、低浓度组和顺铂组（阳性对照）.21天后处死裸鼠,称取瘤重量,观察抑瘤率;免疫组织化学SP法检测移植瘤Bcl-2和Caspase-3的表达.结果：高、中、低组抑瘤率为54.19％、35.75％、20.67％,与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;高剂量组抑瘤率与顺铂组无差异（P＞0.05）.免疫组化显示,各治疗组Bcl-2的表达较空白对照组明显下调;Caspase-3的表达较空白组明显活化,其高剂量组表达与阳性药物顺铂相当.结论：白桦酯醇有一定的抑制卵巢癌生长的作用,可能与其诱导细胞凋亡有关.     

Endostatin对结肠癌生长和转移抑制作用的实验研究

背景与目的:结肠癌的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成,诱导结肠癌细胞凋亡,有效地抑制结直肠癌的生长和转移。肿瘤的抗血管生成治疗对选择手术时机和方式、制定综合治疗方案,提高结肠癌患者5年生存率都具有重要意义。本实验研究血管生成抑制因子Endostatin对结肠癌生长和转移的抑制作用,并探讨其对结肠癌细胞凋亡的影响。方法:采用人结肠腺癌细胞株SW1116完整组织块裸鼠原位种植,建立类似于临床的结肠癌转移裸鼠模型。种植后第1周开始皮下注射Endostatin,每天一次,剂量为0mg/kg(对照组)、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg(治疗组),共用6周。种植后第7周处死动物,测量原位肿瘤瘤重、抑瘤率、肿瘤微血管密度(intratumoralmicrovesseldensity,MVD)、肿瘤细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI),观察肿瘤细胞腹膜、肝、其他脏器转移及腹水情况。结果:Endostatin剂量为0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg时,原位肿瘤瘤重分别为(1.31±0.36)g、(0.42±0.17)g、(0.21±0.09)g、(0.13±0.05)g;抑瘤率分别为0%、67.9%、84.0%、90.1%;MVD分别为(12.8±4.1)、(5.9±2.5)、(2.2±1.4)、(0.74±O.3);AI分别为(3.87±2.61)%、(6.89±5.18)%、(13.24±4.76)%、(20.97±9.04)%;腹膜转移率分别为9